Name: Detectando estabelecimento de suprimento de sangue compartilhado em camundongos parabióticos por injeção de glicose em veia caudal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 27 s
Description: Aprenda a verificar quimerismo sanguíneo em camundongos parabióticos C57BL/6 por injeção de glicose na veia caudal. Este método não letal permite confirmar a circulação compartilhada de forma segura e confiável para pesquisa biomédica.

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Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciência da Natureza da China (81570399 e 81773735), pelo Programa Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento da China - Tradicional Projeto de Pesquisa em Modernização da Medicina Chinesa (2017YFC1702003) e Hei Long Jiang Excelente Fundo de Ciência da Juventude (JC2017020).

Todos os procedimentos envolvendo animais e seus cuidados foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Médica harbin.
NOTA: As ferramentas e equipamentos necessários para o método estão listados na Tabela de Materiais.
1. Preparação de materiais e animais
<ol><li>Peça C57BL/6 camundongos machos com peso entre 20 g-25 g de um fornecedor animal de laboratório padrão.</li>
	<li>Abrigar os ratos em um ciclo de 12h de luz: 12h de escuridão a 24-26 °C com acesso a délibitum à água e à comida.</li>
</ol>2. Parabiose
<ol><li>Anestesiar os camundongos por injeção intraperitoneal de 20 g/L 2,2,2-2-tribromoetanol a uma concentração de 0,1 mL/10 g. Confirme a anestesia adequada, como indicado pelo relaxamento muscular, respiração lenta e constante, perda de reflexo da estimulação da pele e desaparecimento do reflexo córnea.</li>
	<li>Aplique pomada oftalma com uma ponta Q para evitar olhos secos.</li>
	<li>Realizar o procedimento de parabiose como descrito anteriormente5.<ol>
<li>Coloque os ratos na posição supina. Raspe completamente o lado esquerdo de um rato e o lado direito do outro mouse começando a aproximadamente 1 cm acima do cotovelo a 1 cm abaixo do joelho com uma barbeador elétrica. Use creme depilatório para limpar totalmente a pele na pele raspada.</li>
		<li>Limpe as áreas raspadas com iodophor. Coloque os ratos em uma almofada aquecida coberta por uma almofada estéril.</li>
		<li>Crie incisões longitudinal de pele a partir de 0,5 cm acima do cotovelo para 0,5 cm abaixo da articulação do joelho usando um par de tesouras afiadas no lado raspado de cada animal.</li>
		<li>Desative a pele da fáscia subcutânea gentilmente após a incisão.</li>
		<li>Conecte o olecranon e o joelho do parabionte com uma sutura 3-0.</li>
		<li>Sutura a pele raspada com uma sutura contínua 5-0.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Injete 0,5 mL de 0,9% naCl subcutâneamente em cada mouse para evitar desidratação.</li>
	<li>Injete tramadol (10 mg/25 g/dia) intramuscularmente a cada rato para aliviar a dor.</li>
</ol>3. Validação do chimerismo de circulação
<ol><li>Método de flutuação da glicose NOTA: Verifique a construção bem sucedida do chimerismo de circulação entre parabiontes usando o método de flutuação da glicose (sem jejum) no 10º dia após a cirurgia de parabiose.<ol>
<li>Anestesiar os parabiontes por injeção intraperitoneal de 20 g/L 2,2,2-2-tribromoetanol a cada camundongo com concentração de 0,1 mL/10 g.</li>
		<li>Conserte os ratos doadores em um fixador de cauda de rato visual venoso.</li>
		<li>Esfregue as veias caudais no flanco de uma das caudas do parabionte com uma bola de algodão encharcada em 70-75% de álcool para limpar a cauda e dilatar os vasos sanguíneos.</li>
		<li>Segure uma seringa de 1,0 mL contendo glicose na mão direita e mantenha a agulha paralela à veia (menos de 15°).</li>
		<li>Insira a agulha em uma posição de aproximadamente 2-4 cm da ponta da cauda.</li>
		<li>Injete 100 μL de glicose (1,2 g/kg) no doador dentro de 10 s. NOTA: O termo doador refere-se ao parabionte que recebe a injeção de glicose através da veia traseira. O beneficiário é o outro parabionte, que não recebe glicose diretamente.</li>
