Name: Preparação de Complexos modelo sns cobalto(ii) de álcool hepático desidrogenase (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-03-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 31 s
Description: Aprenda a preparar complexos modelo de cobalto(II) tipo SNS da desidrogenase alcoólica hepática usando recristalização por difusão de vapor. Este método fornece uma abordagem confiável para sintetizar e cristalizar compostos de coordenação inorgânicos.

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John Miecznikowski recebeu apoio financeiro do seguinte para este projeto: a Connecticut NASA Space Grant Alliance (Número de Prêmio P-1168), o Fairfield University Science Institute, College of Arts and Sciences Publication Fund, Fairfield University Faculty Summer Research Stipend, e National Science Foundation-Major Research Instrumentation Program (Grant Number CHE-1827854) para fundos para adquirir um espectrômetro de RMN de 400 MHz. Ele também agradece a Terence Wu (Universidade de Yale) pela ajuda na aquisição de espectros de massa de eletrospray. Jerry Jasinski reconhece o Programa de Instrumentação de Pesquisa da Fundação Nacional de Ciência (Grant Number CHE-1039027) para obter fundos para a compra de um difrômetro de raios-X. Sheila Bonitatibus, Emilse Almanza, Rami Kharbouch e Samantha Zygmont reconhecem o Hardiman Scholars Program por fornecer seu subsídio de pesquisa de verão.

1. Síntese de cloro-(n3-S,S,N)-[2,6-bis(N-isopropyl-N'-metilleneimidazol-2-thione)piridina]cobalto(II)tetraclorocobaltato [4]
<ol><li>Para preparar o complexo 4, adicione 0,121 g (3,12 x 10-4 mol) de 2,6-bis (N-isopropyl-N'-metileneimidazol-2-thione)piridina (C19H25N5S2)6 a 15 mL de acetonitrile em um frasco de fundo redondo de 100 mL. Em seguida, a esta solução, adicione 0,0851 g (3,58 x 10-4 mol) de cloreto de cobalto hexahidrato (CoCl2·6H2O). A solução de reação deve mudar de cor de amarelo claro para verde esmeralda imediatamente após a adição do hexahidrato de cloreto de cobalto (II).</li>
	<li>Adicione uma barra de agitação ao frasco. Refluxo e mexa a reação por 20 h para garantir a reação completa. Remova o solvente usando um rotovap sob pressão reduzida.</li>
</ol>2. Recristalização de cloro-(n3-S,S,N)-[2,6-bis(N-isopropyl-N'-methyleneimidazol-2-thione)piridina]cobalto(II)tetraclorocobaltato [4] por difusão lenta de vapor
<ol><li>Dissolva o soluto em acetonitrilo (7,5 mL), filtre a solução e coloque a solução uniformemente em frascos de 1 dram. Encha cada frasco com 1,5 mL de solução acetonitrila.<ol>
<li>Adicione algodão para tampar os frascos, o que permite a difusão lenta de vapor. Coloque o algodão na abertura na parte superior do frasco.</li>
		<li>Coloque os frascos em um frasco de 240 mL contendo 50 mL de éter dietil. Feche o frasco com um boné.</li>
		<li>Permita que os cristais cresçam durante um período de 1 semana. NOTA: A recristalização pode levar mais de 1 dia.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Síntese de cloro-(n3-S,S,N)-[2,6-bis(N-isopropyl-N'-metilenetriazole-2-thione)piridina]cobalto(II)tetraclorocobaltato [5]
<ol><li>Para preparar o complexo 5, adicione 0,183 g (4,70 x 10-4 mol) de 2,6-bis (N-isopropyl-N'-metilenetriazole-2-thione)piridina (C17H23N7S2)6 a 15 mL de acetonitrile em um frasco de fundo redondo de 100 mL. A esta solução, adicione 0,223 g (9,37 x 10-4 mol) de hexahidrato de cloreto de cobalto (CoCl2·6H2O). A solução de reação deve mudar de cor de amarelo claro para azul real imediatamente após a adição do hexahidrato de cloreto de cobalto (II).<ol>
<li>Adicione uma barra de agitação ao frasco. Refluxo e mexa a reação por 20 h para garantir a reação completa. Remova o solvente usando um rotovap pressão reduzida.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Recristalização de cloro-(n3-S,S,N)-[2,6-bis(N-isopropyl-N'-metilenetriazole-2-thione)piridina]cobalto(II)tetraclorocobaltato [5] por difusão lenta de vapor
<ol><li>Dissolva o soluto em acetonitrilo (9,0 mL), filtre a solução e coloque a solução uniformemente em frascos de 1 dram. Encha cada frasco com 1,5 mL de solução acetonitrila.<ol>
<li>Adicione algodão para tampar os frascos, o que permite a difusão lenta de vapor. Coloque o algodão na abertura na parte superior do frasco.</li>
		<li>Coloque os frascos em um frasco contendo 50 mL de éter dietil. Feche o frasco com um boné.</li>
		<li>Permita que os cristais cresçam durante um período de 1 semana. NOTA: A recristalização pode levar mais de 1 dia.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Cristalografia de raios-X
<ol><li>Monte um cristal de 4 em um laço de nylon. Colete os dados em um difrômetro de difração de Rigaku Oxford. Aqui, os dados de difração de raios-X são coletados a 173(2) K. Resolva a estrutura de cristal usando programas de solução de estrutura Olex216 e ShelXT17 usando métodos diretos. Refinar a estrutura com o pacote de refinamento ShelXL18 usando minimização de quadrados mínimos.</li>
	<li>Monte um cristal de 5 em um laço de nylon. Coletar os dados de difração de raios-X em um difusômetro de difração de Rigaku Oxford. Aqui, os dados de difração de raios-X são coletados a 173(2) K. Resolva a estrutura de cristal usando programas de solução de estrutura Olex216 e ShelXT17 usando métodos diretos. Refinar a estrutura com o pacote de refinamento ShelXL18 usando minimização de quadrados mínimos.</li>
</ol>

