Name: Monitoramento Simultâneo da Eletrofisiologia Wireless e Teste Comportamental de Memória como Ferramenta para Estudo da Neurogênese do Hipocampo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-08-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 25 s
Description: Aprenda a integrar EEG sem fio e rastreamento comportamental em tempo real para estudar neurogênese do hipocampo e processos de memória em modelos animais. Este protocolo oferece uma abordagem robusta para pesquisa em neurociência.

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Agradecemos ao Sr. Miguel Burgos e ao Sr. Gustavo Lago pela assistência técnica. Somos gratos à Stoelting Co., por cobrir os custos de produção de vídeo, à Jinga-hi, Inc., por fornecer assistência técnica, e à División de Investigación y Posgrado, da Universidad Iberoamericana Ciudad de México, por conceder fundos para este trabalho.

<ol><li>Hånell, A., Marklund, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structured+evaluation+of+rodent+behavioral+tests+used+in+drug+discovery+research%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Structured evaluation of rodent behavioral tests used in drug discovery research.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, 1-13 (2014).</li>
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<li>Shoji, H., Takao, K., Hattori, S., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contextual+and+cued+fear+conditioning+test+using+a+video+analyzing+system+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Contextual and cued fear conditioning test using a video analyzing system in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (85), e50871(2014).</li>
<li>Zheng, W., Ycu, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fully+automated+and+highly+versatile+system+for+testing+multi-cognitive+functions+and+recording+neuronal+activities+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A fully automated and highly versatile system for testing multi-cognitive functions and recording neuronal activities in rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (63), e3685(2012).</li>
<li>Melo-Thomas, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+wireless%2C+bidirectional+interface+for+in+Vivo+recording+and+stimulation+of+neural+activity+in+freely+behaving+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A wireless, bidirectional interface for in Vivo recording and stimulation of neural activity in freely behaving rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (129), e56299(2017).</li>
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<li>Datta, S. R., Anderson, D. J., Branson, K., Perona, P., Leifer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+Neuroethology%3A+A+Call+to+Action%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Computational Neuroethology: A Call to Action.</a> Neuron. 104 (1), 11-24 (2019).</li>
<li>Medlej, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+setup+for+wired+continuous+long-term+EEG+monitoring+in+juvenile+and+adult+rats%3A+application+for+epilepsy+and+other+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Enhanced setup for wired continuous long-term EEG monitoring in juvenile and adult rats: application for epilepsy and other disorders.</a> BMC Neuroscience. 20, 8(2019).</li>
<li>Weiergräber, M., Henry, M., Hescheler, J., Smyth, N., Schneider, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrocorticographic+and+deep+intracerebral+EEG+recording+in+mice+using+a+telemetry+system%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Protocols%22%5BJournal%5D)">Electrocorticographic and deep intracerebral EEG recording in mice using a telemetry system.</a> Brain Research Protocols. 14 (3), 154-164 (2005).</li>
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<li>Kempermann, G., Kuhn, H. G., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((More+hippocampal+neurons+in+adult+mice+living+in+an+enriched+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">More hippocampal neurons in adult mice living in an enriched environment.</a> Nature. 386 (6624), 493-495 (1997).</li>
<li>Bruel-Jungerman, E., Laroche, S., Rampon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+neurons+in+the+dentate+gyrus+are+involved+in+the+expression+of+enhanced+long-term+memory+following+environmental+enrichment%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">New neurons in the dentate gyrus are involved in the expression of enhanced long-term memory following environmental enrichment.</a> European Journal of Neuroscience. 21 (2), 513-521 (2005).</li>
<li>Leal-Galicia, P., Romo-Parra, H., Rodríguez-Serrano, L. M., Buenrostro-Jáuregui, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+adult+hippocampal+neurogenesis+exerted+by+sexual%2C+cognitive+and+physical+activity%3A+An+update%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Neuroanatomy%22%5BJournal%5D)">Regulation of adult hippocampal neurogenesis exerted by sexual, cognitive and physical activity: An update.</a> Journal of Chemical Neuroanatomy. 101, 101667(2019).</li>
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<li>Irvine, G. I., Logan, B., Ecket, M., Abraham, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enriched+environment+exposure+regulates+excitability%2C+synaptic+transmission%2C+and+LTP+in+the+dentate+gyrus+of+freely+moving+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Enriched environment exposure regulates excitability, synaptic transmission, and LTP in the dentate gyrus of freely moving rats.</a> Hippocampus. 16 (2), 149-160 (2006).</li>
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<li>Forwood, S. E., Winters, B. D., Bussey, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+lesions+that+abolish+spatial+maze+performance+spare+object+recognition+memory+at+delays+of+up+48+hours%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Hippocampal lesions that abolish spatial maze performance spare object recognition memory at delays of up 48 hours.</a> Hippocampus. 15 (3), 347-355 (2005).</li>
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</ol>

A Dra. Sylvia Ortega-Martinez trabalha como funcionária da Stoelting Co., uma empresa que forneceu e patrocinou a produção e o acesso aberto a este artigo.

