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DOI: 10.3791/60357-v
Wen-Yang Hu1, Dan-Ping Hu1, Lishi Xie1, Lynn A. Birch1, Gail S. Prins1,2,3
1Department of Urology, College of Medicine,University of Illinois at Chicago, 2Department of Pathology, College of Medicine,University of Illinois at Chicago, 3University of Illinois Cancer Center, College of Medicine,University of Illinois at Chicago
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Usando células epitelia de próstata primárias humanas, relatamos um novo método livre de biomarcadores de caracterização funcional de células semelhantes a troncos por um ensaio de retenção de rótulos à base de esferóides. Um protocolo passo a passo é descrito para a rotulagem de células BrdU, CFSE ou Far Red 2D; formação tridimensional de esferóides; identificação de células-tronco de retenção de rótulos por imunocitoquímica; e isolamento pela FACS.
O isolamento das células-tronco continua sendo um grande desafio devido ao co-isolamento das células progenitoras usando métodos atuais. Desenvolvemos um novo ensaio sem biomarcadores para isolar células-tronco quiescentes de progenitores mistos. A principal vantagem deste ensaio de retenção de rótulos baseado em esferoides, pode expandir e isolar células-tronco vivas de seus progenitores filhas pela FACS usando a rotulagem CFSE ou Far Red.
Enquanto as terapias convencionais erradicam a maioria das células cancerígenas da próstata, as células-tronco do câncer permanecem devido à resistência terapêutica, impulsionando assim a progressão da doença. O isolamento celular semelhante a tronco permitirá a identificação de novos genes que podem ser terapeuticamente co-alvo para uma remissão eficaz da doença. Nosso ensaio de retenção de rótulos é aplicável para o isolamento normal de células-tronco de vários tecidos e células, e para a pesquisa de células-tronco do câncer.
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