		<li>Limpe os dedos dos dedos com iodophor. Corte os dedos dos camundongos doadores e receptores com uma tesoura e colete uma gota de sangue em diferentes pontos de tempo após a injeção de glicose (1 min, 5 min, 10 min, 15 min, 20 min, 30 min, 40 min, 50 min e 60 min). Remova o coágulo sanguíneo em cada ponto de coleta para evitar mais danos. NOTA: O volume de sangue coletado foi de 10-25 ul para um teste, e 90-225 ul no total.</li>
		<li>Escorra o sangue para o centro das tiras de teste de gliccometer para detecção do nível de glicose.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Use o Contrastain azul de Evan como um controle positivo3.<ol>
<li>Injete 200 μL de 0,5% o Contrastain azul de Evan intraperitonely no mouse doador.</li>
		<li>2 h depois, eutanize os parabiontes por injeção intraperitoneal de 20 g/L 2,2,2-tribromoetanol a cada camundongo com uma concentração de 0,2 mL/10 g, e coletar sangue de ambos os parabiontes por punção cardíaca.</li>
		<li>Centrífuga as amostras de sangue em 916 x g por 15 min.</li>
		<li>Colete soro do supernatante.</li>
		<li>Diluir o soro com 0,9% de NaCl às 1:50.</li>
		<li>Meça a absorção das amostras de soro diluídas em 620 nm com espectrofofômetro.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Baruch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging-induced+type+I+interferon+response+at+the+choroid+plexus+negatively+affects+brain+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Aging-induced type I interferon response at the choroid plexus negatively affects brain function.</a> Science. 346 (6205), 89-93 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+cloning+of+the+mouse+obese+gene+and+its+human+homologue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue.</a> Nature. 372 (6505), 425-432 (1994).</li>
<li>Torres, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiotic+model+for+differentiating+local+and+systemic+effects+of+continuous+and+intermittent+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Parabiotic model for differentiating local and systemic effects of continuous and intermittent hypoxia.</a> Journal of Applied Physiology (1985). 118 (1), 42-47 (2015).</li>
<li>Loffredo, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+differentiation+factor+11+is+a+circulating+factor+that+reverses+age-related+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Growth differentiation factor 11 is a circulating factor that reverses age-related cardiac hypertrophy.</a> Cell. 153 (4), 828-839 (2013).</li>
<li>Kamran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiosis+in+mice%3A+a+detailed+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Parabiosis in mice: a detailed protocol.</a> Journal of Visualized Experiments. (80), e50556(2013).</li>
<li>Conboy, M. J., Conboy, I. M., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterochronic+parabiosis%3A+historical+perspective+and+methodological+considerations+for+studies+of+aging+and+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Heterochronic parabiosis: historical perspective and methodological considerations for studies of aging and longevity.</a> Aging Cell. 12 (3), 525-530 (2013).</li>
<li>Eggel, A., Wyss-Coray, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+revival+of+parabiosis+in+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Swiss+Medical+Weekly%22%5BJournal%5D)">A revival of parabiosis in biomedical research.</a> Swiss Medical Weekly. 144, w13914(2014).</li>
<li>Brack, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ageing+of+the+heart+reversed+by+youthful+systemic+factors%21%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Ageing of the heart reversed by youthful systemic factors!</a> EMBO Journal. 32 (16), 2189-2190 (2013).</li>
<li>Wu, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+cells+contribute+to+cardiomyocyte+regeneration+after+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating cells contribute to cardiomyocyte regeneration after injury.</a> Circulation Research. 116 (4), 633-641 (2015).</li>
