Name: Fotoimunoterapia infravermelha próxima para modelos de mouse de disseminação pleural (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-09T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 39 s
Description: Aprenda a avaliar os efeitos antitumorais da fotoimunoterapia infravermelha próxima (NIR-PIT) em modelo de disseminação pleural de câncer de pulmão em camundongos. Este método utiliza imagem por bioluminescência para monitorar respostas terapêuticas em tempo real.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nenhum

Todos os experimentos in vivo foram realizados em conformidade com o Guia de Cuidado e Uso de Recursos Laboratoriais de Animais do Comitê de Cuidados e Uso animal da Universidade de Nagoya (aprovação nº 2017-29438, #2018-30096, #2019-31234, #2020-20104). Camundongos nus homozigotos de seis semanas foram comprados e mantidos no Centro Animal da Universidade de Nagoya. Ao realizar o procedimento em camundongos, foram anestesiados com isoflurane (introdução: 4-5%, manutenção 2-3%); a pata foi pressionada com pinças para confirmar a profundidade da anestesia.
1. Conjugação de IR700 com mAb
<ol><li>Incubar mAb (1 mg, 6,8 nmol) com éster IR700 NHS (66,8 mgs, 34,2 nmol, 5 mmol/L em DMSO) em 0,1 mol/L Na2HPO4 (pH 8.6) a 15-25 °C para 1 h.</li>
	<li>Purifique a mistura usando uma coluna (por exemplo, Sephadex). Prepare e lave a coluna com PBS. Em seguida, aplique a mistura na coluna e colete a gota, que contém o anticorpo conjugado IR700 purificado. Este anticorpo conjugado IR700 é referido como o conjugado fotoensibilizador de anticorpos (APC).</li>
	<li>Meça a proteína e a concentração de IR700 no APC.<ol>
<li>Prepare as curvas de calibração para proteínas e IR700 usando um espectotômetro.</li>
		<li>Misture as concentrações padrão de albumina com um kit de ensaio de proteínas seguindo o protocolo do kit (ver Tabela de Materiais,Coomassie Brilliant Blue (CBB) coloração de proteínas). Meça a absorção da albumina em comprimento de onda de 595 nm e plote a curva de calibração (uma fórmula de aproximação linear) para a proteína usando a seguinte equação: y = ax + b (x: concentração, y: absorção).</li>
		<li>Obtenha curvas de calibração para IR700 com absorção a 690 nm usando o mesmo procedimento. A concentração padrão de IR700 é recomendada a 0,1-5 μM (0,1954-9,77 μg/mL).</li>
		<li>Meça a concentração de proteína e a concentração de IR700 no APC usando uma curva de calibração [x = (y-b)/a (x: concentração, y: absorvência)].</li>
		<li>Determine o número de corantes IR700 ligados por mAb com os resultados da concentração molar. NOTA: É importante determinar o número ideal de conjugação de moléculas de IR700 por molécula de mAb. Geralmente, aproximadamente três moléculas de IR700 ligadas a uma única molécula de mAb seriam eficazes tanto in vitro quanto in vivo. Muitos IR700 ligados por anticorpo (por exemplo, seis) torna mais fácil ficar preso no fígado durante experimentos in vivo. A razão de anticorpos ligados ao IR700 foi na faixa de 1:2-1:4. A proporção de IR700 foi reduzida, se necessário.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Realize a eletroforese de gel de sulfato-poliacrilamida de sódio de sódio (SDS-PAGE) como confirmação para a formação de um APC. Imagem do gel a 700 nm usando um imager fluorescente, e manche a proteína no gel usando um kit de coloração de proteínas seguindo o protocolo do kit (ver Tabela de Materiais, Mancha de proteína CBB).</li>
</ol>2. Geração de um modelo de disseminação pleural
<ol><li>Prepare células-alvo que expressam a luciferase e suspenda 1,0 × 106 células-alvo em 100 μL de soro fisiológico tamponado com fosfato (PBS) NOTA: Células cancerígenas intratorácicas, como câncer de pulmão e MPM, são adequadas como células-alvo. As células expressas da luciferase foram preparadas por transfecção genética da luciferase, e a alta expressão da luciferase foi confirmada após > 10 passagens celulares. As células foram cultivadas em meio suplementado com soro bovino fetal 10% e penicilina (100 UI/mL) e estreptomicina (100 mg/mL). O número de células foi ajustado de acordo com a taxa de crescimento do tumor e o tempo de tratamento (1,0. × 105-6,0 × 106 células/peso corporal).</li>
