Name: Análise e Especificação das Distribuições de Tamanho do Granulo de Amido (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-04T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: Aprenda a determinar distribuições de tamanho de grânulos de amido de forma reprodutível e estatisticamente válida para pesquisas em ciências de plantas e alimentos. Este método utiliza distribuição lognormal de dois parâmetros.

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Este trabalho é parcialmente apoiado pelo Centro de Pesquisa agropecuária cooperativa e pelo Centro Integrado de Pesquisa em Segurança Alimentar da Faculdade de Agricultura e Ciências Humanas da Prairie View A&M University. Agradecemos a Hua Tian por seu apoio técnico.

1. Preparação de amostras de amido
<ol><li>Prepare duas (ou três) amostras de amido de réplica em escala de grama de tecidos acumulados de amido de várias espécies vegetais seguindo os procedimentos estabelecidos (por exemplo, batatas15, potes de doce28,grãos de trigo13,29e grãos de milho30,etc.).</li>
	<li>Lave completamente amostras de amido com acetona ou tolueno 3-4x para minimizar os agregados de granulo e secá-las completamente. NOTA: Use procedimentos de extração que produzam mais de 1 g de amido por preparação. Uma ou duas alíquotas de 0,5 g de cada um dos três ou dois extratos de réplica, respectivamente, são amostradas para análise de tamanho de grânulo de um extrato de amido.</li>
</ol>2. Preparação de eletrólitos
<ol><li>Prepare 500 mL de cloreto de lítio de 50 g/L em metanol para quatro corridas de tamanho para amostras de amido de replicação (100 mL por corrida mais 100 mL extras). Preferencialmente, faça o eletrólito em lotes de grande volume, por exemplo, 4 a 8 L por vez, para minimizar a variação de concentração.</li>
	<li>Esfrie o recipiente no gelo ou em um armário de 4 °C para acelerar a dissolução do cloreto de lítio.</li>
</ol>3. Configuração do analisador
<ol><li>Escolha um tubo de abertura com uma faixa de diâmetro de partículas cobrindo a faixa de tamanho de grânulo conhecida (na literatura ou através de ensaios) de amostras de amido a serem analisadas, por exemplo, uma abertura de 100 μm para amidos de doces. Para amostras de amido de faixa de tamanho de grânulo desconhecida, selecione uma abertura apropriada através de testes usando vários tubos de abertura com faixas de diâmetro de partículas sobrepostas. NOTA: A faixa de diâmetro de partículas de um tubo de abertura é sua faixa de dimensionamento precisa entre 2 a 60% de, e com uma faixa de dimensionamento estendida para 80% do seu diâmetro orifício. A Tabela 1 lista propriedades de três tubos de abertura mais úteis para dimensionar grânulos de grandes amidos de cultura. Se a faixa de tamanho do grânulo de uma amostra de amido for maior do que a faixa de dimensionamento de um único tubo de abertura, realize uma análise de sobreposição de vários tubos combinando até cinco distribuições de tamanho de partículas medidas com aberturas de diferentes tamanhos. Cada abertura é identificável pelo seu diâmetro e número de peça rotulado no tubo. Seu diâmetro e número de série contidos em um código de barras no tubo podem ser escaneados no software do analisador usando o Leitor de Código de Barras no Painel de Controle do analisador.</li>
	<li>Escolha um béquer analítico de 100 ou 200 mL (sobre cuvetas) para a determinação dos tamanhos do grânulo de amido, e configure agitação automática (abaixo) para manter uma boa suspensão de granulo durante a medição.</li>
	<li>Crie um MÉTODO operacional padrão (SOM) para especificar configurações de execução e um arquivo Preferências para analisar, visualizar e imprimir os resultados. Combine o arquivo SOM e Preferences em um procedimento operacional padrão (SOP) conforme necessário. NOTA: Para análises não padronizadas, use o SOM para executar as análises e ajuste as configurações som entre as execuções através da janela Editar a janela SOM (veja abaixo) conforme necessário. Após a conclusão da execução, analise, visualize e imprima os resultados da execução alterando as Preferências conforme desejado. Para análises padronizadas de dimensionamento de grânulos, use um SOP para executar as análises.<ol>
<li>Inicie o software do analisador. Na Manu Principal, clique em SOP | Crie o MAGO SOM ou edite o SOM, ou no Painel de Status, clique em Editar SOM. Use o assistente ou a janela Editar a janela SOM para selecionar configurações para um SOM. As configurações tipicamente utilizadas para dimensionar grânulos de amostras de amido de doce de pote são resumidas na Tabela 2.</li>
		<li>Salve o SOM criado em um arquivo na janela SOM Wizard-Summary of Settings ou na janela Editar a janela SOM.</li>
		<li>Na Manu Principal, clique em SOP | Criar preferências do assistente ou editar preferências. Use o assistente ou as guias na janela de edição Preferências para selecionar configurações de preferência como as da Tabela 3 ou outras conforme desejado.</li>
