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DOI: 10.3791/60288-v
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This study presents a protocol for visualizing pre- and postsynaptic calcium in Drosophila to investigate learning and memory. Employing in vivo calcium imaging with synaptically localized sensors, the research combines this with classical olfactory conditioning to explore synaptic plasticity associated with associative learning.
Aqui nós apresentamos um protocolo com que o cálcio pre-e/ou pós-sináptica pode ser visualizado no contexto da aprendizagem e da memória de Drosophila . A imagem latente in vivo do cálcio que usa sensores synaptically localizados do cálcio é combinada com um paradigma olfactory clássico do condicionamento tal que a plasticidade sináptica subjacente este tipo de aprendizagem associativa possa ser determinada.
Esta técnica facilita a observação em tempo real da atividade sináptica de cálcio como parâmetro fisiológico para os processos celulares subjacentes à aprendizagem e formação da memória em drosophila melanogaster. Comparando respostas neuronais com odores antes e depois do treinamento associativo, podemos desenhar correlações diretas entre a atividade sináptica e a formação do traço de memória em moscas de frutas individuais. Para produzir moscas de frutas transgênicas em que neurônios específicos de interesse expressam um indicador de cálcio geneticamente codificado cruzam moscas fêmeas e machos carregando as construções GAL4 e UAS desejadas, e envelhecem a progêneria feminina até três a seis dias após a eclosão.
Para preparar uma mosca para a imagem, use fórceps finos para colocar uma mosca anesthetizada de gelo em uma câmara de imagem personalizada. Usando um microscópio dissecando para posicionar o tórax e as pernas em contato com os fios elétricos na parte inferior da câmara, e com a cabeça deitada plana. Fixar a mosca no lugar com fita adesiva clara, e use uma lâmina de bisturi cirúrgica para cortar uma janela na fita ao redor da cabeça, deixando a antena coberta e apenas a parte anterior da parte mais do tórax exposta.
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