Name: In Vitro Cultura das Células Epitelias de diferentes regiões anatômicas da membrana amniótica humana (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-11-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Aprenda a isolar células epiteliais de três regiões anatômicas distintas da membrana amniótica humana para estudar heterogeneidade celular e propriedades funcionais com aplicações clínicas.

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Nossa pesquisa contou com o apoio de doações do Instituto Nacional de Perinatología de México (21041 e 21081) e CONACYT (A1-S-8450 e 252756). Agradecemos a Jessica González Norris e Lidia Yuriria Paredes Vivas pelo apoio técnico.

Este protocolo foi aprovado pelo comitê de ética do Instituto Nacional de Perinatología, na Cidade do México (Registro número 212250-21041). Todos os procedimentos realizados nesses estudos estavam de acordo com os padrões éticos do Instituto Nacional de Perinatología, da Declaração de Helsínquia, e das diretrizes estabelecidas no Padrão Oficial mexicano do Ministério da Saúde.
1. Preparação
<ol><li>Prepare uma solução de 1x PBS com EDTA. Para fazer isso, adicione 500 μL de 0,5 M DETA estoque em 500 mL de 1x PBS para uma concentração final de 0,5 mM EDTA.</li>
	<li>Prepare o meio de cultura para haec. Tome 450 mL de alta glicose-DMEM, complementá-lo com 5 mL de piruvato de sódio (100 mM), 50 mL de calor-inativo fetal soro bovino qualificado para células-tronco, 5 mL de aminoácidos não essenciais (100x), 5 mL de antibiótico-antimicotic (100x), 5 mL de L-glutamina (200m) e 500 μL de mercaptoetanol (1.000x).</li>
	<li>Esterilizar os recipientes para transportar e processar o tecido: um recipiente de aço inoxidável com uma tampa para transportar toda a placenta da sala de cirurgia para o laboratório, uma bandeja (20 cm x 30 cm x 8 cm) para lavar e remover o sangue de toda a placenta antes a dissecação da membrana amniótica, e uma tábua de corte de plástico para separar a membrana amniótica nas três regiões.</li>
	<li>Esterilizar os instrumentos cirúrgicos (bisturis, tesouras, fórceps e grampos), copos de 500 mL, gazes de algodão e solução salina.</li>
</ol>2. Obtenção de tecido placentária
NOTA: As membranas amnióticas foram obtidas de mulheres em gestação a termo (37 a 40 semanas), indicação de parto cesáreo, sem qualquer evidência de trabalho de parto ativo, e sem características microbiológicas de infecção. Os procedimentos completos de isolamento e cultura foram realizados dentro de um armário de biossegurança condições estéreis.
<ol><li>Na sala de cirurgia, aperte o cordão umbilical para evitar o fluxo sanguíneo para o resto do tecido. Recolher toda a placenta com o cordão umbilical preso no recipiente estéril.</li>
	<li>Adicione 500 mL de solução sorino ao recipiente para hidratar a placenta.</li>
	<li>Feche o recipiente e transporte o tecido para o laboratório à temperatura ambiente.</li>
	<li>Coloque o recipiente com a placenta dentro do armário de biossegurança. NOTA: No caso de a dissecação não é realizada dentro de 15 minutos de coleta da placenta, armazenar o recipiente com a placenta no gelo até o processamento. Evite mais de 1 h de tempo decorrido entre a obtenção da placenta e o início da dissecação.</li>
</ol>3. Separação mecânica por região da membrana amniótica
NOTA: O procedimento deve ser realizado dentro de um armário de biossegurança em condições estéreis e à temperatura ambiente.
<ol><li>Retire toda a placenta do recipiente e coloque-o na bandeja com o cordão umbilical voltado para cima.</li>
	<li>Usando uma gaze de algodão estéril, limpe os coágulos sanguíneos da superfície do chorion-amnion que cobre a placenta.</li>
	<li>Identifique as três regiões da membrana: o amnion umbilical que envolve o cordão umbilical, a amnion placentária que cobre os basalis da decidua, e a região refletida, que é o descanso do amnion que não é unido à placenta(figura 1).</li>
	<li>Dissecar a região do amnion umbilical(Figura 2A).<ol>
<li>Usando fórceps dissecando, segure a porção de membrana de amnônio que cobre a junção da placenta e do cordão umbilical.</li>
		<li>Com um bisturi, dissecar a região que rodeia o cordão enquanto se estende para separá-lo do chorion.</li>
		<li>Deposite o tecido separado em um copo rotulado com 100 mL de solução saline.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dissecar a região do amnion placentário(Figura 2B).<ol>
<li>Com uma gaze de algodão estéril, retire os coágulos sanguíneos da superfície do chorion-amnion que cobre a placenta.</li>
		<li>Segure a membrana na fronteira entre a placenta e a região refletida com fórceps dissecando.</li>
		<li>Corte ao longo da circunferência da placenta com o bisturi.</li>
		<li>Separe o amnion placental do chorion, sendo cuidadoso não cortar nenhuma embarcação da placenta.</li>
		<li>Coloque o tecido separado em outro copo rotulado com 300 mL de solução saline.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Separe o resto da membrana amniótica que não está ligada à placenta (ou seja, a porção refletida) do chorion(Figura 2C).<ol>