A pesquisa comportamental e eletroencefalográfica é difícil e desafiadora por natureza. Portanto, a combinação das duas técnicas apresenta etapas críticas significativas. Assim, ambas as técnicas concomitantes são pouco utilizadas. Na prática real, todos os grupos ao redor do mundo realizam testes comportamentais com condições especiais, como animais, parâmetros analisados ou tratamentos. O exposto gera controvérsias significativas na área e a necessidade de desenvolvimento de procedimentos padronizados disponíveis para todos. Aqui, preparamos este procedimento detalhado com todas as etapas críticas e considerações metodológicas que não são usualmente descritas ou mencionadas na maioria dos artigos publicados. Estes são discutidos abaixo.
A produção dos materiais necessários é um passo fundamental para o sucesso dessa técnica. Nesse sentido, o eletrodo precisa ser construído do zero usando parafusos de aço inoxidável, cabos de cobre e soldador de prata. Estes materiais são difíceis de soldar permanentemente, de tal forma que a condutividade e a resistência de cada eletrodo devem ser verificadas antes do uso. É possível utilizar outro tipo de fio para a montagem do eletrodo; no entanto, o cobre é flexível o suficiente para manipular o eletrodo para inseri-lo no conector do amplificador. Nesse sentido, o uso de eletrodos comerciais é desejável, mas sua aquisição pode ser complicada e cara. A cirurgia é uma das etapas mais críticas desse protocolo. É altamente recomendado e até mesmo necessário ter um cirurgião experiente, particularmente para o implante de eletrodos. Como a cirurgia frequentemente requer o prolongamento do tempo de anestesia e, às vezes, uma aplicação de soldagem durante a cirurgia, cada laboratório deve realizar os testes necessários com a anestesia apropriada (diferentes coquetéis podem ser usados) para cada cepa de roedores, particularmente em condições de biotério, diferenças entre ninhadas e até mesmo diferenças individuais entre animais. Planejamento e consideração adequados poderiam evitar a perda de animais durante as cirurgias. A implantação dos eletrodos é outro passo crucial. Requer muito cuidado para evitar perfurar o crânio e danificar meninges ou tecido cerebral. Os parafusos devem ser colocados corretamente, ou seja, completamente fixados no crânio, caso contrário, ruídos e artefatos estarão presentes nos sinais, como aqueles relacionados a uma péssima colocação ou movimento que não utiliza o registro do EEG. O tratamento e as condições pré e pós-operatórias devem ser sempre realizados e observados para evitar o sofrimento do roedor. A lidocaína subcutânea pode ser usada na pele da cabeça antes de fazer a incisão com o bisturi. Uma gota de soro fisiológico nos olhos do animal ajudará a evitar o ressecamento. Além disso, uma solução salina deve ser administrada na boca e, após a cirurgia, 1 mL deve ser administrado por via subcutânea ou intraperitoneal para compensar o balanço hídrico do animal e evitar a desidratação. Imediatamente após a cirurgia, um medicamento anti-inflamatório (para reduzir a dor), bem como antibióticos via subcutâneo ou tópicos, devem ser administrados diretamente na periferia do couro cabeludo onde a tampa de cimento dental está localizada (para diminuir a probabilidade de infecção). Repita o procedimento acima 24 h após a cirurgia. O posicionamento do amplificador de EEG no dorso do animal é a principal dificuldade para o registro simultâneo. O design e a fabricação de um colete são especificamente baseados no tamanho dos animais. O colete deve permitir o movimento natural do roedor (ver Figura 5). Este último garantirá a principal vantagem da técnica, que é o registro dos movimentos livres. Como os animais não tentaram retirar o colete, o conector da cabeça ou os cabos após a cirurgia e nos dias subsequentes, presumiu-se que a instalação não gerou restrição de movimento significativa ou causou dor ou desconforto. Para uma correta segmentação do EEG em épocas com base em eventos marcados pela SBPT é obrigatório anotar um protocolo bem definido. As marcas temporárias podem ser mescladas por manipulação de séries temporais porque ambos os sistemas usam o mesmo relógio para configurar seus carimbos de data/hora. O exposto amplia as possibilidades de experimentação animal incorporando dados eletrofisiológicos para análise.
A técnica aqui apresentada pode ser utilizada em qualquer área de pesquisa em neurociência e com as espécies murinas mais comuns e até mesmo outras espécies. A versatilidade do Software de Rastreamento Comportamental é uma das vantagens mais significativas, uma vez que ele poderia ser usado em uma grande versatilidade de labirintos como labirinto aquático Morris, campo aberto, reconhecimento de novos objetos, preferência de lugar condicionado, placa de buraco, labirinto em cruz elevado, labirinto em Y, labirinto de braço radial, labirinto de Barnes, e outros. Pode ser usado até 16 câmeras simultaneamente. Além disso, centenas de medidas diferentes (para informações mais detalhadas ver manuais31,32) podem ser relatadas. Considere que este trabalho descreve a experimentação para registros de EEG, algumas outras técnicas como Potenciais de Campos Locais ou registro de unidade única são possíveis. No entanto, os usuários devem considerar que a configuração geral e várias etapas preparatórias precisam mudar para outros fins. Assim, quando essa técnica é utilizada em conjunto com o registro Wi-Fi do EEG, as possibilidades são ampliadas, pois agrega novas perspectivas a estudos em animais, como os realizados em seres humanos, para avaliar diversas características da integração e dinâmica do EEG, como conectividade, potência da banda do EEG ou respostas evocadas. Ao contrário dos seres humanos, a experimentação animal é possível para avaliar a administração de medicamentos, modificações gênicas ou expressão, entre muitos outros paradigmas experimentais. Para a análise do EEG, considere que alguns protocolos apresentam um número muito baixo de repetições dos comportamentos desejados, o que restringe a possibilidade de médias de respostas e obtenção de resultados confiáveis. Portanto, tenha o cuidado de elaborar os protocolos de gravação e análise que se considera realizar antes de iniciar o experimento. No entanto, deve-se considerar que trabalhar em experimentação animal não é possível impedir o movimento, aumentando a complexidade do protocolo experimental e considerações para análise de sinais e tarefas comportamentais. Atualmente, os equipamentos para sistemas completos de rastreamento e registros de EEG não são padronizados ou modulares, o que significa que sua montagem se destina a um único protocolo e adaptações para explorar outras tarefas comportamentais, implicando/sugerindo maiores custos para um grande número de laboratórios. Essa situação poderia ser resolvida seguindo as opções explicadas neste estudo. No entanto, várias melhorias puderam ser realizadas para experimentos mais confiáveis. O trabalho pode ser aprimorado em várias etapas, desde a fabricação dos eletrodos até o processamento comportamental e de sinais. No entanto, é demonstrado que o rastreamento de animais e a aquisição de EEG são possíveis usando uma configuração de alta tecnologia acessível, mas barata.
Em resumo, o presente trabalho é uma tentativa de ajudar os cientistas, particularmente no campo das neurociências, a serem capazes de usar essas duas técnicas que não são comumente usadas em combinação. A técnica de registro simultâneo de EEG e testes comportamentais usando o Software de Rastreamento Comportamental tem muitas vantagens, e pode ser particularmente útil em muitos campos da Neurociência, particularmente nas áreas de aprendizagem e memória. Considerando que este equipamento possui outras capacidades como um registro profundo de estruturas subcorticais como o hipocampo, mas como mencionado, várias etapas preparatórias irão mudar. O equipamento sem fio resolve quase todas as limitações de uma abordagem de fio convencional, como problemas de mobilidade dos animais de uma gaiola para outra, animais impedidos ou emaranhados com os cabos. Esta técnica de configuração é fácil de usar, como descrito acima, e um grupo quase não treinado ou não especializado de especialistas ou indivíduos pode usar este software. O preço do equipamento de EEG é mais baixo do que um amplificador de EEG normal. O Behavioral Tracking Software também é um dos softwares mais acessíveis para rastreamento de vídeo do mercado. Este software requer licenças anuais. O equipamento pode ser utilizado em mais de um arranjo experimental, diferentes animais e o tipo de versatilidade. Esperamos que este esforço ajude a comunidade científica e proporcione um fácil acesso ao estudo simultâneo do comportamento e da eletroencefalografia.

