Name: Células progenitoras coronárias e biomarcadores solúveis no prognóstico cardiovascular após angioplastia coronária (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: Aprenda a avaliar células progenitoras coronárias e biomarcadores solúveis para prever eventos cardiovasculares após angioplastia. Este método auxilia na estratificação de risco em pacientes com doença arterial coronária.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Os autores agradecem o apoio do Programa Institucional E015; e Fondo Sectorial FOSSIS-CONACYT, SALUD-2014-1-233947.

Esse protocolo atende às diretrizes institucionais do Comitê de Ética em Pesquisa Humana.
1. Angiografia Coronariana, Ultrassom e Amostragem de Sangue
<ol><li>Solicite informações clínicas e demográficas de linha de base antes da intervenção coronária. Coleta os dados do indivíduo: idade, sexo, estado atual de tabagismo, índice de massa corporal (IMC), pressão alta, dislipidemia, diabetes mellitus, medicamentos e a indicação para a angiografia coronariana atual.</li>
	<li>Realizar angiografia coronariana através do cateterismo cardíaco usando uma abordagem radial. Esse procedimento deve ser realizado um guia de fluoroscopia na sala de hemodinâmica por cardiologistas especialistas. NOTA: Identifique embarcações valiosas. Para o presente estudo, os vasos valiosos foram definidos como artérias com seções maiores que 1,5 mm e estenose de lúmen de mais de 50%.</li>
	<li>Avance o cateter de ultrassom intravascular para a região de interesse e grave imagens. Use o software apropriado para localizar e medir a menor área luminal.</li>
	<li>Use um cateter coronário para coletar 10 mL de sangue do local mais próximo da placa.</li>
	<li>Após a alta do paciente, agendar avaliações médicas periódicas para acompanhar os pontos finais do estudo. Se o contato telefônico não for possível ou uma visita médica for adiada por mais de 2 meses, solicite uma pessoa autorizada (previamente projetada) para verificar os pontos finais do estudo. NOTA: Considere qualquer um dos seguintes MACE: 1) morte cardiovascular, 2) novo infarto do miocárdio, 3) angina instável que levou a uma consulta médica não programada dentro de 24 h, 4) restenose stent como demonstrado pela angiografia coronariana, 5) episódios de descompensados insuficiência cardíaca exigindo atenção clínica.</li>
</ol>2. Determinação dos MPCs circulantes (Figura 2)
<ol><li>Processe o sangue dentro de 1h da coleta. Transfira 6 mL do sangue coletado para um tubo cônico de 15 mL e dilua 1:1 (v/v) com soro fisiológico 1x fosfato (PBS), pH = 7,4.</li>
	<li>Adicione 2 mL de média gradiente de densidade a três tubos de ensaio. Transfira cuidadosamente três alíquotas de volume igual de sangue diluído em cada tubo de ensaio contendo o meio gradiente de densidade. NOTA: O volume total de gradiente de densidade médio e sangue diluído não deve exceder três quartos da capacidade máxima do tubo de ensaio.</li>
	<li>Centrífuga a 1.800 x g, 4 °C por 30 min. Transfira a banda na interface entre as camadas para um novo tubo. Adicione 2 mL de PBS e centrífuga sem 1.800 x g,4 °C para 6 min. A pelota conterá os MPCs.</li>
	<li>Lave a pelota várias vezes. Aspirar a solução anterior e suspender suavemente a pelota celular em PBS fresco. Para as gestões subsequentes, centrífuga a 1.800 x g, 4 °C por 2 min. Repita o processo 6x.</li>
	<li>Resuspender a pelota de celular em 1 mL de PBS. Misture 20 μL da suspensão celular com 0,4% azul trypan, diluído 1:1 (v/v). Aplique uma gota em um hemocímetro e conte as células não manchadas um microscópio leve.</li>
	<li>Prossiga para a determinação dos MPCs. Rotular tubos de citometria de fluxo de 5 mL e aliquot out 1 x 106 células por tubo. Prepare os anticorpos de controle correspondentes com fósforo de isotipo. Centrífuga a 1.800 x g, 4 °C por 6 min e descartar o supernatante.</li>
	<li>Adicione o anticorpo primário diluído em 100 μL de uma solução de incubação de anticorpos composta por 1x PBS (pH = 7,4), 2 mM ácido etilenodiaminatetracético (EDTA) e 0,05% de albumina de soro bovino (BSA). Resuspender por 10 s e incubar por 20 min a 4 °C, protegido pela luz. O protocolo pode ser pausado nesta etapa, fixando os linfócitos em 4% paraformaldeídos na PBS e armazenando amostras até 24 h a 4°C. NOTA: As concentrações finais dos anticorpos primários utilizados no protocolo atual foram CD45 1:50, CD34 1:20, KDR 1:50, CD184 1:20, CD133 1:50.</li>
	<li>Centrífuga a 1.800 x g, 4 °C por 2 min e descartar o supernatante. Resuspender em 500 μL de 1x PBS (pH = 7,4), 2 mM EDTA.</li>