<li>Colete a região refletida em outro copo rotulado com 300 mL de solução sorino. NOTA: Adicione a solução shinhosa continuamente durante a dissecação para evitar que o tecido seque.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Lavar as membranas
NOTA: O procedimento deve ser realizado dentro de um armário de biossegurança condições estéreis à temperatura ambiente.
<ol><li>Descarte a solução sismina de cada região da membrana separadamente.</li>
	<li>Adicione 100 mL de solução shinhona fresca para a região umbilical.</li>
	<li>Adicione 300 mL de solução sorino fresca para as regiões placentárias e refletidas, respectivamente.</li>
	<li>Mexa as membranas com a ajuda de dissecar fórceps para remover resíduos sanguíneos.</li>
	<li>Descarte a solução shinhosa.</li>
	<li>Repita as lavares e agitação, pelo menos, 3x até que as membranas são translúcidas.</li>
	<li>Coloque e estender as membranas na placa para limpar com gaze estéril os coágulos sanguíneos que não foram removidos com as lavares. NOTA: É muito importante remover o maior número possível de eritrócitos, pois sua presença afeta a função de tripsina e a viabilidade das culturas celulares subsequentes.</li>
</ol>5. Digestão enzimática das membranas de diferentes regiões
NOTA: O procedimento deve ser realizado dentro de um armário de biossegurança condições estéreis.
<ol><li>Corte as regiões refletidas e placentárias em dois ou três fragmentos.</li>
	<li>Não corte a região umbilical.</li>
	<li>Coloque os fragmentos de cada região em tubos de centrífuga. Adicione 20 mL de 0,5% de trippsina/EDTA às regiões refletidas e placentárias e 5 mL de 0,5% de trippsina/EDTA à região umbilical, respectivamente. NOTA: É importante cortar as regiões refletidas e placentárias em pedaços menores, porque eles precisam ser completamente imersos na solução de tripsina.</li>
	<li>Agite os tubos de centrífuga levemente por 30 s. Descarte a trippsina.</li>
	<li>Adicione 30 mL de nova trippsina/EDTA de 0,5% às regiões refletidas e placentárias e 15 mL de trippsina/EDTA de 0,5% para a região umbilical, respectivamente.</li>
	<li>Coloque os tubos em um rotador dentro da incubadora.</li>
	<li>Incubar com rotação (20 rpm) para 40 min em 37 °C. NOTA: Se um girador do tubo não está disponível, agite os tubos levemente manualmente cada 10 min.</li>
	<li>Transfira as soluções de tripsina/célula de cada região para novos tubos de centrífuga.</li>
	<li>Adicione 2x o volume de mídia HAEC pré-aquecido a 37 °C por tubo para inativar a enzima.</li>
	<li>Guarde a primeira digestão no gelo.</li>
	<li>Repita os passos 5,6-5,8 para um segundo período de digestão.</li>
	<li>Para cada região, segure uma extremidade da porção de amniônio usando fórceps dissecando, e com outro par espremer ao longo do tecido para remover fileiras de células epiteliais que não descascar completamente durante os períodos de incubação anteriores.</li>
	<li>Colete a segunda digestão em outro conjunto de tubos de centrífuga e inative com 2x o volume de mídia HAEC.</li>
	<li>Descarte as membranas digeridas em um recipiente de risco biológico.</li>
</ol>6. Isolamento da HAEC
NOTA: O procedimento deve ser realizado dentro de um armário de biossegurança condições estéreis.
<ol><li>Centrífuga todos os tubos a 200 x g por 10 min a 4 °C.</li>
	<li>Descarte o supernatant e adicione 10 mL de mídia haec pré-aquecida (a 37 °C) por tubo e pipet suavemente para desagregar cada pelota.</li>
	<li>Combine as suspensões celulares das duas digestões em um tubo individual para cada região da membrana.</li>
	<li>Filtre as suspensões celulares usando filtros de células de 100 μm para remover os detritos da matriz extracelular e obter células únicas.</li>
	<li>Prepare três alíquotas com 90 μL de trippan azul em um tubo de microcentrífuga.</li>
	<li>Adicione 10 μL de cada suspensão celular por região de membrana nos tubos de microcentrífuga e misture.</li>
	<li>Conte as células com um hemocytometer um microscópio de campo de luz.</li>
</ol>7. Cultura da HAEC
<ol><li>Semente o HAEC das três regiões separadamente a uma densidade de 3 × 104 células/cm2 com mídia haec pré-aquecida, complementada com 10 ng/mL de fator de crescimento epidérmico humano (EGF).<ol>
<li>Semeie as células em placas de 100 mm para mantê-las in vitro ou em 24 placas de poço para análise imunoquímica.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Incubar os pratos a 37 °C condições normoxic (5% CO2)em uma incubadora umidificada.</li>
	<li>Adicione o EGF diariamente e altere o meio a cada três dias. NOTA: As células se tornarão confluentes após 4 a 6 dias.</li>
	<li>Use as células para imunohistoquímica convencional, análise de classificação celular, criopreservação, RNA e extração de proteínas, ou para continuar a passagem.</li>
</ol>8. Passagem de HAEC
<ol><li>Retire o meio HAEC e lave 2x com a solução PBS/EDTA 0,01M.</li>
	<li>Incubar com uma solução PBS/EDTA 0.01M por 15 min a 37 °C.</li>
	<li>Retire o PBS/EDTA e adicione 1,5 mL de 0,5% de tripsina/EDTA.</li>
	<li>Incubar por 5-8 min a 37 °C.</li>
	<li>Inativar a enzima com dois volumes de mídia HAEC.</li>
	<li>Colete a solução mista e centrífuga para 5 min a 200 x g.</li>
	<li>Conte as células e continue seguindo passagens ou use as células para uma análise mais aprofundada.</li>
</ol>

