Name: Um modelo reversível da hipertensão ocular óleo-induzida do silicone nos ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-15T10:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Aprenda a induzir hipertensão ocular reversível em camundongos usando injeção intracameral de óleo de silicone. Este modelo reproduz o glaucoma secundário humano para estudar neurodegeneração retiniana e testar terapias neuroprotetoras.

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Este trabalho é apoiado por nih concede EY024932, EY023295, e EY028106 para YH.

Todos os procedimentos foram aprovados pelo Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) da Universidade de Stanford.
1. Indução ocular da hipertensão pela injeção intracameral de SO
<ol><li>Prepare uma micropipette de vidro para injeção intracameral SO puxando um capilar de vidro com um puxador de pipeta para gerar uma micropipette. Corte uma abertura na ponta da micropipette e afie ainda mais a ponta com uma máquina de micromoedor para fazer um bisumo de 35°e 40°.</li>
	<li>Polonês as bordas do bisume e remover todos os detritos, lavando com água. Autoclave a micropipette antes de usar.</li>
	<li>Prepare a agulha da paracentese para a entrada da córnea. Para fazer isso, anexar uma agulha de 32 G para uma seringa de 5 mL em um bloqueio Luer, e fixá-lo ainda mais com fita adesiva. Dobre a ponta do bisumo da agulha de bruços a 30°.</li>
	<li>Prepare o injetor SO, anexando e garantindo uma ponta contundente 18 G agulha em uma seringa de 10 mL em primeiro lugar. Em seguida, anexar um tubo de plástico com a agulha de 18 G em uma extremidade e encher-se com SO, conforme necessário através da outra extremidade.</li>
	<li>Anexar a micropipette esterilizada para o tubo de plástico e empurre o desentupidor de seringa para encher toda a micropipette com SO.</li>
</ol>2. Injeção intracameral so para um olho
<ol><li>Coloque um rato C57B6/J masculino de 9 a 10 semanas de idade em uma câmara de indução com 3% isoflurane misturado com oxigênio a 2 L/min por 3 min.</li>
	<li>Intraperitoneally injetar 2,2,2-tribromoetanol em 0,3 mg / g peso corporal. NOTA: Ao contrário da cetamina/xilazine, 2,2,2-tribromoetanol não causa dilatação óbvia da pupila.</li>
	<li>Verifique se há falta de resposta a uma pitada de dedo do dedo do dedo do dedo do dedo do pés e a falta de movimento dos bigodes ou da cauda para determinar a força anestésica.</li>
	<li>Coloque o mouse em uma posição lateral em uma plataforma de cirurgia. Para reduzir sua sensibilidade durante o procedimento, aplique uma gota de cloridrato de proparacaína de 0,5% à córnea antes da injeção.</li>
	<li>Faça uma incisão de entrada com a agulha de paracentese 32 G no quadrante superotemporal, cerca de 0,5 mm do limbus.</li>
	<li>Túnel através das camadas da córnea por cerca de 0,3 mm antes de perfurar na câmara anterior. Tenha cuidado para não tocar a lente ou íris.</li>
	<li>Retire a agulha lentamente para liberar algum humor aquoso (cerca de 1 a 2 μL) da câmara anterior através do túnel (paracentese).</li>
	<li>Espere ~ 8 min para diminuir ainda mais o IOP. Isso pode ser determinado medindo o olho de controle contralateral.</li>
	<li>Insira a micropipette de vidro pré-carregada com SO através do túnel da córnea na câmara anterior, com o bisumo voltado para a superfície da íris.</li>
	<li>Empurre o desentupidor de seringa lentamente para injetar SO na câmara anterior até que a gota SO cobre a maior parte da superfície da íris, ~ 2,3-2,4 mm de diâmetro.</li>
	<li>Deixe a micropipette na câmara anterior para mais 10 s antes de retirá-la lentamente.</li>