	<li>Prepare camundongos nus homozigotos femininos de 8-12 semanas de idade, com um peso corporal preferível de 19-21 g.</li>
	<li>Camundongos anestesiado durante o procedimento com isoflurane (introdução: 4-5%, manutenção 2-3%); pressione a cauda com pinças para confirmar que não há reação.</li>
	<li>Faça uma rolha com espuma de poliestireno e conecte a rolha à agulha de 30 G para que a ponta permaneça em 5 mm para evitar lesões pulmonares. Dobre a ponta da agulha com fórceps limpos ou pressionando-a contra um objeto duro limpo com 70% de EtOH para evitar pneumotórax(Figura 1). ATENÇÃO: Tenha cuidado para não se perfurar. Use fórceps para dobrar a agulha. Não segure a rolha ao anexá-la à agulha. É mais seguro enfiar a rolha antes de encher as células na seringa.</li>
	<li>Encha uma seringa (1 mL) com células-alvo e conecte uma agulha 30G com uma rolha.</li>
	<li>Desinfete o baú do animal com 70% de EtOH antes do procedimento.</li>
	<li>Fure uma agulha no peito do rato através do espaço intercostal. Devido à resistência ao bater contra as costelas naquele momento, a ponta da agulha se moveu para cima e para baixo. Após passar pelo espaço intercostal, pressione a seringa contra o mouse e injete 100 μL de células-alvo(Figura 2). NOTA: O rato respira profundamente quando a agulha entra corretamente na cavidade torácica. Com a dobra da ponta da agulha, pneumotórax e injeção inadequada de células no pulmão poderiam ser evitados. NOTA: Recomenda-se a punção na parede torácica direita para evitar o risco de punção cardíaca na parede.</li>
	<li>Enrole o mouse 2-3 vezes para espalhar as células por toda a cavidade torácica.</li>
	<li>Volte o mouse para uma gaiola limpa e quente e monitore até ambulatorial. Após o procedimento, o rato acordará da anestesia e se comportará normalmente.</li>
</ol>3. Medição da bioluminescência
NOTA: O software utilizado para aquisição de dados está listado na Tabela de Materiais.
<ol><li>Para confirmar a geração do modelo de disseminação pleural, avalie as imagens de bioluminescência todos os dias após injetar as células na cavidade torácica.</li>
	<li>Camundongos anestesiadores (passo 2.3) e injetam intraperitoneal com D-luciferina (15 mg/mL, 200 μL).</li>
	<li>Certifique-se de que o mouse está respirando normalmente antes e depois da imagem. Use um aquecedor, se necessário, para evitar hipotermia durante a anestesia.</li>
	<li>Dez minutos após a injeção, coloque o mouse no equipamento de medição de bioluminescência (BLI). Para aquisição de imagens, abra o Painel de Controle de Aquisição do software. Selecione Luminescent, Fotografiae Sobreposição (Figura 3).</li>
	<li>Definir o tempo de exposição como Auto. Coloque Binning como pequeno.</li>
	<li>Definir f/stop como 1 para luminescente e 8 para fotografia; f/stop controla a quantidade de luz recebida pelo detector de dispositivos acoplado por carregada.</li>
	<li>Defina o Campo de Visão como C.</li>
	<li>Uma vez que a amostra do mouse esteja pronta para a imagem, clique em Adquirir para aquisição de imagens. Foram selecionados camundongos com atividade luciferase suficiente para estudos posteriores. NOTA: Um modelo adequado de disseminação pleural mostra forte luminescência no local difuso no peito quando visto do lado ventral. Se as imagens bli não forem difundidas no tórax, e apenas no local da injeção, o tumor pode ser transplantado subcutâneamente.</li>
	<li>Depois de exibir a imagem, defina o formato de exibição como Radiance. Abra o painel Paleta de ferramentas (Figura 4A).</li>
	<li>Selecione ferramentas de ROI. Recomendamos usar o Círculo para variar a área bioluminescente em imagens.</li>
	<li>Clique em Medir ROIs para medir a intensidade bioluminescente da superfície(Figura 4B).</li>
	<li>Use configurar medição no canto esquerdo do painel de medição do ROI para selecionar os valores/informações necessários. Exporte esta tabela de dados como um arquivo .csv(Figura 4C).</li>
	<li>Use os valores do Fluxo Total (p/s) como quantificação de intensidade bioluminescente no arquivo .csv.</li>
</ol>4. Tomografia difusa de imagem de luminescência (DLIT)
NOTA: O software utilizado para aquisição de dados está listado na Tabela de Materiais.
