Name: Plasmodium falciparum Cultura gametocito e infecção por mosquitos através da alimentação artificial (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-07-03T15:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Aprenda a cultivar gametócitos de Plasmodium falciparum e infectar mosquitos usando alimentação artificial por membrana. Este protocolo valida métodos para estudar biologia da transmissão da malária e bloqueio de transmissão.

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Os autores agradecem à Bloomberg Philanthropies pelo apoio financeiro ao Johns Hopkins Malaria Research Institute (JHMRI). Este trabalho não teria sido possível sem a expertise fornecida pelas instalações do núcleo de insetos e parasitologia da JHMRI.

<ol><li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((World+Malaria+Report%5BTitle%5D)+AND+%22World+Health+Organization%22%5BJournal%5D)">World Malaria Report.</a> World Health Organization. , (2018).</li>
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<li>Duffy, S., Loganathan, S., Holleran, J. P., Avery, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+production+of+Plasmodium+falciparum+gametocytes+for+malaria+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Large-scale production of Plasmodium falciparum gametocytes for malaria drug discovery.</a> Nature Protocols. 11 (5), 976-992 (2016).</li>
<li>Delves, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Routine+in+vitro+culture+of+P.+Falciparum+gametocytes+to+evaluate+novel+transmission-blocking+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Routine in vitro culture of P. Falciparum gametocytes to evaluate novel transmission-blocking interventions.</a> Nature Protocols. 11 (9), 1668-1680 (2016).</li>
<li>Habtewold, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streamlined+SMFA+and+mosquito+dark-feeding+regime+significantly+improve+malaria+transmission-blocking+assay+robustness+and+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Malaria+Journal%22%5BJournal%5D)">Streamlined SMFA and mosquito dark-feeding regime significantly improve malaria transmission-blocking assay robustness and sensitivity.</a> Malaria Journal. 18 (1), 24(2019).</li>
<li>Demanga, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+sexual+stage+malaria+gametocytes+in+a+Wave+Bioreactor%5BTitle%5D)+AND+%22Parasites+and+Vectors%22%5BJournal%5D)">The development of sexual stage malaria gametocytes in a Wave Bioreactor.</a> Parasites and Vectors. 10 (1), 216(2017).</li>
<li>Brockelman, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditions+favoring+gametocytogenesis+in+the+continuous+culture+of+Plasmodium+falciparum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Eukaryotic+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Conditions favoring gametocytogenesis in the continuous culture of Plasmodium falciparum.</a> Journal of Eukaryotic Microbiology. 29, 454-458 (1982).</li>
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<li>Essuman, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+gametocyte+biomarker+for+superior+molecular+detection+of+the+plasmodium+falciparum+infectious+reservoirs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">A novel gametocyte biomarker for superior molecular detection of the plasmodium falciparum infectious reservoirs.</a> Journal of Infectious Diseases. 216 (10), 1264-1272 (2017).</li>
<li>Simões, M. L., Mlambo, G., Tripathi, A., Dong, Y., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+regulation+of+plasmodium+is+anopheles+species+specific+and+infection+intensity+dependent%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Immune regulation of plasmodium is anopheles species specific and infection intensity dependent.</a> mBio. 8 (5), 01631(2017).</li>
<li>Oakley, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+analysis+based+detection+of+Plasmodium+falciparum+development+in+Anopheles+stephensi+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Transcriptome analysis based detection of Plasmodium falciparum development in Anopheles stephensi mosquitoes.</a> Scientific Reports. 8, 11568(2018).</li>
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<li>Tao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex-partitioning+of+the+Plasmodium+falciparum+stage+V+gametocyte+proteome+provides+insight+into+falciparum-specific+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Sex-partitioning of the Plasmodium falciparum stage V gametocyte proteome provides insight into falciparum-specific cell biology.</a> Molecular and Cellular Proteomics. 13 (10), 2705-2724 (2014).</li>