<li>Kaiser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Rejuvenation+factor%27+in+blood+turns+back+the+clock+in+old+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">'Rejuvenation factor' in blood turns back the clock in old mice.</a> Science. 344 (6184), 570-571 (2014).</li>
<li>Rando, T. A., Finkel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+aging+and+rejuvenation--a+sense+of+humors%3F%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cardiac aging and rejuvenation--a sense of humors?</a> New England Journal of Medicine. 369 (6), 575-576 (2013).</li>
<li>Heidt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+contribution+of+monocytes+to+heart+macrophages+in+steady-state+and+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Differential contribution of monocytes to heart macrophages in steady-state and after myocardial infarction.</a> Circulation Research. 115 (2), 284-295 (2014).</li>
<li>McPherron, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Through+thick+and+thin%3A+a+circulating+growth+factor+inhibits+age-related+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Through thick and thin: a circulating growth factor inhibits age-related cardiac hypertrophy.</a> Circulation Research. 113 (5), 487-491 (2013).</li>
<li>Villeda, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Young+blood+reverses+age-related+impairments+in+cognitive+function+and+synaptic+plasticity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Young blood reverses age-related impairments in cognitive function and synaptic plasticity in mice.</a> Nature Medicine. 20 (6), 659-663 (2014).</li>
<li>Katsimpardi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+and+neurogenic+rejuvenation+of+the+aging+mouse+brain+by+young+systemic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Vascular and neurogenic rejuvenation of the aging mouse brain by young systemic factors.</a> Science. 344 (6184), 630-634 (2014).</li>
<li>Starzl, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lost+chord%3A+microchimerism+and+allograft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Today%22%5BJournal%5D)">The lost chord: microchimerism and allograft survival.</a> Immunology Today. 17 (12), 577-584 (1996).</li>
<li>Coleman, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+historical+perspective+on+leptin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">A historical perspective on leptin.</a> Nature Medicine. 16 (10), 1097-1099 (2010).</li>
<li>Salpeter, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+regulation+of+the+age-related+decline+of+pancreatic+beta-cell+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Systemic regulation of the age-related decline of pancreatic beta-cell replication.</a> Diabetes. 62 (8), 2843-2848 (2013).</li>
<li>Sheldon, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gestational+exercise+protects+adult+male+offspring+from+high-fat+diet-induced+hepatic+steatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Gestational exercise protects adult male offspring from high-fat diet-induced hepatic steatosis.</a> Journal of Hepatology. 64 (1), 171-178 (2016).</li>
<li>Martineau, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+metabolic+profile+of+intrahepatic+cholestasis+of+pregnancy+is+associated+with+impaired+glucose+tolerance%2C+dyslipidemia%2C+and+increased+fetal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">The metabolic profile of intrahepatic cholestasis of pregnancy is associated with impaired glucose tolerance, dyslipidemia, and increased fetal growth.</a> Diabetes Care. 38 (2), 243-248 (2015).</li>
<li>Wang, F., Liu, Y., Yuan, J., Yang, W., Mo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compound+C+Protects+Mice+from+HFD-Induced+Obesity+and+Nonalcoholic+Fatty+Liver+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Compound C Protects Mice from HFD-Induced Obesity and Nonalcoholic Fatty Liver Disease.</a> International Journal of Endocrinology. 2019, 3206587(2019).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