<ol><li>Ligue o botão de raio-X armado.</li>
	<li>Anestesiar os camundongos (passo 2.3) e, em seguida, injetar D-luciferin (15 mg/mL, 200 μL) intraperitoneally nos camundongos. Para filmar o DLIT continuamente de 3,2 para 3,7, pule esta etapa.</li>
	<li>Dez minutos após a injeção, coloque o mouse no equipamento BLI.</li>
	<li>Abra o Painel de Controle de Aquisição do software. Selecione Luminescent, Fotografia, CT, Mouse Padrão-Ume Sobreposição. Outras configurações foram as mesmas de 3.4-3.6 (Figura 5A).</li>
	<li>Selecione o assistente de imagem no painel de controle de aquisição.</li>
	<li>Selecione Bioluminescência e, em seguida, DLIT (Figura 5B).</li>
	<li>Selecione Firefly como o comprimento de onda para medir(Figura 5C).</li>
	<li>Defina o sujeito de imagem como mouse,parâmetros de exposição como configurações automáticas,campo de visão como C-13,4 cme Altura do Sujeito como 1,5 cm (Figura 5D).</li>
	<li>Empurrar os raios-X será produzido quando energizado. Adquirir.</li>
	<li>Abra os dados de imagem sequencial do CT.</li>
	<li>Topografia de superfície aberta na paleta de ferramentas. Selecione Show (Figura 6A).</li>
	<li>Ajuste o limiar, pois o visor roxo mostra apenas a superfície do corpo(Figura 6B). Em seguida, selecione o Mouse De Assunto Nu e clique na Superfície de Gerar. Certifique-se de que o contorno do mouse está desenhado com precisão(Figura 6C).</li>
	<li>Abra a paleta de ferramentas,a guia Propriedades de Reconstrução 3D DLIT. Selecione propriedades de tecido como tecido do mouse e espectro de origem como Firefly (Figura 6D). Em seguida, abra a guia Analisar e confirme os dados de cada dado de comprimento de onda selecionado. Por fim, clique no botão Reconstruir (Figura 6E).</li>
	<li>Confirme a presença de BLI na cavidade torácica na imagem DLIT configurada.</li>
</ol>5. NIR-PIT para modelo de disseminação pleural in vivo
<ol><li>Meça a dose leve de laser de comprimento de onda de 690 nm (NIR) com um medidor de potência e ajuste a saída para 100 mW/cm2. NOTA: A luz laser é coerente com um tamanho preciso da bobina; assim, a energia leve dificilmente muda independentemente da distância dentro de 50 cm. Se houver muitos eventos adversos, como queimaduras, reduza a saída dentro da faixa de 40 mW/cm2.</li>
	<li>Limpe a cauda com 70% de EtOH e injete por via intravenosa APC (100 μg) através da veia da cauda 24 h antes da irradiação NIR. Aplique pressão no local da injeção para controlar o sangramento. NOTA: Ajuste o volume de APC para 50-200 μL para injeção.</li>
	<li>Anestesiar os ratos (passo 2.3), e colocá-los de costas. Para evitar a irradiação do NIR para o local não-alvo, proteja outros locais com papel alumínio(Figura 7A). Irradiar com luz NIR com laser de 100 J/cm2; se o tumor for disseminado de volta à barriga, a dose de irradiação nir-light pode ser dividida em múltiplas direções(Figura 7B). NOTA: Ajuste a dose em 30-150 J/cm2, dependendo dos resultados in vitro e eventos adversos, como queimaduras.</li>
	<li>Quando a irradiação NIR estiver completa e o mouse estiver acordado, devolva-o para a gaiola.</li>
	<li>Observe a BLI e meça o ROI ao longo do tempo (todos os dias) (Ver 3.2-3.12).</li>
	<li>Para imagens ex vivo, eutanize camundongos com dióxido de carbono 24 h após a injeção de APC, imediatamente antes da irradiação NIR.<ol>
<li>Para observar o interior do baú do rato, remova o tórax e corte as costelas e o esterno. Capture a imagem de fluorescência (700 nm) ao lado do controle sem administração APC. Em seguida, aplique D-luciferina (150 μg/mL) sobre o tórax exposto, e a BLI foi tomada (ver 3.2-3.7).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Xu, X., Lu, H., Lee, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+Infrared+Light+Triggered+Photo%2FImmuno-Therapy+Toward+Cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Bioengineering+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Near Infrared Light Triggered Photo/Immuno-Therapy Toward Cancers.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, (2020).</li>