<ol><li>Holm, R. H., Kennepohl, P., Solomon, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+Functional+Aspects+of+Metal+Sites+in+Biology%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Structural and Functional Aspects of Metal Sites in Biology.</a> Chemical Reviews. 96 (7), 2239-2314 (1996).</li>
<li>Ibers, J. A., Holm, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+coordination+sites+in+metallobiomolecules%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Modeling coordination sites in metallobiomolecules.</a> Science. 209 (4453), 223-235 (1980).</li>
<li>Kannan, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+structure+of+human+erythrocyte+carbonic+anhydrase+B.+Three-dimensional+structure+at+a+nominal+2.2-A+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+USA%22%5BJournal%5D)">Crystal structure of human erythrocyte carbonic anhydrase B. Three-dimensional structure at a nominal 2.2-A resolution.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 72 (1), 51-55 (1975).</li>
<li>Eklund, H., Brändén, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+differences+between+apo-+and+holoenzyme+of+horse+liver+alcohol+dehydrogenase%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Structural differences between apo- and holoenzyme of horse liver alcohol dehydrogenase.</a> Journal of Biological Chemistry. 254, 3458-3461 (1979).</li>
<li>Miecznikowski, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Syntheses%2C+Characterization%2C+Density+Functional+Theory+Calculations+and+Activity+of+Tridentate+SNS+Zinc+Pincer+Complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Syntheses, Characterization, Density Functional Theory Calculations and Activity of Tridentate SNS Zinc Pincer Complexes.</a> Inorganica Chimica Acta. 376, 515-524 (2011).</li>
<li>Miecznikowski, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Syntheses%2C+Characterization%2C+Density+Functional+Theory+Calculations%2C+and+Activity+of+Tridentate+SNS+Zinc+Pincer+Complexes+Based+on+Bis-Imidazole+or+Bis-Triazole+Precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Syntheses, Characterization, Density Functional Theory Calculations, and Activity of Tridentate SNS Zinc Pincer Complexes Based on Bis-Imidazole or Bis-Triazole Precursors.</a> Inorganica Chimica Acta. 387, 25-36 (2012).</li>
<li>Sunderland, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+liver+alcohol+dehydrogenase+catalysis+using+an+NADH+biomimetic+and+comparison+with+a+synthetic+zinc+model+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Polyhedron%22%5BJournal%5D)">Investigation of liver alcohol dehydrogenase catalysis using an NADH biomimetic and comparison with a synthetic zinc model complex.</a> Polyhedron. 114, 145-151 (2016).</li>
<li>Miecznikowski, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+characterization+of+three-+and+five-coordinate+copper%28II%29+complexes+based+SNS+ligand+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Polyhedron%22%5BJournal%5D)">Synthesis and characterization of three- and five-coordinate copper(II) complexes based SNS ligand precursors.</a> Polyhedron. 80, 157-165 (2014).</li>
<li>Miecznikowski, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis%2C+Characterization%2C+and+Computational+Study+of+Three-Coordinate+SNS+Copper%28I%29+Complexes+based+on+Bis-Thione+Ligand+Precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Coordination+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Synthesis, Characterization, and Computational Study of Three-Coordinate SNS Copper(I) Complexes based on Bis-Thione Ligand Precursors.</a> Journal of Coordination Chemistry. 67, 29-44 (2014).</li>
<li>Lynn, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper%28I%29+SNS+Pincer+Complexes%3A+Impact+of+Ligand+Design+and+Solvent+Coordination+on+Conformer+Interconversion+from+Spectroscopic+and+Computational+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Copper(I) SNS Pincer Complexes: Impact of Ligand Design and Solvent Coordination on Conformer Interconversion from Spectroscopic and Computational Studies.</a> Inorganica Chimica Acta. 495, (2019).</li>
<li>Web Elements. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.webelements.com/zinc/atom_sizes.html">https://www.webelements.com/zinc/atom_sizes.html</a> (2019).</li>