O teste comportamental é crucial na pesquisa em neurociência para uma grande quantidade de informação gerada em um contexto in vivo. Nesse sentido, pesquisadores têm utilizado amplamente diferentes testes comportamentais para analisar a função sensório-motora, as interações sociais, o comportamento ansioso e depressivo, a dependência de substâncias e as diversas formas de funções cognitivas1. O registro manual de testes comportamentais pode ser difícil, exaustivo e impreciso mesmo para a maioria dos observadores experientes. Embora alguns esforços tenham sido feitos para desenvolver softwares livres e de código aberto para registro de comportamento (por exemplo, aplicativo sexrat male2 para comportamento sexual), várias alternativas permitem o registro comportamental automático e em tempo real de diferentes espécies animais, desde peixes3 até roedores 4,5,6. O rastreamento de vídeo é um método valioso para a gravação rápida e precisa do comportamento usado em uma ampla variedade de aplicações7. Uma característica mais potencial na área de registro comportamental é explorar a atividade neural durante a manifestação comportamental. O registro simultâneo da atividade neuronal (de células isoladas para as principais áreas cerebrais) e tarefas comportamentais poderia nos mostrar como o cérebro gera padrões comportamentais específicos8. Comportamentos são uma sequência de componentes menores que podem revelar correlatos entre a atividade neural e movimentos ou ações. Se a atividade neuronal e os padrões comportamentais pudessem ser registrados simultaneamente por meio de várias escalas de tempo, eles poderiam explicar como cada estado cerebral se correlaciona com cada comportamento particular (para um exame mais aprofundado do registro comportamental, ver Datta et al., revisão8 de 2019). Portanto, o registro sincronizado da atividade comportamental e neuronal na escala desejada (de neurônios a grandes áreas do cérebro) é considerado uma ferramenta extremamente útil. Existem vários sistemas destinados a integrar registros comportamentais com outras medidas como a atividadeneural4,5.
Embora a eletroencefalografia seja considerada uma das técnicas mais utilizadas no campo da neurociência clínica e de pesquisa, a mobilidade relativamente alta, bem como o tamanho do aparelho de registro de EEG, torna essa técnica única e desafiadora para detecção em modelos invivo9. Algumas soluções para esse problema foram desenvolvidas, por exemplo, o uso de cabos e dispositivos giratórios que permitem que os animais se movam livremente na arena. No entanto, os sistemas baseados em cabos muitas vezes impõem problemas para a realização de estudos, por exemplo, durante a transferência de um animal de uma gaiola para outra, observa-se impedimento ou emaranhamento do animal com os cabos. Dispositivos telemétricos foram desenvolvidos para registros eletrofisiológicos sem fio para aumentar a flexibilidade da situação de registro10,11. No entanto, tais sistemas têm mostrado limitações consideráveis devido ao seu baixo número de canais de gravação e baixas taxas de amostragem11. Neste estudo, foi utilizado um sistema sem fio disponível comercialmente que envia sinais de EEG do animal através de uma conexão Wi-Fi com um sistema de roedores em movimento livre12. O aparelho pesa 6 gramas e suporta até 16 canais gravados a 1 kSps. Este sistema permite o registro de EEG ou spike no ambiente animal, com uma perturbação reduzida, servindo como uma solução econômica em comparação com os sistemas eletrofisiológicos tradicionais no mercado. Além disso, sincronizamos esses dados usando um software de rastreamento de vídeo para fornecer correlação entre EEG e padrões comportamentais. Essa sincronização é feita off-line por alinhamento e interpolação de dados e eventos com base em carimbos de data/hora gerados por ambos os sistemas e é processada no MATLAB.
A neurogênese do adulto é definida como a proliferação, sobrevivência e diferenciação em neurônios de células recém-geradas no giro denteado de animais13,14. Sabe-se que esse processo está associado à melhora da memória e do aprendizado, o que aumenta a neurogênese adulta em roedores por meio de condições de ambiente enriquecido (EE)15. A EE consiste em alojar roedores em pequenos grupos dentro de uma grande gaiola provida de brinquedos e tubos, onde os animais apresentam relevância biológica nova e complexa, mas sem relevância biológica15. Embora o EE estimule a neurogênese hipocampal, ele também varia em muitos fatores, como idade, tensão animal, condições específicas de estimulação ou procedimento de detecção da neurogênese. Em camundongos de meia-idade expostos ao alojamento de EE por sete dias, o nascimento de novas células granulares (GC) no giro denteado (GD) hipocampal foi relatado16. Estudos tentando ablar seletivamente a neurogênese adulta em ratos adultos têm sugerido que novas células granulares de cerca de 1 a 2 semanas de idade são necessárias na resposta aprendida17. Por volta de 2 ou 3 semanas após o nascimento do CG no adulto GD, várias características como espinhos dendríticos, essenciais para a transmissão sinápticaexcitatória18, começam a aparecer. realizaram uma análise quantitativa para mostrar que o pico de crescimento da coluna ocorre durante as primeiras 3 a 4 semanas19. Vários estudos eletrofisiológicos in vivo sugerem que apenas três semanas de condições de alojamento do EE produzem alterações na transmissão sináptica do GD e aumentam a excitabilidade celular20. Além disso, foi relatado que a exposição a um ambiente enriquecido em 1-4 semanas após injeções de BrdU aumentou significativamente a densidade de células BrdU/NeuN na camada granular de DG em camundongos21. Esses autores sugerem que existe um período crítico entre uma e três semanas após a exposição ao EE, uma vez que foi observado um aumento substancial no número de novos neurônios21. Estudos da neurogênese hipocampal adulta (NHA) em humanos têm sido controversos, uma vez que não há evidências diretas. No entanto, um relato recente descreveu os estágios de desenvolvimento da AHN no cérebro humano adulto, identificando milhares de neurônios imaturos no GD e, assim, demonstrando a importância da AHN durante o envelhecimento em humanos22. Com base nas evidências mencionadas anteriormente, o estudo do AHN em modelos animais é mais importante do que nunca (para um exame mais aprofundado do AHN, ver Leal-Galicia et al., revisão de 201915).
Como mencionado anteriormente, o hipocampo tem sido associado a uma função fundamental nas capacidades de aprendizagem e memória. A formação das memórias passa por três processos distintos: codificação (aquisição da memória), consolidação (armazenamento da memória) e recuperação (reconhecimento da memória)23. A memória de reconhecimento em humanos é testada por meio da tarefa de comparações pareadas visuais24. Os fundamentos dos modelos humanos e animais de memória e amnésia são os testes comportamentais que avaliam a capacidade de reconhecer um estímulo previamenteapresentado25,26, como a tarefa de comparações visuais pareadas em humanos. Portanto, um dos testes comportamentais mais utilizados para avaliar a habilidade de um roedor em reconhecer um estímulo previamente apresentado, ou seja, a capacidade de aprendizagem e memória é a tarefa de reconhecimento de objetos novos espontâneos (NORT)23,27. O protocolo NORT consiste em dois objetos novos idênticos em uma arena familiar por 10 min no ensaio de aquisição. Após um tempo específico entre 0,28 e 48 horas29 (tempo variável de acordo com cada protocolo), o animal é devolvido à mesma arena contendo um dos mesmos objetos familiares e um objeto novo. O animal explora espontaneamente o objeto novo se o objeto familiar foi memorizado26. A razão de preferência é comumente usada na avaliação do desempenho exploratório. É determinado dividindo o tempo total de exploração do objeto do tempo de exploração do objeto novo ou familiar. O NORT tem algumas vantagens sobre outros testes de memória de reconhecimento. Mais importante ainda, não requer motivação externa, recompensa ou punição. Não gera condições estressantes. Finalmente, nenhum treinamento é necessário para evocar o comportamento de explorar os objetos (para um exame mais aprofundado da NORT, ver ref.23).
Portanto, o registro simultâneo de múltiplas modalidades de dados e sua integração no estudo da aprendizagem e da memória, como efeito da neurogênese hipocampal do adulto, é altamente atraente e fornece uma solução atraente para os pesquisadores da área. O presente trabalho irá expor todos os processos envolvidos na avaliação simultânea de vídeo-rastreamento comportamental (nova tarefa de reconhecimento de objetos) e gravação eletroencefalográfica sem fio. Aqui revisamos o processo de fabricação de eletrodos, cirurgia de implante de eletrodos peridurais (parafuso craniano), protocolo de enriquecimento ambiental (para indução da neurogênese hipocampal), seguindo protocolo NORT, configuração BTS, acoplamento EEG – BTS para monitoramento simultâneo em tempo real, e EEG e análise de dados comportamentais executados em ambiente computacional MATLAB.