<li>Mitsunaga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+cell-selective+in+vivo+near+infrared+photoimmunotherapy+targeting+specific+membrane+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cancer cell-selective in vivo near infrared photoimmunotherapy targeting specific membrane molecules.</a> Nature Medicine. 17, 1685-1691 (2011).</li>
<li>Kobayashi, H., Choyke, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-Infrared+Photoimmunotherapy+of+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Accounts+of+Chemical+Research%22%5BJournal%5D)">Near-Infrared Photoimmunotherapy of Cancer.</a> Accounts of Chemical Research. 52, 2332-2339 (2019).</li>
<li>Oseroff, A. R., Ohuoha, D., Hasan, T., Bommer, J. C., Yarmush, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody-targeted+photolysis%3A+Selective+photodestruction+of+human+T-cell+leukemia+cells+using+monoclonal+antibody-chlorin+e6+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Antibody-targeted photolysis: Selective photodestruction of human T-cell leukemia cells using monoclonal antibody-chlorin e6 conjugates.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 83, 8744-8748 (1986).</li>
<li>Mew, D., Wat, C. K., Towers, G. H., Levy, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoimmunotherapy%3A+treatment+of+animal+tumors+with+tumor-specific+monoclonal+antibody-hematoporphyrin+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Photoimmunotherapy: treatment of animal tumors with tumor-specific monoclonal antibody-hematoporphyrin conjugates.</a> Journal of Immunology. 130, 1473-1477 (1983).</li>
<li>Vrouenraets, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+meta-tetrahydroxyphenylchlorin-monoclonal+antibody+conjugates+for+photoimmunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of meta-tetrahydroxyphenylchlorin-monoclonal antibody conjugates for photoimmunotherapy.</a> Cancer Research. 59, 1505-1513 (1999).</li>
<li>Goff, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoimmunotherapy+and+biodistribution+with+an+OC125-chlorin+immunoconjugate+in+an+in+vivo+murine+ovarian+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Photoimmunotherapy and biodistribution with an OC125-chlorin immunoconjugate in an in vivo murine ovarian cancer model.</a> British Journal of Cancer. 70, 474-480 (1994).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoinduced+Ligand+Release+from+a+Silicon+Phthalocyanine+Dye+Conjugated+with+Monoclonal+Antibodies%3A+A+Mechanism+of+Cancer+Cell+Cytotoxicity+after+Near-Infrared+Photoimmunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Central+Science%22%5BJournal%5D)">Photoinduced Ligand Release from a Silicon Phthalocyanine Dye Conjugated with Monoclonal Antibodies: A Mechanism of Cancer Cell Cytotoxicity after Near-Infrared Photoimmunotherapy.</a> ACS Central Science. 4, 1559-1569 (2018).</li>
<li>Sato, K., Nagaya, T., Choyke, P. L., Kobayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+in+the+treatment+of+pleural+disseminated+NSCLC%3A+Preclinical+experience%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy in the treatment of pleural disseminated NSCLC: Preclinical experience.</a> Theranostics. 5, 698-709 (2015).</li>
<li>Nishinaga, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+Phototherapy+for+Malignant+Pleural+Mesothelioma%3A+Near-Infrared+Photoimmunotherapy+Targeting+Podoplanin%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Targeted Phototherapy for Malignant Pleural Mesothelioma: Near-Infrared Photoimmunotherapy Targeting Podoplanin.</a> Cells. 9, 1019(2020).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+prevents+lung+cancer+metastases+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy prevents lung cancer metastases in a murine model.</a> Oncotarget. 6, 19747-19758 (2015).</li>
<li>Sato, K., Nagaya, T., Mitsunaga, M., Choyke, P. L., Kobayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+for+lung+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy for lung metastases.</a> Cancer Letters. 365, 112-121 (2015).</li>