<li>Web Elements. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.webelements.com/cobalt/atom_sizes.html">https://www.webelements.com/cobalt/atom_sizes.html</a> (2019).</li>
<li>Caballero, A., Díez-Barra, E., Jalón, F. A., Merino, S., Tejeda, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1%2C1%27-%28pyridine-2%2C6-diyl%29bis%283-benzyl-2%2C3-dihydro-1H-imidazol-2-ylidine%29%2C+a+new+multidentate+N-heterocyclic+bis-carbene+and+its+silver%28I%29+complex+derivative%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Organometallic+Chemistry%22%5BJournal%5D)">1,1'-(pyridine-2,6-diyl)bis(3-benzyl-2,3-dihydro-1H-imidazol-2-ylidine), a new multidentate N-heterocyclic bis-carbene and its silver(I) complex derivative.</a> Journal of Organometallic Chemistry. 617-618, 395-398 (2001).</li>
<li>Albrecht, M., van Koten, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platinum+Group+Organometallics+Based+on+%22Pincer%22+Complexes%3A+Sensors%2C+Switches%2C+and+Catalysis%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Platinum Group Organometallics Based on "Pincer" Complexes: Sensors, Switches, and Catalysis.</a> Angewandte Chemie International Edition. 40 (20), 3750-3781 (2001).</li>
<li>Peris, E., Crabtree, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+factors+in+pincer+ligand+design%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">Key factors in pincer ligand design.</a> Chemistry Society Reviews. 47, 1959-1968 (2018).</li>
<li>Dolomanov, O. V., Bourhis, L. J., Gildea, R. J., Howard, J. A. K., Puschmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+complete+structure%2C+solution%2C+refinement%2C+and+analysis+program%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Crystallography%22%5BJournal%5D)">A complete structure, solution, refinement, and analysis program.</a> Journal of Applied Crystallography. 42, 339-341 (2009).</li>
<li>Sheldrick, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+Space+Group+and+Crystal+Structure+Determination%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Integrated Space Group and Crystal Structure Determination.</a> Acta Crystallography. 71, 3-8 (2015).</li>
<li>Sheldrick, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+Structure+Refinement+with+SHELXL%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallography%22%5BJournal%5D)">Crystal Structure Refinement with SHELXL.</a> Acta Crystallography. 71, 3-8 (2015).</li>
<li>Pauling, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-metal+bond+lengths+in+complexes+of+transition+metals%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academies+of+the+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Metal-metal bond lengths in complexes of transition metals.</a> Proceedings of the National Academies of the Sciences of the United States of America. 73, 4290-4293 (1976).</li>
<li>Trzhtsinskaya, B. V., Abramova, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imidazole-2-Thiones%3A+Synthesis%2C+Structure%2C+Properties%5BTitle%5D)+AND+%22Sulfur+Reports%22%5BJournal%5D)">Imidazole-2-Thiones: Synthesis, Structure, Properties.</a> Sulfur Reports. 10 (4), 389(1991).</li>
<li>Schneider, G., Eklund, H., Cedergren-Zeppezauer, E., Zeppezauer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+structure+of+the+active+site+in+specifically+metal-depleted+and+cobalt+substituted+horse+liver+alcohol+dehydrogenase+derivatives%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academies+of+the+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Crystal structure of the active site in specifically metal-depleted and cobalt substituted horse liver alcohol dehydrogenase derivatives.</a> Proceedings of the National Academies of the Sciences of the United States of America. 80, 5289-5293 (1983).</li>
<li>Yang, L., Powell, D. R., Houser, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+variation+in+copper%28I%29+complexes+with+pyridylmethylamide+ligands%3A+structural+analysis+with+a+new+four-coordinate+geometry+index%2C+%CF%844%5BTitle%5D)+AND+%22Dalton+Transactions%22%5BJournal%5D)">Structural variation in copper(I) complexes with pyridylmethylamide ligands: structural analysis with a new four-coordinate geometry index, τ4.</a> Dalton Transactions. , 955-964 (2007).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para revelar.