<table><tbody><tr><td>#2 Ponta de ferramenta rotativa de velocidade variável</td><td>Reordenar #310048, Comprimento 44.5mm</td><td>SS Branco</td><td>Para fazer os furos onde os parafusos serão inseridos</td></tr><tr><td>#4 Bisturi e lâmina</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 X 50 X 50 cm Campo Aberto Preto Mate Arena</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>8 pinos Receptáculo Habitação Fêmea</td><td>Amphenol FCI</td><td>10147606-00008LF</td><td></td></tr><tr><td>8 pinos Receptáculo Habitação Macho</td><td>Amphenol FCI</td><td>10147603-00008LF</td><td></td></tr><tr><td>Resina Acrílica</td><td>MDC Dental</td><td>NicTone</td><td>Para fixar os parafusos ao crânio</td></tr><tr><td>Software de rastreamento de vídeo ANY-maze</td><td>Stoelting, Co.</td><td>versão 6.1</td><td>http://www.anymaze.co.uk/)</td></tr>solução <tr><td>anti-séptica de cloreto de benzalcônio</td><td>Benzal</td><td>Benzal</td><td></td></tr><tr><td>Bulldog grampos</td><td>Cientifica VelaQuin</td><td></td><td>Para retrair a pele</td></tr><tr><td></td><td>Câmera Logitech</td><td>c920</td><td></td></tr><tr><td>Fio</td><td></td><td></td><td></td>de cobre</tr><tr><td>Contato de crimpagem</td><td>Amphenol FCI</td><td>10147604-01LF</td><td></td></tr><tr><td>DELL PC</td><td>DELL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eletrodo</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>JAGA16</td><td>Jinga-Hi, Inc.</td><td>JAGA16</td><td></td></tr><tr><td>Cetamina</td><td>PiSA Agropecuária</td><td>ANESKET</td><td>Para anestesia</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>R2020a</td><td>MathWorks</td><td>Script foi desenvolvido em colaboração com a Jinga-Hi, Inc.</td></tr><tr><td>Monômero</td><td>MDC Dental</td><td>NicTone</td><td>Para fixar os parafusos no crânio</td></tr><tr><td>Software Neurophys</td><td>Jinga-Hi, Inc./ Neurosys, LLC</td><td>Neurosys 3.0.0.7</td><td></td></tr><tr><td>Chave de fenda</td><td></td><td></td><td>Para inserir os parafusos no crânio</td></tr><tr><td>Parafusos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafusos equipados com eletrodo</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Instrumento</td> <td>estereotáxicoKOPF</td><td></td><td>Para a cirurgia</td></tr><tr><td>Ferramenta rotativa de velocidade variável</td><td>Dremel 3000</td><td>Dremel</td><td>Para fazer os furos onde os parafusos serão inseridos</td></tr><tr><td>Voltímetro</td><td>PROAM</td><td>MUL-040</td><td>Para confirmar que o eletrodo conduz eletricidade</td></tr><tr><td>Xilazine</td><td>PiSA Agropecuaria</td><td>PROCIN</td><td>Para anestesia</td></tr></tbody></table>