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</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Implementamos um novo protocolo para isolar a HAEC das membranas a termo. Difere dos relatórios precedentes que cada membrana estêve dividida em suas três regiões anatômicas antes da isolação para analisar pilhas de cada um.
Uma das etapas mais críticas no protocolo é a lavagem da membrana para remover todos os coágulos sanguíneos, porque eles podem interferir com a atividade da tripseao separar as células epiteliais. A falha realizar corretamente esta etapa pode conduzir a obter uma cultura p...

As células amnióticas do epitélio (HAEC) têm origem nos estágios iniciais do desenvolvimento embrionário, por volta de oito dias após a fertilização. Eles surgem de uma população de células epiteliais escamosas do epiblasto que derivam da camada mais interna da membrana amniótica1. Assim, haec são considerados remanescentes de células pluripotentes do epiblasto que têm o potencial de diferenciar as três camadas germinas do embrião2. Na última década, diversos grupos de pesquisa desenvolveram métodos para isolar essas células da membrana amniótica no termo da gestação para caracterizar suas propriedades presuntivas relacionadas à pluripotência em um modelo de cultura in vitro3,4.
Assim, verificou-se que haec características características características de células-tronco pluripotentes humanas (HPSC), tais como os antígenos de superfície SSEA-3, SSEA-4, TRA 1-60, TRA 1-81; o núcleo dos fatores de transcrição da pluripotência OCT4, SOX2 e NANOG; e o marcador de proliferação KI67, sugerindo que eles são auto-renovação5,6,7. Além disso, essas células têm sido desafiadas usando protocolos de diferenciação para obter células positivas para marcadores específicos de linhagem das três camadas germinativas (ectoderme, mesoderme e endoderm)4,5,8,bem como em modelos animais de doenças humanas. Finalmente, HAEC expressar E-cadherin, que demonstram que eles mantêm uma natureza epitelial muito parecido com o HPSC5,9.
Além de sua origem embrionária, haec têm outras propriedades intrínsecas que os tornam adequados para diferentes aplicações clínicas, tais como a secreção de moléculas anti-inflamatórias e antibacterianas10,11, fatores de crescimento e citocina liberação12, nenhuma formação de teratomas quando eles são transplantados em ratos imunodeficientes em contraste com HPSC2, e tolerância imunológica, porque eles expressam HLA-G, que diminui o risco de rejeição após a rejeição transplante13.
No entanto, relatos anteriores assumiram que o amniônio humano é uma membrana homogênea, sem considerar que pode ser anatomicamente e fisiologicamente dividida em três regiões: placental (a amniônia que cobre a decidua basalis), umbilical (a parte que envolve o cordão umbilical) e refletida (o resto da membrana não ligada à placenta)14. Tem sido demonstrado que as regiões placentárias e refletidas da amniônia apresentam diferenças na morfologia, atividade mitocondrial, detecção de espécies reativas de oxigênio15,expressão miRNA16,e ativação das vias de sinalização17. Estes resultados sugerem que o amnion humano está integrado por uma população heterogênea com funcionalidade diferente que deve ser considerada para estudos mais adicionais realizados em modelos in situ ou in vitro. Enquanto outros laboratórios projetaram protocolos para o isolamento da HAEC de toda a membrana, nosso laboratório estabeleceu um protocolo para isolar, cultura e caracterizar células de diferentes regiões anatômicas.