	<li>Empurre delicadamente a pálpebra superior para fechar a incisão da córnea para minimizar o escapamento assim.</li>
	<li>Aplique pomada antibiótica (bacitracin-neomicina-polimixixina) à superfície dos olhos.</li>
	<li>Durante todo o procedimento, umedeça freqüentemente a córnea com rasgos artificiais.</li>
	<li>Mantenha o rato na almofada de aquecimento até que seja recuperado inteiramente da anestesia.</li>
</ol>3. Remoção so
<ol><li>Prepare o sistema de irrigação.<ol>
<li>Prepare a solução de irrigação de acordo com as instruções do fabricante e coloque-a na garrafa de irrigação. Elevará a garrafa de solução irrigante para 110 a 120 cm acima da plataforma de cirurgia.</li>
		<li>Anexar uma administração IV definido para a garrafa de solução de irrigação. Retire as bolhas de ar da tubulação IV. Conecte uma agulha 33 G dobrada a 20° face até a tubulação IV.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Para preparar o sistema de drenagem, retire o desentupidor de uma seringa de 1 mL. Anexe uma agulha de 33 G à seringa e dobre a agulha a 20°.</li>
	<li>Retire-se da câmara anterior.<ol>
<li>Intraperitoneally injetar 2,2,2-tribromoetanol (0,3 mg / g peso corporal). Check for the lack of response to the toe pinch to determine the anesthetic strength and the lack of movement of the whiskers or the tail.</li>
		<li>Coloque o mouse em uma plataforma de cirurgia e fixá-lo na posição lateral com fita adesiva. Aplique uma gota de cloridrato de proparacaína de 0,5% à córnea para reduzir sua sensibilidade.</li>
		<li>Faça duas incisões no quadrante temporal da córnea entre ~2 e 5 horas na borda da gota SO usando a agulha de paracentese de 32 G pré-feita.</li>
		<li>Insira uma agulha de irrigação 33 G conectada à solução irrigante através de uma incisão da córnea, velocidade máxima.</li>
		<li>Insira outra agulha de drenagem 33 G presa à seringa sem um desentupidor através da outra incisão da córnea para permitir que a gota SO saia da câmara anterior enquanto irriga com solução de irrigação.</li>
		<li>Retire a agulha de drenagem, em seguida, a agulha de irrigação.</li>
		<li>Injetar uma bolha de ar na câmara anterior para manter sua profundidade normal e pressione para fechar a incisão da córnea.</li>
		<li>Aplique pomada antibiótica em ambos os olhos.</li>
		<li>Mantenha o rato na almofada de recuperação do aquecimento até que seja recuperado inteiramente da anestesia.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Medição do IOP uma vez por semana
<ol><li>Coloque o mouse em uma câmara de indução perfundida com 3% isoflurane misturado com oxigênio em 2L/min por 3 min.</li>
	<li>Intraperitoneally injetar xilazine e cetamina (0,01 mg xilazine/g, 0,08 mg quetamina/g).</li>
	<li>Mantenha a córnea úmida aplicando lágrimas artificiais durante todo o procedimento.</li>
	<li>Espere cerca de 15 min para permitir que a pupila para dilatar totalmente.</li>
	<li>Medir o OPP de ambos os olhos usando um tonomômetro de acordo com as instruções do produto. Leve o tononter perto do olho do rato. Mantenha a distância da ponta da sonda para a córnea do rato em cerca de 3-4 mm. Pressione o botão de medição 6x para gerar uma leitura. Três leituras geradas por máquina são obtidas de cada olho para adquirir o IOP médio.</li>
	<li>Sacrifique os animais em 8 semanas após a injeção de SO e realizar imunohistoquímica de toda a montagem retina, contagem RGC, nervo óptico (ON) seções semi-finas, e quantificação de axônios sobreviventes, que foram descritos antesde 13.</li>
</ol>