monitoramento simultâneo da eletrofisiologia wireless e teste comportamental de memória como ferramenta para estudo da neurogênese do hipocampo

Simultaneous Monitoring of Wireless Electrophysiology and Memory Behavioral Test as a Tool to Study Hippocampal Neurogenesis

A amplitude das ondas cerebrais obtidas a partir da eletroencefalografia (EEG) tem sido bem reconhecida como base para a capacidade cognitiva, memória e aprendizagem em animais e humanos. O mecanismo de neurogênese do adulto também está ligado à melhora da memória e da aprendizagem. Tradicionalmente, os pesquisadores costumavam avaliar parâmetros de aprendizagem e memória em modelos de roedores por meio de tarefas comportamentais. Portanto, o monitoramento simultâneo de mudanças comportamentais e EEG é particularmente interessante na correlação de dados entre atividade cerebral e comportamentos relacionados à tarefa. No entanto, a maioria dos equipamentos necessários para a realização de ambos os estudos ou são complexos, caros ou utilizam uma rede de instalação cabeada que dificulta o movimento natural dos animais. Neste estudo, o EEG foi registrado com um dispositivo de eletrofisiologia sem fio juntamente com a execução de uma nova tarefa de reconhecimento de objetos (NORT). O comportamento do animal foi monitorado simultaneamente por um sistema de rastreamento de vídeo. Ambos os registros foram analisados off-line por seus carimbos de data/hora que foram sincronizados para vincular os sinais de EEG com as ações do animal. Os indivíduos consistem em ratos Wistar adultos após tratamento de enriquecimento ambiental a médio prazo. Seis eletrodos de parafuso craniano foram fixados aos pares em ambos os hemisférios nas regiões frontal, central e parietal e referenciados a um eletrodo localizado posteriormente ao osso nasal. O protocolo NORT consiste em expor o animal a dois objetos idênticos por 10 min. Após 2 h e 24 h, um dos objetos foi substituído por um novo. O tempo de exploração de cada objeto foi monitorado por um software de rastreamento comportamental (BTS) e registro dos dados do EEG. A análise do EEG sincronizado com dados comportamentais consiste em estimativas de potência de banda relativa alfa e beta e comparações entre reconhecimento de objetos novos versus exploração de objetos familiares, entre três etapas experimentais. Neste manuscrito, discutimos o processo de fabricação dos eletrodos, a cirurgia de implante de eletrodos peridurais, o protocolo de enriquecimento ambiental, o protocolo NORT, a configuração BTS, o acoplamento EEG-BTS para monitoramento simultâneo em tempo real e a análise de dados de EEG baseada na detecção automática de eventos.

