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DOI: 10.3791/60410-v
Manu Prasad*1,2, Sankar Jagadeeshan*1,2, Maurizio Scaltriti3, Irit Allon2,4, Moshe Elkabets1,2
1The Shraga Segal Department of Microbiology, Immunology and Genetics,Ben-Gurion University of the Negev, 2Faculty of Health Sciences,Ben-Gurion University of the Negev, 3Human Oncology & Pathogenesis Program (HOPP),Memorial Sloan Kettering Cancer Center, 4Institute of Pathology,Barzilai University Medical Center
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol enables the development of head and neck cancer models with specific genomic alterations, enhancing our understanding of gene mutations in neoplasia. The technique allows for the easy generation of cell lines from various organs.
O desenvolvimento de modelos de urina com genes específicos mutados em pacientes com câncer de cabeça e pescoço é necessário para a compreensão da neoplasia. Aqui, apresentamos um protocolo para a transformação in vitro das células primárias da língua murina usando um sistema de vírus-Cas9 associado ao adeno para gerar linhas celulares murine HNC com alterações genômicas específicas.
Este protocolo possibilitou o desenvolvimento de modelos de câncer de cabeça e pescoço com operação genômica específica, impactando significativamente nossa compreensão do papel de mutações genéticas específicas no processo de neoplasia. A principal vantagem dessa técnica é a facilidade com que a linha celular pode ser desenvolvida a partir de praticamente qualquer órgão. Demonstrando o procedimento será Manu Prasad uma estudante de pós-graduação do meu laboratório.
Comece usando uma tesoura cirúrgica para colher a língua de um rato transgênico B6 masculino ou feminino de seis semanas de idade. Use um bisturi para cortar o tecido em fragmentos muito pequenos e coletar os pedaços em um tubo de 15 mililitros contendo 4,5 mililitros de meio liso RPMI sem soro. Adicione 200 microliters de mistura de enzima tripla ao tubo e incubar a amostra a 37 graus Celsius por 30 minutos tocando o tubo a cada 10 minutos para melhorar a dissociação enzimática do tecido.
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