<ol><li>Chang, E. E., Goldberg, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glaucoma+2.0%3A+neuroprotection%2C+neuroregeneration%2C+neuroenhancement%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Glaucoma 2.0: neuroprotection, neuroregeneration, neuroenhancement.</a> Ophthalmology. 119 (5), 979-986 (2012).</li>
<li>Tham, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+of+glaucoma+and+projections+of+glaucoma+burden+through+2040%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Global prevalence of glaucoma and projections of glaucoma burden through 2040: a systematic review and meta-analysis.</a> Ophthalmology. 121 (11), 2081-2090 (2014).</li>
<li>Pang, I. H., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+glaucoma+retinopathy+and+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy.</a> Journal of Glaucoma. 16 (5), 483-505 (2007).</li>
<li>Morrison, J. C., Johnson, E., Cepurna, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+models+for+glaucoma+research%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Rat models for glaucoma research.</a> Progress in Brain Research. 173, 285-301 (2008).</li>
<li>McKinnon, S. J., Schlamp, C. L., Nickells, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+retinal+ganglion+cell+death+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of retinal ganglion cell death and glaucoma.</a> Experimental Eye Research. 88 (4), 816-824 (2009).</li>
<li>Chen, S., Zhang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Rodent+Model+of+Glaucoma+and+Its+Implications%5BTitle%5D)+AND+%22Asia+Pacific+Journal+of+Ophthalmology+%28Philadelphia%29%22%5BJournal%5D)">The Rodent Model of Glaucoma and Its Implications.</a> Asia Pacific Journal of Ophthalmology (Philadelphia). 4 (4), 236-241 (2015).</li>
<li>Sappington, R. M., Carlson, B. J., Crish, S. D., Calkins, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbead+occlusion+model%3A+a+paradigm+for+induced+ocular+hypertension+in+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">The microbead occlusion model: a paradigm for induced ocular hypertension in rats and mice.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 51 (1), 207-216 (2010).</li>
<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+neuropathy+due+to+microbead-induced+elevated+intraocular+pressure+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Optic neuropathy due to microbead-induced elevated intraocular pressure in the mouse.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (1), 36-44 (2011).</li>
<li>Cone, F. E., Gelman, S. E., Son, J. L., Pease, M. E., Quigley, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+to+experimental+glaucoma+among+3+mouse+strains+using+bead+and+viscoelastic+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility to experimental glaucoma among 3 mouse strains using bead and viscoelastic injection.</a> Experimental Eye Research. 91 (3), 415-424 (2010).</li>
<li>Samsel, P. A., Kisiswa, L., Erichsen, J. T., Cross, S. D., Morgan, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+the+induction+of+experimental+glaucoma+using+magnetic+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">A novel method for the induction of experimental glaucoma using magnetic microspheres.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (3), 1671-1675 (2011).</li>
<li>Ichhpujani, P., Jindal, A., Jay Katz, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silicone+oil+induced+glaucoma%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Archieves+for+Clinical+and+Experimental+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Silicone oil induced glaucoma: a review.</a> Graefes Archieves for Clinical and Experimental Ophthalmology. 247 (12), 1585-1593 (2009).</li>
<li>Kornmann, H. L., Gedde, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glaucoma+management+after+vitreoretinal+surgeries%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Glaucoma management after vitreoretinal surgeries.</a> Current Opinion in Ophthalmology. 27 (2), 125-131 (2016).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silicone+oil-induced+ocular+hypertension+and+glaucomatous+neurodegeneration+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Silicone oil-induced ocular hypertension and glaucomatous neurodegeneration in mouse.</a> Elife. 8, (2019).</li>
<li>Kwong, J. M., Caprioli, J., Piri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+binding+protein+with+multiple+splicing%3A+a+new+marker+for+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+and+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">RNA binding protein with multiple splicing: a new marker for retinal ganglion cells.</a> Investigative Ophthalmology and Visual Science. 51 (2), 1052-1058 (2010).</li>
<li>Rodriguez, A. R., de Sevilla Muller, L. P., Brecha, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RNA+binding+protein+RBPMS+is+a+selective+marker+of+ganglion+cells+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">The RNA binding protein RBPMS is a selective marker of ganglion cells in the mammalian retina.</a> Journal of Comparative Neurology. 522 (6), 1411-1443 (2014).</li>
<li>Smith, R. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSmith%2C+RS+%22Systematic+evaluation+of+the+mouse+eye+%3A+anatomy%2C+pathology%2C+and+biomethods%22">Systematic evaluation of the mouse eye : anatomy, pathology, and biomethods</a>. , CRC Press. (2002).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Aqui demonstramos um procedimento simples, mas eficaz para induzir a elevação sustentada de OPP no olho do rato por injeção intracameral de SO. Este procedimento pode ser aprendido rapidamente por qualquer pessoa com experiência em microdissecção um microscópio. O principal risco potencial de falha é o vazamento de SO da incisão da córnea. No entanto, uma das vantagens do uso de SO é que, como a gota de óleo é visível e mensurável, podemos facilmente identificar camundongos que receberam gotículas pequenas demais para in...