<li>Isobe, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+targeting+DLL3+for+small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy targeting DLL3 for small cell lung cancer.</a> EBioMedicine. 52, 102632(2020).</li>
<li>Nakamura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+in+a+transgenic+mouse+model+of+spontaneous+epidermal+growth+factor+receptor+%28EGFR%29-expressing+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy in a transgenic mouse model of spontaneous epidermal growth factor receptor (EGFR)-expressing lung cancer.</a> Molecular Cancer Therapeutics. 16, 408-414 (2017).</li>
<li>Nagaya, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+with+avelumab%2C+an+anti-programmed+death-ligand+1+%28PD-L1%29+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy with avelumab, an anti-programmed death-ligand 1 (PD-L1) antibody.</a> Oncotarget. 8, 8807-8817 (2017).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+selective+depletion+of+tumor-associated+regulatory+T+cells+with+near-infrared+photoimmunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Spatially selective depletion of tumor-associated regulatory T cells with near-infrared photoimmunotherapy.</a> Science Translational Medicine. 8, (2016).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+effectiveness+of+light+emitting+diodes+%28LEDs%29+and+lasers+in+near+infrared+photoimmunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Comparative effectiveness of light emitting diodes (LEDs) and lasers in near infrared photoimmunotherapy.</a> Oncotarget. 7, 14324-14335 (2016).</li>
<li>Sato, K., Choyke, P. L., Kobayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoimmunotherapy+of+Gastric+Cancer+Peritoneal+Carcinomatosis+in+a+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Photoimmunotherapy of Gastric Cancer Peritoneal Carcinomatosis in a Mouse Model.</a> PLoS One. 9, 113276(2014).</li>
<li>McLemore, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+intrapulmonary%2C+percutaneous+intrathoracic%2C+and+subcutaneous+models+for+the+propagation+of+human+pulmonary+and+nonpulmonary+cancer+cell+lines+in+athymic+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Comparison of intrapulmonary, percutaneous intrathoracic, and subcutaneous models for the propagation of human pulmonary and nonpulmonary cancer cell lines in athymic nude mice.</a> Cancer Research. 48, 2880-2886 (1988).</li>
<li>Manzotti, C., Audisio, R. A., Pratesi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+orthotopic+implantation+for+human+tumors+as+model+systems%3A+relevance+to+metastasis+and+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Importance of orthotopic implantation for human tumors as model systems: relevance to metastasis and invasion.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 11, 5-14 (1993).</li>
<li>Lwin, T. M., Hoffman, R. M., Bouvet, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+of+patient-derived+orthotopic+mouse+models+and+genetic+reporters+for+developing+fluorescence-guided+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Advantages of patient-derived orthotopic mouse models and genetic reporters for developing fluorescence-guided surgery.</a> Journal of Surgical Oncology. 118, 253-264 (2018).</li>
<li>Sordat, B. C. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSordat%2C+BCM+%22From+Ectopic+to+Orthotopic+Tumor+Grafting+Sites%3A+Evidence+for+a+Critical+Role+of+the+Host+Tissue+Microenvironment+for+the+Actual+Expression+of+the+Malignant+Phenotype%22">From Ectopic to Orthotopic Tumor Grafting Sites: Evidence for a Critical Role of the Host Tissue Microenvironment for the Actual Expression of the Malignant Phenotype</a>. , Humana Press. Cham. 43-53 (2017).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoimmunotherapy%3A+comparative+effectiveness+of+two+monoclonal+antibodies+targeting+the+epidermal+growth+factor+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Oncology%22%5BJournal%5D)">Photoimmunotherapy: comparative effectiveness of two monoclonal antibodies targeting the epidermal growth factor receptor.</a> Molecular Oncology. 8, 620-632 (2014).</li>