Os métodos descritos acima foram aplicados para registrar EEG e atividade de ratos simultaneamente após o tratamento de enriquecimento ambiental. Ratos Wistar, machos com três meses de idade, foram submetidos a um protocolo de tratamento de enriquecimento ambiental de médio prazo por 20 dias e operados para fixação de seis eletrodos de parafuso craniano pareados nas regiões frontal, central e parietal referenciados a um sétimo eletrodo localizado na NZ. Os animais foram mantidos sob condições naturais de luz escura, com acesso ad libitum a ração e água. Este trabalho mostra a integração entre o sistema de EEG e o software de rastreamento comportamental para uma gravação simultânea ao vivo. Utilizamos apenas animais tratados sob protocolo de EE, pois não temos a pretensão de comparar a efetividade do tratamento, mas apenas exemplificar as vantagens do equipamento. Como evidência de que o protocolo de alojamento de enriquecimento ambiental de 20 dias utilizado estimula a neurogênese adulta, apresentamos dados de contagem de células BrdU positivos de animais sob EE e animais alojados em condições padrão a partir de dados não publicados de nosso laboratório. Foram utilizados ratos Wistar machos com três meses de idade. Eles foram injetados três vezes com BrdU com 12 h entre si. Os animais foram anestesiados (pentobarbital (50 mg/kg, i.p.) e eutanasiados por perfusão transcárdica (ver Figura 5). Para garantir que o colete acoplado ao aparelho de EEG não limitasse os movimentos dos animais, realizamos o teste de campo aberto (TFO) em dois grupos, um grupo foi submetido à cirurgia durante o uso do equipamento (colete e amplificador de EEG) e o outro grupo de animais permaneceu intacto sem usar o equipamento. Não foram encontradas diferenças significativas na distância percorrida pelos animais em 10 min de teste (ver Figura 5). O protocolo NORT típico consiste na apresentação de dois objetos e na substituição de um deles por um novo objeto. O software de rastreamento comportamental monitorou o tempo de exploração.
O Software de Rastreamento Comportamental registrou um grupo de animais para avaliar seus principais parâmetros de desempenho. Portanto, foram utilizados três parâmetros para avaliar o desempenho exploratório. A razão de preferência foi calculada usando o tempo de cabeça dos animais na zona do objeto, que relata o tempo total que a cabeça dos animais passou em cada objeto. Além disso, calculamos uma razão de preferência para o tempo gasto movendo-se em direção aos objetos, que mostra a quantidade total de tempo gasto em cada animal que estava se movendo em direção a cada zona do objeto. Além disso, foi calculado o tempo gasto por visita a cada objeto. A Figura 6 mostra os resultados dos três parâmetros mencionados acima. Na tentativa de aquisição, não houve distinção entre os objetos nos três parâmetros avaliados: tempo de cabeça na zona do objeto para as três tentativas, tempo de movimento em direção aos objetos para as três tentativas e tempo por visita em cada objeto. Não houve diferenças no estudo STM. Enquanto isso, no ensaio LTM, uma razão preferencial de exploração significativamente maior para o novo objeto foi observada. Além disso, no estudo LTM, também foi possível observar uma preferência pelo objeto novo no tempo gasto por visita (painel C). O Vídeo 1 mostra um exemplo representativo de um rato registrado no experimento, enquanto o Vídeo 2 mostra um exemplo representativo de EEG e registro comportamental simultâneos.
Foi possível combinar os eventos de tempo rastreados com o rastreamento comportamental e o registro do software EEG usando o relógio do computador. A Figura 7 e a Figura 8 mostram as mudanças na potência relativa do EEG sobre as bandas alfa e beta. Estes estão relacionados ao controle motor, concentração e memória, sugerindo que a exploração está apenas relacionada a essas funções. Os resultados do animal 3 mostram que a potência alfa tende a diminuir no STM em relação ao ACQ e LTM, sugerindo uma dessincronização relacionada à exploração ou recuperação da memória. O número de reconhecimento de objetos (épocas processadas) foi baixo. A essa altura, não é possível determinar se um teste estatístico validaria se tal diferença é real, ou se um artefato foi capaz de produzir tais condições experimentais. No entanto, a segmentação, rotulagem e análise de épocas tornaram-se possíveis por uma linha do tempo de eventos de marcação simultânea em animais e resultados de EEG produzidos para futuros projetos de pesquisa. A combinação desses sistemas evita a identificação errônea de eventos por um processo de marcação manual, o que se tornou um problema significativo para fins de experimentação animal. A combinação da SBT com a atividade eletrofisiológica (PE) pode ser associada com precisão ao comportamento animal; No entanto, as condições experimentais requerem o uso de técnicas avançadas de processamento de sinais para eliminar artefatos de movimento e fazer melhorias na configuração experimental de forma eficaz.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61494/61494fig01.jpg"> Figura 1: Exemplos de ambiente enriquecido (EE) condições gaiola. O alojamento foi fornecido com brinquedos e tubos, nos quais os animais encontram novos e complexos, mas sem relevância biológica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61494/61494fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61494/61494fig02.jpg"> Figura 2: Posição dos eletrodos peridurais no crânio de ratos. Os parafusos foram utilizados simultaneamente como âncora para o fone de ouvido e como eletrodos. F = frontal; C = frontoparietal; P = parietal; 3 = esquerda; 4 = direita; NZ = como referência de base. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61494/61494fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61494/61494fig03.jpg"> Figura 3: Imagens representativas de uma cirurgia de implante de eletrodos peridural (parafuso craniano). Imagem mostrando parafusos de eletrodos intracranianos implantados em ratos em diferentes fases da cirurgia. Certifique-se de que as técnicas assépticas sejam seguidas durante a realização deste procedimento. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61494/61494fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61494/61494fig04.jpg"> Figura 4: Imagens representativas de um rato juntamente com o arranjo experimental. O rato foi confeccionado para usar o colete acoplado ao aparelho de EEG com uma bateria embutida, dentro da arena utilizada para o protocolo NORT. A imagem mostra o fone de ouvido e o conector do cabo instalados no rato da cabeça. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61494/61494fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61494/61494fig05.jpg"> Figura 5: Evidência de capacidade de movimento e estimulação da neurogênese do adulto pelo protocolo de EE. (A) Imagens representativas da atividade animal por 10 min no Teste de Campo Aberto (TFO) e a distância média percorrida pelos animais que usaram o equipamento/cirurgia e animais sem o equipamento/sem cirurgia. (B-E) Seção DG representativa com células marcadas com BrdU (escuro intenso) para EE e grupos de alojamento padrão. Os painéis B e D mostram uma baixa ampliação do GD, e os painéis C e E mostram a área da caixa em maior ampliação. Os painéis B e C são tecidos do grupo de habitação EE, os painéis D e E são do grupo de habitação padrão. O inset ilustra o número médio de células marcadas em ambos os grupos. ML - camada molecular; GCL – camada de células granulares; SGZ – zona subgranular; setas - células BrdU+. Os gráficos mostram a média ± EPM. O teste T-student foi utilizado para comparar os grupos. * pág≤0,05. Não foram encontradas diferenças significativas entre os grupos no Teste de Campo Livre. Clique <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61494/61494fig05large.jpg" target="_blank">aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61494/61494fig06.jpg"> Figura 6: Desempenho exploratório na avaliação da NORT. (A) Tempo de cabeça na zona objeto para as três tentativas. (B) Tempo se movendo em direção aos objetos para as três tentativas. (C) Tempo por visita em cada objeto. Os gráficos mostram a média ± EPM. A ANOVA de medidas repetidas two-way com o teste de comparações múltiplas de Sidak foi usada em todos os parâmetros. * p≤0,05, ** p≤0,01 entre os objetos no respectivo julgamento. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61494/61494fig06large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61494/61494fig07.jpg"> Figura 7: Alterações na potência da banda alfa do EEG associadas à exploração. Esta figura mostra mudanças na potência alfa relativa, de meio segundo para 2,5 após o animal iniciar a exploração dos objetos. Os seis gráficos corresponderam aos eletrodos Frontal, Central e Parietal (de cima para baixo) e lados esquerdo e direito. Boxplots mostram a distribuição de tais séries temporais para cada combinação de condição de um Objeto: "Familiar" e "Novel", e estágio: "ACQ", "STM" e "LTM". <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61494/61494fig07large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61494/61494fig08.jpg"> Figura 8: Alterações na potência da banda beta do EEG associadas à exploração. Esta figura mostra mudanças na potência beta relativa, de meio segundo para 2,5 depois que o animal começa a exploração dos objetos. Os seis gráficos corresponderam aos eletrodos Frontal, Central e Parietal (de cima para baixo) e lados esquerdo e direito. Boxplots mostram a distribuição de tais séries temporais para cada combinação de condição de um Objeto: "Familiar" e "Novel", e estágio: "ACQ", "STM" e "LTM". <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61494/61494fig08large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Vídeo 1: Vídeo representativo mostrando um rato gravado no experimento. O rato estava dentro da arena utilizada para o protocolo NORT. O rato usava o colete acoplado ao aparelho de EEG com uma bateria embutida. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61494/VIDEO_1.mp4" target="_blank">Clique aqui para baixar este vídeo.</a>
Vídeo 2: Vídeo representativo mostrando EEG simultâneo e gravação comportamental. O sinal do EEG foi exibido no lado esquerdo enquanto o teste comportamental (NORT) foi exibido no lado direito do vídeo. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61494/VIDEO_2.mp4" target="_blank">Clique aqui para baixar este vídeo.</a>

