Name: Um ensaio de alimentação oral bacteriana com mosquitos tratados com antibióticos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-09-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 59 s
Description: Aprenda a dissecar o intestino médio de mosquitos e isolar bactérias cultiváveis para estudar o papel de cada cepa na fisiologia do hospedeiro. Este método auxilia pesquisadores em ecologia microbiana e controle de vetores.

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Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciência Natural da China (Grant No. 81902094, 81600497), e pelo Projeto do Plano de Ciência e Tecnologia da Província de Hunan (2019RS1036).

1. Dissecção midgut e isolamento de bactérias cultivais
<ol><li>Prepare o mosquito para dissecção.<ol>
<li>Recolher os mosquitos de 7 a 9 dias após o surgimento com um aspirador. Anestesiar os mosquitos coletados submetendo-os a uma temperatura de 4 °C por 3-5 min e manter os mosquitos anestesiados em uma placa de Petri gelada até a dissecção.</li>
	</ol></li>
	<li>Esterilizar instrumentos de laboratório e a superfície do mosquito.<ol>
<li>Esterilize o banco de experimentos, dissecando microscópio, fórceps e lâmina de vidro pulverizando 75% de etanol para evitar contaminação por bactérias do ambiente.</li>
		<li>Prepare uma placa de Petri estéril contendo 75% de etanol e duas placas de Petri contendo salina tamponada de fosfato estéril de 1x (1x PBS).</li>
		<li>Esterilize a superfície do mosquito mergulhando e sacudindo-os em 75% de etanol por 3 minutos, e enxágue duas vezes com 1x de tampão PBS no caso de o etanol afetar a flora intestinal dissecada.</li>
	</ol></li>
	<li>Dissecar o mosquito midgut.<ol>
<li>Transfira o mosquito esterilizado pela superfície para a lâmina de vidro com uma gota de tampão PBS 1x estéril. Disseca sob o microscópio dissecando.</li>
		<li>Sob a ampliação inferior do microscópio dissecando, remova cuidadosamente as pernas, asas e a cabeça do mosquito para evitar a fuga. Remova o último somite do mosquito cortando diretamente, em vez de puxá-lo, para evitar que o trato digestivo quebre.</li>
		<li>Aperte o tórax do mosquito e a extremidade do abdômen com fórceps. Puxe suavemente o trato digestivo do mosquito. O trato digestivo adquirido geralmente contém a cultura, foregut, midgut, hindgut, e os tubos malpighianos.</li>
		<li>Ajuste o microscópio de dissecação para uma ampliação maior. Remova a cultura, o foregut, o hindgut e os tubos malpighianos do trato digestivo dissecado para obter o midgut do mosquito.</li>
		<li>Tome cuidado ao remover a cultura, pois a cultura infla e se assemelha ao midgut depois que o mosquito toma uma refeição de açúcar. Os tubos malpighianos, um grupo de tubos excretórios longos e finos, estão localizados na fronteira entre o midgut e o hindgut.</li>
	</ol></li>
	<li>Isolar bactérias intestinais.<ol>
<li>Transfira o midgut dissecado para um tubo estéril de 1,5 mL com 200 μL de tampão PBS estéril de 1x.</li>
		<li>Triture o midgut em um banco estéril completamente com um pilão estéril para permitir a liberação completa de bactérias intestinais no tampão.</li>