A perda progressiva de células ganglionares da retina (RGCs) e seus axônios é a marca registrada do glaucoma, uma doença neurodegenerativa comum na retina1. Afetará mais de 100 milhões de indivíduos de 40 a 80 anos até 20402. O IOP continua a ser o único fator de risco modificável no desenvolvimento e progressão do glaucoma. A fim de explorar a patogênese, progressão e tratamentos potenciais de glaucoma, um modelo de hipertensão ocular experimental/glaucoma confiável, reproduzível e indutor que reproduz as principais características dos pacientes humanos é imperativo.
O IOP depende da entrada aquosa do humor à câmara anterior do corpo ciliary na câmara posterior e da saída através do meshwork trabecular (TM) no ângulo da câmara anterior. Ao chegar a um estado estável, o IOP é mantido. Quando o fluxo excede ou é menor do que a saída, o IOP sobe ou cai respectivamente. Ao diminuir a saída aquosa, quer occluding o ângulo da câmara anterior ou por danificar o TM, vários modelos de glaucoma foram estabelecidos3,4,5,6,7,8,9,10. Esses modelos estão normalmente associados a danos irreversíveis do tecido ocular, e o alto OPE na câmara anterior também causa complicações indesejadas, como edema córnea e inflamação intraocular, que dificultam a realização e interpretação da imagem ocular da retina.
Para desenvolver um modelo que supere essas deficiências, nos concentramos no glaucoma secundário bem sudocumenta causado pelo óleo de silicone (SO) que ocorre como uma complicação pós-operatória da cirurgia vitreoretinal humana11,12. Assim é usado como um tamponade em cirurgias da retina por causa de sua tensão de superfície elevada. No entanto, Assim pode fisicamente ocluir a pupila, porque é mais leve do que os fluidos aquosos e vítreos, o que impede o fluxo aquoso para a câmara anterior. A obstrução causa elevação do IOP na câmara posterior devido à acumulação aquosa do humor. Isso nos motivou a desenvolver e caracterizar um novo modelo de camundongo hipertensão ocular baseado na injeção intracameral SO e no bloco pupilar13,com características-chave do glaucoma secundário: bloco pupillar eficaz, elevação significativa do IOP que pode retornar ao normal após a remoção de SO e neurodegeneração glaucomatous.
Aqui apresentamos um protocolo detalhado para hipertensão ocular induzida por SO no olho do rato, incluindo injeção e remoção de SO e medição de IOP.

