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DOI: 10.3791/60742-v
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A glândula mamária é uma estrutura bicamada, composta por células epiteliais mioepiteleliais externas e internas. Apresentado é um protocolo para preparar organóides utilizando a tripspsinização diferencial. Este método eficiente permite que os pesquisadores manipulem separadamente esses dois tipos de células para explorar questões sobre seus papéis na forma e função da glândula mamária.
Nosso método é significativo porque permite que os pesquisadores isolem e manipulem diferentes tipos de células para a investigação de suas contribuições individuais de linhagem à forma e função tecidual. Esta técnica é um método suave e eficiente para separar tipos de células e, como resultado, a integridade das células é preservada para a cultura 3D. Essa técnica também pode ser aplicada a outros sistemas para isolar células que não possuem biomarcadores bem caracterizados.
Para colher as glândulas mamárias número dois, três, quatro e cinco de um rato fêmea de 10 a 14 semanas, primeiro faça uma incisão de um centímetro na linha média entre os dois traseiros. Estenda o corte até o pescoço e faça pequenos cortes laterais da incisão da linha média em direção aos membros. Em seguida, estique a pele ensinada antes de fixá-la com um alfinete em cada lado do animal.
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