<li>Grabias, B., Zheng, H., Mlambo, G., Tripathi, A. K., Kumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sensitive+enhanced+chemiluminescent-ELISA+for+the+detection+of+Plasmodium+falciparum+circumsporozoite+antigen+in+midguts+of+Anopheles+stephensi+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiological+Methods%22%5BJournal%5D)">A sensitive enhanced chemiluminescent-ELISA for the detection of Plasmodium falciparum circumsporozoite antigen in midguts of Anopheles stephensi mosquitoes.</a> Journal of Microbiological Methods. 108, 19-24 (2015).</li>
<li>Ferrer, P., Vega-Rodriguez, J., Tripathi, A. K., Jacobs-Lorena, M., Sullivan, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimalarial+iron+chelator+FBS0701+blocks+transmission+by+Plasmodium+falciparum+gametocyte+activation+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Antimalarial iron chelator FBS0701 blocks transmission by Plasmodium falciparum gametocyte activation inhibition.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (3), 1418-1426 (2015).</li>
<li>Sanders, N. G., Sullivan, D. J., Mlambo, G., Dimopoulos, G., Tripathi, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gametocytocidal+screen+identifies+novel+chemical+classes+with+Plasmodium+falciparum+transmission+blocking+activity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Gametocytocidal screen identifies novel chemical classes with Plasmodium falciparum transmission blocking activity.</a> PLoS One. 9 (8), 105817(2014).</li>
<li>Lindner, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomics+and+proteomics+reveal+two+waves+of+translational+repression+during+the+maturation+of+malaria+parasite+sporozoites%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Transcriptomics and proteomics reveal two waves of translational repression during the maturation of malaria parasite sporozoites.</a> Nature Communications. 10, 4964(2019).</li>
<li>McLean, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+Transmission-Competent+Human+Malaria+Parasites+with+Chromosomally-Integrated+Fluorescent+Reporters%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Generation of Transmission-Competent Human Malaria Parasites with Chromosomally-Integrated Fluorescent Reporters.</a> Scientific Reports. 9, 13131(2019).</li>
<li>Espinosa, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteolytic+Cleavage+of+the+Plasmodium+falciparum+Circumsporozoite+Protein+Is+a+Target+of+Protective+Antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Proteolytic Cleavage of the Plasmodium falciparum Circumsporozoite Protein Is a Target of Protective Antibodies.</a> Journal of Infectious Diseases. 212 (7), 1111-1119 (2015).</li>
<li>Swearingen, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interrogating+the+Plasmodium+Sporozoite+Surface%3A+Identification+of+Surface-Exposed+Proteins+and+Demonstration+of+Glycosylation+on+CSP+and+TRAP+by+Mass+Spectrometry-Based+Proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Interrogating the Plasmodium Sporozoite Surface: Identification of Surface-Exposed Proteins and Demonstration of Glycosylation on CSP and TRAP by Mass Spectrometry-Based Proteomics.</a> PLoS Pathogens. 12 (4), 1005606(2016).</li>
<li>Ifediba, T., Vanderberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+in+vitro+maturation+of+Plasmodium+falciparum+gametocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Complete in vitro maturation of Plasmodium falciparum gametocytes.</a> Nature. 294 (5839), 364-366 (1981).</li>
<li>Miura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inter-laboratory+comparison+of+standard+membrane-feeding+assays+for+evaluation+of+malaria+transmission-blocking+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Malaria+Journal%22%5BJournal%5D)">An inter-laboratory comparison of standard membrane-feeding assays for evaluation of malaria transmission-blocking vaccines.</a> Malaria Journal. 15, 463(2016).</li>
<li>Miura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Qualification+of+Standard+Membrane-Feeding+Assay+with+Plasmodium+falciparum+Malaria+and+Potential+Improvements+for+Future+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Qualification of Standard Membrane-Feeding Assay with Plasmodium falciparum Malaria and Potential Improvements for Future Assays.</a> PLoS One. 8 (3), 57909(2013).</li>
</ol>

Os Autores não têm nada a revelar.

Os métodos aqui descritos têm sido utilizados com sucesso no Johns Hopkins Malaria Research Institute por mais de 10 anos15,16,17,18,19,20,21,22. Os gametócitos produzidos usando este protocolo têm sido usados para ensaios gametocitopecidas de alto rendimen...