	<li>Realizar análise de citometria de fluxo. Use anticorpos de controle com fósforo de isotipo para configurar a coloração de fundo. Em seguida, selecione linfócitos espalhados na trama fsc/SSC, tentando excluir granulocitos residuais, detritos celulares e outras partículas, que geralmente estão localizadas na parte inferior, deixada distribuída na trama. Tal distribuição é considerada 100%.</li>
	<li>Use um portão contendo um alto número de células com imunofenótipo comum CD45+ e CD34+. Para imunofenótipos duplos positivos, use um portão de identificação anterior de CD45+,CD34+, com a adição de KDR (VEGFR-2)+,CD133+, ou CD184+. Identifique as subpopulações do MPC por seus marcadores específicos de superfície celular. Reporte como a porcentagem de eventos fechados.</li>
	<li>Identifique as principais subpopulações de MPCs. No presente estudo os principais imunofenótipos foram CD45+CD34+CD133+,CD45+CD34+CD184+,CD45+CD34+CD133+C Dd184+,CD45+CD34+KDR+, CD45+CD34+KDR+CD133+, e CD45+CD34+KDR+CD184. NOTA: Os marcadores de superfície celular utilizados foram CD45 (linfócitos), CD34 (células endoteliais e/ou vasculares), KDR (VEGFR-2, marcador de membrana de células endoteliais), CD133 (células progenitoras endoteliais) e CD184 (células-tronco hematopoiéticas e células-tronco endoteliálas).</li>
</ol>3. Determinação de Biomarcadores Solúveis de Plasma
<ol><li>Use um ensaio imunosorbent ligado à enzima (ELISA) para determinar a concentração de SICAM-1 e MMP-9 (Figura 3,linha superior).<ol>
<li>Centrífuga as amostras de sangue a 3.000 x g,temperatura ambiente para 5 min e coletar o plasma.</li>
		<li>Rotular os padrões, tubos de amostra e tubos de controle. Equilibre os poços pré-revestidos na placa de ensaio lavando 2x com o tampão de lavagem fornecido no kit ELISA.</li>
		<li>Transfira os padrões, amostras e controles para os poços. Vedae e incuba a 37 °C por 90 min. NOTA: Não deixe os poços secarem completamente.</li>
		<li>Descarte o conteúdo e adicione o anticorpo de detecção de biotina. Vedae e incuba a 37 °C por 60 min.</li>
		<li>Descarte o conteúdo e lave 3x. Selar a placa e incubar sequencialmente com solução de trabalho de streptadina seguida de substrato tetrametilbenzidina a 37 °C por 30 min, protegido por luz. Lave 3x entre incubações. Quando a cor se desenvolver, adicione a solução de parada e leia a absorção de densidade óptica em um leitor ELISA microplacado.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Use um ensaio imunomagnético multiplexante para determinar a concentração do fator necrose tumoral alfa (TNFα) e interleucina 1 beta (IL-1β) (Figura 3,linha inferior).<ol>
<li>Rotular os padrões, tubos de amostra e tubos de controle.</li>
		<li>Vórtice os frascos de contas magnéticas por 30 s. Transfira a suspensão da contas para tubos de tamanho adequado e, em seguida, para os poços na placa de ensaio multiplexeto. O vórtice periódico evita a precipitação das contas.</li>
		<li>Insira com segurança a lavadora de placas magnéticas portáteis. Espere 2 min para que as contas se acumulem na parte inferior de cada poço e invertam rapidamente tanto a lavadora de placas magnéticas portáteis quanto o conjunto de placas, sobre uma pia ou recipiente de resíduos. Lembre-se de usar a lavadora de placas magnéticas portátil para manter as contas dentro dos poços.</li>
		<li>Adicione 150 μL de tampão de lavagem em cada poço e espere 30 s para permitir que as contas se acumulem na parte inferior. Descarte o conteúdo como na etapa 3.2.3. Em seguida, adicione 25 μL de buffer de ensaio universal (fornecido no kit) seguido por 25 μL de padrões, amostras e controles preparados.</li>
		<li>Selar a placa e incubar por pelo menos 60 min à temperatura ambiente, protegido pela luz, com constante agitação a 500 rpm. Alternativamente, incuba durante a noite a 4 °C, iluminado, com constante agitação a 500 rpm, se possível.</li>
		<li>Lave 2x adicionando 150 μL de tampão de lavagem e espere 30 s. Descarte o conteúdo inserindo a lavadora de placa magnética portátil. Espere 2 min e inverta sobre uma pia ou recipiente de lixo.</li>
		<li>Incubasequencialmente com 25 μL de mistura de anticorpos de detecção seguido por 25 μL de solução streptavidin-PE a temperatura ambiente por 30 min, lacrada e protegida pela luz, com tremor constante a 500 rpm. Lave 2x entre incubações, conforme descrito na etapa 3.2.6.</li>
		<li>Obtenha as leituras. Adicione 120 μL de tampão de leitura. Selar a placa e incubar 5 min à temperatura ambiente, protegido pela luz, com tremor constante a 500 rpm. Faça a leitura em um leitor de ensaios multiplexing. Ajuste os parâmetros de leitura de acordo com cada anestesia.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Cassar, A., Holmes, D. R. Jr, Rihal, C. S., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+coronary+artery+disease%3A+diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Mayo+Clinic+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Chronic coronary artery disease: diagnosis and management.</a> Mayo Clinic Proceedings. 84 (12), 1130-1146 (2009).</li>
