Name: Um modelo modificado de rato de dois rins um clipe de regulação de renin em estenose da artéria renal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Aprenda a induzir estenose da artéria renal em camundongos usando o modelo 2K1C modificado. Este método permite estudar mecanismos moleculares da expressão de renina e hipertensão vascular renal, oferecendo uma plataforma confiável para identificar novos alvos terapêuticos.

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A pesquisa foi apoiada pela NHLBI Research Scientist Development Grant (1K01HL135461-01) para a JAG. Obrigado a David Carmona-Berrio e Isabel Adarve-Rengifo por sua assistência técnica.

Os camundongos foram alojados e atendidos na Divisão de Cuidados com Animais do Centro Médico da Universidade Vanderbilt (VUMC) seguindo as diretrizes do National Institutes of Health (NIH) e o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório, Departamento de Saúde e Serviços Humanos dos EUA. Todos os procedimentos em animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da VUMC antes do início dos experimentos.
1. Preparação e dissecção animal
<ol><li>Ligue o germinador e a bomba de água da almofada de aquecimento cerca de 30 minutos antes de iniciar a cirurgia.</li>
	<li>Corte tubo de poliuretano de 0,5 mm de comprimento com um bisturi afiado. Remova 0,2 mm da circunferência fazendo um corte longitudinal para fazer uma braçadeira. NOTA: Esta é uma parte crítica do procedimento de estenose da artéria renal que requer extrema precisão, atenção aos detalhes e paciência. Tente cortar vários pedaços de tubos de poliuretano de cada vez. Realize todo este procedimento sob microscópio.</li>
	<li>Antes de prosseguir, coloque luvas cirúrgicas estéreis e uma máscara cirúrgica.</li>
	<li>Use ratos C57BL/6 (WT) de 6-8 semanas. Use um número igual de ratos machos e fêmeas para evitar qualquer viés sexual.</li>
	<li>Grave o peso dos camundongos antes de realizar a cirurgia. O peso ideal para realizar estenose da artéria renal com tubo de poliuretano é de 18 a 22 g. Manuseie os ratos suavemente e não se agite ao injetar a anestesia. Administrar analgesia pré-operatória (Ketofgen, 5 mg/kg de musculação corporal). NOTA: Ao transferir os ratos de sua sala de alojamento para a sala de cirurgia, leve-os com grande gentileza e cuidado para evitar agitação. Carregar gaiolas de ratos nas mãos em vez de um carrinho é altamente recomendado.</li>
	<li>Anestesiar os camundongos com uma mistura de cetamina (100 mg/kg BW) e xilazina (10 mg/kg BW) através de injeções intraperitoneais (I.P.).</li>
	<li>Coloque o mouse de volta dentro da gaiola até anestesiar completamente. Leva cerca de 4-5 minutos antes que o rato esteja totalmente inconsciente. Aperte a cauda ou o dedo do pé com fórceps para verificar se o rato está totalmente inconsciente e pronto para a cirurgia.</li>
	<li>Coloque o rato de costas em uma toalha de papel. Remova o cabelo do abdômen lateral usando um cortador de cabelo elétrico seguindo a direção oposta do crescimento capilar. Após raspar o local cirúrgico, limpe a área com um esfoliante cirúrgico contendo iodo (ou clorexidina), seguido de uma lavagem com 70% de etanol (ou soro fisiológico estéril).  Repita 3 vezes. NOTA: O procedimento de depilação deve ser realizado a alguma distância ou preferencialmente em um banco diferente do banco do procedimento cirúrgico para evitar qualquer interferência capilar e contaminação capilar durante o procedimento cirúrgico.</li>
	<li>Cubra a almofada de aquecimento com uma folha estéril. Leve o mouse para o banco cirúrgico e coloque na folha estéril, de frente para o lado lateral direito do mouse em direção ao microscópio. Mantenha uma temperatura constante da almofada de 37 °C com água circulante.</li>
	<li>Abra o saco esterilizado contendo todo o equipamento cirúrgico. Usando um microscópio dissecando e uma tesoura afiada estéril, faça uma pequena incisão flanco (perto da costela torácica de13º , a última costela no rato) e cerca de 0,5 cm de distância das vértebras. Prossiga ao longo das vértebras lombares e faça uma incisão de 1 polegada.</li>
	<li>Puxe a pele e o músculo para expor o rim.</li>