		<li>Diluir a homogeneizar para três diluições de 10 vezes. Adicione 50 μL de cada diluição à placa de ágar LB (caldo de Luria) e, em seguida, espalhe-a na placa. Se o midgut contém uma alta concentração de flora intestinal, é essencial fazer mais diluições seriais para escolher colônias individuais.</li>
		<li>Incubar a placa a 37 °C por 1-2 dias até que colônias únicas sejam visíveis.</li>
	</ol></li>
	<li>Identificação de espécies<ol>
<li>Escolha colônias únicas e inocula-as respectivamente em um frasco cônico de 150 mL contendo 50 mL de meio de caldo LB.</li>
		<li>Agite as bactérias a 37 °C durante a noite.</li>
		<li>Extrair DNA total por kit de extração de DNA genômico bacteriano. Amplie o RDNA 16S por reação em cadeia de polimerase (PCR). NOTA: Existem vários segmentos em 16S rDNA que são conservados. Com base nessas regiões conservadas, primers universais para bactérias podem ser projetados para amplificar fragmentos de rDNA 16S de todas as bactérias. Estes primers são específicos para bactérias, e a diferença na região variável de 16S rDNA pode ser usada para distinguir diferentes bactérias. Portanto, o 16S rDNA é amplamente utilizado para identificação bacteriana.</li>
		<li>Recuperar e purificar fragmentos de DNA de produtos PCR por eletroforese de gel agarose e um kit comercial de recuperação de gel.</li>
		<li>Realize o sequenciamento de DNA nos fragmentos de DNA purificados para obter sequências genéticas bacterianas.</li>
		<li>Compare a sequência genética de rRNA 16S com a sequência bacteriana disponível no GenBank. Selecione o banco de dados Bactérias e Archaea. NOTA: A identificação ao nível da espécie foi definida como ≥99% 16S rDNA sequência similaridade com a entrada genbank mais próxima. O isolado foi atribuído ao gênero correspondente quando sua similaridade de sequência de rDNA 16S foi <99% e ≥95%.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Tratamento de antibióticos e reintrodução de bactérias
<ol><li>Prepare a solução antibiótica.<ol>
<li>Pese a quantidade necessária de sacarose, penicilina e estreptomicina para preparar uma solução de 10% de sacarose, incluindo 20 unidades de penicilina e 20 μg de estreptomicina por mL.</li>
	</ol></li>
	<li>Alimente mosquitos com a solução antibiótica.<ol>
<li>Anestesiar os mosquitos em 4 °C por 3-5 min. Transfira os mosquitos para um copo de papel. Cubra a parte superior com gaze e enwind a gaze com fita adesiva para evitar que os mosquitos escapem.</li>
		<li>Mergulhe bolas de algodão estéreis na solução antibiótica e coloque-as cuidadosamente no copo de mosquito. Esprema as bolas de algodão antes de usar para evitar que os mosquitos se afoguem nas bolas de algodão pingando.</li>
		<li>Cubra as bolas de algodão com uma placa de Petri de 10 cm para evitar a evaporação da umidade. Substitua as bolas de algodão duas vezes por dia por três dias consecutivos.</li>
	</ol></li>
	<li>Confirme a eficácia do tratamento com antibióticos.<ol>
<li>De acordo com o método acima, dissecar o midgut de mosquitos tratados com antibióticos.</li>
		<li>Transfira os meio-médios dissecados para um tubo estéril de 1,5 mL com 200 μL de tampão PBS estéril de 1x.</li>
		<li>Triture os meio-médios em um banco estéril completamente com um pilão estéril para permitir a liberação completa de bactérias intestinais no tampão.</li>
		<li>Extrair o DNA microbiano intestinal pelo kit de extração de DNA genômico bacteriano.</li>