<li>Regueiro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mobilization+of+endothelial+progenitor+cells+in+acute+cardiovascular+events+in+the+PROCELL+study%3A+time-course+after+acute+myocardial+infarction+and+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).</li>
<li>Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+progenitor+cells%3A+novel+biomarker+and+promising+cell+therapy+for+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Science+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease.</a> Clinical Science (Lond). 120 (7), 263-283 (2011).</li>
<li>Samman Tahhan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitor+Cells+and+Clinical+Outcomes+in+Patients+With+Acute+Coronary+Syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes.</a> Circulation Research. 122 (11), 1565-1575 (2018).</li>
<li>Tomulić, V., Gobić, D., Lulić, D., Židan, D., Zaputović, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soluble+adhesion+molecules+in+patients+with+acute+coronary+syndrome+after+percutaneous+coronary+intervention+with+drug-coated+balloon%2C+drug-eluting+stent+or+bare+metal+stent%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Hypotheses%22%5BJournal%5D)">Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent.</a> Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).</li>
<li>Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+sinus+blood+sampling%3A+an+insight+into+local+cardiac+pathophysiology+and+treatment%3F%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment?</a> European Heart Journal. 28 (8), 929-940 (2007).</li>
<li>Kremastinos, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracoronary+cyclic-GMP+and+cyclic-AMP+during+percutaneous+transluminal+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty.</a> International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).</li>
<li>Karube, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+cytokine+levels+by+coronary+sinus+blood+sampling+during+cardiac+surgery+with+cardiopulmonary+bypass%5BTitle%5D)+AND+%22American+Society+for+Artificial+Internal+Organs+Journal%22%5BJournal%5D)">Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass.</a> American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42 (5), M787-M791 (1996).</li>
<li>Truong, Q. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+sinus+biomarker+sampling+compared+to+peripheral+venous+blood+for+predicting+outcomes+in+patients+with+severe+heart+failure+undergoing+cardiac+resynchronization+therapy%3A+the+BIOCRT+study%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Rhythm%22%5BJournal%5D)">Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study.</a> Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).</li>
<li>Suárez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+circulating+mononuclear+progenitor+cells+and+soluble+biomarkers+in+the+cardiovascular+prognosis+after+coronary+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).</li>
<li>Suárez-Cuenca, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+of+Coronary+Artery+Lumen+with+Baseline%2C+Post-angioplasty+Coronary+Circulating+Pro-Inflammatory+Cytokines+in+Patients+with+Coronary+Artery+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Angiology+Open+Access%22%5BJournal%5D)">Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease.</a> Angiology Open Access. 7, 01(2019).</li>
<li>Schmidt-Lucke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+circulating+endothelial+progenitor+cells+using+the+modified+ISHAGE+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol.</a> PLoS One. 5 (1), e13790(2010).</li>
<li>Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+IL-1+alpha+and+IL-1+beta+by+arterial+cells+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 138 (4), 951-960 (1991).</li>
<li>Morales-Portano, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+measurements+of+epicardial+adipose+tissue+and+comparative+ability+to+predict+adverse+cardiovascular+outcomes+in+patients+with+coronary+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiovascular+Imaging%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease.</a> International Journal of Cardiovascular Imaging. 34 (9), 1429-1437 (2018).</li>
<li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+progenitor+cells+correlated+with+oxidative+stress+after+mild+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury.</a> Yonsei Medical Journal. 58 (5), 1012-1017 (2017).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

