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DOI: 10.3791/60234-v
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As células progenitoras de tronco hematopoiético (HSPCs) transitam de um estado quiescente para um estado de diferenciação devido à sua plasticidade metabólica durante a formação sanguínea. Aqui, apresentamos um método otimizado para medir a respiração mitocondrial e a glicolíse dos HSPCs.
Mudanças metabólicas nas células hematopoiéticas e progenitoras permitem que elas transitem de seu estado quiescente para um estado de diferenciação para sustentar demandas de formação sanguínea. A alteração na plasticidade metabólica das células-tronco hematopoiéticas e progenitoras leva a distúrbios hematológicos. Nosso protocolo ajudará a medir a regulação metabólica e a saúde das células-tronco hematopoiéticas e progenitoras durante o desenvolvimento sanguíneo e doenças.
A análise da respiração mitocondrial e da glicolise das células-tronco hematopoiéticas e progenitoras é difícil, pois são frágeis e raras populações. Nosso protocolo otimizado permite o isolamento de uma maior quantidade de células hematopoiéticas de haste e progenitor da medula óssea murina, melhora sua viabilidade durante a incubação, facilita a análise de fluxo extracelular de HSPCs não aderentes e fornece parâmetros de injeção otimizados para a segmentação de fábulas oxidativas, bem como vias glicólticas. Para iniciar este procedimento, encha os poços da placa de utilidade e as câmaras ao redor dos poços com água estéril.
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