O protocolo aqui apresentado fornece informações sobre o eletroencefalograma (EEG) simultâneo e avaliação comportamental em tempo real. Discutimos todas as etapas envolvidas neste protocolo como uma solução atraente para pesquisadores em muitos campos da neurociência, particularmente nas áreas de aprendizagem e memória.

Monitoramento Simultâneo da Eletrofisiologia Wireless e Teste Comportamental de Memória como Ferramenta para Estudo da Neurogênese do Hipocampo

Brainwaves amplitude obtained from electroencephalography (EEG) has been well-recognized as a basis for cognitive capacity, memory, and learning on ...

A avaliação simultânea de rastreamento de vídeo comportamental e os elétrons sem fio de gravação de holografia e sua integração são altamente atraentes e fornecem uma solução interessante para pesquisadores em muitos campos da neurociência. A versatilidade da avaliação simultânea de rastreamento de vídeo comportamental e gravação de EEG sem fio é uma das vantagens mais significativas, pois pode ser usada em muitas condições experimentais. Demonstrando o procedimento estarão Florencia Mata, uma estudante de pós-graduação, e Alejandro Tapia-de-Jesus, um pesquisador do meu laboratório.Para configurar o dispositivo de eletrofisiologia, conecte o modem do dispositivo a um host de computador pessoal e ligue o modem. Desligue qualquer outro dispositivo de rede no computador e silencie qualquer outra comunicação sem fio dentro da sala de registro possível. Conecte o amplificador na parte de trás do rato a ser testado e conecte a bateria para ligar o dispositivo de EEG.Dois segundos após a conexão, um LED vermelho no amplificador EEG piscará no dispositivo indicando que a comunicação com o modem está ativa, seguida pela ativação de uma luz LED verde. Se a comunicação for bem-sucedida, os LEDs no modem começarão a piscar continuamente. Quando a comunicação do dispositivo tiver sido configurada com sucesso, inicie o software EEG e configure-o de acordo com as instruções do fabricante para integrar o software ao dispositivo de aquisição de EEG sem fio.Em seguida, clique em Iniciar exibição. O software EEG exibirá a aquisição real do sinal. Para configurar o software de rastreamento comportamental, faça login na conta e selecione Novo experimento vazio e Novo.Defina um nome para o protocolo e selecione Modo de rastreamento de vídeo. Sob o aparelho, defina a linha da régua móvel da escala para uma posição ao longo do comprimento conhecido da arena e insira o comprimento da arena em milímetros no painel de configurações. Em Rastreamento e comportamento, selecione Zonas.Em Adicionar item, selecione Nova zona e o comprimento da arena e defina um nome para a nova zona. Depois de definir a área da arena e nomeá-la como acabamos de demonstrar, abra Animal Color e selecione os animais que são mais claros que o fundo do aparelho. Em Rastreando a cabeça e a cauda do animal, selecione sim, quero que a cabeça e a cauda do animal sejam rastreadas.Navegue até Teste e Estágios e selecione Adicionar Item e Novo Estágio. Nomeie a aquisição do estágio. Em seguida, defina a duração do estágio e repita a configuração para os testes de memória de curto e longo prazo.Quando todos os testes tiverem sido configurados, abra Procedimentos e defina os eventos a serem rastreados para cada estágio. Para uma sessão de aquisição no software de rastreamento, selecione Testes e Adicionar um teste e atribua um número para o animal a ser testado, selecione Registrar e nomeie os animais e a sessão. Antes de colocar o animal na arena, clique em Jogar.Uma mensagem de espera para iniciar será exibida. Em seguida, coloque um animal na arena de frente para uma parede oposta aos objetos. Clique em Jogar novamente e permita que o animal explore livremente por 10 minutos.Duas horas após o término da sessão de aquisição, substitua um dos objetos por outro objeto de forma, cor e textura completamente diferentes e configure um teste de memória de curto prazo no software de rastreamento, conforme demonstrado. Em seguida, coloque o animal na arena de frente para uma das paredes opostas ao objeto, conforme demonstrado. Pressione Play novamente e deixe o animal explorar livremente por 10 minutos.24 horas após a sessão de aquisição, configure o software para registrar um teste de memória de longo prazo e substitua o objeto por outro objeto completamente diferente daquele usado no teste de memória de curto prazo. Em seguida, coloque o animal na arena e registre o comportamento do animal com o software, conforme demonstrado. Testes de campo aberto de ratos que foram submetidos a cirurgia enquanto usavam o equipamento ou que permaneceram intactos sem usar o hardware não mostraram diferenças significativas em sua distância de viagem durante o período de exploração de 10 minutos.Usando a análise de rastreamento, o tempo de cabeça na taxa de preferência do objeto pode ser calculado usando o tempo de cabeça do animal gasto na zona do objeto. Uma taxa de preferência para o tempo gasto movendo-se em direção aos objetos, indicando a quantidade total de tempo gasto em cada animal movendo-se em direção a cada zona de objeto e o tempo gasto por visita a cada objeto, também pode ser calculada. Neste ensaio de aquisição representativa, não houve distinções entre objetos nos três parâmetros avaliados, nem houve diferenças no ensaio de memória de curto prazo.No teste de memória de longo prazo, no entanto, foi observada uma taxa de preferência de exploração significativamente maior para o novo objeto, bem como a preferência pelo novo objeto no tempo gasto por visita. Nestes dados de um único animal representativo, a potência alfa tendeu a uma diminuição na memória de curto prazo em comparação com a aquisição e a memória de longo prazo, sugerindo uma dessincronização relacionada à exploração ou recuperação de memória. Ao tentar este procedimento, certifique-se de que todos os canais de EEG exibam uma relação sinal-ruído confiável.É necessário construir ou usar eletrodos e sistema motor adequados. Essa técnica pode ajudar os pesquisadores a responder a perguntas relacionadas ao desempenho comportamental e à atividade elétrica do cérebro, como potencial evocativo, como o teste P300, um Stroop ou um estado estacionário.