A parabiose refere-se à técnica cirúrgica de conectar dois animais vivos para estabelecer um sistema vascular comum por meioexperimental6,7,8. A vantagem deste modelo é que as substâncias produzidas por um único indivíduo podem atuar em ambos os animais ao mesmo tempo. Assim, o modelo de parabiose pode ser usado para explorar o papel de uma substância ou fator em uma doença relacionada, produzindo muitas conclusões significativa...

A parabiose é um método de modelagem no qual dois organismos vivos são unidos cirurgicamente e se desenvolvem como um único sistema fisiológico com um sistema circulatório compartilhado1. Tais modelos têm sido amplamente utilizados para estudar fisiologia devido à vantagem de que as substâncias produzidas por um único indivíduo podem atuar em ambos os animais ao mesmo tempo através do sistema circulatório compartilhado. Desde meados da década de 1800, quando experimentos parabióticos foram pioneiros por Paul Bert2, os métodos para a construção de modelos parabióticos tornaram-se padronizados. No entanto, um método simples e conveniente para verificar o estabelecimento bem sucedido do chimerismo sanguíneo está faltando. Foi relatado que a circulação cruzada pode ser avaliada com sucesso por injetar intraperitoneicamente 0,5% de tinta azul Evans em um dos parabiontes seguido pela medição da absorção do azul Evans no sangue de ambos os parabiontes com um leitor de microplaca3. Outro método requer uma raça específica do mouse que contém CD45.1+- e monocitos rotulados por CD45.2+em cada parabionte. A citometria celular é então usada para determinar o chimerismo sanguíneo medindo a frequência dos dois marcadores em monocitos do baço ou sangue4. No entanto, esses métodos são muitas vezes letais ou complicados para os animais, e um método seguro e simples para verificação rápida e confiável de modelos parabióticos é altamente desejável. Neste estudo, estabelecemos um novo método para esse fim, que foi validado em um modelo de parabiose de camundongos. A concentração de glicose em amostras de sangue retiradas de uma veia traseira é medida usando um glucometer, e o padrão de mudanças do nível de glicose em camundongos doadores e receptores é considerado uma indicação de chimerismo de circulação. Nomeamos este método de "método de flutuação de glicose". A aplicação deste método de validação não se limita aos camundongos, mas pode ser estendida a diversos modelos patológicos, exceto aqueles com grave disregulação do metabolismo da glicose. O procedimento é simples, economizando tempo e seguro.

<table><tbody><tr><td>pinça curva</td><td>JZ instrumentos cirúrgicos, China</td><td>J31340</td><td></td></tr><tr><td>tesoura fina</td><td>JZ instrumentos cirúrgicos, China</td><td>WA1030</td><td></td></tr><tr><td>pinça de agulha</td><td>JZ instrumentos cirúrgicos, China</td><td>60017961</td><td></td></tr><tr><td>seringas de 2,5 mL</td><td>Agilent, EUA</td><td>5182-9642</td><td></td></tr><tr><td>Tribromoethano</td><td>Sigma-Aldrich, EUA</td><td>T48402-5G</td><td></td></tr><tr><td>penicilina</td><td>Solarbio, China</td><td>IP0150</td><td></td></tr><tr><td>tramadol</td><td>Yijishiye, China</td><td>YJT712520</td><td></td></tr><tr><td>glicosímetro</td><td>Roche Diabetes Care, Indiana</td><td>Accu-Chek Tiras</td><td></td>de teste ativas</tr><tr><td>Evan's blue Counterstain</td><td>Solarbio, China</td><td>G1810</td><td></td></tr><tr><td>creme depilatório</td><td>Nair, EUA</td><td>LL9161</td><td></td></tr><tr><td>Cobertor de aquecimento ( Kent</td> <td>Scientific Corp, EUA</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>Barbeador elétrico</td><td>Codos, China</td><td>CP-5000</td><td></td></tr><tr><td>3-0,5-0 sutura cirúrgica</td><td>Xangai Medical Sutura Agulha Fábrica, China</td><td>SYZ 3-0 #, SYZ 5-0 #</td><td></td></tr></tbody></table>

detectando estabelecimento de suprimento de sangue compartilhado em camundongos parabióticos por injeção de glicose em veia caudal

Detecting Establishment of Shared Blood Supply in Parabiotic Mice by Caudal Vein Glucose Injection