A malária é causada por parasitas de Plasmodium e é transmitida aos seus hospedeiros vertebrados através de picadas infecciosas de mosquitos Anopheles fêmeas. De acordo com o relatório da Organização Mundial da Saúde (OMS) de 2019, foram estimadas 405 mil mortes, de um total de 228 milhões de casos de malária1. A maioria dos óbitos relacionados à malária estava concentrada na região africana, especialmente entre crianças menores de cinco anos de idade. Embora a taxa global de incidência de malária tenha diminuído globalmente a partir de 2010, nos últimos anos o declínio aumentou e estratégias adicionais de controle são urgentemente necessárias para eliminar a doença.
Os estágios sanguíneos assexuados cíclicos de parasitas da malária causam patogênese da doença e um pequeno subconjunto destes diferenciam-se em gametocitos femininos e masculinos. Os gametocitos plasmodium falciparum são únicos na natureza, pois levam de 7 a 10 dias para se desenvolverem através de cinco estágios morfologicamente distintos. Gametócitos imaturos da fase I a IV são sequestrados em parenchyma de medula óssea e permanecem em grande parte ausentes da circulação periférica2,3,4,5. Os eritrócitos infectados com gametócitos maduros do estágio V são liberados na corrente sanguínea e circulam livremente para serem tomados por mosquitos. Uma vez dentro do mosquito midgut, os gametócitos são ativados, através de uma mudança de temperatura e exposição ao ambiente midgut, transformam-se em gametas femininos e masculinos e iniciam o desenvolvimento dos estágios do mosquito, que culmina com os estágios infecciosos dos esporozoitas nas glândulas salivares do mosquito6,7.
Desde que Trager e Jenson8 descreveram um método padronizado para cultivar P. falciparum,os estudos sobre os estágios sanguíneos assexuados têm avançado muito. No entanto, a falta de um sistema de cultura confiável para estágios sexuais tem dificultado o estudo de gametocitos de P. falciparum, biologia de transmissão e estágios de mosquitos. Nos últimos anos, foram publicados diversos métodos que têm auxiliado laboratórios no estabelecimento de culturas gametócitos9,10,11,12. Este manuscrito descreve um protocolo padronizado e confiável para cultivar gametocitos P. falciparum que podem representar um recurso valioso para a comunidade de pesquisa da malária. Este método permite a produção robusta de gametocitos maduros e infecciosos que, juntamente com um protocolo padronizado de alimentação de mosquitos, resulta em infectividade de mosquitos altamente confiável. Esses métodos foram estabelecidos para manter o fornecimento ininterrupto de gametócitos e parasitas em estágio de mosquitos. Neste manuscrito, descrevemos um protocolo de cultura gametocito completo(Figura 1),preparação de alimentadores de membrana de vidro e infecção de mosquitos utilizando esses alimentadores de membrana(Figura 2),dissecção de midgut(Figura 3) e glândula salivar de mosquitos(Figura 4), e quantificação de infecção em mosquito após dissecação de glândulas médias e salivares.