simultaneous-monitoring-wireless-electrophysiology-memory-behavioral

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Um procedimento é descrito para manipular a actividade de neurónios piramidais corticais cerebrais optogenetically enquanto o electroencefalograma, electromiograma, e concentração do lactato cerebral são monitorados. Gravações experimentais são realizados em ratinhos de cabo-cativos, enquanto eles sofrem espontâneas do sono / vigília ciclos. Optogenética equipamento é montado no nosso laboratório, o equipamento de gravação encontra-se comercialmente disponível.

Eletroencefalografia simultânea, em tempo real de medição da concentração de lactato e Manipulação optogenética da atividade neuronal do córtex cerebral de roedores

Uma abordagem multi-facetada para investigar alterações funcionais para circuitos do hipocampo é explicado. Técnicas electrofisiológicas são descritos em conjunto com o protocolo de lesão, testes comportamentais e método de dissecação regional. A combinação destas técnicas pode ser aplicada de forma semelhante para outras regiões do cérebro e perguntas científicas.

Investigações sobre alterações da função Circuito Hippocampal Após lesão cerebral traumática leve

Modulação da hippocampally dependente de memória espacial de trabalho por microinjeção intrahippocampal direta, acompanhado e seguido...

Microinjeção insulina hipocampal e<em&gt; Em vivo</em&gt; Microdiálise Durante um teste de memória espacial

Aqui demonstramos o uso de uma tecnologia de habilitação sem fio para eletroencefalograma (EEG) em modelos de roedores neonatais de doenças humanas. Com a telemetria, não há conexões onerosas, permitindo assim comportamentos naturais.

Monitorização EEG contínuo a longo prazo no pequeno roedor modelos de doença humana, utilizando o Sistema Epoch transmissor sem fio

Nós descrevemos um protocolo de imuno-histoquímica para estudar o perfil de ativação dos neurônios do hipocampo após a exposição a uma tarefa de aprendizagem espacial em um modelo de rato caracterizado por déficits cognitivos de origem do desenvolvimento neurológico. Este protocolo pode ser aplicado a ambos os modelos genéticos ou farmacológicos de ratinho caracterizadas por disfunções cognitivas.

A visualização imuno-histoquímica de Hippocampal Neuron Atividade Após Spatial Aprendizagem em um rato modelo de desordens do desenvolvimento neurológico

Descrevemos as medidas diversas para implante de silicone crônica sondas e gravar lugar células em ratos que são cabeça running-fixo em um aparelho de esteira cue-enriquecido.

Implantação de sondas de silicone crônica e gravação de lugar Hippocampal células em um aparelho de esteira enriquecido

Este protocolo descreve um método simples para gravação simultânea de co localizada Eletroencefalografia (EEG) e multi-laminar local campo potencial em um rato anestesiado. Um orifício de trépano, perfurado o crânio para a inserção de um microeléctrodo é mostrado para produzir distorção negligenciável do sinal EEG.

Gravação simultânea de eletroencefalografia co localizada e potencial do campo Local em roedores

Aqui, apresentamos um protocolo para gravar o cérebro e coração bio sinais nos ratos usando vídeo simultâneo, Eletroencefalografia (EEG) e eletrocardiograma (ECG). Descrevemos também métodos para analisar as gravações de EEG-ECG resultantes para convulsões, potência espectral de EEG, função cardíaca e variabilidade da frequência cardíaca.

Simultânea vídeo-EEG-ECG de monitoramento para identificar a disfunção Neurocardiac em modelos de Mouse de epilepsia

Este método descreve uma preparação crônica que permite o acesso óptico ao hipocampo de camundongos vivos. Esta preparação pode ser utilizada para realizar imagens ópticas longitudinais de plasticidade estrutural neuronal e plasticidade celular evocada por atividade ao longo de um período de várias semanas.

Imagem latente longitudinal do dois-fotão do hipocampal dorsal CA1 em ratos vivos

Este protocolo descreve o uso de um dispositivo de gravação personalizado e eletrodos para registrar potenciais de campo locais e investigar o fluxo de informações no hipocampo e no córtex pré-frontal do camundongo.

Gravações extracelulares duplas no hipocampo de camundongos e córtex pré-frontal

Esse protocolo fornece uma descrição abrangente de um método para o registro simultâneo de sinais de cálcio de neurônios e astrócitos em múltiplas regiões cerebrais relacionadas à memória e demonstra sua aplicação durante um paradigma de aprendizagem e comportamento da memória.

Um método de fotometria de fibra bicolorida para registrar a atividade dos neurônios dos astrócitos em múltiplas regiões cerebrais durante comportamentos de aprendizagem e memória

Aprenda a integrar EEG sem fio e rastreamento comportamental em tempo real para estudar neurogênese do hipocampo e processos de memória em modelos animais. Este protocolo oferece uma abordagem robusta para pesquisa em neurociência.

Monitoramento Simultâneo da Eletrofisiologia Wireless e Teste Comportamental de Memória como Ferramenta para Estudo da Neurogênese do Hipocampo (Vídeo) | JoVE Journal

Monitoramento Simultâneo da Eletrofisiologia Wireless e Teste Comportamental de Memória como Ferramenta para Estudo da Neurogênese do Hipocampo

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