		<li>Salvar as Preferências selecionadas em um arquivo na janela Criar preferências Assistente-Resumo de Configurações ou na janela Editar preferências.</li>
		<li>No menu principal, clique em SOP | Criar assistente SOP. Seguindo o guia passo a passo do assistente, digite uma descrição, selecione o arquivo SOM e Preferências para criar e salvar um SOP.
</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Análises de dimensionamento de grânulos das amostras de amido
<ol><li>Prepare o Analisador<ol>
<li>Ligue o analisador, abra o software no computador e verifique o status Pronto na parte superior do Painel de Status após sua conexão automática com o analisador.</li>
		<li>Encha o frasco de eletrólitos com eletrólitos, esvazie o frasco de resíduos se necessário.</li>
		<li>Instale e fixe corretamente o tubo de abertura escolhido seguindo o guia no manual do usuário. Para um novo tubo de abertura não calibrado, calibra-o seguindo o guia passo-a-passo em Calibração | Calibrar a abertura no menu principal. Para obter um tubo de abertura calibrado, verifique a calibração seguindo o guia passo-a-passo do assistente do tubo de abertura de alteração sob o | de execução ou calibração Verifique a calibração da abertura no menu principal.</li>
		<li>Desbloqueie a plataforma de ensaio empurrando o clipe de liberação de bloqueio (na frente média da parede do compartimento da amostra esquerda) e baixe manualmente a plataforma para a parte inferior. Coloque um béquer analítico contendo 100 mL de eletrólito na plataforma, mova o agitador para a posição de agitação e levante manualmente a plataforma para a posição superior auto-travada para imergir o tubo de abertura e o agitador no eletrólito.</li>
		<li>Clique em Preencher na barra de ferramentas do instrumento inferior para que o analisador preencha automaticamente o sistema com o eletrólito e clique em Flush para que o analisador lave automaticamente o sistema.</li>
		<li>Carregue o SOM clicando em SOP | Carregue um SOM no Menu Principale use o SOM para executar uma análise sem um arquivo Preferências. Alternativamente, carregue um SOP clicando em SOP | Carregue um SOP no menu principal ou carregue SOP no Painel de Status e use o SOP para executar uma análise.</li>
		<li>Se estiver usando um SOP, clique em SOP | SOM Info ou Informações de Preferência no Menu Principal para verificar as configurações SOM e Preferência. Clique em | de amostra Digite Informações de exemplo no menu principal ou edite informações no painel de status para inserir as informações de amostra para a execução.</li>
	</ol></li>
	<li>Prepare a amostra de amido-metanol e as suspensões de dimensionamento<ol>
<li>Pesar duas ou uma amostra de 0,5 g de cada um dos dois ou três extratos de amido de réplica, respectivamente.</li>
		<li>Adicione cada uma das alíquotas de amido de 0,5 g a 5 mL de metanol em um tubo de centrífuga cônica de 50 mL e disperse totalmente os grânulos de amido usando vários pulsos de ultrassom de baixa intensidade (12-24 W/cm2) de um processador ultrassônico.</li>
		<li>Usando uma pipeta de transferência descartável, aplique uma pequena gota da suspensão amido-metanol (~0,2 mL) aos 100 mL de 50 g/L LiCl eletrólito de metanol sob constante agitação no béquer. Feche a porta do compartimento de amostra.</li>
	</ol></li>
	<li>Realize uma corrida de dimensionamento<ol>
<li>Clique em Visualizar na barra de ferramentas de instrumento inferior para iniciar uma execução de pré-visualização. No Painel de Status, verifique se a barra de concentração exibida dinamicamente está em verde e mostra uma faixa de concentração nominal de 5 a 8% para a suspensão.</li>
		<li>Clique em Parar na barra de ferramentas inferior para impedir a execução da pré-visualização. Se necessário, diluir a suspensão de eletrólitos de amido substituindo uma alíquota da suspensão pelo eletrólito e, em seguida, repita uma pré-visualização. NOTA: A faixa de concentração nominal de 5% a 8% da suspensão é fundamental para a conclusão de uma corrida sem paralisação devido ao bloqueio de abertura por grânulos agregados. Se necessário, ajuste o tamanho da amostra de gota e/ou a concentração da suspensão amido-metanol para fazer uma nova suspensão de onte-eletrólitos com a concentração nominal na faixa ideal.</li>
		<li>Após a verificação, clique em Iniciar na barra de ferramentas inferior para iniciar a execução. O analisador completa automaticamente a execução assim que a contagem total de grânulos de tamanho, que é exibida juntamente com o tempo de execução no Painel de Status em uma execução, atinge o conjunto Contagem Total (125.000 ou 250.000) pelo Modo de Controle do SOM. Dependendo da concentração de suspensão (dentro da faixa de 5-8% ou inferior), uma única corrida leva de 2 a 5 minutos ou mais. NOTA: Quando o analisador detectar automaticamente um bloqueio de abertura por configurações de detecção de bloqueio do SOM, ele abortará a execução, lava para desbloquear a abertura e iniciar uma nova execução. Esta ação de bloqueio é definida para repetir ao máximo por quatro vezes antes que o analisador cancele a operação de execução. Este problema de bloqueio de abortagem pode ser superado por meio de dois métodos técnicos, conforme observado na Tabela 2 e detalhado na discussão.</li>