		<li>Realize a quantitação bacteriana por PCR quantitativo em tempo real (qPCR) no DNA genômico usando primers de eubacteria universal (16S rRNA F: TCCTACGGGAGGCAGCAGT e R: GGACTACCAGGGTAATCCTGTT).</li>
	</ol></li>
	<li>Preparação de suspensão bacteriana<ol>
<li>Meça a solução bacteriana com um espectotômetro. Adicione 1 OD (OD600) suspensão bacteriana em um tubo de 1 mL. Centrifugar a suspensão a 5.000 x g por 5 min a 4 °C.</li>
		<li>Descarte o supernasciente e adicione 1 mL de tampão PBS estéril a tubo de 1,5 mL para precipitação de suspensão.</li>
		<li>Centrifugar a 5.000 x g para 5 min a 4 °C; descartar o supernante.</li>
		<li>Repetir as etapas 2.4.2 e 2.4.3.</li>
		<li>Adicione 200 μL de tampão PBS estéril 1x à precipitação bacteriana.</li>
		<li>Adicione 600 μL de solução de sacarose de 10%, 200 μL de ATP de 10 mm (que atua como fagostimulante) e 200 μL de suspensão bacteriana em um tubo estéril de 1,5 mL. Misture por vórtice. Alternativamente, suspender a pelota bacteriana em sangue inativado pelo calor.</li>
		<li>Preparação de sangue inativado pelo calor<ol>
<li>Coletar sangue fresco com um tubo anticoagulante.</li>
			<li>Tome 2-3 mL de sangue fresco. Centrífuga a 1.000 x g por 10 min a 4 °C para separar plasma e células sanguíneas. Note que o sangue será perdido durante o processo de centrifugação e lavagem; há a necessidade de calcular o uso com antecedência.</li>
			<li>Colete o plasma em um novo tubo de 1,5 mL e inativar a calor a 56 °C por 1h.</li>
			<li>Adicione 500 μL de tampão PBS estéril a tubo de 1,5 mL para suspensão de células sanguíneas. Centrifugar a 1.000 x g por 10 min a 4 °C e, em seguida, descartar o supernaspe.</li>
			<li>Repita o passo 2.4.7.4 duas vezes.</li>
			<li>Resuspend células sanguíneas com plasma inativado pelo calor para obter sangue inativado pelo calor.</li>
			<li>Siga os passos 2.4.1 a 2.4.4 para obter 1 pellet bacteriano OD.</li>
			<li>Resuspenque as bactérias com 1 mL de sangue inativado pelo calor.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Alimente o mosquito com suspensão de bactérias.<ol>
<li>Passe a fome os mosquitos por 24 horas, permitindo que os antibióticos metabolizem antes de alimentar as bactérias.</li>
		<li>Monte o sistema de alimentação de membrana.</li>
		<li>Sele a unidade alimentador esterilizada com um parafilm, alternativamente uma membrana de colágeno.</li>
		<li>Coloque um anel de plástico e fixe-o com parafilm para evitar quebrar devido ao atrito durante a alimentação.</li>
		<li>Adicione lentamente a solução bacteriana preparada à unidade alimentador. Observe que apenas um poço da unidade alimentador de dois poços pode ser preenchido com a solução e cobrir a unidade alimentador apenas a partir do lado de queda do reagente.</li>
		<li>Conecte a unidade alimentador a um sistema de alimentação pré-aquecido a 37 °C, que simula a temperatura humana para atrair mosquitos. Coloque o dispositivo de alimentação em um copo de papel cheio de mosquitos e alimente por 90 minutos.</li>
		<li>Após a alimentação, anestesia os mosquitos submetendo-os a uma temperatura de 4 °C por 3-5 min e mantenha os mosquitos anestesiados em uma placa de Petri gelada.</li>
		<li>Escolha os mosquitos totalmente engorgados para mais estudos.</li>
	</ol></li>
</ol>