A parabiose é um método experimental para combinar cirurgicamente dois animais paralelos ao longo do eixo longitudinal do corpo. Apresentamos um protocolo para detectar o estabelecimento bem sucedido de chimerismo sanguíneo em parabiontes por uma injeção de glicose na veia caudal. Foram construídos camundongos parabióticos. A glicose foi injetada no camundongo doador através da veia traseira, e a flutuação do nível de glicose no sangue foi medida em ambos os camundongos usando um glucometer de sangue em diferentes pontos de tempo. Nossos resultados mostraram que após a injeção de glicose, o nível de glicose no sangue em camundongos doadores aumentou acentuadamente após 1 min e diminuiu lentamente depois disso. Enquanto isso, o nível de glicose no sangue dos camundongos receptores atingiu 15 min após a injeção. Resultados semelhantes foram obtidos com o azul Evans, usado como um controle positivo para a glicose. A flutuação síncrona dos níveis de glicose no sangue indica que o fluxo sanguíneo entre os dois camundongos foi estabelecido com sucesso.

Em seis camundongos doadores, os níveis de glicose no sangue aumentaram acentuadamente para 26,5 μmol/L (aumento de 173%) em uma média de 1 min após a injeção de 100 μL de glicose (1,2 g/kg) através da veia traseira e, em seguida, gradualmente diminuíram para 13,3 μmol/L a 60 min. Em camundongos receptores, a glicemia aumentou lentamente após a injeção e atingiu o primeiro pico de nível de 15 min (aumento de 47%, 12,2 μmol/L). Com base nos resultados acima, o padrão de quimerismo de circu...

Aqui descrevemos um novo método de detecção de estabelecimento bem sucedido de circulação sanguínea compartilhada de dois parabiontes através de uma injeção de veia caudal de glicose, o que causa danos mínimos e não é fatal para os parabiontes.

Detectando estabelecimento de suprimento de sangue compartilhado em camundongos parabióticos por injeção de glicose em veia caudal

Parabiosis is an experimental method for surgically combining two parallel animals along the longitudinal axis of the body. We present a protocol for ...

Nosso protocolo fornece um método de verificação aprimorado para o chimerismo de circulação e um método para uma configuração bem-sucedida do modelo de parabiose para pesquisa biomédica. Comparado com os métodos existentes para a detecção de chimerismo sanguíneo na parabiose que muitas vezes são letais ou complicados, nosso protocolo é seguro e simples, permitindo uma verificação rápida e confiável. Embora este método seja específico para a detecção do chimerismo sanguíneo em modelos de parabiose, pode ser aplicado a quaisquer estudos biomédicos envolvendo procedimentos parabióticos.O passo mais desafiador é a injeção de glicose. Portanto, certifique-se de praticar a injeção da veia da cauda antes de realizar um procedimento experimental, ou usar um fixador de cauda visual venoso. Depois de confirmar a falta de resposta ao reflexo do pedal, coloque dois camundongos c57 pretos c57 de 20 a 25 gramas na posição supina, e use um barbeador elétrico para raspar completamente o lado esquerdo de um rato e o lado direito do segundo rato de aproximadamente um centímetro acima do cotovelo para um centímetro abaixo do joelho.Remova qualquer cabelo restante com creme depilatório antes de fazer

detecting-establishment-shared-blood-supply-parabiotic-mice-caudal

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JoVE Journal

Biology

Biologia

Parabiótico junção dos dois organismos conduz ao desenvolvimento de um sistema circulatório compartilhado. Neste protocolo, descrevemos os passos cirúrgicos para formar uma conexão parabiótico entre um rato do tipo selvagem e um rato expressando GFP constitutiva.

Parabiose em Ratos: Um protocolo detalhado

Este filme demonstra como adquirir hemodinâmica sistêmica e hepática em ratos. Todo o monitoramento inclui a aquisição de parâmetros vitais, pressão arterial sistêmica, pressão venosa central, a taxa de fluxo da artéria hepática comum, e pressão da veia porta, bem como a taxa de fluxo portal em camundongos.

Monitoramento da sistêmicas e hepática Hemodinâmica em Ratos

Vasodilatação induzida por insulina regula a perfusão muscular e aumenta o microvascular superfície (recrutamento microvascular) disponível para troca de soluto entre sangue e tecido do interstício. Combinado de microscopia intravital e ultra-sonografia contraste aprimorado é apresentado para avaliar simultaneamente a ação da insulina em vasos maiores e a microcirculação in vivo.