	<li>Limpe e remova a gordura circundante usando cotonetes estéreis para isolar a artéria renal. Isole o nervo renal da artéria renal usando fórceps curvos.</li>
	<li>Ao realizar a cirurgia falsa, aplique suturas para fechar a pele e aplicar antibiótico na ferida fechada, em seguida, prossiga para cuidados pós-operatórios. Se não, prossiga com a seguinte seção para stenose a artéria. NOTA: Todo experimento deve ter animais falsos como controles do procedimento cirúrgico. Animais falsos consistem em camundongos que passaram pelo procedimento cirúrgico de expor a artéria renal sem colocar uma braçadeira sobre ela.</li>
</ol>2. Estenose da artéria renal direita
<ol><li>Coloque duas suturas de nylon sob a artéria renal direita, faça nós soltos e, em seguida, coloque o manguito ao redor da artéria renal principal aproximadamente equidistante entre o rim e a bifurcação da aorta</li>
	<li>Feche a braçadeira usando as suturas de nylon. Faça quatro nós para cada sutura para evitar a probabilidade de perder as suturas após a cirurgia.</li>
	<li>Feche a incisão no músculo aplicando uma sutura contínua simples.</li>
	<li>Faça suturas simples interrompidas para fechar a pele.</li>
	<li>Administrar analgésicos aprovados pela IACUC. NOTA: Ferramentas cirúrgicas autoclave antes de cada uso. Se mais de uma cirurgia estiver sendo realizada de uma só vez, limpe todas as ferramentas usadas com um medidor de álcool estéril e coloque-as em germinadores quentes para 15-30 s após cada cirurgia. Troque luvas estéreis também para cada rato.</li>
</ol>3. Cuidados pós-operatórios
<ol><li>Voltem os ratos para sua gaiola e deixem a gaiola meio em frente, meio fora, uma almofada de aquecimento de água circulante por 2 - 3 horas. Adicione alimentos de recuperação da dieta gel dentro da gaiola.</li>
	<li>Administrá-lo com analgésico (cetoprofeno) intraperitoneal (dose: 5 mg/kg BW) no dia seguinte.</li>
	<li>Pesar os ratos pelos próximos dois dias; se alguns camundongos perderem mais de 20% de seu peso consultar o veterinário e decidir se o animal precisa ser eutanizado após o procedimento autorizado pela IACUC.</li>
	<li>Monitore os camundongos diariamente para avaliar vermelhidão, inchaço, dor ou infecção.</li>
	<li>Procure consulta veterinária para complicações pós-operatórias de acordo com as políticas institucionais da IACUC..</li>
</ol>4. Colheita de tecidos
<ol><li>Colher tecido 3 semanas após o procedimento cirúrgico. Grave o peso de cada rato.</li>
	<li>Eutanize o mouse com um procedimento aprovado pela IACUC.</li>
	<li>Coloque o mouse em uma plataforma estéril em posição supina para dissecar.</li>
	<li>Segure e estenda os membros para limitar o movimento.</li>
	<li>Pulverize minuciosamente os ratos com 70% de etanol.</li>
	<li>Faça uma incisão midline para abrir o abdômen e a área do peito usando uma tesoura afiada.</li>
	<li>Puxe a pele e a parede peritoneal.</li>
	<li>Exponha cuidadosamente o coração e perfure o ventrículo direito e exsanguine o rato.</li>
	<li>Remova ambos os rins usando fórceps. Os rins estão localizados na parte de trás dos ratos. NOTA: Não misture os dois rins. Esteja ciente dos rins estenosed, falso e contralateral.</li>
	<li>Remova a cápsula renal, limpe-as de qualquer gordura e grave o peso de cada rim separadamente.</li>
	<li>Corte uma seção longitudinal de ambos os rins e fixada em 4% pfa durante a noite a 4 °C para ser posteriormente processada para incorporação de parafina, para realizar em situ hibridização (ISH) e imunohistoquímica (IHC). Siga os protocolos ISH e IHC conforme relatado23,24.</li>
	<li>Isole o córtex do rim restante e o flash congele em nitrogênio líquido para realizar a mancha ocidental. Armazene amostras a -80 °C até a análise.</li>
	<li>Quantifique expressões de renin, e N-GAL com mancha ocidental como descrito na literatura23,24.</li>
</ol>5. Estatísticas
<ol><li>Use ANOVA unidirecional ou bidirecional para experimentos com três ou mais condições seguidas de testes pós-hoc bonferroni para comparações entre grupos individuais. Considere um valor p igual ou inferior a 0,05 significativo. Use software (por exemplo, GraphPad Prism 8.2) para realizar todas as análises estatísticas.</li>
</ol>