<li>Nakajima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+conjugate+and+light+dose+on+photo-immunotherapy+induced+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">The effects of conjugate and light dose on photo-immunotherapy induced cytotoxicity.</a> BMC Cancer. 14, 389(2014).</li>
<li>Nagaya, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+of+B-cell+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Oncology%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy of B-cell lymphoma.</a> Molecular Oncology. 10, 1404-1414 (2016).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+in+the+treatment+of+disseminated+peritoneal+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy in the treatment of disseminated peritoneal ovarian cancer.</a> Molecular Cancer Therapeutics. 14, 141-150 (2015).</li>
<li>Colin, D. J., Bejuy, O., Germain, S., Triponez, F., Serre-Beinier, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+and+monitoring+by+pet%2Fct+of+an+orthotopic+model+of+human+pleural+mesothelioma+in+athymic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Implantation and monitoring by pet/ct of an orthotopic model of human pleural mesothelioma in athymic mice.</a> Journal of Visualized Experiments. 2019, (2019).</li>
<li>Opitz, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+recurrence+model+of+malignant+pleural+mesothelioma+for+investigation+of+intrapleural+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cardio-Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Local recurrence model of malignant pleural mesothelioma for investigation of intrapleural treatment.</a> European Journal of Cardio-Thoracic Surgery. 31, 772-778 (2007).</li>
<li>Bunn, P. A., Kelly, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+chemotherapeutic+agents+prolong+survival+and+improve+quality+of+life+in+non-small+cell+lung+cancer%3A+a+review+of+the+literature+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">New chemotherapeutic agents prolong survival and improve quality of life in non-small cell lung cancer: a review of the literature and future directions.</a> Clinical Cancer Research. 4, 1087-1100 (1998).</li>
<li>Astoul, P., Wang, X., Hoffman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-like+nude-mouse+and+scid-mouse+models+of+human+lung+and+pleural+cancer+%28review%29%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Patient-like nude-mouse and scid-mouse models of human lung and pleural cancer (review).</a> International Journal of Oncology. 3, 713-718 (1993).</li>
<li>Yamaguchi, H., Pantarat, N., Suzuki, T., Evdokiou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+photoimmunotherapy+using+a+small+protein+mimetic+for+HER2-overexpressing+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Near-infrared photoimmunotherapy using a small protein mimetic for HER2-overexpressing breast cancer.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20, (2019).</li>
<li>Jing, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+and+selective+elimination+of+glioblastoma+stem+cells+with+theranostic+Near-Infrared-Labeled+CD133-Specific+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Imaging and selective elimination of glioblastoma stem cells with theranostic Near-Infrared-Labeled CD133-Specific antibodies.</a> Theranostics. 6, 862-874 (2016).</li>
<li>Burley, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+photoimmunotherapy+targeting+EGFR-Shedding+new+light+on+glioblastoma+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Near-infrared photoimmunotherapy targeting EGFR-Shedding new light on glioblastoma treatment.</a> International Journal of Cancer. 142, 2363-2374 (2018).</li>