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</ol>

Os autores não têm conflitos de interesse para divulgar.

Pesquisas sobre interações hospedeiras-micróbios descobriram que diferentes micróbios intestinais afetam sua fisiologia hospedeira através de mecanismos divergentes. Este artigo introduz o método para investigar o respectivo papel do micróbio intestinal do mosquito, incluindo dissecação de mosquito midgut, cultivo de bactérias intestinais cultivable, tratamento antibiótico e reintrodução das bactérias de interesse.
Para o tratamento com antibióticos bem-sucedido, os seguintes detalhes devem se...

Os mosquitos são considerados os vetores mais importantes das doenças patogênicas humanas, transmitindo mais de cem patógenos, incluindo o vírus Zika, o vírus da dengue e os parasitas do Plasmodium 1. Quando os mosquitos fazem uma refeição sanguínea para adquirir nutrientes para oviposição, eles podem acidentalmente ingerir patógenos de um hospedeiro infectado através do trato digestivo2. É importante ressaltar que o mosquito midgut, que desempenha um papel fundamental tanto na digestão da refeição sanguínea quanto na entrada do patógeno, abriga um microbioma altamente dinâmico3.
Vários estudos caracterizaram microbiota de mosquitos criados em laboratório e coletados em campo usando um método dependente da cultura ou um ensaio de sequenciamento de bactérias4,,5,,6. Espécies como Pantoea, Serratia, Klebsiella, Elizabethkingiae Enterococcus são comumente isoladas de mosquitos em diversos estudos5,,7,,8,9. Curiosamente, a microbiota intestinal do mosquito flutua dinamicamente tanto na diversidade comunitária quanto na quantidade de espécies de bactérias, afetadas pelo estágio de desenvolvimento, espécies, origem geográfica e comportamento alimentar4. Estudos mostram que a alimentação sanguínea aumenta drasticamente a carga bacteriana total com rápida expansão de espécies de Enterobacteriaceae e redução da diversidade global10,11. Além disso, a microbiota intestinal do mosquito do estágio larval é geralmente erradicada quando o inseto sofre metamorfose durante a pupação e a eclosão; assim, os mosquitos adultos recém-emergidos precisam repovoar sua microbiota4.
Microbiota intestinal modula a fisiologia de insetos em vários aspectos, incluindo absorção de nutrientes, imunidade, desenvolvimento, reprodução e competência vetorial12. As larvas de mosquitos axenic não se desenvolvem além da primeira instar enquanto uma bactéria de suprimento oral resgata o desenvolvimento, indicando que o micróbio intestinal do mosquito é essencial para o desenvolvimento larval13,14. Além disso, o esgotamento das bactérias intestinais retarda a digestão da farinha de sangue e a absorção de nutrientes, afeta a maturação do oócito e diminui a oviposição15. Além disso, mosquitos com microflora intestinal provocam maiores respostas imunes em comparação com mosquitos tratados com antibióticos, com expressão de peptídeo antimicrobiano constantemente elevada contra outros patógenos para infectar16. Antibióticos são geralmente administrados oralmente para remover bactérias intestinais pan nesses estudos, e então experimentos são realizados para comparar a diferença entre mosquitos machados e mosquitos com micróbios commensais. No entanto, o mosquito midgut abriga uma comunidade diversificada de micróbios, e cada espécie de bactéria poderia exercer um efeito distinto em relação à fisiologia hospedeira.
Microbiota de mosquitos regula a competência vetorial com efeitos divergentes. Colonização por Proteus isolada de mosquitos derivados de campo de áreas endêmicas da dengue confere expressão de peptídeo antimicrobiano regulamentada e resistência contra a infecção pelo vírus da dengue16. O fungo entomopatômico Beauveria bassiana ativa a via imunológica Toll e JAK-STAT contra a infecção por arboviroses17. Em contrapartida, o fungo Talaromyces isolado do Aedes aegypti midgut facilita a infecção pelo vírus da dengue através da modulação da atividade de trippsina intestinal18. Além disso, Serratia marcescens promove a transmissão de arboviroses através de uma proteína secreta chamada SmEnhancin, que digere a camada de mucina no epitélio intestinal dos mosquitos19.,
Este procedimento fornece um método sistemático e intuitivo para dissecção do mosquito midgut, isolamento de colônias de bactérias cultivavel, identificação das espécies de bactérias e reintrodução via alimentação oral. Fornece resultados representativos de alimentação sanguínea com uma bactéria commensal, Chryseobacterium meningosepticum,no desenvolvimento do ovário do mosquito e oviposição.

