Name: Tecnologia celular encapsulada para a entrega de biológicos ao olho do rato (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 10 s
Description: Aprenda a encapsular células em microcápsulas de alginato para entrega sustentada de biológicos ao olho de roedores. Este método minimiza reações imunes e permite liberação prolongada de agentes terapêuticos in vivo.

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O estudo foi apoiado, em parte, por subvenções concedidas a B. R. pelos Institutos Nacionais de Saúde (R01EY019320), pelo Departamento de Assuntos dos Veteranos (RX000444 e BX003050) e pelo South Carolina SmartState Endowment.

Todos os experimentos foram realizados de acordo com a Declaração ARVO para o Uso de Animais em Pesquisa Oftalmológica e de Visão e foram aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Médica da Carolina do Sul sob o protocolo ID 00399.
1. Cultura Celular
<ol><li>Gerar células epiteliais de pigmento da retina humana (ARPE-19) expressando o gene de escolha de acordo com os protocolos publicados14,15.</li>
	<li>Manter células no Meio Águia Modificada (DMEM) de Dulbecco suplementada com 10% de soro bovino fetal (FBS).</li>
	<li>Incubar as células a 37 °C e 5% de CO2.</li>
	<li>Substitua o meio a cada 2-3 dias.</li>
	<li>Passe as células depois de atingir 70%-80% de confluência usando procedimentos padrão de cultura tecidual.</li>
</ol>2. Encapsulamento celular
<ol><li>Misture alginato de sódio com água deionizada (DI) para uma concentração final de 2% w/v e purifique por filtração com um filtro de seringa estéril de 0,2 μm.</li>
	<li>Prepare as células para serem misturadas com a solução de alginato, tripsinizando, centrifugando e lavando-as com solução salina tamponada hepes de 10 mM (pH = 7,4). Usando um hemocitômetro, conte as células e ajuste a concentração celular final para 1 x 106 em solução alginato. NOTA: O processo de encapsulamento deve ser executado dentro de uma coifa esterilizada.</li>
	<li>Carregue ~300 μL de alíquotas de alginato e mistura de células em uma seringa de 3 mL e conecte-a a uma bomba de seringa. A solução será bombeada através de uma agulha de ponta cega de 30 G para um banho de gelagem estéril colocado em um béquer estéril de 50 mL abaixo da ponta da seringa a 7 mm para uma agulha para banho de distância de pulverização.</li>
	<li>O banho de gelagem contém um volume de 40 mL de 10 mM HEPES soro retalhado contendo 100 mM de cloreto de cálcio (CaCl2) e 0,5% w/v poli-L-ornithine (PLO). A OLP é um revestimento de polímero secundário que pode ser omitido ou alterado de acordo com as necessidades do investigador.</li>
	<li>Ajuste a tensão e a vazão e mantenha-as constantes durante o processo de encapsulamento a 60 mm/h de vazão e 6,0 kV de tensão inicial para produzir microcápsulas do tamanho de ~150 μm.</li>
	<li>Conecte o clipe do fio de ânodo (vermelho) de uma ponta de agulha geradora de alta tensão à agulha e conecte o clipe de terra (preto) ao fio de cobre que está meio submerso no banho de gelagem. Um lote da mistura alginato + célula (1 mL) leva aproximadamente 30 min para preparar as células encapsuladas (aproximadamente 25.000 microcápsulas).</li>
	<li>Lave as microcápsulas formadas contendo células com solução de lavagem (10 mM HEPES soro lógico tampão contendo 1,5 mM CaCl2, pH = 7,4) duas vezes. Não use PBS para lavar.</li>
	<li>Incubar as células encapsuladas com 10% de FBS suplementada mídia DMEM em uma incubadora umidificada a 37 °C e 5% CO2. NOTA: Os instrumentos do processo de encapsulamento são retratados na Figura 1.</li>
</ol>3. Confirmação de que o encapsulamento não afeta a viabilidade celular
<ol><li>Depois de incubar as células encapsuladas por 24 h em mídia, prepare uma pequena amostra de 500 μL (~30 microcápsulas) para coloração.</li>
	<li>Lave as microcápsulas 2x usando a solução de lavagem (10 mM HEPES soro aspirado contendo 1,5 mM CaCl2) e manche-as para viabilidade viva-morta usando um kit de ensaio vivo/morto.</li>
	<li>Prepare uma mistura de coloração de calceina AM (acetoxymethyl) e etídio homodimer-1 em concentrações finais de 2 μM e 4 μM, respectivamente.</li>
	<li>Adicione 2 mL da mistura de coloração às células encapsuladas e incubar por 30-45 min no escuro à temperatura ambiente (RT).</li>