<table><tbody><tr><td>Cloridrato de proparacaína a 0,5%</td><td>Akorn, Somerset</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10mL syinge</td><td>BD</td><td></td><td>Luer-Lok Ponta</td></tr><tr><td>18G agulha</td><td>BD</td><td></td><td>com chanfro regular, comprimento da agulha: 25,4 mm</td></tr><tr><td>2,2,2-Tribromoetanol (Avertin)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>CAS # 75-80-9</td><td>50g</td></tr><tr><td>32G nano</td><td>BD</td><td>320122</td><td>BD Nano Ultra Fine Pen Needle-32G 4mm</td></tr><tr><td>agulha de oftalmologia 33G</td><td>TSK/ VWR</td><td>TSK3313/ 10147-200</td><td></td></tr><tr><td>5mL syinge</td><td>BD</td><td></td><td>Luer-Lok</td></tr><tr><td>Tip AnaSed Injection (xilazina)</td><td>Butler Schein</td><td></td><td>100 mg/ml, 50 ml</td></tr><tr><td>lágrimas artificiais</td><td>Alcon Laboratories</td><td>300651431414</td><td>Systane Ultra Lubricant Eye Drops</td></tr><tr><td>BSS PLUS Solução de irrigação</td><td>Alcon Laboratories</td><td></td><td></td>65080050</tr><tr><td>Extrator de micropipeta de vidro de duplo estágio</td><td>NARISHIGE</td><td>PC-10</td><td></td></tr><tr><td>EZ-7000 Sistema</td><td></td><td></td>clássico <td>Sistema EZ</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>VetOne</td><td>502017</td><td>isoflurano, USP, 250ml/garrafa</td></tr><tr><td>IV Conjuntos de administração</td><td>EXELint/ Fisher</td><td>29081</td><td></td></tr><tr><td>INJEÇÃO DE CLORIDRATO</td> DE <td>CETAMINA VEDCO</td><td>50989-996-06</td><td>KETAVED 100mg/ml * 10ml</td></tr><tr><td>máquina de chanfrar microgrind</td><td>NARISHIGE</td><td>EG-401</td><td></td></tr><tr><td>Miniatura EVA Tubing</td><td>McMaster-Carr</td><td>1883T4</td><td>0.05" ID, 0.09" OD, 10 ft. Comprimento</td></tr><tr><td>óleo de silício (SILIKON)</td> <td>Alcon Laboratories</td><td>8065601185</td><td>1.000 mPa.s</td></tr><tr><td>Capilares de vidro padrão</td><td>WPI/ Fisher</td><td>1B150-4</td><td>4 in. (100mm) OD 1.5mm ID 0.84mm</td></tr><tr><td>TonoLab tonômetro</td><td>Colonial Medical Supply, pomada</td><td></td><td></td></tr><tr><td>antibiótica veterinária</td><td>Dechra Veterinary</td><td>1223RX</td><td>BNP pomada oftálmica, Vetropolycin</td></tr></tbody></table>