Combinado de microscopia Intravital e ultra-sonografia contraste aprimorado do membro posterior Mouse para estudar a vasodilatação induzida por insulina e perfusão muscular

O atual artigo descreve a geração e caracterização metabólica de ratos alimentados com dieta de alto teor de gordura como um modelo de obesidade e resistência à insulina induzida pela dieta. Possui ainda mais protocolos detalhados para executar o teste de tolerância à glicose oral e o teste de tolerância à insulina, monitoramento de alterações de todo o organismo de glicose metabolismo na vivo.

Estudo do metabolismo in vivo da glicose em camundongos alimentados com dieta de alto teor em gordura usando o teste oral de tolerância à glicose (OGTT) e o teste de tolerância à insulina (ITT)

Aqui, descrevemos um método simples para implantar um monitor de glicose contínuo comercial projetado para pacientes em camundongos e fornecemos os scripts para analisar os resultados.

Monitoramento Contínuo Simples de Glicose em Camundongos em Movimento Livre

Este protocolo descreve um método simples e minimamente invasivo para transplante e obtenção de imagens de células NIT-1 em camundongos imunodeficientes combinados não-obesos diabéticos (NOD)-graves desafiados com esplenócitos purificados de camundongos NOD espontaneamente diabéticos.

Monitoramento Bioluminescente da Sobrevida do Enxerto em Modelo de Transferência Adotiva de Diabetes Autoimune em Camundongos

Um clamp hiperglicêmico é usado para medir a liberação de insulina com uma concentração de glicose no sangue mais alta mantida. Uma pinça hipoglicemiante serve para medir a produção de glicose induzida por respostas contra-regulatórias. Ambos os métodos utilizam o mesmo procedimento cirúrgico. Apresentamos aqui uma técnica de clamp para avaliar o metabolismo sistêmico da glicose.

Clamp hiperglicêmico e grampo hipoglicêmico em camundongos conscientes

Neste protocolo, métodos relevantes para metabolômica arteriovenosa otimizada para BAT usando GC-MS em um modelo de camundongo são descritos. Esses métodos permitem a aquisição de informações valiosas sobre a troca de metabólitos mediada por MTD em nível de organismo.

Metabolômica Arteriovenosa para Mensuração da Troca de Metabólitos In Vivo no Tecido Adiposo Marrom

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de camundongo de injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI) e transferência de embriões (ET), permitindo-nos observar mudanças relacionadas à idade no metabolismo da glicose que podem ser atribuídas à ICSI, fornecendo informações sobre seus potenciais impactos de longo prazo no desenvolvimento humano.

Monitoramento da glicose no sangue na prole de camundongos após injeção intracitoplasmática de espermatozóides

O protocolo demonstra um método para coletar sangue de veias porta e veia cava inferior de camundongos sequencialmente para avaliar a produção e absorção de metabólitos microbianos intestinais.

Coleta sequencial de sangue da veia cava inferior seguida da veia porta para avaliar metabólitos microbianos intestinais em camundongos

Aqui, fornecemos detalhes sobre a realização da secreção de insulina estimulada por glicose (GSIS) via perfusão através da vasculatura de camundongos com um pâncreas intacto como uma técnica adicional para avaliar a função pancreática endócrina com redução de possíveis fatores de confusão.

Secreção de insulina estimulada por glicose via perfusão através da vasculatura de camundongos com pâncreas intacto

Aprenda a verificar quimerismo sanguíneo em camundongos parabióticos C57BL/6 por injeção de glicose na veia caudal. Este método não letal permite confirmar a circulação compartilhada de forma segura e confiável para pesquisa biomédica.

Detectando estabelecimento de suprimento de sangue compartilhado em camundongos parabióticos por injeção de glicose em veia caudal (Vídeo) | JoVE Journal

Detectando estabelecimento de suprimento de sangue compartilhado em camundongos parabióticos por injeção de glicose em veia caudal

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