<table><tbody><tr><td>Adenosina 5&prime;-trifosfato disódico sal hidrato Sigma</td><td></td><td>A2383</td><td>Adenosina 5&prime;-trifosfato sal dissódico hidrato tem sido usado para preparar soluções padrão de adenosina trifosfato (ATP)</td></tr><tr><td>Aedes aegypti</td><td></td><td></td><td>Mosquitos fêmeas</td></tr><tr><td>Tubo anticoagulante</td><td>BD Vacutainer</td><td>363095</td><td>Coletar sangue fresco</td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga</td><td>Sangon Biotech</td><td>F601620-0010</td><td>1,5 ml, Natural, Graduado, Bolas de</td></tr><tr><td>algodão</td><td></td><td></td><td></td></tr> estéreis <tr><td>Pilão descartável para moagem de tecidos</td><td>Sangon Biotech</td><td>F619072-0001</td><td>70 mm de comprimento, cônico, azul, estéril</td></tr><tr><td>Dor absoluta de etanol</td><td>Dilua</td><td></td><td>para 75% de etanol</td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>RWD</td><td>F11029</td><td>Dissecção</td></tr><tr><td>Hemotek Membrane Feeding Sistema</td><td>Hemotek</td><td></td><td>Componentes do sistema de alimentação, incluindo&nbsp; Controlador de temperatura Hemotek, conjunto de alimentador-carcaça, alimentador de metal montado.</td></tr><tr><td>Incubadora agitador</td><td></td><td>ZQZY-78AN</td><td></td></tr><tr><td>Inoculation Loops</td><td>Sangon Biotech</td><td>F619312-0001</td><td>10 &mu; l, Ágar</td></tr><tr><td>LB Amarelo em Pó</td><td>Sangon Biotech</td><td>A507003</td><td>Triptona 10,0 g, Extrato de Levedura 5,0 g, NaCl 10,0 g, Ágar 15,0 g.</td></tr><tr><td>LB Caldo em Pó</td><td>Sangon Biotech</td><td>A507002</td><td>Triptona 10,0 g, Extrato de Levedura 5,0 g, NaCl 10,0 g.</td></tr><tr><td>Microscópio</td><td>Zeiss</td><td>Stemi508</td><td></td></tr><tr><td>Copo</td><td></td><td></td> de papel <td>Lugar mosquito</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Sangon Biotech</td><td>F104002</td><td>4 inx 125 pés</td></tr><tr><td>Placa de Petri</td><td>Sangon Biotech</td><td>F611203</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina G sal de procaína hidrato</td><td>Sangon Biotech</td><td>A606248</td><td>Pó branco. Solúvel em água, solúvel em metanol, ligeiramente solúvel em água, etanol</td></tr><tr><td>Pipetador Channal Único</td><td>Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de estreptomicina</td><td>Sangon Biotech</td><td>A610494</td> O <td>sulfato de estreptomicina é um antibiótico de glucosamina que interfere na síntese de proteínas procarióticas.</td></tr><tr><td>Sacarose</td><td>Sangon Biotech</td><td>A502792</td><td>Solúvel em água, etanol e metanol, ligeiramente solúvel em glicerol e piridina.</td></tr><tr><td>Kit de DNA de Bactérias TIANamp</td><td>TIANGEN</td><td>DP302</td><td>Extrato de DNA&nbsp;</td></tr>Misturador de vórtice <tr>branco <td></td><td></td><td></td>de <td>rede de tecido-mosquito utilitário</td></tr><tr><td></td><td>Scintic Industries</td><td>S1-0246</td><td></td></tr><tr><td>Tubo EP de 1,5 ml</td><td>Sangon Biotech</td><td>F600620</td><td></td></tr><tr><td>10X PBS buffer</td><td>Sangon Biotech</td><td>E607016</td><td>Este produto é uma solução 10X. Por favor, dilua-o 10 vezes antes de usar. O valor do pH é 7,4.</td></tr></tbody></table>

