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Um protocolo da microdissecção da captação do laser que rende o RNA da alta qualidade dos ossos f...
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JoVE Journal Biology
A Laser Capture Microdissection Protocol That Yields High Quality RNA from Fresh-frozen Mouse Bones

Um protocolo da microdissecção da captação do laser que rende o RNA da alta qualidade dos ossos frescos-congelados do rato

Full Text
10,136 Views
10:11 min
September 16, 2019

DOI: 10.3791/60197-v

Ana Marek1, Christiane Schüler1, María Satué1, Barbara Haigl1, Reinhold G. Erben1

1Department of Biomedical Research,University of Veterinary Medicine Vienna

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a protocol utilizing laser capture microdissection (LCM) to extract high-quality RNA from bone cells in mouse femurs, facilitating gene expression analysis. While focused on mouse bone tissues, the method is adaptable for examining gene expression in hard tissues across various species.

Key Study Components

Research Area

  • Gene expression analysis
  • Bone cell biology
  • Hard tissue studies

Background

  • Importance of gene expression in understanding bone biology
  • Challenges in isolating high-quality RNA from specific bone cells
  • The potential of LCM technology in biological research

Methods Used

  • Laser capture microdissection (LCM)
  • Mouse femur tissue as the biological system
  • Protocols for RNA extraction and analysis

Main Results

  • Successful isolation of RNA from distinct bone cell types
  • High yield and integrity of the extracted RNA
  • Demonstration of the protocol's versatility across hard tissues

Conclusions

  • The developed LCM protocol enhances the capability to study gene expression in bone cells
  • Significant implications for research in bone biology and related fields

Frequently Asked Questions

What is laser capture microdissection (LCM)?
LCM is a technique that allows for the isolation of specific cells from a tissue section using a focused laser.
Why is RNA quality important in gene expression studies?
High-quality RNA is essential for accurate gene expression analysis and reliable results.
Can this protocol be adapted for other tissues?
Yes, although this study focuses on bone cells, the protocol can be applied to any hard tissue.
What are the initial steps in preparing mouse femur samples?
The samples are cleaned of soft tissues, snap-frozen in liquid nitrogen, and stored until processing.
What types of cells can be isolated using this method?
Osteoblasts, osteocytes, and bone lining cells can be specifically isolated from the sample.
How is the RNA extracted after LCM?
RNA is extracted using a specific lysis buffer and following a standardized protocol for RNA purification.
What is the significance of this research?
It provides a reliable method for studying gene expression in bone cells, which can be crucial for understanding bone-related diseases.

Um protocolo da microdissecção da captação do laser (LCM) foi desenvolvido para obter a quantidade suficiente de RNA de alta qualidade para a análise da expressão de gene em pilhas de osso. O estudo atual centra-se em seções do fêmur do rato. Entretanto, o protocolo de LCM relatado aqui pode ser usado para estudar a expressão de gene nas pilhas de todo o tecido duro.

Você já pensou em aproveitar o poder da microdisseção de captura a laser para análise da expressão genética em células ósseas específicas dentro de seu ambiente natural? Aqui, descrevemos um protocolo que lhe permitirá obter quantidades suficientes de RNA de alta qualidade a partir de criosections de ossos de rato. Esta tecnologia é uma ótima ferramenta para examinar mudanças na expressão genética em células ósseas específicas em modelos de camundongos geneticamente modificados ou em modelos de doenças.

O protocolo descrito aqui é focado em ossos de camundongos, mas pode ser usado para estudar in situ uma expressão genética em células de qualquer tecido duro em qualquer espécie. Ajudando a demonstrar este procedimento, será Christiane Schueler, uma técnica do meu laboratório. Depois de eutanásia camundongos por exsanguinação sob anestesia geral, remova os fêmures inteiros rapidamente.

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Biologia edição 151 microdissecção da captação do laser rato ossos RNA expressão de Gene número da integridade do RNA

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