um modelo reversível da hipertensão ocular óleo-induzida do silicone nos ratos

A Reversible Silicon Oil-Induced Ocular Hypertension Model in Mice

A pressão intraocular elevada (OPP) é um fator de risco bem documentado para glaucoma. Aqui descrevemos um novo método eficaz para induzir consistentemente a elevação estável de IOP em camundongos que imita a complicação pós-operatória do uso de óleo de silicone (SO) como um agente de tamponada na cirurgia de vitreoretinal humana. Neste protocolo, SO é injetado na câmara anterior do olho do rato para bloquear a pupila e evitar o fluxo de humor aquoso. A câmara posterior acumula humor aquoso e isso, por sua vez, aumenta o IOP do segmento posterior. Uma única injeção de SO produz elevação de IOP confiável, suficiente e estável, o que induz neurodegeneração glaucomatous significativa. Este modelo é uma verdadeira réplica do glaucoma secundário na clínica oftalmológica. Para imitar ainda mais o ambiente clínico, assim pode ser removido da câmara anterior para reabrir a via de drenagem e permitir o fluxo de humor aquoso, que é drenado através da malha trabecular (TM) no ângulo da câmara anterior. Como o IOP retorna rapidamente ao normal, o modelo pode ser usado para testar o efeito da redução do IOP nas células ganglionares da retina glaucomatous. Este método é simples, não requer equipamentos especiais ou procedimentos de repetição, simula de perto situações clínicas e pode ser aplicável a diversas espécies animais. No entanto, pequenas modificações podem ser necessárias.

Logo após a injeção, podemos identificar facilmente camundongos que não produzem hipertensão ocular estável por causa das gotículas SO sendo muito pequenas (≤1,5 mm)13. Estes animais são excluídos dos experimentos subsequentes. Após os procedimentos de injeção, mais de 80% dos camundongos injetados SO acabam com gotículas maiores do que 1,6 mm. Medimos o OPP desses olhos de rato uma vez por semana durante 8 semanas após uma única injeção de SO. O OPP do olho que recebe SO permaneceu elevado, geral...

Aqui, apresentamos um protocolo para induzir hipertensão ocular e neurodegeneração glaucomatous nos olhos do rato por injeção intracameral de óleo de silicone e o procedimento para a remoção de óleo de silicone da câmara anterior para retornar pressão intraocular elevada para Normal.

Um modelo reversível da hipertensão ocular óleo-induzida do silicone nos ratos

Elevated intraocular pressure (IOP) is a well-documented risk factor for glaucoma. Here we describe a novel, effective method for consistently inducing ...