um ensaio de alimentação oral bacteriana com mosquitos tratados com antibióticos

A Bacterial Oral Feeding Assay with Antibiotic-Treated Mosquitoes

O mosquito midgut abriga um microbioma altamente dinâmico que afeta o metabolismo hospedeiro, reprodução, aptidão e competência vetorial. Estudos têm sido realizados para investigar o efeito de micróbios intestinais como um todo; no entanto, diferentes micróbios poderiam exercer efeitos distintos em relação ao hospedeiro. Este artigo fornece a metodologia para estudar o efeito de cada micróbio intestinal específico do mosquito e o mecanismo potencial.
Este protocolo contém duas partes. A primeira parte introduz como dissecar o mosquito midgut, isolar colônias de bactérias cultivaveles e identificar espécies de bactérias. A segunda parte fornece o procedimento para gerar mosquitos tratados com antibióticos e reintroduzir uma espécie específica de bactérias.

Os midguts de mosquitos tratados com antibióticos e sem antibióticos foram retirados para extração de DNA, e qPCR foi realizado com primers bacterianos universais. A Figura 1 mostra a expressão de rRNA bacteriana 16S no grupo controle e grupo de tratamento de antibióticos. Os resultados mostram que cerca de 98% das bactérias intestinais foram removidas, e a esterilização intestinal de penicilina e estreptomicina foi bem sucedida.
Com os métodos descritos, as cepas de bactérias...

Este artigo apresenta um protocolo para investigar o efeito de bactérias intestinais individuais do mosquito, incluindo isolamento e identificação de micróbios cultivados de mosquitos midgut, esgotamento de antibióticos de bactérias intestinais de mosquitos e reintroduzir uma espécie específica de bactérias.

Um ensaio de alimentação oral bacteriana com mosquitos tratados com antibióticos

The mosquito midgut harbors a highly dynamic microbiome that affects the host metabolism, reproduction, fitness, and vector competence. Studies have been ...

Mosquito midgut abriga uma comunidade complexa de micróbios que afetam o metabolismo hospedeiro, reprodução, aptidão e competência veterinária. Com cada micróbio intestinal é um efeito diferente. Este vídeo introduz o procedimento para estudar o respectivo papel de cada cepa de bactérias ou fisiologia hospedeira.Para adquirir uma cultura de colônias bacterianas intestinais, disseque o mosquito midgut sob condição estéril. Aterrar o meio-boca dissecado, serotologinado, e espalhe sobre a placa de ágar. Escolha colônias únicas da placa, e identifique as espécies de bactérias através de sua sequência genética de 16 SRNA.Alimente os mosquitos com COD Emboss contendo antibióticos por três dias consecutivos para remover microbiota intestinal. A eficácia do tratamento com antibióticos pode ser confirmada dissecando o midgut do mosquito asséptico para ensaio da unidade de formação de colônias antes dos extremistas subsequentes. Em seguida, reintroduzir espécies de bactérias específicas que anteriormente se isolaram do intestino do mosquito através do ensaio de alimentação oral.O efeito das bactérias na fisiologia hospedeira poderia ser avaliado comparando os mosquitos não tratados, mosquito

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Fonte: Liu, X., et al. Um ensaio de alimentação oral bacteriana com mosquitos tratados com antibióticos. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra a dissecação do intestino médio do mosquito para isolar bactérias intestinais. O intestino médio é extraído do trato digestivo, homogeneizado para liberar as bactérias e colocado em ágar nutritivo para cultivar colônias bacterianas.

Isolamento de Bactérias do Intestino Médio do Mosquito

Fonte: Liu, X., et al. Um ensaio de alimentação oral bacteriana com mosquitos tratados com antibióticos. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra a diminuição da microbiota intestinal nativa em mosquitos usando uma solução contendo sacarose com antibiótico. Isso é seguido por uma recolonização controlada com uma suspensão bacteriana administrada por meio de um sistema de alimentação por membrana para estabelecer uma população bacteriana definida no intestino do mosquito.