A coleta de sangue da artéria coronária afetada pode ser difícil. Às vezes, a artéria coronária mal é acessível. Neste caso, a amostragem do seio venoso pode ser uma alternativa. Realizamos testes de validação comparando biomarcadores circulantes em artéria coronária versus seio venoso, sem diferenças significativas. No entanto, o desempenho dos biomarcadores circulantes foi validado apenas para amostragem coronária. Portanto, o desempenho dos biomarcadores obtidos a partir do seio venoso continua a ser explorado.
<p...

A angioplastia coronariana e o stent representam um procedimento de resgate para pacientes com doença arterial coronariana (CAD). No entanto, grandes eventos cardiovasculares adversos (MACEs), incluindo morte cardiovascular, infarto do miocárdio, restenose coronariana e episódios de angina ou insuficiência cardíaca descompensada, podem ocorrer meses após a intervenção coronária, provocando visitas não programadas ao hospital. MacEs são comuns em todo o mundo e sua morbi-mortalidade é alta1.
A lesão isquêmica coronariana induz a resposta vascular precoce e mecanismos reparativos envolvendo mobilização de MPCs devido à sua capacidade de diferenciação e/ou potencial de angioção-reparative, bem como a produção de moléculas solúveis como moléculas de adesão intercelular (ICAMs), metaloproteinases matrizes (MMPs) e espécies de oxigênio reativa, refletindo adesão celular, remodelação de tecidos e estresse oxidativo. Embora características vasculares intrínsecas como características da placa e complexidade arterial coronariana tenham sido utilizadas para prever MACEs, alguns estudos têm sugerido que biomarcadores relacionados aos mecanismos de lesão e reparo que ocorrem no endotelo coronário poderiam ser muito úteis para a identificação precoce e prognóstico de eventos cardiovasculares em pacientes com CAD submetidos à angioplastia coronariana2,3,4,5.
O interesse contínuo em entender os mecanismos subjacentes à lesão cad e reparo tem motivado os investigadores a estudar biomarcadores circulantes intracoronários, pois a amostragem coronária reflete mais de perto danos vasculares e reparos6. No entanto, a caracterização de biomarcadores coronários em estudos humanos tem sido escassa7,8,9. Portanto, o objetivo do presente estudo foi descrever um método para determinar a quantidade de MPCs circulantes coronários e moléculas solúveis, refletindo tanto a lesão vascular quanto a reparação, e mostrar se esses biomarcadores estão associados aos MACEs e ao prognóstico clínico dos pacientes cad que foram submetidos à angioplastia coronária. Este método baseia-se no uso de MPCs e moléculas solúveis relacionadas a vasculares e circulantes obtidas por locais de amostragem mais próximos aos danos causados pelo vaso. Também pode ser útil para estudos clínicos para isquemia de membros inferiores, derrame, vasculite, trombose venosa e outras lesões envolvendo lesão vascular e reparo.