<table><tbody><tr>Solução <td></td><td></td><td></td><td>de açúcar a 10%</td></tr><tr><td>pipeta sorológica</td><td>Falcon</td><td>357551</td><td></td></tr><tr><td>tubo cônico de 15 ml</td><td>Falcon</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>pipeta sorológica de 1ml</td><td>Falcon</td><td>357521</td><td></td></tr><tr><td>pipeta sorológica de 25 ml</td><td>Falcon</td><td>357535</td><td></td></tr><tr><td>37&deg; C Incubadora</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>tubo cônico de 50 ml</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>pipeta sorológica de 5 ml</td><td>Falcon</td><td>357543 placas de</td><td></td></tr><tr><td>cultura de tecidos de 6 poços</td><td>Falcon</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>70% Etanol</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>9" pipeta de vidro</td><td>Fisherbrand</td><td>13-678-6B</td><td></td></tr><tr><td>Anopheles Mosquitoes</td><td>JHMRI, núcleo de insetário</td><td>Usamos contador</td> de células A. stephensi ou A. gambiae (keele) Pinça de ponta fina de banho-maria circulante Fisherbrand 12-000-122 Geimsa mancha Sigma GS1L Dessecador de vidro Alimentador de membrana de vidro <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Lâminas</td><td>de vidro CG183570</td><td></td>Chemglass Life Sciences</tr><tr><td></td><td>Fisherbrand</td><td>12-552-3</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Sigma</td><td>H6648</td><td></td></tr><tr><td>Sangue Humano O+</td><td>JHU</td><td></td><td>Lave as hemácias três vezes com RPMI e leve à geladeira a 50% de hematócrito</td></tr><tr><td>Soro Humano O+</td>Banco <td></td> de <td>sangue interestadual</td><td>Junte pelo menos 6 unidades de soro de diferentes doadores e congele alíquotas a -20& graus; C.</td></tr><tr><td>Hipoxantina</td><td>Sigma</td><td>H9337</td><td>Faça estoque de 500x em 1M NaOH</td></tr><tr><td>Mercurochrome</td><td>Sigma</td><td>M7011</td><td>Prepare solução de estoque a 1% em PBS que pode ser diluída a 0,1% quando necessário</td></tr><tr><td>Micro Microscópio de Pipeta</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Olympus</td><td></td><td>Qualquer microscópio com objetiva de 10x, 40x e 100x funcionará.</td></tr><tr><td>Copos de mosquito</td><td>Copos de Netuno</td><td></td><td></td></tr><tr><td>N-acetilglucosamina</td><td>Sigma</td><td>A3286</td><td>Opcional e necessário apenas quando gametócitos puros são necessários.</td></tr><tr><td>Rede</td><td></td><td></td><td>Certifique-se de que pode conter mosquitos e permitir a alimentação sanguínea</td></tr><tr><td>Placa de Petri Parafilm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Thermo Scientific</td><td>249964</td><td></td></tr><tr><td>Pontas</td><td></td><td></td><td></td>de pipeta</tr><tr><td>Pipetman</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plasmodium falciparum NF54</td><td>BEI Resources</td><td>MRA-1000</td><td>Congele um grande número de culturas de passagem precoce para garantir que você tenha um suprimento constante</td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Corning</td><td>CV-041-CV</td><td>A mídia contém glutamina e HEPES</td></tr><tr><td>Aquecedor de</td><td></td><td></td><td></td>lâminas</tr><tr><td>Bicarbonato de sódio</td><td>Sigma</td><td>S6297</td><td>Opcional para mídia, adicione apenas ao usar mistura de gás de malária durante a incubação da cultura</td></tr><tr><td>banho-maria</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ácido xanturênico</td><td>Sigma</td><td>D120804</td><td>para meios de flagelação</td></tr></tbody></table>

plasmodium falciparum cultura gametocito e infecção por mosquitos através da alimentação artificial

Plasmodium falciparum Gametocyte Culture and Mosquito Infection Through Artificial Membrane Feeding

A malária continua sendo um dos mais importantes problemas de saúde pública, causando morbidade e mortalidade significativas. A malária é uma doença transmitida por mosquitos transmitida através de uma picada infecciosa do mosquito Anopheles fêmea. O controle da malária eventualmente dependerá de uma infinidade de abordagens, o que inclui maneiras de bloquear a transmissão para, através e de mosquitos. Para estudar os estágios dos mosquitos dos parasitas da malária em laboratório, otimizamos um protocolo para cultivar gametocitos plasmodium falciparum altamente infecciosos, um estágio parasita necessário para a transmissão do hospedeiro humano para o mosquito vetor. P. falciparum gametocitos amadurecem através de cinco passos morfologicamente distintos, que leva aproximadamente 1-2 semanas. A cultura gametócica descrita neste protocolo é concluída em 15 dias e são infecciosas para mosquitos dos dias 15 a 18. Esses protocolos foram desenvolvidos para manter um ciclo contínuo de gametocitos competentes para infecção e para manter o fornecimento ininterrupto de estágios do mosquito do parasita. Aqui, descrevemos a metodologia da cultura gametocito e como infectar mosquitos com esses parasitas usando alimentadores de membrana de vidro.