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<li>Johns, C., Gavras, I., Handy, D. E., Salomao, A., Gavras, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+experimental+hypertension+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Models of experimental hypertension in mice.</a> Hypertension. 28 (6), 1064-1069 (1996).</li>
</ol>

Nenhum conflito de interesses, financeiro ou não, é declarado pelos autores.

A estenose da artéria renal é uma importante causa de hipertensão secundária ou resistente, e lesão renal 1,29. O modelo goldblatt de dois rins (2K1C) foi empregado para estudar a hipertensão renovascular induzida por RAStenosis 1,17,18,19. Vários estudos anteriores utilizando vários modelos de animais mostraram que a estenose na artéri...

A estenose da artéria renal (RAStenosis) é um problema intratável que afeta cerca de 6% das pessoas com mais de 65 anos e em até 40% das pessoas com doença vascular coronariana ou periférica 1,2. Os tratamentos atuais para a doença são limitados; portanto, há uma necessidade crítica de desenvolver novas terapias para tratar hipertensão renovascular ou hipertensão resistente induzida por RAStenosis. O sistema de aldosterona de angiotensina renin (RAAS) é o caminho-chave envolvido na patogênese da hipertensão induzida por RAStenose ou hipertensão renovascular 3,4. Terapias conhecidas voltadas para o RAAS, como inibidores de ACE ou bloqueadores de receptores de angiotensina, aliviam a hipertensão, mas precisam de um exame próximo para insuficiência renal e hipercalemia 5,6,7. Renin catalisa o passo limitante de taxas no RAAS; converte angiotensinogênio em angiotensina I. Na aterosclerose, a formação da placa provoca o estreitamento da artéria renal que impulsiona a secreção de renin, resultando em hipertensão renovascular e danos nos rins8. Vários estudos relataram aumento dos níveis de estresse oxidativo durante a hipertensão renovascular em humanos, que foram corroborados com o modelo de dois camundongos de um rim (2K1C), bem como outros modelos animais hipertensos 2,9,10,11,12,13,14,15,16 . O mecanismo molecular de controle de expressão de renin durante a hipertensão renovascular induzida por RAStenosis não é bem compreendido e merece uma investigação mais aprofundada.
Modelos animais experimentais que recapitulam RAStenosis de forma confiável e reprodutiva são importantes na elucidação dos mecanismos celulares e moleculares do controle de expressão de renin para o desenvolvimento de novas terapias. O modelo de camundongo 2K1C é um modelo experimental bem estabelecido para estudar a patogênese da hipertensão renovascular 17,18,19,20. Este modelo é gerado pela constrição da artéria renal utilizando um clipe 17,20,21, produzindo assim oclusão da artéria renal que resulta em um aumento na expressão de renin e hipertensão 17,19,20,21. No entanto, não há relatórios técnicos disponíveis, que descrevam um procedimento passo a passo para gerar estenose da artéria renal em modelos animais.
Clipes de prata convencionais em forma de U, tubos de poliuretano e outros clipes têm sido usados para restringir a artéria renal para induzir estenose da artéria renal. Alguns estudos têm demonstrado que o design e o material do clipe são fundamentais para obter dados confiáveis e reprodutíveis com o modelo animal 2K1C. De acordo com Lorenz et al., o uso de clipes de prata convencionais projetados por U induz uma baixa taxa de sucesso de hipertensão (40-60%)21. Devido ao desenho do clipe, a artéria renal é pressionada lateralmente, desencadeando algumas constrições e maior probabilidade de ser desalojada da artéria renal. Maleabilidade prateada e ductilidade podem permitir alterações nas larguras do clipe; portanto, causando diferentes níveis de hipertensão entre camundongos. Os dióxidos de prata no clipe podem causar inflamação perivascular, proliferação intimal e granulação tecidual, alterando o diâmetro da artéria renal22. Devido à variabilidade nos níveis de hipertensão obtida com o clipe de prata u-design convencional, Warner et al. e Lorenz et al. usaram com sucesso um tubo de poliuretano de design arredondador para iniciar a estenose da artéria renal em camundongos, gerando uma indução mais confiável e consistente dos dois rins um clipe modelo animal20,21.
Neste relatório, descrevemos um protocolo cirúrgico para gerar RAStenosis experimental em camundongos, usando a tubulação de poliuretano para restringir a artéria renal. O manguito de design redondo de poliuretano é um clipe mais reprodutível, confiável e de baixo custo para gerar estenose no mouse. O objetivo deste modelo experimental é estudar e definir o mecanismo molecular e celular do controle da expressão de renin durante a estenose da artéria renal. Confirmamos o sucesso do modelo de camundongos RAStenosis medindo a expressão de renin e o marcador de lesão renal neutrófilo gelatinase-associado lipocalina (N-GAL).