A preparação dos complexos 4 e 5 é fácil. O passo chave é adicionar o sólido CoCl2·6H2O a uma solução acetonitrila que contém o respectivo precursor do ligante. A solução fica verde escuro em segundos após a adição de CoCl2·6H2O para formar o complexo 4. A solução fica azul brilhante após a adição de CoCl2·6H2O para formar o complexo 5. Para garantir uma reação completa, a solução é coloca...

O objetivo do método apresentado é preparar análogos de pequenas moléculas de LADH para entender melhor a atividade catalítica das metaloenzimas. LADH é uma enzima dimérica que contém um domínio de ligação cofator e zinco(II) domínio catalítico contendo metal1. LADH, na presença do co-fator NADH, pode reduzir cetonas e aldeídos aos seus respectivos derivados de álcool2. Na presença de NAD+, LADH pode realizar catálise reversa de oxidação de álcoois a cetonas e aldeídos2. A estrutura cristalina do local ativo da LADH mostra que seu centro metálico de zinco (II) está ligado a um átomo de nitrogênio, fornecido por uma cadeia lateral de histidina e dois átomos de enxofre e oferecido por dois ligantes de cisteína3. Outras pesquisas mostraram que o centro metálico de zinco é ligado com uma molécula de água labile, resultando em geometria pseudo-tetraédrico ao redor do centro metálico4.
Já reportamos e utilizamos precursores de ligante sns, bem como metalizamos os precursores do ligante com ZnCl2 para formar complexos Zn(II) que contêm o precursor do ligante tridentato5,,6,7. Estes precursores de ligante são mostrados na Figura 1. Estes complexos de zinco (II) apresentaram atividade para a redução estequiométrica de aldeídos pobres em elétrons e, portanto, são complexos de modelo para LADH. Posteriormente, a síntese e caracterização de uma série de complexos de cobre(I) e cobre(II) que contêm precursores de ligantes SNS foram relatadas8,,9,10.
Embora ladh seja uma enzima de zinco (II), estamos interessados em preparar complexos de modelo de cobalto (II) de LADH, a fim de obter mais informações espectroscópicas sobre os análogos de cobalto (II) de LADH. Os complexos de cobalto (II) são coloridos, enquanto os complexos de zinco (II) são off-white. Uma vez que os complexos de cobalto (II) são coloridos, espectros visíveis ultravioletas dos complexos podem ser obtidos, nos quais também podem ser coletadas informações sobre a força do campo de ligante nos complexos de cobalto(II). Usando informações de cálculos gaussianos e dos espectros visíveis ultravioleta obtidos experimentalmente, informações sobre a força do campo de ligante podem ser deduzidas. O cobalto(II) é um bom substituto para o zinco(II), uma vez que ambos os íons têm raios iônicos semelhantes e acidez semelhante de Lewis11,12.
O método apresentado envolve sintetizar e caracterizar complexos de modelos para tentar imitar o comportamento catalítico natural de LADH5,6. Já metalizamos uma família de precursores de ligantes com ZnCl2 para formar complexos modelo de zinco (II) de LADH, que modelou a estrutura e a reatividade do local ativo de zinco em LADH4. Através de múltiplos experimentos, esses ligantes de pinça provaram ser robustos em diferentes condições ambientais e permaneceram estáveis com uma coleção diversificada de grupos R ligados. 5,,6
Os ligantes tridentatos são preferíveis em comparação com os ligantes monodentatos, porque eles têm sido mais bem sucedidos com metalização devido aos fortes efeitos chelates de ligantes tridentatos. Esta observação deve-se a uma entropia mais favorecida da formação de ligante sinuoso em comparação com um ligante monodentado13. Além disso, os ligantes de pinça tridentato susceptíveis de evitar a dimerização dos complexos metálicos, o que é favorecido porque a dimerização provavelmente retardará a atividade catalítica de um complexo14. Assim, o uso de ligantes de pinça tridentato tem se mostrado bem sucedido na química organometálica na preparação de complexos catalíticos ativos e robustos. Os complexos de pinças SNS têm sido menos estudados do que outros sistemas de pinça, uma vez que os complexos de pinça geralmente contêm metais de transição de segunda e terceirafileira15.
Esta pesquisa sobre metaloenzymes pode ajudar a aprofundar a compreensão de sua atividade enzimática, que pode ser aplicada a outras áreas da biologia. Este método de sintetizar complexos de modelos em comparação com o método alternativo (sintetizando toda a proteína de LADH) é favorável por uma série de razões. A primeira vantagem é que os complexos modelo são baixos em massa molecular e ainda são capazes de representar com precisão a atividade catalítica e as condições ambientais do local ativo da enzima natural. Em segundo lugar, os complexos de modelos são mais simples de trabalhar e produzir dados confiáveis e relacionáveis.
Este manuscrito descreve a preparação sintética e caracterização de dois complexos de pinça de cobalto (II) de LADH. Ambos os complexos apresentam um ligante pinça que contém átomos de enxofre, nitrogênio e doador de enxofre. O primeiro complexo (4) é baseado em um precursor imidazol, e o segundo (5) é baseado em um precursor triazol. Os complexos mostram reatividade para a redução da estequiometria de aldeídos pobres de elétrons na presença de um doador de hidrogênio. Esses resultados de reatividade serão relatados em um manuscrito subseqüente.