<table><tbody><tr><td>Reagentes de cultura</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td><td>21985023</td><td>55 mM</td></tr><tr><td>Animal-Free Recombinante Humano EGF</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>Antibiótico-Antimicótico</td><td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td><td>15240062</td><td>100X</td></tr><tr><td>Meio Eagle Modificado de Dulbecco</td><td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td><td>12430054</td><td>Suplementado com alto teor de glicose e HEPES</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Thermo Fisher Scientific/Ambion</td><td>AM9260G</td><td>0,5 M</td></tr><tr><td>Células-tronco embrionárias FBS, qualificado</td><td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td><td>10439024</td><td></td></tr><tr><td>Aminoácidos Não Essenciais</td><td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td><td>11140050</td><td>100X</td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>qualquer marca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphate-Buffered Saline</td><td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td><td>10010023</td><td>1X</td></tr><tr><td>solução salina (cloreto de sódio 0,9%)</td> <td>qualquer marca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sodium Pyruvate</td><td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td><td>11360070</td><td>100 mM</td></tr><tr><td>Trypsin/EDTA 0,05%</td><td>Thermo Fisher Scientific/Gibco</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td> Material descartável</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>100 &micro; m Cell Strainer</td><td>Corning/Falcon</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Cultura Tratada com TC de 100 mm</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Poços Múltiplos Transparentes de 24 poços</td><td>Corning/Costar</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Múltiplos Poços Transparentes de 6 poços</td> tratadas com TC Tubo de Centrífuga Estéril Não Pirogênico <td>Corning/Costar</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td></td><td>qualquer marca</td><td></td><td>com cônico fundo</td></tr><tr><td>Pontas estéreis não pirogênicas de 1.000 &micro; l, 200 &micro; l e 10 &micro;l.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gazes</td><td></td><td></td><td></td>de algodão estéreis</tr><tr><td>Pipetas serológicas estéreis de 5, 10 e 25 mL de</td><td>qualquer marca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luvas cirúrgicas estéreis</td><td>de qualquer marca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Equipamento</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cabine</td><td></td><td></td><td></td>de segurança biológica</tr><tr><td>Centrífuga</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micropipetas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Enchimento/dispensador</td><td></td><td></td><td></td>de pipetas motorizadas</tr><tr><td>Copos estéreis de 500 mL</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr>Tábua <td></td><td></td><td></td><td>de corte de plástico estéril</td></tr><tr><td>Bisturis, tesouras, pinças, braçadeiras</td><td></td><td></td><td></td>estéreis</tr><tr>Recipiente <td></td><td></td><td></td><td>estéril de aço inoxidável</td></tr><tr>Bandeja <td></td><td></td><td></td><td>estéril</td></tr><tr><td>Rotador de tubo</td><td>MaCSmix</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anticorpos e kits</td><td></td><td></td><td>ID de anticorpos</td></tr><tr><td>Anti-E-caderina</td><td>BD Biosciences</td><td>610181</td><td>RRID:AB_3975</td></tr><tr><td>Anti-KI67</td><td>Santa Cruz</td><td>23900</td><td>RRID:AB_627859)</td></tr><tr><td>Anti-NANOG</td><td>Peprotech</td><td>500-P236</td><td>RRID:AB_1268274</td></tr><tr><td>Anti-OCT4</td><td>Abcam</td><td>ab19857</td><td>RRID:AB_44517</td></tr><tr><td>Anti-SOX2</td><td>Millipore</td><td>AB5603</td><td>RRID:AB_2286686</td></tr><tr><td>Anti-SSEA-4</td><td>Sinalização Celular</td><td>4755</td><td>RRID:AB_1264259</td></tr><tr><td>Sinalização Celular</td><td>Anti-TRA-1-60</td><td>4746</td><td>RRID:AB_2119059</td></tr><tr><td>Cabra Anti-Rato Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11029</td><td>RRID:AB_2534088</td></tr><tr><td>Cabra Anti-Coelho Alexa Fluor 568</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11036</td><td>RRID:AB_10563566</td></tr><tr><td>Kit de Ensaio de Túnel</td><td>Abcam</td><td>66110</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro cultura das células epitelias de diferentes regiões anatômicas da membrana amniótica humana