	<li>Com aspiração cuidadosa, apiratee a solução de coloração e lave as microcápsulas 2x com a solução de lavagem. Use um sistema de microscópio fluorescente para observar e visualizar as células encapsuladas. NOTA: A documentação do encapsulamento é retratada na Figura 2.</li>
</ol>4. Confirmação de que as cápsulas são o tamanho apropriado para entrega e entrega da Biológica
<ol><li>Injeções intravitreais em um olho de rato são tipicamente realizadas com uma agulha de ponta cega de 27 G (diâmetro interno de 210 μm) anexada a uma seringa Hamilton de 2,5 μL.</li>
	<li>Gerar cápsulas que variam de 100 a 200 μm, diluí-las em meios livres de soro e puxá-las cuidadosamente para dentro da seringa Hamilton. O PBS não é um veículo adequado, pois as cápsulas de alginato se dissolverão na PBS.</li>
	<li>Ejete lentamente gotas de 1 μL contendo cápsulas em um slide de microscópio e determine sua integridade usando um microscópio de campo brilhante vertical.</li>
	<li>Ajuste o tamanho da cápsula (ver passo 2.3) ajustando a tensão e a taxa de fluxo de acordo. Microcápsulas menores são produzidas de forma não linear, aumentando a tensão e diminuindo ligeiramente a taxa de fluxo8. Em nossas mãos, cápsulas de 150 μm de diâmetro mostraram-se mais adequadas. O ajuste do tamanho da cápsula também depende de manter a concentração de alginato constante enquanto altera os outros parâmetros.</li>
	<li>Mantenha um conjunto separado de células em cápsulas do tamanho apropriado em meio livre de soro para determinar a quantidade de secreção do biológico desejado. Use ELISAs sensíveis ou manchas ocidentais para determinar a concentração dos biológicos no sobrenadante.</li>
	<li>Determine a quantidade necessária de cápsulas que precisam ser injetadas com base no PK/PD conhecido (farmacocinética/farmacodinâmica) do terapêutico. Em nossas mãos, 10 cápsulas por olho de rato provaram ser mais eficazes.</li>
</ol>5. Entrega de cápsulas em Mouse Vitreous
<ol><li>Realize injeções intravitreais usando um microscópio dissecando. Consulte a Figura 3 para a configuração cirúrgica e os materiais utilizados durante o procedimento. Um protocolo detalhado para injeções intravitreous pode ser encontrado em outro lugar16.</li>
	<li>Anestesia camundongos por injeção intraperitoneal de xilazina e cetamina (20 mg/kg e 80 mg/kg) ou outros anestésicos preferidos aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso animal da instituição específica. Certifique-se de profundidade adequada da anestesia usando uma pitada de dedo do dedo17.</li>
	<li>Dilado as pupilas do camundongo com HCL de fenilefrina (2,5%) e sulfato de atropina (1%) para permitir uma boa visibilidade da câmara vítrea e aplicar um gel de olho lubrificante aos olhos para mantê-los hidratados durante o procedimento.</li>
	<li>Perfure o esclera no membro com uma agulha de 26 G como orifício guia, certificando-se de que 1) a agulha está em um ângulo de 45° com o olho e tabela e 2) a ponta chanfrada é apontada para cima para evitar perfurar a lente.</li>
	<li>Injete cuidadosamente as cápsulas usando uma agulha de ponta cega de 27 G presa a uma seringa Hamilton em um ângulo de 45° inspeção visual, certificando-se de evitar tocar a lente com a agulha. A lesão da lente levará à formação de catarata. As cápsulas devem ser visíveis no vítreo usando o microscópio dissecando(Figura 4A).</li>
	<li>Após a retração da agulha, trate o local da injeção com pomadas antibióticas neomicina e sulfato de polimicina B, além de pomada antiptológica oftalmológica de xamametasona.</li>
	<li>Aplicar solução oftálmica demulcentes goniotaire hypromellose (2,5%) para ambos os olhos para evitar que as córneas sequem durante o período de recuperação.</li>
	<li>Coloque o mouse em uma almofada de aquecimento mantida a 37°C e monitore até acordar completamente.</li>
	<li>Uma injeção bem sucedida de células ARPE-19 encapsuladas deve revelar a presença de cápsulas intactas na câmara vítrea do camundongo com apenas pequenas quantidades de detritos ao fazer a imagem do olho por tomografia de coerência óptica ou outros métodos(Figura 4B).</li>
	<li>O olho do rato injetado, após alguns dias de recuperação devido à cirurgia, agora está pronto para o paradigma experimental em mãos. NOTA: A configuração cirúrgica e a documentação das cápsulas no olho são retratadas na Figura 3 e Figura 4,respectivamente.</li>
</ol>