<table><tbody><tr><td>Frasco de fundo redondo de 100 mL</td><td>Chem Glass</td><td>CG150691</td><td>100mL Frasco de fundo redondo de gargalo único, 19/22 Junta externa</td></tr><tr><td>Acetonitrila</td><td>Fisher</td><td>HB9823-4</td><td>Resfriador de grau HPLC</td></tr><tr><td>para roto-vap</td><td>Lauda</td><td>L000638</td><td>Alpha RA 8</td></tr><tr><td>Cloreto de cobalto hexahidratado</td><td>Acros Organics</td><td>AC423571000</td><td>Acros Organics</td></tr><tr><td>Éter</td> <td>dietílicoFisher</td><td>E-138-1</td><td>Diethyl Ether Anhydorus</td></tr><tr><td>cilindro graduado</td><td>Fisher</td><td>S63456</td><td>25 mL de placa de aquecimento de cilindro graduado</td></tr><tr><td></td><td>Fisher</td><td>11-100-49SH</td><td>Isotemp Basic Agitando</td></tr><tr><td>Frascos</td> de placa de aquecimento <td>Fisher</td><td>05-719-481</td><td>Frascos de 250 mL</td></tr><tr><td>Ligante</td><td>-----</td><td>-----</td><td>Sintetizado anteriormente pelo professor Miecznikowski</td></tr><tr><td>meio bolas de algodão</td><td>Fisher</td><td>22-456-80</td><td>bolas de algodão médio</td></tr><tr><td>frascos de uma dram</td><td>Fisher</td><td>03-339</td><td>frascos de uma dram com pipeta de tampa forrada TFE</td></tr><tr><td></td><td>Fisher</td><td>13-678-20B</td> Bulbos de pipeta de <td>5,75 polegadas</td></tr><tr><td></td><td>Fisher</td><td>03-448-21</td><td>Lâmpada de látex da marca Fisher para</td></tr><tr><td>prato de recristalização</td> de pipeta para banho de areia <td>Fisher</td><td>08-741 D</td><td>325 mL prato de recristalização para condensador de refluxo de banho de areia</td></tr><tr><td></td><td>Condensador de vidro químico</td><td>CG-1218-A-22</td><td>com junta interna 19/22</td></tr><tr><td>Rotovap</td><td>Heidolph Collegiate</td><td>36000090</td><td>Brinkmann; Evaporador Rotativo Heidolph Collegiate com banho ecológico Heidolph WB Evaporador Rotativo Heidolph</td></tr> areia <tr><td>do mar para banho de areia</td><td>Acros Organics</td><td>612355000</td><td>areia do mar lavada para banho de areia</td></tr><tr><td>Barra de agitação</td><td>Fisher</td><td>07-910-23</td><td>Barra de agitação magnética em forma de ovo</td></tr><tr><td>Graxa a vácuo</td><td>Fisher</td><td>14-635-5D</td> Bomba de vácuo de <td>graxa de alto vácuo Dow Corning</td></tr><tr><td>para rotovap</td><td>Heidolph Collegiate</td><td>36302830</td><td>Controle de Válvula Heidolph Rotovac</td></tr></tbody></table>