Aqui apresentamos resultados de uma série de rações de membrana utilizando culturas de gametocitte P. falciparum NF54 geradas usando o protocolo acima (ver (Figura 5). A cultura gametocito foi iniciada com aproximadamente 0,5% de cultura assexuada de palco misto no dia 0, que cresceu para um pico de parasitamia de aproximadamente 15% no dia 4 e dia 5. Como mostrado na Figura 5A nesta alta parasitamia, os parasitas estão estressados e a cultura de estági...

Investigações detalhadas sobre os estágios dos mosquitos dos parasitas da malária são fundamentais para projetar estratégias eficazes de bloqueio de transmissão. Este protocolo demonstra como efetivamente cultivar gametocitos infecciosos e, em seguida, alimentar esses gametocitos para mosquitos para gerar estágios de mosquitos de P. falciparum.

Plasmodium falciparum Cultura gametocito e infecção por mosquitos através da alimentação artificial

Malaria remains one of the most important public health problems, causing significant morbidity and mortality. Malaria is a mosquito borne disease ...

Os gametócitos são responsáveis pela transmissão do parasita da malária. A geração de gametócitos infecciosos em laboratório é fundamental para estudar a biologia da transmissão nos estágios do mosquito e para gerar esporozoítos para resultados em estágios posteriores. Esses métodos são simples para qualquer laboratório adotar, e a demonstração visual ajudará no compartilhamento desses procedimentos com a comunidade mundial de malária.Demonstrando o procedimento comigo estarão meus colegas, Godfree Mlambo, nosso pesquisador associado sênior, e Sachie Kanatani, nosso pós-doutorado, ambos do Johns Hopkins Malaria Research Institute. Para configurar uma cultura de gametócitos, gire cinco mililitros de cultura alimentadora em uma centrífuga e ressuspenda o pellet em 30 mililitros de meio completo. Misture 1,2 mililitros de concentrado de glóbulos vermelhos com o conteúdo do tubo e adicione cinco mililitros da suspensão resultante a cada poço de uma placa de cultura de seis poços.Em seguida, coloque o prato em uma jarra de vela a 37 graus Celsius. Todos os dias, durante os próximos 15 a 18 dias, aspire cuidadosamente 70 a 80% do sobrenadante da cultura de cada poço e use uma pipeta soro

plasmodium-falciparum-gametocyte-culture-mosquito-infection-through

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Biology

Biologia

Uma vez que um gene é identificada como potencialmente refratário para o vírus da dengue, deve ser avaliado para o seu papel na prevenção de infecções virais dentro do mosquito. Este protocolo ilustra como a extensão das infecções por dengue de mosquitos podem ser ensaiadas. As técnicas para crescer o vírus em cultura, alimentando-se membrana de sangue os mosquitos humanos e assaying títulos viral no intestino médio do mosquito são demonstradas.

Protocolo para infecções por dengue em mosquitos (A. aegypti) e Determinação Fenótipo Infecção

Uma vez que um gene é identificada como potencialmente refratário para a malária, deve ser avaliado pelo seu papel na prevenção de infecções Plasmodium dentro do mosquito. Este protocolo ilustra como a extensão de infecções plasmodium de mosquitos podem ser ensaiadas. As técnicas de preparação da cultura gametócitos, membrana alimentarem de sangue humano os mosquitos, e assaying títulos viral no intestino médio do mosquito são demonstradas.

Protocolo para Infecções Plasmodium falciparum em mosquitos e Infecção Determinação Fenótipo

Este vídeo demonstra a geração de um modelo experimental de camundongo com malária cerebral. Esporozoítos isolados de mosquitos fêmeas infectados com Plasmodium berghei são injetados nas veias da cauda de um camundongo contido, levando à ruptura da barreira hematoencefálica e inflamação cerebral, causando malária cerebral. Este modelo de camundongo infectado oferece uma ferramenta valiosa para estudar a patologia microvascular in vivo associada à malária cerebral.