O glaucoma é a principal causa de cegueira irreversível, caracterizada pela morte celular gânglio da retina e pela opto-neurodegeneração. A elevação da pressão intraocular, também chamada de hipertensão ocular, é o fator de risco mais reconhecido para glaucoma. Um modelo simples, mas eficaz de hipertensão ocular em animais experimentais como camundongos, é importante para investigar glaucometros em neurodegeneração e testar o tratamento para neuroproteção.Assim, com os resultados, desenvolvemos um modelo de hipertensão ocular do camundongo que imita de perto o glaucoma secundário observado em pacientes humanos. Este modelo replica fielmente o glaucoma secundário causado pelo óleo de silicone induzido pelo bloqueio pupilar. O procedimento é simples a elevação do IOP é estável, e se a neurodegeneração associada à hipertensão ocular for grave nos olhos do rato, mais importante, a hipertensão ocular é reversível porque o óleo de silicone pode ser facilmente removido dos olhos do rato.Demonstrando o procedimento será o Dr. Fang Fang, um sujeito pós-operatório do meu laboratório. Para começar, faça uma micropipette de vidro para injeção intracameral de óleo de silicone puxando um capilar de vidro com um puxador de pipeta. Corte uma abertura na ponta da micropipette e afie a ponta usando uma máquina de bipartida micro-moedor para fazer um bisbilhoteiro de 35 a 40 graus.Polir as bordas do bisel e lavá-lo com água para remover todos os detritos. Autoclave a micropipette antes de usar. Para preparar a agulha de paracentese para a entrada da córnea, conecte uma agulha de calibre 32 a uma seringa de cinco mililitros em uma fechadura de isca e fixe-a ainda mais com fita adesiva.Dobre a ponta de bevel agulha, de frente para cima, a 30 graus. Para preparar o injetor de óleo de silicone, conecte e fixe uma agulha de ponta 18 em uma seringa de 10 mililitros. Em seguida, conecte um tubo plástico com a agulha de calibre 18 em uma extremidade e encha com óleo de silicone conforme necessário através da outra extremidade.Depois de anestesiar um rato C57 preto 6J de nove a 10 semanas, verifique se há falta de resposta ao aperto do dedo do dedo com a falta de movimento dos bigodes ou da cauda. Coloque o mouse em posição lateral em uma plataforma de cirurgia. Aplique uma gota de 5% de cloridrato de proparacaina na córnea antes da injeção para reduzir sua sensibilidade durante o procedimento.Use a agulha de paracentese de calibre 32 para fazer uma incisão de entrada no quadrante super temporal a cerca de 5 milímetros do limbus. Túnel através das camadas da córnea por cerca de 3 milímetros antes de perfurar na câmara anterior, tomando cuidado para não tocar na lente ou íris. Retire a agulha lentamente para liberar cerca de um a dois microliters de humor aquoso da câmara anterior através do túnel e espere cerca de oito minutos para diminuir ainda mais a pressão intraocular.Meça o olho de controle contralateral para determinar a pressão. Insira a micropipette de vidro pré-carregada com óleo de silicone através do túnel córnea na câmara anterior com o bisel voltado para baixo na superfície da íris. Empurre o êmbolo da seringa lentamente para injetar óleo de silicone na câmara anterior até que a gota de óleo cubra a maior parte da superfície da íris, aproximadamente 2,3 a 2,4 milímetros de diâmetro.Deixe a micropipette na câmara anterior por mais 10 segundos antes de retirá-la lentamente. Empurre suavemente a pálpebra superior para fechar a incisão da córnea para minimizar o vazamento de óleo de silicone. E então aplique pomada antibiótica na superfície dos olhos.Mantenha o mouse na almofada de aquecimento até se recuperar totalmente da anestesia. Para remover o óleo de silicone da câmara anterior, anestesiar o mouse e, em seguida, verificar a falta de resposta ao aperto do dedo do dedo do dedo para determinar a força anestéstica e a falta de movimento dos bigodes ou da cauda. Coloque o mouse em uma plataforma de cirurgia e fixe-o na posição lateral com fita.Aplique uma gota de 5% de cloridrato de proparacaina na córnea para reduzir sua sensibilidade. Usando a agulha de paracentese de calibre 32 pré-feita, faça duas incisões no quadrante temporal da córnea entre aproximadamente duas e cinco horas na borda da gotícula de óleo de silicone. Insira uma agulha de irrigação de calibre 33 conectada à solução de irrigação através de uma incisão córnea em velocidade máxima.Insira outra agulha de drenagem de calibre 33 presa à seringa sem um êmbolo através da outra incisão córnea para permitir que a gota de óleo de silicone saia da câmara anterior enquanto irriga com solução irrigante. Retire a agulha de drenagem e depois a agulha de irrigação. Use uma micropipette de vidro conectada a uma seringa Hamilton para injetar uma bolha de ar na câmara anterior para manter sua profundidade normal e pressione para fechar a incisão da córnea.Aplique pomada antibiótica em ambos os olhos e mantenha o rato na almofada de recuperação de aquecimento até que esteja totalmente recuperado da anestesia. Coloque o mouse em uma câmara de indução. Anestesia-o como descrito no manuscrito e mantenha sua córnea úmida aplicando lágrimas artificiais durante todo o procedimento.Aguarde cerca de 15 minutos para permitir que o aluno dilatar completamente. Meça o IOP de ambos os olhos usando um tonômetro de acordo com as instruções do produto. Leve o tonômetro perto do olho do rato, mantendo a distância da ponta da sonda até a córnea do rato em cerca de três a quatro milímetros.Pressione o botão de medição seis vezes para gerar uma leitura e obter três leituras geradas por máquina de cada olho para adquirir o IOP médio. Realize a imunohistoquímica de células gânglios de retina de montagem inteira contando seções semifinais do nervo óptico e quantificação de axônios sobreviventes nos animais sacrificados às oito semanas após a injeção de óleo de silicone. A pressão intraocular dos olhos do rato com gotículas de óleo de silicone maiores que 1,6 milímetros foi medida uma vez por semana durante oito semanas, após uma única injeção de óleo de silicone.A pressão do olho que recebeu o óleo permaneceu alta, principalmente o dobro da pressão do olho de controle contralateral indicando um bloqueio efetivo da pupila. Em outro grupo de camundongos, o óleo de silicone foi retirado da câmara anterior duas semanas após a injeção. Depois de esperar uma semana para permitir que a córnea se recuperasse, a pressão intraocular voltou ao normal, o mesmo que o olho de controle.Para determinar os efeitos da hipotensão ocular induzida pelo óleo de silicone nas células gânglios da retina, a somata sobrevivente nas regiões periféricas dos montagems inteiras da retina foi quantificada pela coloração RBPMS mostrando dramática morte celular de gânglio da retina após injeção de óleo de silicone. Os axônios sobreviventes nas seções transversais semi-finas do nervo óptico foram quantificados pela coloração da PBD oito semanas após a injeção. Houve uma grande degeneração de axônio na hipertensão ocular induzida pelo óleo de silicone.Os animais podem ser imagens com SLOOCT para determinar a mudança na retina. A função visual dos animais também pode ser avaliada pelo padrão ERG e OKR. Este modelo de hipertensão ocular facilitará a investigação da neurodegeneração de glaucometros induzidos pelo IOP.Também pode ser usado para testar terapias neuroprotetoras promissoras pré-clínicas.

