Estabelecimento de Infarto Agudo de Pontina em Ratos por Estimulação Elétrica

Nós fornecemos um protocolo para estabelecer infarto em um pons de rato. Este modelo de rato de infarto pontino foi facilmente executado, facilmente reproduzido e altamente bem sucedido modelo. A estimulação elétrica pode ser usada para causar infarto em qualquer outra área cerebral como o tálamo.

As pessoas que querem realizar esse modelo devem aprender a autonomia pontina antes do experimento. Antes da cirurgia, pesam os ratos e avaliam seu desempenho neurológico de acordo com os testes comportamentais descritos no texto que acompanha. Pré-aqueça a almofada de aquecimento a 37 graus Celsius imediatamente antes da anestesia e conecte a broca do crânio ao suporte no quadro estereotaxista.

Confirme a falta de resposta ao reflexo do pedal no primeiro rato anestesiado e monte o rato sobre o quadro estereotaxic na posição propensa na almofada de aquecimento. Posicione as barras de ouvido acima do canal auditivo para fixar a cabeça, tomando cuidado para que o crânio seja mantido horizontalmente para evitar qualquer distorção da injeção. Aplique pomada nos olhos do animal e use uma micro máquina de barbear para remover o cabelo do crânio.

Use um marcador para desenhar uma linha de três centímetros ao longo da linha média do crânio da linha do canthus lateral bilateral a 0,5 centímetros atrás da fontanelle posterior e use um bisturi para fazer uma incisão de linha média ao longo da linha marcada. Use um cotonete para remover qualquer sangue e coloque um pedaço de fita cirúrgica em cada lado da aba da pele para expor o crânio. Use um novo cotonete encharcado com cloreto de sódio de 0,9% para remover suavemente qualquer tecido conjuntivo do crânio e localizar o bregma.

Use uma caneta marcador de ponta fina para indicar o ponto central do bregma como o ponto de origem, coloque a broca em seis milímetros anteriores, dois milímetros lateral medial. Use a broca para realizar cuidadosamente uma craniotomia de um milímetro de diâmetro. Em seguida, substituiu a broca por uma sonda calibre 22 por uma baia isolada com a ponta colocada dois milímetros acima da extremidade proximal da baia.

Insira as folhas sete milímetros no cérebro e avance a sonda ao longo da baia até que o topo da sonda esteja nove milímetros abaixo da superfície do cérebro. Conecte os eletrodos a um estimulador elétrico e conecte o ânodo à sonda. Em seguida, conecte-se ao cátodo ao ouvido do rato.

Em seguida, ligue o estimulador elétrico e defina a largura de pulso único para 4.050 milissegundos, a tensão para 50 volts e a corrente para quatro miliamperes. Deixe a sonda em posição por cinco minutos após a estimulação antes de remover o dispositivo do cérebro. Cubra a craniotomia com cimento ósseo e deixe o cimento secar antes de usar filamentos de sutura de poliamida 4.0 para fechar a ferida.

Depois de três ou quatro pontos, amarre 2-1-1 nós cirúrgicos padrão. Em seguida, injete intraperitoneally o rato com 250 microliters de penicilina e monitore o rato a cada 15 minutos até totalmente acordado antes de devolver o animal à sua gaiola. Nesta análise, seis animais foram submetidos à cirurgia como demonstrado e seis animais foram tratados como controles.

As fatias cerebrais nestas imagens foram derivadas de um rato por grupo. A ressonância magnética revelou que o infarto foi localizado na base dos pons imitando infartos anterolaterais em pacientes humanos. Como foi utilizada uma baanha isolada, o infarto não foi observado no córtex, cerebelo ou midbrain.

Imagens ponderadas por difusão também revelaram o infarto agudo de pontina. A coloração do TTC foi usada para confirmar o infarto 24 horas após a cirurgia. Como esperado, o volume de infarto foi significativamente maior no grupo cirúrgico em comparação com o grupo controle.

Os escores comportamentais foram medidos antes e depois da cirurgia. Comparados com o grupo controle, ratos com um infarto pontino circularam para a esquerda. Diferenças significativas foram observadas no Longa, Berderson, colocação de membros, equilíbrio do feixe e escores de teste somatossensorial de remoção adesiva entre discursos com infarto pontino e ratos do grupo controle.

Qualquer área cerebral específica será destruída pela estimulação elétrica.