Geração de um modelo de camundongo de malária cerebral experimental usando esporozoítos derivados de mosquitos hospedeiros

Tuberculose e malária são duas das infecções mais prevalentes em seres humanos e as principais causas de morbidade e mortalidade em populações empobrecidas nos trópicos. Nós estabelecemos um sistema de modelo experimental para estudar resultado de malária tuberculose co-infecção em camundongos após o desafio com ambos os patógenos através de sua rota natural de infecção.

Um modelo experimental para estudar a Tuberculose-Malária Coinfection sobre Transmissão Natural de Mycobacterium tuberculosis E Plasmodium berghei</i

Descrevemos um modelo de camundongo de malária cerebral experimental e mostramos como a patologia inflamatória e microvascular pode ser rastreada in vivo usando ressonância magnética.

In Vivo Tracking of Edema Development and Microvascular Pathology em um Modelo de Malária Cerebral Experimental Usando Ressonância Magnética

Devido às semelhanças marcantes do ciclo de vida e biologia de parasitas da malária de roedores para parasitas da malária humana, modelos de malária de roedores tornaram-se indispensáveis para a pesquisa da malária. Neste documento, padronizamos algumas das técnicas mais importantes utilizadas na análise fenotípica de espécies selvagens e transgênicas de malária por roedores.

Análise fenotípica de roedores malária parasita assexuada e estágios do sangue sexual e estágios do mosquito

O ensaio padrão de alimentação de membrana (SMFA) é considerado como o padrão-ouro para a avaliação e identificação de potenciais compostos antimaláricos. Este sistema de alimentação artificial é usado para infectar mosquitos para avaliar ainda mais os efeitos desses compostos na intensidade e prevalência do parasita Plasmodium falciparum .

Ensaio padrão de alimentação de membrana para a detecção de infecção por plasmodium falciparum em Vetores de Mosquito Anopheles

Aqui descrevemos um novo método para ajudar a elucidar os mecanismos de imunidade celular ao Plasmodium durante a fase sanguínea da infecção. Este é um ensaio in vitro que mede a morte de hemácias infectadas por linfócitos citotóxicos.

In vitro Ensaio de Morte de Hemácias Infectadas por Plasmodium por Linfócitos Citotóxicos

A malária é transmitida através da inoculação do estágio de esporozoíto do Plasmodium por mosquitos infectados. O Plasmodium Transgênico nos permitiu compreender melhor a biologia da malária e contribuiu diretamente para os esforços de desenvolvimento de vacinas contra a malária. Aqui, descrevemos uma metodologia simplificada para gerar esporozoítos transgênicos de Plasmodium berghei .

Geração de Esporozoítos Geneticamente Modificados de Plasmodium berghei

A genética química envolve a substituição de um resíduo de gatekeeper por um aminoácido contendo uma cadeia lateral diferente no locus alvo. Aqui, geramos um parasita mutante contendo um alelo hipomórfico de cdpk1 e identificamos vias compensatórias adotadas pelo parasita no fundo mutante.

Compreendendo o desenvolvimento de vias compensatórias em um parasita mutante da malária que abriga alelo hipomórfico de quinases semelhantes a plantas

O desenvolvimento sexual do Plasmodium ocorre no intestino médio do mosquito. Direcionar os estágios sexuais do parasita é uma estratégia promissora para bloquear a transmissão. Desenvolvemos o Ookluc, um P. berghei transgênico que expressa nanoluciferase após a formação do zigoto, permitindo a triagem de alto rendimento de compostos bloqueadores de transmissão. Este artigo detalha os métodos de triagem usando o Ookluc.

Ookluc: Uma linha de Plasmodium berghei para identificar compostos bloqueadores de transmissão

Aprenda a cultivar gametócitos de Plasmodium falciparum e infectar mosquitos usando alimentação artificial por membrana. Este protocolo valida métodos para estudar biologia da transmissão da malária e bloqueio de transmissão.

Plasmodium falciparum Cultura gametocito e infecção por mosquitos através da alimentação artificial

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