<table><tbody><tr><td>Diet Gel</td><td>Clear H2O</td><td>Diet-Gel 76A</td><td>Dieta de recuperação cirúrgica</td></tr><tr><td>EMC Almofada dura aquecida</td><td>Hallowell</td><td>000A2788B</td><td>Almofadas de aquecimento foram usadas para manter os ratos aquecidos</td></tr><tr><td>Sutura de Nylon</td><td>Ethilon Ethicon</td><td>662G</td><td>4-0 (métrica 1.5), Esta sutura foi usada para fechar o peritônio e a pele</td></tr><tr><td>Sutura de Nylon</td><td>Ethilon Ethicon</td><td>2815 G</td><td>8-0 (0,4 métrica), Esta sutura foi usada para fechar o manguito para amarrar e contrair a artéria</td></tr><tr><td>Germinator 500</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>GER 5287</td><td>Esterilize ferramentas cirúrgicas entre cirurgias</td></tr><tr><td>Cetoprofeno</td><td>Zoetis</td><td>Ketofen</td><td>Analgésico</td></tr><tr><td>Poliuretano</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>MRE-025</td><td>Este tubo foi usado para iniciar a estenose</td></tr><tr><td>Cotonetes anti-sépticos de iodopovidona</td><td>Medline</td><td>MDS093901</td><td>Foi aplicado após depilação e cirurgia na pele</td></tr><tr><td>Reflex 7 Clip Applier</td><td>Roboz Surgical Instrument Co</td><td>204-1000</td><td>Este aplicador de clipe foi usado para aplicar o clipe no caso de uma ou mais suturas saírem</td></tr><tr><td>Cortinas de toalha estéreis</td><td>Dynarex</td><td>4410</td><td>Foi usado como lençol para ratos durante a cirurgia</td></tr><tr><td>Pomada antibiótica tripla</td><td>Medi-First</td><td>22312</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de água</td><td>Stryker</td><td>T/pump Professionals</td><td>Usado para aquecer e circular água na almofada dura de aquecimento para manter os ratos aquecidos durante e pós-cirurgia</td></tr></tbody></table>

um modelo modificado de rato de dois rins um clipe de regulação de renin em estenose da artéria renal

A Modified Two Kidney One Clip Mouse Model of Renin Regulation in Renal Artery Stenosis