		<li>Se necessário, execute uma repetição técnica (ver Tabela 2 e detalhado em Discussão) usando a mesma suspensão de eletrólitos de amido, simplesmente clicando em Iniciar ou Repetir na barra de ferramentas inferior.</li>
		<li>Após a conclusão de uma corrida ou repetição, esvazie o béquer, enxágue-o com metanol e recarregue-o com uma solução de eletrólito fresco de 100 mL para a próxima corrida.</li>
		<li>Durante uma execução, se uma caixa de notificação de Faixa de Tamanho Estendido aparecer quando a contagem de grânulos maiores que 60 μm exceder 0,1% da contagem total (de acordo com a configuração SOM), clique em Executar de 60% a 80% para executar uma faixa de dimensionamento dinâmico estendida para 80% do diâmetro da abertura. NOTA: A configuração de faixa de tamanho estendido controla ações para grânulos maiores que 60% do diâmetro de abertura (100 μm, neste caso). A configuração no SOM especifica a inclusão de grânulos de amido superiores a 60 μm quando suas contagens atingem mais de 0,1% da contagem total. A conclusão da corrida ainda é controlada pela contagem total, podendo levar um pouco menos tempo do que de outra forma sem a inclusão dos grânulos maiores totalizando menos de 0,1% (quantidade supostamente insignificante) da contagem total.</li>
	</ol></li>
	<li>Analise os resultados da execução<ol>
<li>Se um SOM foi usado para controlar as corridas, selecione Configurações de Preferências conforme desejado para visualização, impressão e análises estatísticas dos resultados usando o Assistente de Preferências de Criação ou as Preferências de Edição no SOP no Menu Principal.</li>
		<li>Os resultados de sobreposição de várias corridas em um único gráfico para comparação.<ol>
<li>Clique em Sobreposição na barra de ferramentas principal ou | de arquivos Sobreposição no Menu Principal para acessar a janela Sobreposição. Navegue e selecione vários arquivos de resultados desejados na caixa Arquivos, clique em Adicionar para movê-los para a caixa Arquivos Selecionados e clique em OK para sobrepor os resultados selecionados em um único gráfico.</li>
			<li>Para adicionar um arquivo a uma sobreposição aberta, clique em RunFile | Abra para sobreposição no Menu Executar para acessar a janela Sobreposição, navegar até o arquivo desejado e clicar para adicionar.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Resultados médios de análises de replicação (2 extratos x 2 amostragem de amido ou 3 extratos x 1 amostragem de amido), e visualizar ou imprimir a distribuição média do tamanho do grânulo e estatísticas em uma lista ou gráfico.<ol>
<li>No menu principal, clique em Arquivo | FileTool | Média para abrir a janela Média. Navegue e selecione vários arquivos de resultados desejados na caixa Arquivos, clique em Adicionar para movê-los para a caixa Arquivos Selecionados e clique em OK para mediar os resultados selecionados e exibir a média em um único gráfico.</li>
			<li>Para incluir um arquivo de resultado adicional em uma distribuição média, no Menu Executar, clique em Executar | Abrir e Adicionar à Média para abrir a janela Adicionar à Média, navegar e adicionar o arquivo. A nova média aparece no gráfico na janela ou listagem de Executar (resultado).</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>5. Especificando a distribuição média
<ol><li>Na janela Executar-Menu exibindo a distribuição média, clique em Calcular | Estatísticas médias no Menu Executar para abrir a janela de resumo de estatísticas, que exibe as estatísticas médias em linhas, e as estatísticas de gráficos para a distribuição média nas colunas.</li>
	<li>Use a média geométrica <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/61586/61586eq1.jpg"> gráfica () e S.D.(s*)na coluna de estatísticas de gráficos para especificar a distribuição média na forma <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/61586/61586eq1.jpg"> x/s*. Calcular as variações de medição de CV entre as distribuições médias de replicação dividindo a média (μ, a mesma <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/61586/61586eq1.jpg"> da distribuição média) das médias das distribuições médias com a média de S.D. (σ) listada na linha média estatística. NOTA: A média de S.D. (para μ) que avalia variações entre os meios das distribuições de replicação é diferente da S.D. geométrica gráfica (para <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/61586/61586eq1.jpg"> ) medir a propagação da distribuição média.</li>
</ol>

