Padronizar um método não letal para caracterizar o estado reprodutivo e o desenvolvimento larval de mexilhões de água doce (Bivalvia: Unionida)

Nosso protocolo padroniza metodologias para amostragem das brânquias de mexilhões de água doce gravid e caracterizando os diferentes estágios do desenvolvimento larval, ao mesmo tempo em que fornece um banco de dados on-line para apresentação e exploração de dados do Almanaque gravidity. A técnica não é letal e não afeta substancialmente a capacidade de um mexilhões fêmea permanecer árvida após a amostragem das brânquias, portanto o método pode ser aplicado a espécies comuns e protegidas. Essa metodologia pode ser aplicada a organismos caracterizados nas famílias Bivalvia de Hyriidae, Margaritiferidae e Unionidae, que são distribuídas em ecossistemas de água doce em todos os continentes, exceto na Antártida.

É importante abrir mexilhões com cuidado, coletar informações de localização e garantir que os dados sejam coletados corretamente. Se as identificações forem questionáveis, deve-se tirar fotos e contatar os especialistas apropriados. Comece coletando mexilhões vivos do campo usando métodos visuais táteis.

Avalie a gravididade feminina por inspeção visual durante ou após a coleta, brindo suavemente as válvulas apenas o suficiente para olhar para dentro e ver se as brânquias estão infladas. Se usar um espécime preservado de um museu, realize a inspeção visual abrindo as válvulas e inspecionando as brânquias. Para provar o teor de brânquia, prepare um tubo de coleta de microcentrifuge plástico de 1,5 mililitro com aproximadamente um mililitro de água ou etanol, dependendo de quanto tempo a avaliação ocorrerá.

Desembrulhe uma agulha de ponta de bipe estéril de 30 mm em uma seringa de 10 mililitros, desaparafusar a tampa para expor a agulha, e empurrar a alça da seringa para baixo para que a rolha esteja na linha zero-mililitro. Pegue a fêmea gravid e abra suavemente as duas válvulas usando as pontas dos polegares. Use a ponta da agulha para penetrar suavemente um único tubo de água da brânquia marsupial inflada, em seguida, colher suavemente o conteúdo da brânquia com a ponta chanfrada da agulha.

Armazene-os no tubo de microcentrifuuagem preparado para avaliação posterior. Regise informações relevantes, como identificação de espécies de gênero, informações de localização de coleta e status de gravididade na ficha de dados e registos um identificador exclusivo em cada nave de coleta para garantir registros precisos de dados durante o transporte. Oriente corretamente o mexilhão para fotografar a válvula certa para validação de identidade, deitá-la e tirar a fotografia, certificando-se de incluir o tubo de amostra rotulado na imagem.

Para avaliar o conteúdo da brânquia, transfira-os para uma placa de Petri e encha o fundo da placa com água. Gire suavemente o prato para coletar conteúdos no centro para uma visão mais concentrada da amostra. Coloque a placa de Petri sob um microscópio de dissecção para avaliar a amostra e, se possível, tirar uma fotografia da amostra sob o microscópio.

Registo os resultados dos quais as etapas de desenvolvimento estão presentes em cada amostra de brânquia. Se as fêmeas estiverem meditando larvas em múltiplos estágios de desenvolvimento, informe cada estágio de desenvolvimento observado em uma determinada amostra. Se forem identificados glochidia totalmente desenvolvidos e o etanol não for utilizado para preservação, avalie sua viabilidade adicionando um cristal de cloreto de sódio a uma gotícula subconjunta da amostra de brânquia.

Glochidia viável responderá abrindo e fechando suas válvulas ou simplesmente fechando-as de uma posição aberta. Informe qualquer glochidia testada com sal com um T no final da designação quando os dados forem registrados. Para relatar os dados, acesse a página FMGA ou aplicativo móvel e regise os resultados no formulário de entrada de dados usando menus suspensos e campos de entrada de texto.

Para obter grandes conjuntos de dados pré-existentes, entre em contato com os autores para a planilha de modelos. Digite os dados registrados nos títulos de coluna apropriados, tendo em mente que cada linha na planilha representa observações de uma amostra de brânquia de um indivíduo gravid, em seguida, enviar os resultados e eles serão adicionados ao banco de dados FMGA após serem validados por um administrador, que pode entrar em contato com o coletor para solicitar mais detalhes ou fotos. O banco de dados FMGA compila todas as informações enviadas e permite que o usuário visualize dados de gravididade temporal para todas as espécies do banco de dados.

O Freshwater Mussel Gravidity Almanac é uma ferramenta de pesquisa projetada para padronizar a coleta de dados de gravididade, facilitando futuros esforços de pesquisa, conservação e recuperação. O protocolo de amostragem de brânquias foi avaliado por marcação e recaptura de fêmeas em intervalos mensais ao longo do ano. Embora os tamanhos amostrais do estudo sejam desiguais entre as espécies, os resultados destacam as aplicações benéficas e práticas deste protocolo.

O calendário de gravididade de Villosa lienosa mostra que fêmeas gravid meditando gloquidia totalmente desenvolvida foram encontradas em quase todos os meses do ano, exceto agosto, quando apenas fêmeas que faziam massas de ovos foram encontradas. As fêmeas Hamiota australis foram encontradas não-gravid em julho, agosto e dezembro. Uma proporção maior de fêmeas estavam se desenvolvendo totalmente glochidia em janeiro e fevereiro e em outubro e novembro.

Nenhum indivíduo de Elliptio pullata foi encontrado meditando gloquidia totalmente desenvolvido, embora as fêmeas estivessem meditando massas de ovos de maio a junho. Apenas uma fêmea Strophitus williamsi foi encontrada e recapturada três vezes. Esta fêmea foi encontrada meditando glochidia totalmente desenvolvida em março, não gravid em maio, relatou gravid em junho, e ovos de ninhada em agosto.

Fêmeas gravid de Villosa vibex ninhada totalmente desenvolvida glochidia foram encontradas entre fevereiro e junho. Mexilhões de água doce são um grupo altamente impermeável de organismos. Essa metodologia é importante porque fornece uma forma não letal de avaliar características reprodutivas de espécies empoeiradas.

É fundamental lidar com mexilhões com cuidado. Condições ambientais, como temperatura da água e fluxos de córregos podem ser medidas no campo para determinar quais condições desencadeiam a desova e o desenvolvimento de larvas em mexilhões de água doce. A compilação de dados de gravididade temporal para todas as espécies de mexilhões de água doce pode auxiliar estudos em epidemiologia, morfologia gloquidial, história de vida, filogenética, propagação e translocação.