In Vitro Culture of Epithelial Cells from Different Anatomical Regions of the Human Amniotic Membrane

Vários protocolos foram relatados na literatura para o isolamento e a cultura das células epiteliais amnióticas humanas (HAEC). No entanto, estes assumem que o epitélio amniótico é uma camada homogênea. O amnion humano pode ser dividido em três regiões anatômicas: refletida, placentária e umbilical. Cada região tem diferentes papéis fisiológicos, como em condições patológicas. Aqui, descrevemos um protocolo para dissecar o tecido amnion humano em três seções e mantê-lo in vitro. Na cultura, as pilhas derivadas do amnion refletido indicaram uma morfologia cuboidal, quando as pilhas das regiões placental e umbilicais eram escamosas. No entanto, todas as células obtidas têm um fenótipo epiteliais, demonstrado pela imunodetecção de E-cadherin. Assim, como as regiões placentárias e refletidas in situ diferem em componentes celulares e funções moleculares, pode ser necessário que estudos in vitro considerem essas diferenças, pois podem ter implicações fisiológicas para o uso de HAEC em pesquisa biomédica e a aplicação promissora dessas células na medicina regenerativa.

Haec foram isolados de cada uma das três regiões anatômicas da membrana amniótica e individualmente cultivadas in vitro. Após 48 h de cultura, células com fenótipo epiteliais aderiram à superfície da placa, embora a mídia também continha detritos celulares e células flutuantes, que foram removidas uma vez que o meio foi alterado (Figura 3).
Durante o processamento da cultura primária (passagem zero, P0), algumas complicações podem surgir que podem interferir na an...

Este protocolo descreve o isolamento de células epiteliais de diferentes regiões anatômicas da membrana amniótica humana para determinar sua heterogeneidade e propriedades funcionais para possível aplicação em modelos clínicos e fisiopatológicos.

In Vitro Cultura das Células Epitelias de diferentes regiões anatômicas da membrana amniótica humana

Several protocols have been reported in the literature for the isolation and culture of human amniotic epithelial cells (HAEC). However, these assume that ...

Este protocolo pode ajudar a responder a perguntas-chave sobre heterogeneidade e propriedades funcionais de células epiteliais amnióticas humanas isoladas da membrana amniótica. Enquanto protocolos anteriores isolaram células da membrana co-amniótica sem discernir entre as regiões, nosso protocolo permite a cultura da população celular isolada de três regiões anatômicas distintas. Para separar a membrana amniótica por região, em um armário de biossegurança em condições estéreis, identificar o amnion umbilical envolvendo o cordão umbilical, o amnão placentário que cobre o decidua basalis, e a região refletida, que é considerada o resto do amnion que não está ligado à placenta.Para dissecar a região de amnion umbilical, utilize fórceps dissecando para segurar a porção da membrana de amnion que cobre a junção da placenta e do cordão umbilical, e use um bisturi para dissecar a região que circunda o cordão, enquanto se alonga para separar a região do acorde. Em seguida, deposite o tecido separado em um béquer rotulado com 100 mililitros de solução salina. Para dissecar a região de amnion placentária, use uma gaze de algodão estéril para remover os coágulos sanguíneos da superfície do ac

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Uma maneira rápida e robusta de isolar células-tronco adultas viável epiteliais da pele humana é descrito. O método utiliza a digestão enzimática da matriz de colágeno da pele, seguido por arrancar dos folículos pilosos e isolamento de células em suspensão simples ou fragmentos de tecido para cultura de células.