<ol><li>Shannon, J. C., Garwood, D. L., Boyer, C. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShannon%2C+JC+%22Starch%3AChemistry+and+Technology+Food+Science+and+Technology%22">Starch:Chemistry and Technology Food Science and Technology</a>. BeMiller, J., Whistler, R. , Academic Press. Ch. 3 23-82 (2009).</li>
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<li>Gao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-preserving+lognormal+volume-size+distributions+of+starch+granules+in+developing+sweetpotatoes+and+modulation+of+their+scale+parameters+by+a+starch+synthase+II+%28SSII%29%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologiae+Plantarum%22%5BJournal%5D)">Self-preserving lognormal volume-size distributions of starch granules in developing sweetpotatoes and modulation of their scale parameters by a starch synthase II (SSII).</a> Acta Physiologiae Plantarum. 38 (11), 259(2016).</li>
<li>Wattebled, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STA11%2C+a+Chlamydomonas+reinhardtii+locus+required+for+normal+starch+granule+biogenesis%2C+encodes+disproportionating+enzyme.+Further+evidence+for+a+function+of+alpha-1%2C4+glucanotransferases+during+starch+granule+biosynthesis+in+green+algae%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">STA11, a Chlamydomonas reinhardtii locus required for normal starch granule biogenesis, encodes disproportionating enzyme. Further evidence for a function of alpha-1,4 glucanotransferases during starch granule biosynthesis in green algae.</a> Plant Physiology. 132 (1), 137-145 (2003).</li>
<li>Ji, Y., Seetharaman, K., White, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+a+Small-Scale+Corn-Starch+Extraction+Method+for+Use+in+the+Laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Cereal+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Optimizing a Small-Scale Corn-Starch Extraction Method for Use in the Laboratory.</a> Cereal Chemistry. 81 (1), 55-58 (2004).</li>
<li>Halloy, S., Whigham, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lognormal+as+universal+descriptor+of+unconstrained+complex+systems%3A+a+unifying+theory+for+complexity%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+7th+Asia-Pacific+Complex+Systems+Conference%22%5BJournal%5D)">The lognormal as universal descriptor of unconstrained complex systems: a unifying theory for complexity.</a> Proceedings of the 7th Asia-Pacific Complex Systems Conference. , QLD. Australia. 309-320 (2004).</li>
<li>Furusawa, C., Suzuki, T., Kashiwagi, A., Yomo, T., Kaneko, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ubiquity+of+log-normal+distributions+in+intra-cellular+reaction+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysics+%28Nagoya-shi%29%22%5BJournal%5D)">Ubiquity of log-normal distributions in intra-cellular reaction dynamics.</a> Biophysics (Nagoya-shi). 1, 25-31 (2005).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar

O procedimento delineado resolveu algumas questões críticas em vários métodos existentes para análises de tamanho de grânulo de amido, incluindo dimensionamento 1D ou 2D inadequado de grânulos 3D, distorção das medidas de dimensionamento devido a formas de grânulo não uniforme, baixa reprodutibilidade e validade estatística duvidosa devido a tamanhos limitados de amostra de granulo, especificações imprecisas ou inadequadas (especialmente o uso do tamanho médio) de tamanhos de grânulo na presença de forma de grânulo e dis...

Os grânulos de amido são a estrutura física na qual dois polímeros homoglucanos de reserva principal em fotossíntese vegetal e tecidos de armazenamento, a amilolose linear ou pouco ramificada e a amilódeina altamente ramificada, são embaladas ordenadamente junto com alguns componentes menores, incluindo lipídios e proteínas. Grânulos de amido de várias espécies vegetais exibem muitas formas tridimensionais (3D) (revisadas em ref.1,2), incluindo esferas, elipsoides, poliedros, plaquetas, cubos, cuboides e tubulos irregulares. Mesmo aqueles do mesmo tecido ou tecidos diferentes da mesma espécie vegetal poderiam ter um conjunto de formas com frequências de ocorrência variadas. Em outras palavras, grânulos de amido de uma espécie de planta podem ter uma distribuição estatística característica, em vez de uma forma específica. As formas de grânulo não uniforme e não esférica dificultam a medição adequada e a definição dos tamanhos do grânulo do amido. Além disso, os grânulos de amido dos mesmos tecidos de uma espécie vegetal são de uma gama de tamanhos com diferentes proporções, ou seja, exibindo uma distribuição de tamanho característica. Essa distribuição de tamanho complica ainda mais a análise e descrição dos tamanhos do grânulo de amido.
Os tamanhos do grânulo de amido foram analisados utilizando várias categorias de técnicas de dimensionamento de partículas (revisadas no ref.3), incluindo microscopia, sedimentação/fracionamento de fluxo de campo esterico (Sd/StFFF), difração a laser e zona de sensoriamento elétrico (ESZ). No entanto, essas técnicas não são igualmente adequadas para a determinação de tamanhos de grânulos de amido na presença de uma forma de grânulo e uma distribuição de tamanho. A microscopia, incluindo microscopia eletrônica leve, confocal e de varredura, é excelente para os estudos de morfologia4,5,6,7, estrutura8,9 e desenvolvimento10,11 de grânulos de amido, mas dificilmente adequado para definir suas distribuições de tamanho devido a algumas deficiências inerentes. Medições diretas de imagens de grânulos microscópicos ou análise de imagem assistida por software de dados de microscopia óptica (IAOM), que têm sido usados para a determinação de tamanhos de grânulos de amidos de várias espécies, incluindo milho12, trigo13,14, batata15 e cevada16, pode medir apenas tamanhos 1D (geralmente comprimento máximo) ou 2D (área de superfície) de números muito limitados (dezenas a alguns milhares) de imagens de grânulo de amido. Os pequenos tamanhos de amostragem de grânulos inerentemente constrangidos pelas técnicas raramente poderiam ser estatisticamente representativos, considerando os enormes números de granulo por unidade de peso de amido (~120 x 106 por grama, assumindo todas as esferas de 10 μm em densidade de 1,5 g/cm³), e, portanto, poderia levar à baixa reprodutibilidade dos resultados. A técnica Sd/StFFF pode ter alta velocidade e resolução, e frações de tamanho estreito de grânulos de amido17,mas raramente tem sido usada provavelmente porque sua precisão pode ser severamente afetada por danos, diferentes formas e densidade de grânulos de amido. A técnica de difração a laser é a mais utilizada, e tem sido aplicada para análises de tamanho de granulo de amido para todas as principais espécies de cultura3,14,16. Embora a técnica tenha muitas vantagens, na verdade não é adequada para determinações de tamanhos de grânulo de amido na presença de uma distribuição de forma de grânulo. A maioria dos instrumentos simultâneos de difração a laser dependem da teoria de dispersão de luzMie 18 para partículas esféricas uniformes e a teoria miemodificada 18 para algumas outras formas de uniformidade. A técnica é, portanto, inerentemente muito sensível às formas de partículas, e não é inteiramente adequada mesmo para certas formas de uniformidade19, muito menos para grânulos de amido com um conjunto de formas de proporções variadas. A técnica ESZ mede a perturbação do campo elétrico proporcional ao volume da partícula que passa por uma abertura. Fornece tamanhos de volume de granulo, bem como as informações de distribuição de números e volumes, etc., em altas resoluções. Uma vez que a técnica ESZ é independente de quaisquer propriedades ópticas de partículas, incluindo cor, forma, composição ou índice refrativo, e os resultados são muito reprodutíveis, é particularmente adequado para determinar distribuições de tamanho de grânulos de amido com um conjunto de formas.
Os tamanhos do grânulo de amido também foram definidos usando muitos parâmetros. Muitas vezes foram descritos simplistamente por diâmetros médios, que em alguns casos foram os meios aritméticos dos comprimentos máximos microscopicamente medidos de imagens 2D12,20ou médias de diâmetros equivalentes da esfera3. Em outros casos, as distribuições de tamanho do grânulo foram especificadas utilizando-se faixas de tamanho21,22, o volume médio de distribuição ou diâmetro médio (equivalente de esfera, ponderado por número, volume ou área de superfície) assumindo uma distribuição normal14,23,24,25,26. Estes descritores de tamanhos de grânulo de amido de várias análises são de natureza muito diferente, e não estritamente comparáveis. Poderia ser muito enganoso se esses "tamanhos" de grânulos de amido de diferentes espécies ou mesmo os mesmos tecidos da mesma espécie fossem diretamente comparados. Além disso, o parâmetro de propagação (ou forma) das distribuições normais presumidas, ou seja, o desvio padrão σ (ou desvio padrão gráfico σg) medindo a largura da distribuição (ou seja, a disseminação dos tamanhos), tem sido ignorado na maioria dos estudos.
Para resolver os problemas críticos acima mencionados frente às análises de dimensionamento do grânulo de amido, delineamos um procedimento para determinações reprodutíveis e estatisticamente válidas das distribuições de tamanho de grânulo de amostras de amido usando a técnica ESZ, e para especificar adequadamente as distribuições de tamanho periculoso de granulo determinado usando uma forma multiplicativa de dois parametradosadotadas 27 com melhor precisão e comparabilidade. Para validação e demonstração, realizamos análises de dimensionamento de grânulos de réplica de amostras de amido de doce de pote usando o procedimento, e especificamos as distribuições de volume-volume-diâmetro de volume-quantidade equivalente de volume-equivalente de volume-equivalente lognormal usando seus meios <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/61586/61586eq1.jpg"> geométricos gráficos e desvios padrão multiplicativos s* em uma forma <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/61586/61586eq1.jpg"> x/ (multiplique e divida) s*

