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Cancer Research
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JoVE Journal Cancer Research
In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

In Vitro Estabelecimento de uma linha de células de câncer de urina de urina geneticamente modificada usando um sistema adeno associado de vírus-cas9

Full Text
8,440 Views
05:45 min
January 9, 2020

DOI: 10.3791/60410-v

Manu Prasad*1,2, Sankar Jagadeeshan*1,2, Maurizio Scaltriti3, Irit Allon2,4, Moshe Elkabets1,2

1The Shraga Segal Department of Microbiology, Immunology and Genetics,Ben-Gurion University of the Negev, 2Faculty of Health Sciences,Ben-Gurion University of the Negev, 3Human Oncology & Pathogenesis Program (HOPP),Memorial Sloan Kettering Cancer Center, 4Institute of Pathology,Barzilai University Medical Center

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol enables the development of head and neck cancer models with specific genomic alterations, enhancing our understanding of gene mutations in neoplasia. The technique allows for the easy generation of cell lines from various organs.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Oncology
  • Genetics

Background

  • Murine models are essential for studying head and neck cancer.
  • Specific gene mutations play a critical role in neoplasia.
  • Current methods for developing cancer models can be complex.
  • This protocol simplifies the process of creating cell lines.

Purpose of Study

  • To develop murine head and neck cancer cell lines.
  • To investigate the impact of specific genomic alterations.
  • To provide a straightforward protocol for researchers.

Methods Used

  • Harvesting tongue tissue from B6 transgenic mice.
  • Mincing tissue into small fragments.
  • Using a triple enzyme mix for enzymatic dissociation.
  • Incubating samples at 37 degrees Celsius.

Main Results

  • Successful transformation of primary murine tongue cells.
  • Generation of cell lines with specific genomic alterations.
  • Enhanced understanding of gene mutations in neoplasia.
  • Demonstrated ease of use for researchers.

Conclusions

  • The protocol provides a reliable method for creating cancer models.
  • It facilitates research on the role of gene mutations in cancer.
  • This approach can be adapted for various organ tissues.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of this protocol?
The main advantage is the ease of developing cell lines from various organs.
What type of mouse is used in this study?
B6 transgenic mice are used for harvesting tongue tissue.
How long should the tissue be incubated with the enzyme mix?
The tissue should be incubated at 37 degrees Celsius for 30 minutes.
What is the purpose of mincing the tissue?
Mincing the tissue helps to enhance the enzymatic dissociation process.
Who demonstrates the procedure in the video?
Manu Prasad, a graduate student, demonstrates the procedure.
What is the significance of this research?
It significantly impacts our understanding of specific gene mutations in neoplasia.

O desenvolvimento de modelos de urina com genes específicos mutados em pacientes com câncer de cabeça e pescoço é necessário para a compreensão da neoplasia. Aqui, apresentamos um protocolo para a transformação in vitro das células primárias da língua murina usando um sistema de vírus-Cas9 associado ao adeno para gerar linhas celulares murine HNC com alterações genômicas específicas.

Este protocolo possibilitou o desenvolvimento de modelos de câncer de cabeça e pescoço com operação genômica específica, impactando significativamente nossa compreensão do papel de mutações genéticas específicas no processo de neoplasia. A principal vantagem dessa técnica é a facilidade com que a linha celular pode ser desenvolvida a partir de praticamente qualquer órgão. Demonstrando o procedimento será Manu Prasad uma estudante de pós-graduação do meu laboratório.

Comece usando uma tesoura cirúrgica para colher a língua de um rato transgênico B6 masculino ou feminino de seis semanas de idade. Use um bisturi para cortar o tecido em fragmentos muito pequenos e coletar os pedaços em um tubo de 15 mililitros contendo 4,5 mililitros de meio liso RPMI sem soro. Adicione 200 microliters de mistura de enzima tripla ao tubo e incubar a amostra a 37 graus Celsius por 30 minutos tocando o tubo a cada 10 minutos para melhorar a dissociação enzimática do tecido.

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