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<li>Vincent, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+combination+PDGF+%2F+VEGF-antagonist+ECT+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Generation of combination PDGF / VEGF-antagonist ECT devices.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 54, 3290(2013).</li>
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</ol>

Os autores não declaram interesses financeiros concorrentes.

Esta técnica de encapsulamento celular é relativamente rápida e fácil de executar; no entanto, alguns pontos devem ser mantidos em mente para obter resultados precisos a jusante. As células devem ser mantidas na cultura em uma placa de Petri antes do encapsulamento e mantidas em confluência adequada. O encapsulamento deve ser realizado em uma capa de ventilação adequada com fluxo de ar regulado, se possível. Uma corrente de ar muito forte pode afetar a formação de cápsulas, especialmente em experimentos de longo prazo. U...

As terapias baseadas em células representam técnicas biológicas revolucionárias que têm sido amplamente aplicadas na medicina. Recentemente, eles têm sido aplicados com sucesso no tratamento de doenças neurodegenerativas, doenças oculares e câncer. As terapias celulares abrangem uma ampla gama de campos, desde a substituição celular até a entrega de medicamentos, e este protocolo se concentra neste último. Microcápsulas de alginato biodegradável (MC) têm mostrado eficácia como um sistema de parto, e estão se tornando amplamente utilizadas no campo biomédico. O alginato tem sido utilizado na microencapsulação devido ao seu processo simples de gelagem, biodegradabilidade, excelente biocompatibilidade e estabilidade em condições in vivo1,2,3,4.
O método de eletrospray, como técnica de microencapsulamento, tem sido utilizado com sucesso para encapsular peptídeos e proteínas usando alginato (polímero base) e poli-l-ornithine (polímero de revestimento secundário). Ambos os polímeros são naturalmente encontrados e utilizados para sua biocompatibilidade5,6,7. No entanto, o principal desafio nas terapias de base celular é a supressão do sistema imunológico hospedeiro para evitar efeitos colaterais causados por drogas imunossupressoras. A permeabilidade das microcápsulas de alginato é considerada uma propriedade adequada para o encapsulamento celular, que permite a difusão de nutrientes, resíduos e fatores terapêuticos dentro e fora das células enquanto as mascara da resposta imune hospedeira8,,9,10.
No olho, as células encapsuladas têm sido utilizadas em ensaios clínicos para a entrega constante de biológicos (ou seja, fatores de crescimento11,12 e antagonistas do fator de crescimento13) para o tratamento da retinite pigmentosa ou degeneração macular relacionada à idade. Outros alvos, como inibidores complementares14, também estão sendo explorados em ambientes pré-clínicos.

