Um modelo pré-clínico do rato para o estudo da lesão da Isquemia-reperfusion na microcirurgia reconstrutiva

A lesão de isquemia-reperfusão é a principal causa de falha na microcirurgia reconstrutiva. Este vídeo descreve um modelo animal pré-clínico para o estudo desta fisiopatologia. Este modelo de retalho de pele livre baseado nos vasos epigástricos caudais superficiais no rato pode permitir a avaliação de diferentes terapias e compostos para neutralizar danos relacionados à isquemia-reperfusão.

Reconstruções microcirúrgicas são ideais para uma grande variedade de defeitos. No entanto, esses procedimentos garantem um período obrigatório de isquemia seguido da reperfusão. Esse período geralmente é bem tolerado, e a taxa de sucesso dos procedimentos microcirúrgicos excede 90% No entanto, apenas 73,7% dos retalhos que requerem revisão cirúrgica podem ser completamente seguros.

Além disso, em casos de replantação de lesões por avulsão de dedos, a taxa de sucesso é de cerca de 60% e nos casos de reco transplante de tecido composto, os percentuais de projeção de lesão isquemia-reperfusão são aumentados, uma vez que a lesão ativa imunidade inata. Portanto, o estudo desse fenômeno fisiopatológico é de interesse. Para iniciar este procedimento, use um marcador cirúrgico para desenhar um retalho de três centímetros por seis centímetros, certificando-se de que um dos lados de seis centímetros corresponda à linha média do abdômen.

Em seguida, faça uma incisão de pele de seis centímetros na linha média do abdômen, duas incisões perpendiculares de três centímetros, bem como uma de seis centímetros paralelos à primeira incisão. Para começar a dissecar a aba de pele designada, use tesouras e fórceps Adson para levantar a aba. Puxe suavemente a aba da área craniana em direção à área caudal.

Disseque o pedículo de retalho sem tocá-lo ou segurando a adventitia o mínimo possível para evitar danificar a parede do vaso. Use 8-0 suturas de nylon para ocluir por ligaduras os vasos saphenosos, vasos femorais circunflexos laterais, e os vasos femorais caudais proximais. Aperte o pedículo vascular e corte-o para iniciar o período de isquemia de oito horas.

Use solução salina heparinizada para perfundir a aba e, em seguida, remover o sangue estagnado da microcirculação. Use suturas de nylon 10-0 para realizar os anastomos microcirúrgicos. Após oito horas de isquemia, reperfuse a aba removendo os grampos microvasculares e verifique a patência vascular.

Primeiro, avalie o fluxo sanguíneo usando um medidor de ultrassom em tempo de trânsito e sondas microcirúrgicas. Coloque o vaso alvo na janela de detecção ultrassônica da sonda de fluxo para quantificar o volume de fluxo. Quando um bom acoplamento for alcançado e o vaso for colocado na janela acústica sem qualquer tensão, clique no botão de gravação no visor para armazenar os dados.

Depois disso, use suturas absorvíveis 4-0 para fechar a pele. Para avaliar a microcirculação do retalho, use análise de contraste de manchas a laser. Faça uma nova gravação para cada amostra e para cada estudo de acompanhamento clicando no arquivo, nova gravação.

Uma nova janela será aberta, que exibe o painel de configuração. Aqui, edite as informações para o nome do projeto, assunto, operador e nome de gravação. Ajuste a distância de trabalho movendo o laser em relação ao tecido.

Amplie a cabeça laser para dentro ou para fora em direção ao tecido de interesse. Na configuração da imagem, padronize a área de medição digitando a largura e altura desejadas. Defina a densidade de pontos para alta.

Na configuração de captura de imagem, selecione a taxa de quadros e a duração da gravação. Em seguida, clique no botão gravar para começar a gravar. O painel de configuração é substituído pelo painel de gravação e os dados são salvos automaticamente.

Tire instantâneos durante o procedimento para permitir uma comparação adicional. Depois disso, use o software ImageJ para medir as áreas de sobrevivência e necrose, colocando primeiro uma régua no local da aba e tirando fotos de controle para medição macroscópica. Na caixa de ferramentas ImageJ, selecione linha reta e desenhe uma linha sobre um centímetro da régua.

Clique em analisar, definir escala e na caixa de texto para distância conhecida, digite o valor de um centímetro. Clique na ferramenta de seleção do polígono e desenhe as linhas do polígono sobre a aba para calcular a área viável. Clique em analisar, meça para obter o valor da área.

Em seguida, coloque um curativo pós-operatório no animal antes da carcaça para evitar a automutilação. Sete dias após a cirurgia, fotografe a área cirúrgica para permitir medições macroscópicas das áreas de sobrevivência e necrose do retalho. Utilizando a técnica de análise de contraste de manchas de laser descrita anteriormente, visualize e quantifique diferenças de perfusão para avaliar a microcirculação do retalho.

Após a análise macroscópica, remova as suturas 4-0, levante a aba e use ultrassom em tempo de trânsito para reavaliar o fluxo sanguíneo do pedículo vascular. Realize a amostragem tecidual dividindo longitudinalmente o reta em duas partes que medem 1,5 centímetros por seis centímetros. Imediatamente após a criação dos anastomos microcirúrgicos, obtivemos valores de fluxo sanguíneo mais elevados do que os fluxos mínimos recomendados na literatura.

Assim, todos os anastomos microcirúrgicos foram patenteados uma semana após a cirurgia. A observação da depravação microcirculatória do fluxo sanguíneo durante o insulto isquêmico foi possível com a técnica de análise de contraste de manchas de laser. Isso inclui a hiperperfusão imediata durante a reperfusão do retalho e perioperatória, as diferentes áreas com menor perfusão apresentaram maior risco de necrose pós-operatória que foram de fato necrosadas sete dias após o término do estudo.

A área de sobrevivência do retalho após oito horas de isquemia e sua subsequente reperfusão foi de cerca de 40% Resultados publicados anteriormente mostram diferenças estatisticamente significativas quando este modelo é comparado com retalhos onde nenhum insulto isquêmico é infligido. Lembre-se de dissecar o pedículo de retalho sem tocá-lo ou agarrar a adventitia o mínimo possível para evitar danificar a parede do vaso, bem como realizar anastomos microcirúrgicos adequados, a fim de evitar complicações devido à técnica cirúrgica. Intraoperacionalmente, a tecnologia de ultrassom em tempo de trânsito nos permite quantificar o fluxo sanguíneo de anstomoses microcirúrgicos e, assim, prever a perfusão de retalhos.

No pós-operatório, a análise de contraste de manchas a laser permite uma semi-continuidade do mapeamento em tempo real do fluxo dentro de retalhos livres. É uma técnica promissora, porém mais pesquisas são necessárias. Este vídeo descreveu o protocolo de um modelo adequado para avaliar agentes terapêuticos para combater a lesão isquemia-reperfusão no campo da microcirurgia reconstrutiva.