preparação de complexos modelo sns cobalto(ii) de álcool hepático desidrogenase

Preparation of SNS Cobalt(II) Pincer Model Complexes of Liver Alcohol Dehydrogenase

Complexos de modelos químicos são preparados para representar o local ativo de uma enzima. Neste protocolo, uma família de precursores de ligadores de pinça tridentato (cada um possuindo duas funcionalidades de átomo de doador de nitrogênio (SNS) e baseada sinuosa (compostos de bis-imidazole ou bis-triazole) são metalizadas com cocl2·6H2O para pagar complexos de cobalto de pinça sns tridentado(II). A preparação dos complexos do modelo de cobalto(II) para álcool hepático desidrogenase é fácil. Com base em uma rápida mudança de cor ao adicionar o CoCl2·6H2O à solução acetonitrila que contém o precursor do ligante, o complexo se forma rapidamente. A formação do complexo metálico é completa depois de permitir que a solução reflua durante a noite. Estes complexos de cobalto (II) servem como modelos para o local ativo de zinco no álcool hepático desidrogenase (LADH). Os complexos são caracterizados por difração de raios-X de cristal único, espectrometria de massa eletrospray, espectroscopia visível ultravioleta e análise elementar. Para determinar com precisão a estrutura do complexo, sua estrutura cristalina única deve ser determinada. Cristais únicos dos complexos adequados para a difração de raios-X são então cultivados através da difusão lenta de vapor de éter dietil em uma solução de acetonitrilo que contém o complexo de cobalto(II). Para cristais de alta qualidade, a recristalização normalmente ocorre durante um período de 1 semana, ou mais. O método pode ser aplicado à elaboração de outros complexos de coordenação de modelos e pode ser utilizado em laboratórios de ensino de graduação. Finalmente, acredita-se que outros possam encontrar esse método de recristalização para obter cristais únicos benéficos à sua pesquisa.

Síntese As sinestes dos complexos 4 e 5 foram realizadas com sucesso reagindo a uma solução de acetonitrilo contendo um precursor de ligante bis-thione com hexahidrato de cloreto de cobalto(II) (Figura 2). Esta reação ocorreu a uma temperatura de refluxo na presença de ar. Em geral, os complexos 4 e 5 foram observados como solúveis em acetonitrila, sulfóxido de dimetila, diclorometano e metanol. Complexo ...

A preparação de complexos de cobalto pincer SNS (II) de álcool hepático desidrogenase é apresentada aqui. Os complexos podem ser preparados reagindo ao precursor do ligante com CoCl2·6H2O e podem então ser recristalizados permitindo que o éter dietil se difunde lentamente em uma solução de acetonitrilo que contém o complexo de cobalto.

Preparação de Complexos modelo sns cobalto(ii) de álcool hepático desidrogenase

Chemical model complexes are prepared to represent the active site of an enzyme. In this protocol, a family of tridentate pincer ligand precursors (each ...