<table><tbody><tr><td>Seringa de 3 mL</td><td>BD</td><td>309656</td><td></td></tr><tr><td>30 G 1" Agulha romba</td><td>SAI Tecnologia de infusão</td><td>B30-100</td><td></td></tr><tr><td>Sal de sódio de ácido algínico, de algas marrons</td><td>Sigma</td><td>A0682</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de atropina Solução oftalmólica (1%)</td><td>Akorn</td><td>NDC 17478-215-15</td><td>para dilatação da pupila</td></tr><tr><td>BD 1 mL Seringa 26 G x 3/8 (0,45 mm x 10 mm)</td><td>Becton, Dickinson e Empresa</td><td>DG518105 500029609 REF 309625</td><td>para gerar o orifício guia</td></tr><tr><td>Cloreto de cálcio, anidro, granular</td><td>Sigma</td><td>C1016</td><td></td></tr><tr><td>GenTeal Tears</td><td>Alcon</td><td>NDC 0078-0429-47</td><td>para lubrificar os olhos durante a anestesia</td></tr><tr><td>Goniotaire: Hipromelose (2,5%) Solução Oftalmólica Demoliente (Estéril)</td><td>Altaire Pharmaceuticals Inc.</td><td>NDC 59390-182-13</td><td>para lubrificar os olhos durante a anestesia</td></tr><tr><td>Hamilton Ponta da agulha/seringa: 27 G, Small Hub RN NDL, comprimento do cliente (12 mm), estilo de ponta 3, 6/PK</td><td>Hamilton</td><td>7803-01</td><td>para administração intravítrea de cápsulas</td></tr><tr><td>Seringa Hamilton: 2,5 &micro; L, Modelo 62 RN SYR, NDL Vendido separadamente</td><td>Hamilton</td><td>7632-01</td><td>para entrega intravítrea de cápsulas</td></tr><tr><td>Tampão HEPES, 1 M</td><td>Bioreagentes Fisher</td><td>BP299100</td><td></td></tr><tr><td>Gerador de alta tensão</td><td>ESD EMC Technology</td><td>ES813-D20</td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD Kit de Viabilidade/Citotoxicidade</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>L3224</td><td></td></tr><tr><td>Cloridrato de L-Ornitina, 99%</td><td>Alfa Aesar</td><td>A12111</td><td></td></tr><tr><td>Neomicina e Polimixina B Sulfatos e Dexametasona Pomada Oftalmólica</td><td>SANDOZ</td><td>NDC 61314-631-36</td><td>antibiótico para prevenir a infecção após injeção intravítrea</td></tr><tr><td>Solução Oftalmólica de Cloridrato de Fenolfrina (2,5%)</td><td>Akorn</td><td>NDC 17478-201-15</td><td>para dilatação da pupila</td></tr><tr><td>Cloreto de Sódio</td><td>Sigma</td><td>S-5886</td><td></td></tr><tr><td>Seringa estéril filtros, 0,2 &mu; m</td><td>VWR</td><td>28143-312</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de seringa</td><td>GRASEBY</td><td>MS16A</td><td></td></tr></tbody></table>

tecnologia celular encapsulada para a entrega de biológicos ao olho do rato

Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye

Muitas terapêuticas atuais em desenvolvimento para doenças do pólo posterior do olho são biológicas. Estes medicamentos precisam ser administrados com freqüência, tipicamente através de injeções intravitreais. As células encapsuladas que expressam o biológico de escolha estão se tornando uma ferramenta para a produção e liberação de proteínas locais (por exemplo, via entrega de medicamentos a longo prazo). Além disso, os sistemas de encapsulamento utilizam materiais permeáveis que permitem a difusão de nutrientes, resíduos e fatores terapêuticos dentro e fora das células. Isso ocorre enquanto mascara as células da resposta imune do hospedeiro, evitando a necessidade de supressão do sistema imunológico hospedeiro. Este protocolo descreve o uso de alginato como um polímero em microencapsulamento juntamente com o método de eletrospray como uma técnica de microencapsulamento. As células ARPE-19, uma linha de células RPE humanas espontaneamente surgidas, tem sido usada em experimentos de terapia celular de longo prazo devido à sua funcionalidade de vida, e é usada aqui para encapsulamento e entrega das cápsulas aos olhos do rato. O manuscrito resume os passos para microencapsulamento celular, controle de qualidade e entrega ocular.

As células ARPE-19 são uma linha celular rpe humana espontaneamente imortalizada que tem se mostrado passível de encapsulamento e sobrevivência a longo prazo após a implantação de cápsulas no olho. As ferramentas para encapsulamento de alginato são mostradas na Figura 1. Neste estudo, foi demonstrado que após o encapsulamento em alginato, as células em cápsulas de alginato foram confirmadas por imagem de campo brilhante(Figura 2A). Ensaios de mortos vivos foram ...

Apresentado aqui é um protocolo para o uso de alginato como polímero na microencapsulação de células imortalizadas para entrega a longo prazo de biológicos aos olhos de roedores.

Tecnologia celular encapsulada para a entrega de biológicos ao olho do rato

Many current therapeutics under development for diseases of the posterior pole of the eye are biologics. These drugs need to be administered frequently, ...