<table><tbody><tr><td>Béquer Analítico</td><td>Beckman Coulter Life Sciences</td><td>A35595</td><td>Béquer Smart-Technology (ST)</td></tr><tr><td>Tubo de abertura, 100 &micro; m</td><td>Beckman Coulter Life Sciences</td><td>A36394</td><td>Para o</td></tr><tr><td>pipetador de transferência descartável</td> MS4E, <td>Fisher Scientific (Fishersci.com)</td><td>13-711-9AM</td><td>Outros pipetadores de transferência descartáveis com orifício semelhante também podem ser usados.</td></tr><tr><td>Tubos de Centrífuga de Polipropileno Cônico Fisherbrand, 50 ml</td><td>Fisher Scientific (Fishersci.com)</td><td>05-539-13</td><td>Qualquer outro tipo semelhante de tubos pode ser usado.</td></tr><tr><td>Copos de vidro, 150 a 250 ml</td><td>Fisher Scientific (Fishersci.com)</td><td>02-540K</td><td>Esses copos são usados para conter metanol para lavar o tubo de abertura e o agitador entre as corridas.</td></tr><tr><td>LiCl</td><td>Fisher Chemical</td><td>L121-100</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Chemical</td><td>A412-500</td><td>Compre a granel, pois a análise usa uma grande quantidade de metanol.</td></tr><tr><td>Balanças de Precisão ML-T da Mettler Toledo</td><td>30243412</td> da <td>Mettler Toledo</td><td>Qualquer outra balança de precisão com resolução de 0,01 g a 1 mg funcionará.</td></tr><tr><td>Contador de relhas Multisizer 4e</td><td>Beckman Coulter Life Sciences</td><td>B23005</td><td>O modelo antigo, Multisizer 3, também pode ser usado com um ligeiro ajuste de parâmetros. O modelo 4e vem com um 100 &mu; Tubo de abertura M. Outros tubos de abertura de diferentes diâmetros podem ser adquiridos separadamente da empresa.</td></tr><tr><td>Processador ultrassônico UP50H</td><td>Hielscher Tecnologia de ultrassom</td><td>UP50H</td><td>Outro sonicador de laboratório com baixa potência (< 50 Watt) também pode ser usada. Os sonotrodos MS1 e MS2 para o sonicador específico podem ser usados para dispersar grânulos de amido em 5 ml de metanol. Sempre use a configuração mais baixa primeiro, 20% de amplitude e 0,1 ou 0,2 ciclo, e aumente a configuração se os agregados persistirem em suspensão.</td></tr></tbody></table>