A estenose da artéria renal é uma condição comum em pacientes com doença vascular coronariana ou periférica onde o sistema de aldosterona renin angiotensin (RAAS) é superativado. Nesse contexto, há um estreitamento das artérias renais que estimulam o aumento da expressão e liberação de renin, a protease que limita a taxa no RAAS. O aumento resultante da expressão de renin é um conhecido condutor da hipertensão renovascular, frequentemente associada a lesões renais e danos nos órgãos finais. Assim, há um grande interesse em desenvolver novos tratamentos para essa condição. O mecanismo molecular e celular do controle de renin na estenose da artéria renal não é totalmente compreendido e merece uma investigação mais aprofundada. Para induzir estenose da artéria renal em camundongos, foi desenvolvido um modelo de rato Goldblatt modificado de 2 rins 1 (2K1C). O rim direito foi estenoso em camundongos do tipo selvagem e camundongos operados por vergonha foram usados como controle. Após estenose da artéria renal, determinamos expressão de renin e lesão renal. Os rins foram colhidos, e cortices frescos foram usados para determinar a expressão proteica e mRNA de renin. Este modelo animal é reprodutível e pode ser usado para estudar respostas fiofoficológicas, vias moleculares e celulares envolvidas na hipertensão renovascular e lesão renal.

A constrição da artéria renal aumenta a expressão de renin no rim estenoso enquanto reprime a expressão no rim contralateral. O dois rim um clipe (2K1C) ou modelo Goldblatt de estenose induz aumento da expressão renin e lesão renal. Este é reconhecido como o melhor modelo representativo de estenose unilateral da artéria renal em humanos.
A expressão de renin e prorenina (precursora da renin) foram medidas utilizando-se imunoblotting. Os dados mostram que a expressão de renin e prorenina aument...

Um modelo modificado de 2 rim 1 (2K1C) O modelo de rato Goldblatt foi desenvolvido usando tubos de poliuretano para iniciar a estenose da artéria renal, induzindo um aumento na expressão de renin e lesão renal. Aqui, descrevemos um procedimento detalhado de preparação e colocação da braçadeira na artéria renal para gerar um modelo de mouse 2K1C reprodutível e consistente.

Um modelo modificado de rato de dois rins um clipe de regulação de renin em estenose da artéria renal

Renal artery stenosis is a common condition in patients with coronary or peripheral vascular disease where the renin angiotensin aldosterone system (RAAS) ...