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Research

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Medicine

Medicina

Glaucoma é uma das principais causas de cegueira no mundo. Pressão intraocular elevada é um importante fator de risco. Fotocoagulação a laser hipertensão ocular induzida é um dos modelos animais bem estabelecidos. Este vídeo demonstra como para induzir hipertensão ocular por fotocoagulação com laser de argônio em ratos.

Laser-Induced Ocular Modelo Hipertensão crônica em ratos SD

Neste vídeo, um rato anestesiado passa por um procedimento ocular onde esferas magnéticas são injetadas na câmara anterior sob um campo magnético para bloquear o ângulo iridocorneano. Esse bloqueio obstrui a malha trabecular, impedindo a drenagem do humor aquoso e levando ao aumento da pressão intraocular, danificando as células ganglionares da retina e o nervo óptico. Isso desenvolve uma condição semelhante ao glaucoma.

Indução experimental de glaucoma via obstrução do ângulo iridocorneano em um modelo de camundongo

Fonte: Lani-Louzada, R., et al., Cauterização de círculo completo do plexo vascular límbico para glaucoma induzido cirurgicamente em roedores. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra a indução e monitoramento da pressão intraocular (PIO) elevada em um modelo de rato. O processo envolve a cauterização dos vasos sanguíneos límbicos, resultando em oclusão do vaso e PIO elevada. O rato é então autorizado a se recuperar e a PIO é monitorada regularmente nos olhos experimental e de controle para...

 Indução de Pressão Intraocular Elevada em Modelo de Rato

Hipertensão ocular crônica é induzida pelo uso de fotocoagulação a laser da malha trabecular em rato olhos. A pressão intra-ocular (IOP) é ​​elevada durante vários meses após o tratamento com laser. A diminuição da acuidade visual e sensibilidade ao contraste de animais experimentais são monitorados por meio do teste optomotor.

Um modelo de rato induzida por laser de crônica Ocular Hypertension para Caracterizar defeitos visuais

Apresentamos um método para induzir pressão intraocular elevada (PIO), injetando microesferas magnéticas no olho do rato, para modelar o glaucoma. Isso leva a fortes aumentos de pressão e morte neuronal extensa. Este protocolo é fácil de executar, não requer injeções repetidas e produz aumentos estáveis de PIO de longa duração.

Experimental Glaucoma induzida pela injeção de microesferas magnéticas Ocular

Aqui, nós apresentamos um protocolo para induzir hipertensão ocular no olho murino que resulta na perda de células ganglionares da retina observada no glaucoma. microesferas magnéticas são injectados na câmara anterior e atraído para o ângulo iridocorneal utilizando um magnete para bloquear o escoamento do humor aquoso.

A Magnetic Microbead Oclusão Modelo para induzir Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma em Ratos

Este artigo descreve um processo para induzir a lesão de isquemia-reperfusão da retina pela pressão intra-ocular elevada em ratos. lesão de isquemia-reperfusão da retina pela pressão intra-ocular elevada serve para modelar patologias humanas caracterizadas por oxigénio e entrega de nutrientes comprometida na retina, permitindo aos investigadores para examinar os mecanismos celulares e potenciais tratamentos para doenças humanas da unidade neurovascular da retina.

Um modelo de mouse Retinal isquemia-reperfusão Através elevação da pressão intra-ocular

Hipertensão ocular crônica é induzida pela aplicação de uma sutura de circumlimbal em ratos e camundongos, levando à deterioração funcional e estrutural das células ganglionares da retina consistentes com glaucoma.

Um modelo de Glaucoma induzido por sutura Circumlimbal em ratos e camundongos

Aqui, descrevemos o uso da tomografia de coerência óptica de domínio espectral (SD-OCT) para visualizar estruturas retinianas e oculares in vivo em modelos de degeneração da retina, glaucoma, retinopatia diabética e miopia.

Avaliações estruturais in vivo de doenças oculares em modelos de roedores utilizando tomografia de coerência óptica

O objetivo deste protocolo é caracterizar um novo modelo de neurodegeneração glaucomatosa baseado na cauterização térmica 360° do plexo vascular limbal, induzindo hipertensão ocular subaguda.

Cauterização em círculo completo do plexo vascular limbal no glaucoma induzido cirurgicamente em roedores

Aqui, apresentamos um método para estabelecer um modelo de camundongo de olho seco deficiente em aquos, excisando as glândulas lacrimais extraorbital e infraorbital e avaliar as alterações na superfície ocular no olho seco por deficiência aquosa.

Estabelecimento de um modelo de camundongo de olho seco por deficiência aquosa

Aprenda a induzir hipertensão ocular reversível em camundongos usando injeção intracameral de óleo de silicone. Este modelo reproduz o glaucoma secundário humano para estudar neurodegeneração retiniana e testar terapias neuroprotetoras.

Um modelo reversível da hipertensão ocular óleo-induzida do silicone nos ratos

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