Esta técnica é uma maneira confiável de fornecer qualquer conteúdo, como drogas, proteínas ou células para locais específicos em tecidos ou animais. Você pode acompanhar a entrega e ajustar a liberação do conteúdo para se adequar ao experimento desejado. Pode ser usado para tratar inúmeras doenças, desde a cicatrização de feridas até doenças oculares e cardíacas.A principal vantagem deste método é a capacidade de fornecer células terapêuticas usando microcápsulas alginatos para os locais alvo sem causar reações imunológicas e manter uma entrega sustentada de terapêuticas secretas frescas por um período maior de tempo. Comece por culminar células epiteliais da retina de acordo com as instruções do manuscrito. Passagem das células quando atingem 70 a 80% de confluência usando procedimentos padrão de cultura tecidual.Para encapsular as células, misture alginato de sódio com água deionizada para uma concentração final de 2% de peso ao volume e purifique a mistura via filtração com um filtro de seringa estéril de 0,2 micrômetro. Trypsinize, centrífuga e lave as células com solução salina tamponada HEPES de 10 mililitros. Use um hemótmetro para contar as células e ajustar a concentração celular final para um milhão por mililitro de solução de alginato.Carregue 300 alíquotas de microliter da mistura de alginato e células em uma seringa de três mililitros e anexe-a a uma bomba de seringa. Prepare um banho de gelagem de acordo com as instruções do manuscrito e coloque-o em um béquer estéril de 50 mililitros abaixo da ponta da seringa em uma agulha de sete milímetros para a distância de pulverização do banho. Ajuste a tensão para oito quilovolts e a vazão para 30 milímetros por hora para produzir microcápsulas de cerca de 150 micrômetros de tamanho.Conecte o clipe de terra preto ao fio de cobre que está meio submerso no banho de gelagem e conecte o clipe do fio ânodo vermelho à agulha. Leva aproximadamente 30 minutos para preparar células encapsuladas de cada um lote mililitro da mistura de alginato e celular. Quando formado, lave as microcápsulas com solução de lavagem duas vezes e incuba-as com mídia DMEM suplementada de 10%FBS em uma incubadora umidificada a 37 graus Celsius e 5%DE CO2.Após uma incubação de 24 horas, prepare uma amostra de 500 microliter de microcápsulas para coloração, lavando-as duas vezes em solução de lavagem. Use um kit de ensaio LIVE/DEAD para manchá-los para viabilidade. Para garantir que as microcápsulas sejam adequadamente dimensionadas, dilui-as em mídia livre de soro.Aspire-os cuidadosamente com uma seringa Hamilton de 2,5 microliter. Ejete lentamente um microliter em um slide de microscópio e determine a integridade das microcápsulas usando um microscópio Brightfield vertical. Em um rato apropriadamente anestesiado, aplique lubrificante ocular para manter a umidade dos olhos e use uma agulha de seringa chanfrada de 3/8 polegadas de calibre 26 para estabelecer uma punção inicial do olho logo abaixo do limbus.Certifique-se de se aproximar do olho a partir de uma direção nasal em um ângulo de 45 graus mantendo a ponta chanfrada para cima para evitar perfuração da lente. Em seguida, certifique-se de que toda a ponta da agulha está inserida no olho para a geração de orifícios guia, mas tome cuidado para não viajar muito longe e perfurar a retina temporal. Uma vez que isso esteja completo, retraia lentamente a agulha.Dentro do micromanipulador, coloque uma seringa Hamilton de calibre 27 de bitola 2,5 microliter que foi preenchida com solução de cápsula e forra a agulha com o orifício guia inicial. Segure a cabeça do animal em uma posição estável e deliberadamente manobrem a agulha em direção ao olho. Para garantir uma posição correta da agulha dentro do vítreo, insira a seringa até que a ponta da agulha possa ser visualizada atrás da lente.Em seguida, injete a solução da cápsula lentamente ao longo de 25 a 30 segundos. E uma vez concluída, retraia gradualmente a seringa de ponta cega, a fim de minimizar a lesão no olho. Se necessário, ajuste o tamanho da cápsula ajustando a tensão e a taxa de fluxo de acordo com as instruções do manuscrito.O encapsulamento das células em alginato foi confirmado com imagens brightfield e um ensaio LIVE/DEAD demonstrou que 90% das células eram viáveis pós-encapsulamento. A viabilidade a longo prazo das células foi garantida pela dissolução das cápsulas em citrato de sódio e replação. A injeção intravitreal foi realizada sob inspeção visual que permitiu a visualização de cápsulas no vítreo.Ao tentar este procedimento, não use PBS para quaisquer etapas de lavagem porque o PBS dissolve microcápsulas alginato formadas. Após seu desenvolvimento, nosso laboratório é usado como um sistema de parto para tratar formas de insuficiência cardíaca e hipertensão. Esta técnica é considerada uma ferramenta promissora para o tratamento futuro de diferentes doenças cardiovasculares e neurológicas.