<table><tbody><tr><td>A BSA</td><td>Roche</td><td>10735086001</td><td>a albumina de soro bovino (BSA) como agente tampão, estabilizador, padrão e para mistura.</td></tr><tr><td>Grânulos de calibração</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td><td>#130-093-607</td><td>Os grânulos de calibração MACQuant são fornecidos em solução aquosa contendo 0,05% de azida sódica. 3,5 ml para até 100 testes</td></tr><tr><td>CD133/1 (AC133)-PE</td><td>Milteny Biotec / MACS</td><td>#130-080-801</td><td>Anticorpo conjugado à R-Ficoeritrina em tampão PBS/EDTA</td></tr><tr><td>CD184 (CXCR4)-PE-VIO770</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td><td>#130-103-798</td><td>Monoclonal, IgG1 humano recombinante de isotipo, CD309 conjugado</td></tr><tr><td>(VEGFR-2/KDR)-APC</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td><td>#130-093-601</td><td>Anticorpo conjugado a R-Ficoeritrina em tampão PBS/EDTA</td></tr><tr><td>CD34-FITC</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td><td>#130-081-001</td><td>O clone de anticorpo monoclonal AC136 detecta um epítopo de classe III do CD34</td></tr><tr><td>CD45- VioBlue</td><td>Miltenyi Biotec / MACS</td><td>#130-092-880</td><td>Anticorpo CD45 monoclonal,</td></tr><tr><td>tubos cônicos</td> conjugados humanos <td>Thermo SCIENTIFIC</td><td>#339651</td><td>Tubos de centrífuga cônicos de 15ml</td></tr><tr><td>Tubos de citometria</td><td>FALCON Corning Marca</td><td>#352052</td><td>Tubo de fundo redondo de poliestireno de 5 mL. Estilo 12x75. Estéril.</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>BIO-RAD</td><td>#161-0729</td><td>Metais pesados, (como Pb) < 10ppm, Fe < 0,01%, como < 1ppm, Insolúveis < 0,005%</td></tr><tr><td>Neubauer melhorado</td><td>Sem marca</td><td>Sem número de catálogo</td><td>Hemocitômetro para contagem de células. (faixa 0,1000 mm, 0,0025 mm2)</td></tr><tr><td>Tubos de coleta de sangue K2 EDTA</td><td>BD Vacutainer</td><td>#367863</td><td>Tubo vacutainer de plástico lilás (K2E) 10,8mg, 6 mL.</td></tr><tr><td>Lymphoprep</td><td>Stemcell Technologies</td><td>01-63-12-002-A</td><td>Estéril e verificado quanto à presença de endotoxinas. Densidade: 1.077&plusmn; 0,001g/mL</td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>SIGMA-ALDRICH</td>#SZBF0920V <td></td><td>Fixação de amostras biológicas, (pó, 95%)Transferência de</td></tr> <tr><td>pipeta 1,3mL</td><td>CRM Globe</td><td>PF1016, PF1015</td><td>A pipeta de transferência é uma ferramenta que facilita a transferência de líquidos com maior precisão.</td></tr><tr><td>Tubos de ensaio</td><td>KIMBLE CHASE</td><td>45060 13100</td><td>Tubos de ensaio resistentes ao calor. TAMANHO/TAMPA 13 x 100 mm</td></tr></tbody></table>

células progenitoras coronárias e biomarcadores solúveis no prognóstico cardiovascular após angioplastia coronária

Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty

Os principais eventos cardiovasculares adversos (MACEs) impactam negativamente o prognóstico cardiovascular de pacientes submetidos à angioplastia coronariana devido a lesão isquêmica coronariana. A extensão dos danos coronários e os mecanismos de reparação vascular são fatores que influenciam o desenvolvimento futuro dos MACEs. Características vasculares intrínsecas como as características da placa e a complexidade da artéria coronária têm demonstrado informações prognósticos para MACEs. No entanto, o uso de biomarcadores circulantes intracoronários foi postulado como um método conveniente para a identificação precoce e prognóstico dos MACEs, pois refletem mais de perto mecanismos dinâmicos envolvendo danos coronários e reparos. Determinação de biomarcadores circulantes coronários durante a angioplastia, como o número de subpopulações de células progenitoras mononucleares (MPCs), bem como a concentração de moléculas solúveis refletindo inflamação, adesão celular e reparo, permite avaliação de desenvolvimentos futuros e o prognóstico de MACEs 6 meses após a angioplastia coronária. Este método é destacado por sua natureza translacional e melhor desempenho do que biomarcadores circulantes de sangue periféricos em relação à previsão de MACEs e seu efeito sobre o prognóstico cardiovascular, que pode ser aplicado para estratificação de risco dos pacientes com doença arterial coronariana submetida à angioplastia.

O sangue coronário, venoso e periférico foram coletados de 52 pacientes submetidos à angiografia coronariana (Figura 1)e apresentaram alta prevalência de hipertensão e dislipidemia. No acompanhamento clínico, 11 (21,1%) MacEs ocorreu 6 meses após angiografia coronariana: morte (n = 1), angina que exige atendimento hospitalar (n = 6), infarto do miocárdio (n = 2) e/ou evidência de insuficiência cardíaca (n = 4).
<p class="jove_content" fo:keep-together.wit...

O desenvolvimento de grandes eventos cardiovasculares adversos, que afetam o prognóstico cardiovascular após a angioplastia coronariana, são influenciados pela extensão dos danos coronários e reparo vascular. O uso de novos biomarcadores celulares coronários e solúveis, reativos a danos vasculares e reparos, são úteis para prever o desenvolvimento de MACEs e prognósticos.

Células progenitoras coronárias e biomarcadores solúveis no prognóstico cardiovascular após angioplastia coronária

Major adverse cardiovascular events (MACEs) negatively impact the cardiovascular prognosis of patients undergoing coronary angioplasty due to coronary ...

Embora a angioplastia ajude pacientes com doença arterial coronariana, eventos cardiovasculares ainda podem ocorrer após o procedimento. Como os MPCs e moléculas solúveis são obtidos a partir da circulação coronária, elas podem ser correlacionadas ao grau de dano vascular e reparação. Os níveis de Mediador coronariano e solúvel podem, portanto, ser usados para estimar eventos cardiovasculares e prognósticos em pacientes com doença arterial coronariana submetidas a angioplastias coronárias.Os MPCs e moléculas solúveis também podem ser usados para estimar complicações e prognósticos que ocorrem em diferentes ambientes isquêmicos, como o derrame isquemico recorrente de membros. Os que demonstrarão o procedimento serão Eduardo Vera-Gomez e Alejandro Hernandez-Patricio, técnicos de laboratório, e Karen De La Vega-Moreno e Carlos Zamora-Aleman, estudantes de graduação. Também estarão em demonstração Gabriela Alexandra Dominguez-Perez, estudante de Mestrado em Ciências, Alberto Melchor-Lopez, doutorando, e Mario Antonio Tellez-Gonzalez, colaborador do Mestrado em Ciências.Dentro de uma hora após a coleta, transfira seis mililitros da amostra de sangue colhida para um tubo cônico de 15 mil

coronary-progenitor-cells-soluble-biomarkers-cardiovascular-prognosis

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

tecido cardíaco humano abriga populações de células precursoras perivasculares multipotentes que podem ser adequados para a regeneração do miocárdio. A técnica aqui descrita permite o isolamento e purificação simultânea de duas populações de células estromais multipotentes associados com os vasos nativos de sangue, ie CD146 + CD34 - pericitos e células CD34 + CD146 - células adventícias, a partir do miocárdio humano.

Isolamento de perivascular Multipotentes populações de células precursoras a partir de tecido cardíaco humano

Apresentamos três protocolos de novos e mais eficientes para a diferenciação de células estaminais pluripotentes humanas induzida em cardiomiócitos, células endoteliais, e células do músculo liso e um método de entrega que melhora o enxerto de células transplantadas através da combinação de injecção das células com citocinas entrega mediada por remendo.