Isolamento e Cultura de Células-Tronco Adultas epitelial da pele humana

Um método para processar o material de descarte mamária humana cirúrgico é descrito. Tecido transformado, sob a forma de Organóides, podem ser armazenadas congeladas indefinidamente ou colocadas em cultura para crescimento a longo prazo. Este método permite a análise experimental da biologia celular epitelial humana normal, e os efeitos das perturbações exógenas.

Processamento da mamoplastia redutora e tecidos humanos Mastectomia para cultura de células

Células epiteliais nasais, obtidas através de biópsia superficial raspar de voluntários humanos, são expandidas e transferido para tecido inserções de cultura. Ao atingir a confluência, as células são cultivadas na interface ar-líquido, obtendo-se culturas de células ciliadas e não ciliadas. Culturas de células epiteliais nasais diferenciados fornecem modelos experimentais para o estudo de viáveis ​​da mucosa respiratória.

A cultura de células epiteliais nasais Humano na interface ar líquido

Descrevemos um protocolo para isolar e cultivar células epiteliais de âmnio humano (hAECs) usando reagentes livres de produtos de origem animal de acordo com as diretrizes atuais de boas práticas de fabricação (cGMP).

Isolamento, criopreservação e cultivo de células epiteliais humanas Amnion para aplicações clínicas

Este manuscrito descreve uma técnica suave baseado em litografia para engenharia matrizes uniformes de tridimensional (3D) de tecidos epiteliais geometria definida rodeados por matriz extracelular. Este método é favorável a uma ampla variedade de tipos de células e contextos experimentais e permite o rastreio de alto rendimento de réplicas idênticas.

Engenharia tridimensionais tecidos epiteliais incorporado dentro Matriz Extracelular

Este estudo apresenta um método padronizado e validado para o isolamento e cultura de rato primária do estroma do endométrio e pelas células epiteliais, o que pode ser utilizado num sistema de co-cultura para estudo em decidualização vitro.

Isolamento de rato Endometrial epiteliais e estromais para células<em&gt; In Vitro</em&gt; decidualization

Este protocolo descreve a reprogramação de primário amniótico fluido e membrana mesenquimais células-tronco em células-tronco pluripotentes induzidas usando uma abordagem epissomal não-integrando em condições totalmente quimicamente definidas. Procedimentos de extração, cultura, reprogramação e caracterização das células-tronco pluripotentes induzidas resultante por métodos rigorosos são detalhados.

Reprogramação de primário líquido amniótico e a membrana de células de pluripotência em condições Xeno-livre

Aqui apresentamos um método modificado para o isolamento e cultura das células epiteliais gengival humanas adicionando o inibidor de Rocha, Y-27632, ao método tradicional. Este método é mais fácil, menos demorado, melhora as propriedades das células-tronco e produz um número maior de células epiteliais de alto potencial, tanto para o laboratório quanto para aplicações clínicas.

Isolamento e Cultura das Células Epiteliais Gengivais Humanas Primárias usando Y-27632

Os recentes avanços nos protocolos de diferenciação de células-tronco pluripotentes induzidos pelo homem permitem a derivação stepwise de tipos celulares específicos de órgãos. Aqui, fornecemos etapas detalhadas para a manutenção e expansão das células basais derivadas das vias aéreas derivadas do iPSC e sua diferenciação em um epitélio mucociliary em culturas de interface ar-líquido.

Geração de culturas de interface ar-líquido de células epiteliais das vias aéreas a partir de células-tronco pluripotentes humanas

Aqui, demonstramos como as células epiteliais cultivadas com fibroblastos no sistema de duas camadas baseado em membrana nanofibrosa podem aderir e crescer de forma estável na membrana.

Estabelecimento de um módulo de cocultura tridimensional de células epiteliais usando membranas nanofibrosas

Aprenda a isolar células epiteliais de três regiões anatômicas distintas da membrana amniótica humana para estudar heterogeneidade celular e propriedades funcionais com aplicações clínicas.

In Vitro Cultura das Células Epitelias de diferentes regiões anatômicas da membrana amniótica humana

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