análise e especificação das distribuições de tamanho do granulo de amido

Analysis and Specification of Starch Granule Size Distributions

Amido de todas as fontes de plantas são compostos de grânulos em uma variedade de tamanhos e formas com diferentes frequências de ocorrência, ou seja, exibindo um tamanho e uma distribuição deforma. Os dados de tamanho do grânulo de amido determinados usando vários tipos de técnicas de dimensionamento de partículas são muitas vezes problemáticos devido à baixa reprodutibilidade ou falta de significância estatística resultante de alguns erros sistemáticos intransponíveis, incluindo sensibilidade às formas de grânulo e limites de tamanhos amostrais de grânulo. Delineamos um procedimento para determinações reprodutíveis e estatisticamente válidas das distribuições de tamanho do grânulo de amido usando a técnica da zona de sensoriamento elétrico, e para especificar as distribuições determinadas de tamanho de lognormal do grânulo usando uma forma multiplicativa de dois parâmetros adotada com melhor precisão e comparabilidade. É aplicável a todas as análises de dimensionamento de grânulos de amostras de amido em escala grama e, portanto, poderia facilitar estudos sobre como os tamanhos do grânulo de amido são moldados pelo aparelho e mecanismos de biosíntese de amido; e como eles impactam propriedades e funcionalidades de amidos para alimentos e usos industriais. Os resultados representativos são apresentados a partir de análises de réplica das distribuições de tamanho de granuloso de amostras de amido de doce de pote de milho utilizando o procedimento descrito. Discutimos ainda vários aspectos técnicos fundamentais do procedimento, especialmente, a especificação multiplicativa das distribuições de tamanhonormal do granulo lognormal e alguns meios técnicos para superar o bloqueio frequente de abertura por agregados de grânulos.

Para validar o procedimento e demonstrar a reprodutibilidade da distribuição determinada do tamanho do grânulo, foram realizadas análises de dimensionamento de amostras de amido de doces. Preparamos amostras de amido replicante (S1 e S2) de potes doces cultivados em campo de uma linha de reprodução SC1149-19 em idade de desenvolvimento semelhante usando um procedimento descrito anteriormente28. De cada extrato de amido, duas alíquotas de 0,5 g (a e b) foram amostradas, suspensas em 5 mL de metanol...

Apresentado aqui é um procedimento para determinações reprodutíveis e estatisticamente válidas de distribuições de tamanho de grânulo de amido, e para especificar as distribuições de tamanhonormal de enrasculado determinados do granulo usando uma forma multiplicativa de dois parâmetros. É aplicável a todas as análises de dimensionamento de grânulos de amostras de amido em escala grama para pesquisa em ciência vegetal e alimentar.

Análise e Especificação das Distribuições de Tamanho do Granulo de Amido

Starch from all plant sources are made up of granules in a range of sizes and shapes having different occurrence frequencies, i.e., exhibiting a size and ...