Pluripotentes Stem Cell Derivado células cardíacas para reparo do miocárdio

As células progenitoras endoteliais (CPE) são crucialmente envolvidas na neovascularização de tecidos isquémicos. Este método descreve o isolamento de EPCs humanos a partir de sangue periférico, bem como a identificação do seu potencial migratório contra amostras de soro de pacientes de cirurgia cardíaca.

Isolamento de células endoteliais progenitoras de voluntários saudáveis ​​e seu potencial migratório influenciada por amostras de soro após cirurgia cardíaca

Este protocolo ilustra um procedimento seguro e eficiente para modificar CD133+ células-tronco hematopoiéticas. A apresentado não-virais, magnética polyplex abordagem pode fornecer uma base para a otimização dos efeitos terapêuticos células-tronco, bem como acompanhamento do produto celular administrado via ressonância magnética.

Protocolo para transferência de MicroRNA na medula óssea-derivado hematopoiéticas células-tronco adultas para habilitar celular engenharia combinada com alvo magnético

Aqui nós apresentamos um método robusto para reprogramar fibroblastos embrionários primários em cardiomyocytes funcional através de superexpressão de GATA4 Hand2, Mef2c, Tbx5, miR-1 e miR-133 (GHMT2m) juntamente com a inibição da sinalização do TGF-β. Nosso protocolo gera cardiomyocytes bater tão cedo quanto pós-transdução de 7 dias com até 60% eficiência.

Supressão de sinalização pró-fibróticos potencializa mediada por fator de reprogramação de fibroblastos embrionários de rato em Cardiomyocytes induzida

Este protocolo descreve uma técnica de diferenciação endotelial para células progenitoras cardíacas. Centra-se sobretudo em como concentração sérica e densidade de semeadura de célula afetam o potencial de diferenciação endotelial.

Indução de diferenciação endotelial em células progenitoras cardíacas sob condições de baixo de soro

Modelos in vitro de angiogênese coronariana podem ser utilizados para a descoberta dos mecanismos celulares e moleculares da angiogênese coronariana. Culturas in vitro explantam tecidos sinus venosos e endocárdios mostram crescimento robusto em resposta ao VEGF-A e apresentam um padrão semelhante de expressão COUP-TFII como in vivo.

Modelo In Vitro de Angiogênese Coronariana

A amputação de membros inferiores pode ocorrer mesmo após a angioplastia de vasos obstruídos em Isquemia de Membros Críticos (CLI). Células Progenitoras Mononucleares (MPCs) refletem o reparo vascular. O presente protocolo descreve a quantificação de CMS de circulação próxima à angioplastia, e sua relação com disfunção endotelial e previsão de amputação de membros inferiores.

Prever amputação usando células progenitoras mononucleares circulantes locais em pacientes tratados com angioplastia com isquemia de membros críticos

Este estudo apresenta um modelo cirúrgico porcino de isquemia miocárdica crônica por estenose progressiva da artéria coronária, resultando em comprometimento da função cardíaca sem infarto. Após a isquemia, os animais são submetidos à cirurgia de revascularização do miocárdio sem circulação extracorpórea com colocação epicárdica de adesivo carregado de exossomos derivado de células-tronco. Essa terapia adjuvante melhora a função e a recuperação miocárdica.

Modelo cirúrgico porcino de isquemia miocárdica crônica tratada com adesivo carregado de exossomo e cirurgia de revascularização miocárdica sem circulação extracorpórea

Amostras de tecido de endarterectomia coronária foram processadas para isolar núcleos individuais usando um protocolo otimizado de dissociação. A integridade dos núcleos isolados foi validada por meio de três abordagens complementares: coloração de exclusão por azul de tripano para avaliar a integridade da membrana, microscopia confocal baseada em DAPI para confirmar a morfologia nuclear e citometria de fluxo para quantificar o rendimento e a pureza nuclear.

Isolamento de Núcleo Único de Tecido de Endarterectomia Coronária de Pacientes com Bypass de Artéria Coronária

Aprenda a avaliar células progenitoras coronárias e biomarcadores solúveis para prever eventos cardiovasculares após angioplastia. Este método auxilia na estratificação de risco em pacientes com doença arterial coronária.

Células progenitoras coronárias e biomarcadores solúveis no prognóstico cardiovascular após angioplastia coronária

Explorar mais vídeos