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Um método é descrito para propagar tumores retinoblastoma humano em camundongos. Células tumorais são diretamente injetadas nos olhos de ratos imune deficiente. Tumores secundários foram estabelecidas com sucesso usando as duas células diretamente colhidas a partir de tumores humanos e tumorspheres cultivadas.

Estabelecimento e propagação de Tumores Humanos em Retinoblastoma Imune camundongos deficientes

Transfecção de células de camundongo por Ganglionares da Retina In vivo Eletroporação

Um método para a incorporação de DNA plasmidial em células da retina de camundongos com o propósito de realizar qualquer ganho ou perda de função de...

Em Eletroporação vivo de Retina do rato em desenvolvimento

Esta técnica cirúrgica ilustra a injecção de vectores de terapia genética e de células estaminais para o espaço sub-retiniano do olho do rato.

Injeção de sub-retiniana de Vetores da terapia genética e células-tronco no olho do rato

Este vídeo descreve um método para gerar um modelo de camundongo que imita a endoftalmite bacteriana – uma infecção intraocular resultante de uma invasão bacteriana na cavidade vítrea do olho – por meio de injeção intravítrea de uma suspensão bacteriana no olho. Este modelo de camundongo ajuda a estudar o mecanismo da doença e avaliar a terapêutica para ela.

Modelo de camundongo com endoftalmite bacteriana: um método para gerar endoftalmite bacteriana por meio de injeção intravítrea de suspensão bacteriana no olho do camundongo

Este vídeo demonstra uma técnica de entrega aprimorada por convecção (CED) para entrega de anticorpos no cérebro de camundongos. O crânio de um camundongo anestesiado é exposto e um orifício de rebarba é criado na área-alvo para a entrega de anticorpos. Um cateter escalonado contendo anticorpos é inserido no local alvo e, por meio de uma bomba de infusão, um gradiente de pressão é criado para fornecer anticorpos a uma taxa controlada.

Entrega de anticorpos aprimorada por convecção em um cérebro de camundongo

A injeção sub-retiniana é uma técnica cirúrgica para entrega gênica eficaz ao epitélio pigmentar da retina no olho do camundongo.  Aqui descrevemos um método fácil e replicável para injeção sub-retiniana de vetores virais no epitélio pigmentar da retina em camundongos experimentais.

Limbo Abordagem-Subretinal injeção de vetores virais para terapia genética em ratos Retinal Pigment Epithelium

Aqui vamos demonstrar uma nova abordagem para usando a tomografia de coerência óptica espectral-domínio de alta resolução (HR-SD-OCT) para auxiliar entrega de agentes de terapia do gene para o espaço subretinal, avaliar sua cobertura areal e caracterizar vitalidade fotoreceptor.

Tomografia de coerência óptica Mouse ultra alta resolução para auxiliar a injeção intra-ocular em pesquisa de terapia de genes da retina

Descrevemos aqui um método de injeção intravitaliana e subsequente quantitação bacteriana no modelo de camundongos de endophthalmite bacteriana. Este protocolo pode ser estendido para medir as respostas imunes do hospedeiro e a expressão genética bacteriana e hospedeira.

Injeção intravitreal e quantitação de parâmetros de infecção em um modelo de rato de endophtalmite bacteriana

Apresentamos um protocolo para o uso de microendoscopia a laser confocal (CLM) para estudar não invasivamente a distribuição espátula-temporal de lipossomos no olho após injeção subconjunta.

Espólio-Temporal Em Vivo Imagem de Sistemas de Entrega de Drogas Oculares usando Microendoscopia a laser confocal de fibra óptica

Descrevemos um protocolo detalhado para a preparação de células progenitoras fotorreceptoras derivadas de hESC pós-criopreservadas e a liberação sub-retiniana dessas células em camundongos rd10 .

Liberação Sub-Retiniana de Progenitores de Fotorreceptores Derivados de Células-Tronco Embrionárias Humanas em Camundongos rd10

Aprenda a encapsular células em microcápsulas de alginato para entrega sustentada de biológicos ao olho de roedores. Este método minimiza reações imunes e permite liberação prolongada de agentes terapêuticos in vivo.

Tecnologia celular encapsulada para a entrega de biológicos ao olho do rato

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