Estabelecimento de uma População Bacteriana Intestinal Definida em Mosquitos Adultos

Este vídeo demonstra um ensaio de alimentação sanguínea para avaliar a mortalidade e a fecundidade de compostos de teste com novos modos de ação em mosquitos fêmeas. Essa técnica ajuda na triagem de novas classes de inseticidas para matar a população resistente de mosquitos e controlar a propagação de doenças.

Ensaio de alimentação de mosquitos: um método para avaliar os efeitos dos compostos de teste na mortalidade e fecundidade de mosquitos fêmeas adultas

Devido às semelhanças marcantes do ciclo de vida e biologia de parasitas da malária de roedores para parasitas da malária humana, modelos de malária de roedores tornaram-se indispensáveis para a pesquisa da malária. Neste documento, padronizamos algumas das técnicas mais importantes utilizadas na análise fenotípica de espécies selvagens e transgênicas de malária por roedores.

Análise fenotípica de roedores malária parasita assexuada e estágios do sangue sexual e estágios do mosquito

Os protocolos são descritos para avaliar a toxicidade de produtos químicos para mosquitos imaturos e adultos para o desenvolvimento como novas classes de larvicidas, adulticides e Endectocidas. Os protocolos permitem o elevado-throughput teste de químicas múltiplas na dose de ponto único e posterior avaliação através do ensaio de resposta de dose para determinar a toxicidade em contato ou ingestão.

Protocolos para testar a toxicidade de romance químicas inseticidas para mosquitos

Controlo eficaz de transmissão do vírus a cargo de mosquito, o conhecimento do potencial vetor de respectivos mosquitos é de particular interesse. Descrevemos a salivação forçada como um método para analisar a competência vetorial do Aedes albopictus e três táxons de Culex diferentes para a transmissão de vírus Zika.

Forçado a salivação como um método para analisar a competência vetorial de mosquitos

Um protocolo é apresentado para a formulação de uma dieta artificial sem sangue para alimentar mosquitos Anopheles em cativeiro. Esta dieta tem um desempenho semelhante ao sangue vertebrado e desencadeia oogênese e maturação de ovos e produz descendência adulta viável.

Uma dieta sem sangue para mosquitos de anophelina traseira

O objetivo deste protocolo é entregar refeições de sangue derivadas de animais e artificiais aos mosquitos Aedes aegypti através de um alimentador de membrana artificial e quantificar precisamente o volume de refeições ingeridas.

Alimentação e quantificação de sangue derivados de animais e refeições artificiais em mosquitos Aedes aegypti

A administração oral do dsRNA produzido por bactérias, um método de entrega para interferência de RNA (RNAi) que é rotineiramente utilizado em caenorhabditis elegans, foi aplicada com sucesso aqui em mosquitos adultos. Nosso método permite estudos robustos de genética reversa e estudos de vetores de bloqueio de transmissão sem o uso de injeção.

Administração eficaz de interferência oral de RNA (RNAi) para mosquitos anofeeles gâmbias adultos

O ensaio padrão de alimentação de membrana (SMFA) é considerado como o padrão-ouro para a avaliação e identificação de potenciais compostos antimaláricos. Este sistema de alimentação artificial é usado para infectar mosquitos para avaliar ainda mais os efeitos desses compostos na intensidade e prevalência do parasita Plasmodium falciparum .

Ensaio padrão de alimentação de membrana para a detecção de infecção por plasmodium falciparum em Vetores de Mosquito Anopheles

Essa metodologia, que incluiu alimentação por via oral e infecção por injeção intratorácica, foi capaz de avaliar efetivamente a influência das barreiras do intestino médio e/ou glândulas salivares na infecção por arbovírus.

Infecção viral experimental em mosquitos adultos por alimentação oral e microinjeção

Aprenda a dissecar o intestino médio de mosquitos e isolar bactérias cultiváveis para estudar o papel de cada cepa na fisiologia do hospedeiro. Este método auxilia pesquisadores em ecologia microbiana e controle de vetores.

Um ensaio de alimentação oral bacteriana com mosquitos tratados com antibióticos

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