Esta técnica permite uma determinação reprodutível e estatisticamente válida dos tamanhos do grânulo de amido e fornece uma descrição adequada dos tamanhos de grânulos estatisticamente distribuídos. Esta técnica determina volumes de grânulos de amido independentes de suas formas e usa tamanhos de amostra de grânulo estatisticamente válidos para distribuição de tamanho e fornece especificação melhorada das distribuições de tamanho do grânulo. Este método é aplicável a estudos de pesquisa em ciência vegetal e alimentar que envolvem tamanhos de grânulos de amido, além de outras aplicações de amido que requerem informações de tamanho de grânulo.Antes de iniciar uma análise, dissolva 25 gramas de cloreto de lítio em 500 mililitros de metanol e selecione um tubo de abertura com uma faixa de diâmetro de partículas cobrindo a faixa de tamanho de grânulo conhecida das amostras de amido a serem analisadas. Para configurar um método operacional padrão, inicie o software do analisador e no menu principal, clique em SOP e crie o assistente SOM e selecione as configurações apropriadas, clique em editar o SOM e selecione as configurações apropriadas. Para selecionar um arquivo de preferências, em SOP, clique em criar o assistente de preferências e selecione as configurações de preferência apropriadas, clique em criar assistente SOP, digite uma descrição e autor e selecione os arquivos SOM e preferências para criar e salvar o SOP.Para configurar o analisador para uma análise, ligue o analisador e verifique o estado pronto no software analisador. Encha o frasco de eletrólitos com o eletrólito previamente preparado e esvazie o frasco de resíduos conforme necessário. Instale e proteja o tubo de abertura selecionado de acordo com o guia no manual do usuário e empurre o clipe de liberação de bloqueio para desbloquear a plataforma de ensaio.Abaixe manualmente a plataforma para a parte inferior e coloque um béquer analítico contendo 100 mililitros de eletrólito na plataforma. Mova o agitador para a posição de agitação e levante manualmente a plataforma para a posição superior auto-travada para imergir o tubo de abertura e o agitador no eletrólito. Clique em preencher na barra de ferramentas do instrumento inferior para preencher automaticamente o sistema com eletrólito e clique em flush para lavar automaticamente o sistema, em seguida, clique em SOP e carregue no SOM para carregar o método operacional padrão e clique em amostra e digite informações de amostra para inserir as informações da amostra para a execução.Para preparar uma suspensão de tamanho de amostra de metanol amido, pese uma ou duas amostras de 0,5 gramas de cada um dos dois ou três extratos de amido de réplica e adicione cada alíquota a cinco mililitros de metanol em um tubo de centrífuga córica de 50 mililitros. Use vários pulsos de ultrassom de baixa intensidade de um processador ultrassônico para dispersar totalmente os grânulos de amido e use uma pipeta de transferência descartável para aplicar cerca de 200 microlitros da primeira suspensão de cetotanol aos 100 mililitros de eletrólito de metanol de cloreto de lítio sob constante agitação no béquer, em seguida, feche a porta do compartimento de amostra e clique na pré-visualização para iniciar uma pré-visualização. No painel de status, verifique se a barra de concentração exibida dinamicamente é verde e mostra uma faixa de concentração nominal de 5 a 8% para a suspensão.Clique em parar para interromper a visualização e clique em iniciar a análise. O analisador completará automaticamente a execução assim que a contagem total de grânulos de tamanho, que é exibida juntamente com o tempo de execução no painel de status em uma execução, atingir a contagem total definida pelo modo de controle do SOM. Para realizar uma repetição técnica, usando a mesma suspensão de eletrólitos de amido, clique em iniciar ou repetir na barra de ferramentas inferior.Ao final da análise, esvazie o béquer, enxágue-o com metanol e recarregue-o com 100 mililitros de solução de eletrólito fresco para análise da próxima amostra. Se um SOM foi usado para controlar as corridas, use o assistente de preferências de criação para selecionar as configurações de preferências conforme desejado para visualização, impressão e análises estatísticas dos resultados. Para sobrepor os resultados de várias corridas em um único gráfico, na janela de sobreposição, selecione os resultados a serem sobrepostos.Clique em adicionar para mover os arquivos para a caixa de arquivos selecionados e clique em OK para sobrepor os resultados selecionados em um único gráfico. Para adicionar um arquivo a uma sobreposição aberta, clique em executar arquivo e abra para sobreposição para acessar a janela de sobreposição, selecione o arquivo desejado e clique para adicionar. Clique em arquivo, ferramenta de arquivo e média para abrir a janela média e navegar e selecionar vários arquivos de resultado desejados na caixa de arquivos.Clique em adicionar para mover os arquivos para a caixa de arquivos selecionados e clique em OK para mediar os resultados selecionados para exibição em um único gráfico. Para incluir um arquivo de resultado adicional em uma distribuição média, clique em executar arquivo e abrir e adicionar à média para abrir o adicionar à janela média e adicionar o arquivo de interesse. A nova média aparecerá no gráfico na janela de execução.Para obter a média geométrica gráfica e o desvio padrão para especificar a distribuição média, clique em calcular e estatísticas médias para abrir a janela de resumo de estatísticas para exibir os meios e desvios padrão dos dados. A terceira linha da tabela exibe a média geométrica gráfica e o desvio padrão para especificar a distribuição média. E a segunda coluna mostra as estatísticas da média das distribuições.Aqui, são mostradas distribuições de volume de volume diferencial equivalente de diâmetro da esfera para as quatro análises de dimensionamento de réplica de amostras representativas de amido de batata-doce e suas distribuições médias. Nesse valor, pode-se observar o número médio cumulativo e as distribuições de tamanho percentual de volume das quatro análises de dimensionamento de réplica, que foram vistas de transformação da distribuição média do tamanho percentual do volume diferencial. Comparando-se os percentuais cumulativos de número e volume dessas amostras de grânulos de amido revelou que os grânulos com diâmetros equivalentes de volume menor foram responsáveis por percentuais muito maiores da contagem total do que o volume total.É importante minimizar os agregados de grânulos de amido nas amostras de amido e assar suspensões e atingir uma faixa de concentração nominal de 5 a 8% para suspensão de eletrólitos de amido. Ensaios para caracterização de propriedades físicas, químicas e térmicas de amostras de amido e para correlacionar tamanhos de grânulo com características de síntese de amido em plantas de origem também podem ser realizados.

analysis-and-specification-of-starch-granule-size-distributions

Research

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Biochemistry

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