O modelo de camundongo 2K1C é um método confiável e reprodutível para induzir estenose da artéria renal. Este protocolo é valioso na elucidação dos mecanismos moleculares envolvidos no controle da expressão da renina durante a hipertensão vascular renal. Este modelo animal mimetiza a estenose unilateral da artéria renal em humanos.A confiabilidade e a reprodutibilidade o tornam um bom modelo para discernir novos alvos terapêuticos para o tratamento da hipertensão vascular renal. Esta técnica requer um conhecimento básico de realização de cirurgia em camundongos. Existem duas partes críticas: preparação do tubo e colocação do tubo na artéria renal.Ambos são descritos em detalhes. A constrição da artéria renal direita usando tubos cortados com precisão é fundamental. Este vídeo do procedimento mostrará aos alunos como cortar a tubulação e, em seguida, acessar e contrair a artéria.Comece cortando a tubulação para o procedimento de estenose. Corte um pedaço de tubo de poliuretano de 0,5 milímetro de comprimento com um bisturi afiado. Em seguida, faça um manguito removendo 0,2 milímetros da circunferência com um corte longitudinal.Registre o peso dos camundongos, que deve estar entre 18 e 22 gramas, para realizar a estenose da artéria renal com o tubo de poliuretano. O peso dos camundongos é fundamental para realizar a cirurgia. Depois de anestesiar e administrar o analgésico ao camundongo, coloque-o de volta dentro da gaiola até que esteja totalmente inconsciente.Aperte o dedo do pé com uma pinça para verificar se o mouse está totalmente anestesiado e pronto para a cirurgia. Coloque o mouse de costas em uma toalha de papel longe da área de cirurgia e remova os pelos laterais do abdômen com uma máquina de cortar cabelo elétrica seguindo a direção oposta ao crescimento dos pelos. Limpe a área raspada com uma gaze de álcool estéril e aplique solução tópica de iodopovidona.Abra a bolsa esterilizada contendo todo o equipamento cirúrgico. Trabalhando sob o microscópio de dissecação, use uma tesoura afiada estéril para fazer uma pequena incisão no flanco a cerca de 0,5 centímetros de distância das vértebras. Prossiga ao longo das vértebras lombares e faça uma incisão de uma polegada.Puxe a pele e o músculo para trás para expor o rim. Em seguida, limpe e remova a gordura circundante com cotonetes para isolar a artéria renal. Isole o nervo renal da artéria renal usando a pinça curva.Limpe o líquido escorrido perto da artéria renal com um cotonete. Coloque duas suturas de náilon sob a artéria renal direita, faça nós soltos e coloque o manguito ao redor da artéria renal principal aproximadamente equidistante entre a bifurcação do rim e da aorta. Feche o manguito usando as suturas de náilon, fazendo três nós para cada sutura para evitar a probabilidade de perder as suturas após a cirurgia.Feche a incisão no músculo aplicando uma sutura contínua simples e faça suturas interrompidas simples para fechar a pele. Retorne os camundongos à gaiola e deixe a meia gaiola em uma almofada de aquecimento de água circulante por duas a três horas para que os animais se recuperem da cirurgia. Forneça aos animais alimentos de recuperação de dieta em gel.No dia seguinte, administre analgésicos. Pese os ratos pelos próximos dois dias e consulte o veterinário se um rato perder mais de 20% de seu peso. Inspecione os ratos diariamente para avaliar vermelhidão, inchaço, dor ou infecção.Registre o peso de cada mouse. Após a eutanásia do animal, coloque-o em uma plataforma estéril em decúbito dorsal. Prenda e estenda os membros para limitar o movimento e borrife completamente o mouse com 70% de etanol.Use uma tesoura para fazer uma incisão na linha média e abrir o abdômen e a área do tórax. Puxe a pele e a parede do peritônio para trás, exponha cuidadosamente o coração e perfure o ventrículo direito. Remova os dois rins usando uma pinça, mantendo o controle de qual rim foi estenosado.Remova as cápsulas renais, limpe-as de qualquer gordura e registre o peso de cada rim separadamente. Corte uma seção longitudinal de ambos os rins e fixe-os em 4% de PFA durante a noite a quatro graus Celsius para hibridização in situ e imuno-histoquímica. Isole o córtex do rim restante e congele-o rapidamente em nitrogênio líquido para realizar um Western blot.Armazene as amostras a menos 80 graus Celsius até uma análise mais aprofundada. A constrição da artéria renal aumenta a expressão da renina no rim estenosado, enquanto reprime a expressão no rim contralateral. O modelo de estenose de dois rins induziu a expressão de renina e aumentou a lesão renal.A expressão de renina e prorenina foi medida por immunoblotting. Os dados mostram que a expressão de renina e prorenina aumentou no rim estenosado em comparação com os rins contralateral e simulado, sugerindo que o manguito estava contraindo a artéria renal e causando alterações na perfusão renal. A imuno-histoquímica foi realizada para visualizar a localização da expressão da renina.As imagens confirmaram o aumento da expressão de renina no rim cortado. Além disso, o recrutamento de células justaglomerulares ao longo da artéria aferente foi observado no rim estenosado. Para investigar o efeito nos níveis de expressão de mRNA de renina, foi realizada hibridização in situ.Os dados sugerem aumento do recrutamento de rRNAm e células JG de renina no rim estenosado. Outra característica da estenose da artéria renal é a regulação positiva dos marcadores de lesão renal devido a alterações na perfusão renal, produção de superóxido e hipertensão. Portanto, o N-GAL foi medido com immunoblotting, mostrando que o marcador de lesão renal aguda foi altamente regulado positivamente no rim estenosado.Ao tentar este protocolo, lembre-se de colocar as suturas de náilon ao redor da artéria renal antes de colocar o manguito. Isso ajuda a agilizar o procedimento.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este vídeo demonstra um procedimento para denervação simpática da artéria renal em um modelo de camundongo hipertenso induzido por angiotensina II, usando fenol para interromper a função nervosa simpática e reduzir a pressão arterial.