Este método pode ser usado para preparar um complexo de modelo químico de uma enzima hecoolismo desidrogenase e para cultivar cristais únicos. As vantagens dessa técnica são que a formação complexa é fácil e que o método de recristalização pode ser aplicado à preparação de outros complexos de coordenação. Este método pode fornecer insights sobre a preparação e recristalização de compostos de coordenação inorgânica e pode ser aplicado a qualquer composto de interesse para cultivar cristais únicos.É preciso prática para cultivar os cristais únicos. A chave é fazer a solução de acetonitrila que contém o complexo metálico o mais concentrado possível. Para preparar o complexo quatro, adicione 0,121 gramas de 2, 6-BIS-N-isopropil-N'metileneimidzole-2-thione-pyridina e 0,0851 gramas de cloreto de cobalto II hexahidrate a um frasco fundo redondo de 100 mililitros contendo 15 mililitros de acetonitrilo.A reação deve mudar de uma cor amarela clara para verde esmeralda imediatamente após o hexahidrato de cloreto de cobalto II ser adicionado. Em seguida, refluxo e agitar a reação por 20 horas para garantir a reação completa antes de usar um rotovap sob pressão reduzida para remover o solvente. Para cloro-N3-S, S, N-2, 6-BIS-N-isopropyl-N'metileneimidzole-2-thione-pyridine cobalt II tetrachlorocobaltate recristallização por difusão de vapor lento, dissolver o soluto em 10 mililitros de acetonitrilo, filer a solução, em seguida, aliquotar a solução uniformemente entre um frasco de dram.Adicione 1,5 mililitros de solução de acetonitrila fresca a cada frasco e tampe os frascos com algodão. Coloque os frascos em um frasco de 240 mililitros contendo 50 mililitros de éter dietil e feche o frasco com uma tampa. Então permita que os cristais cresçam por até uma semana.Para preparar o complexo cinco, adicione 0,183 gramas de 2, 6-BIS-N-isopropil-N'metilenetriazole-2-thione-pyridina e 0,223 gramas de cloreto de cobalto II hexahidrato a 15 mililitros de acetonitrila em um frasco redondo de 100 mililitros. A reação deve mudar a cor de uma cor amarela clara para azul real imediatamente após o hexahidrato de cloreto de cobalto II ser adicionado. Em seguida, refluxo e agitar a reação por 20 horas para garantir a reação completa antes de remover o solvente usando um rotovap sob pressão reduzida.Para cloro-N3-S, S, N-2, 6-BIS-N-isopropil-N'metilenetriazole-2-thione-pyridine cobalt II tetrachlorocobaltate recristallização por difusão de vapor lento, dissolver o soluto em 10 mililitros de acetonitrilo e filtrar a solução antes de aliquotar a solução uniformemente em um frasco de dram. Encha cada frasco com 1,5 mililitros de solução de acetonitrila e tampe os frascos com algodão. Para cultivar cristais únicos de alta qualidade, é fundamental que o plugue de algodão se encaixe no frasco de um dram.Usamos um pouco menos de uma bola de algodão para cada frasco. Em seguida, coloque os frascos em um frasco contendo 50 mililitros de éter dietil, feche o frasco com uma tampa e deixe os cristais crescerem por até uma semana. A síntese dos complexos quatro e cinco pode ser realizada com sucesso reagindo a uma solução de acetonitrilo contendo um precursor de ligante bis-thione com hexahidrato de cloreto de cobalto II.A aquisição de cristais únicos de complexos quatro e cinco via difusão de vapor lento é um excelente método para o cultivo de cristais únicos para amostras difíceis de cristalizar. A análise elementar dos complexos recristalizados sugere que os complexos quatro e cinco são puros porque as porcentagens calculadas de carbono, hidrogênio e nitrogênio estão em excelente concordância com as porcentagens encontradas de carbono, hidrogênio e nitrogênio. Além disso, a espectroscopia visível ultravioleta dos complexos quatro e cinco revela que o complexo quatro exibe três picos na região visível em 680, 632 e 589 nanômetros, e que o complexo cinco exibe quatro picos na região visível em 682, 613, 588 e 573 nanômetros.O mais importante a se lembrar é que quando você prepara o complexo, você deve adicionar hexahidrato de cloreto de cobalto a uma solução de acetonitrila que contém um precursor de ligante. O método de recristalização pode ser aplicado a qualquer composto orgânico ou inorgânico que seja difícil de recristalizar. Estamos preparando os complexos de cobalto II que não contêm cobalto no contra-ânion e triagem dos complexos para sua reatividade.Certifique-se de conduzir todas as reações em um capô de fumaça.

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Chemistry

Química

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