Denervação simpática de artérias renais em um modelo de camundongo com hipertensão induzida por angiotensina II

O modelo de camundongo de lesão de reperfusão de isquemia renal descrito aqui compreende uma nefrectomia direita que fornece tecido de controle e pinçamento do pedículo renal esquerdo para induzir isquemia que resulta em lesão renal aguda. Este modelo usa uma abordagem de laparotomia de linha média com todas as etapas realizadas por meio de uma incisão.

Renal Isquemia Reperfusão: um modelo do rato de lesão e regeneração

O mouse rim isolado perfundido (MIPK) é uma técnica para manter um rim do rato em condições ex vivo perfundidos e funcionais durante 1 h. Os tampões e técnica cirúrgica encontram-se descritos em pormenor.

A técnica de rim perfundidos rato isolado

Este manuscrito fornece um procedimento cirúrgico de duas etapas detalhadas para executar o rato 5/6th nefrectomia parcial (PNx) com ligadura de polo. Quatro semanas após a cirurgia, em comparação com a operação de ratos, os ratos PNx desenvolveram insuficiência renal, anemia, hipertrofia cardíaca, Fibrose cardíaca e diminuição da função sistólica e diastólica do coração.

Um Mouse 5/6th nefrectomia modelo que induz a miocardiopatia urêmica Experimental

A lesão por isquemia renal está associada à alta morbidade e mortalidade em pacientes hospitalizados. Aqui, apresentamos um modelo de camundongo simples e eficaz de lesão unilateral de isquemia renal-reperfusão e fornecemos uma visão geral sequencial das alterações patológicas representativas observadas no rim.

Um modelo eficaz de rato de isquemia renal unilateral-reperfusão lesão

Aqui, apresentamos um protocolo para denervação simpática renal (RDN) em camundongos com hipertensão induzida por infusão de Angiotensina II. O procedimento é repetível, conveniente e permite estudar os mecanismos regulatórios da RDN na hipertensão e hipertrofia cardíaca.

Denervação renal melhorada Hipertensão Mitigada Induzida por Infusão de Angiotensina II

Este protocolo detalha os passos cirúrgicos da criação da fístula arteriovenosa ilíaca comum murina. Desenvolvemos este modelo para estudar a fisiopatologia do membro relacionada ao acesso hemodialítico.

Um modelo murino de disfunção da mão relacionada ao acesso para hemodiálise

Este artigo fornece instruções detalhadas para permitir que os investigadores realizem obstrução ureteral unilateral reversível em camundongos usando um modelo padronizado que permite a análise dos resultados estruturais e funcionais de longo prazo após a reversão da obstrução ureteral prolongada.

Um modelo de camundongo para avaliar os resultados estruturais e funcionais de longo prazo após a reversão da obstrução ureteral unilateral prolongada

Este artigo apresenta um modelo isquêmico de DRC usando IRI renal unilateral com nefrectomia contralateral realizada um dia antes da coleta da amostra; esse protocolo permite avaliação funcional baseada em soro, alta sobrevivência e patologia reprodutível da DRC em 28 e 42 dias, proporcionando uma plataforma versátil para estudos mecanicistas e intervencionistas.

Modelo murino de transição aguda para crônica de doença renal induzida por isquemia/lesão de reperfusão renal

Um modelo murino precisa de lesão renal aguda (IRA) devido à isquemia é uma ferramenta importante para investigar lesão renal aguda e, eventualmente, encontrar ferramentas terapêuticas para tratar a lesão renal. O sistema de suspensão de peso oferece uma ferramenta para a oclusão da artéria renal imediata e confiável e reperfusão sem causar congestão renal.

Uso de um sistema de suspensão de peso para oclusão da artéria renal isolada

Aprenda a induzir estenose da artéria renal em camundongos usando o modelo 2K1C modificado. Este método permite estudar mecanismos moleculares da expressão de renina e hipertensão vascular renal, oferecendo uma plataforma confiável para identificar novos alvos terapêuticos.

Um modelo modificado de rato de dois rins um clipe de regulação de renin em estenose da artéria renal

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