<li>Nagaya, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near+infrared+photoimmunotherapy+using+a+fiber+optic+diffuser+for+treating+peritoneal+gastric+cancer+dissemination%5BTitle%5D)+AND+%22Gastric+Cancer%22%5BJournal%5D)">Near infrared photoimmunotherapy using a fiber optic diffuser for treating peritoneal gastric cancer dissemination.</a> Gastric Cancer. 22, 463-472 (2019).</li>
<li>Nagaya, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+near+infrared+photoimmunotherapy+using+a+fiber+optic+diffuser+for+peritoneal+dissemination+of+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Science%22%5BJournal%5D)">Endoscopic near infrared photoimmunotherapy using a fiber optic diffuser for peritoneal dissemination of gastric cancer.</a> Cancer Science. 109, 1902-1908 (2018).</li>
<li>Harada, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+photoimmunotherapy+with+galactosyl+serum+albumin+in+a+model+of+diffuse+peritoneal+disseminated+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Near-infrared photoimmunotherapy with galactosyl serum albumin in a model of diffuse peritoneal disseminated ovarian cancer.</a> Oncotarget. 7, 79408-79416 (2016).</li>
<li>Journals, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JNCI+Journal+of+the+National+Cancer+Institute+Way+to+Better+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">JNCI Journal of the National Cancer Institute Way to Better DNA.</a> Annals of Internal Medicine. 37, 1-9 (2008).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Neste estudo, demonstramos um método de medição do efeito terapêutico do NIR-PIT no modelo de disseminação pleural do MPM. A matança celular altamente seletiva foi realizada com NIR-PIT; assim, o tecido normal quase não foi danificado23,24,25. Com este tipo de matança celular seletiva, o NIR-PIT demonstrou ser seguro nos modelos disseminados9,2...

O câncer continua sendo uma das principais causas de mortalidade, apesar de décadas de pesquisa. Uma das razões é que a radioterapia e a quimioterapia são técnicas altamente invasivas, o que pode limitar seus benefícios terapêuticos. Terapias de alvo celular ou molecular, que são técnicas menos invasivas, estão recebendo maior atenção. Fotoimmunoterapia é um método de tratamento que aumenta sinérgicamente o efeito terapêutico combinando imunoterapia e fototerapia. A imunoterapia aumenta a imunidade tumoral aumentando a imunogenicidade do microambiente tumoral e reduzindo a supressão imunoregulatória, resultando na destruição de tumores no corpo. A fototerapia destrói tumores primários com uma combinação de fotosensibilizadores e raios de luz, e antígenos específicos do tumor liberados das células tumorais aumentam a imunidade tumoral. Os tumores podem ser tratados seletivamente usando fotosensibilizadores, pois são específicos e seletivos para as células-alvo. A modalidade de fototerapia inclui terapia fotodinâmica (TT), terapia fototérmica (PTT) e terapias à base de fotoquímica1.
A fotoimuneterapia quase infravermelha (NIR-PIT) é um método recentemente desenvolvido de fototerapia antitumoral que combina terapia fotoquímica e imunoterapia1,2. NIR-PIT é uma terapia molecularmente direcionada que tem como alvo moléculas específicas da superfície celular através da conjugação de um corante de fttallocianina de silício quase infravermelho, IRdye 700DX (IR700), para um anticorpo monoclonal (mAb). A membrana celular da célula alvo é destruída após a irradiação com luz NIR (690 nm)3.
O conceito de usar terapia leve direcionada combinando fotosensibilizadores convencionais e anticorpos ou PDT direcionado tem mais de três décadasde idade 4,5. Estudos anteriores tentaram atingir agentes convencionais do PDT conjugando-os a anticorpos. No entanto, houve um sucesso limitado porque esses conjugados estavam presos no fígado, devido à hidroofobidade dos fotosensibilizadores6,7. Além disso, o mecanismo do NIR-PIT é completamente diferente do do PDT convencional. Fotosensibilizadores convencionais geram estresse oxidativo que resulta de uma conversão de energia que absorve energia leve, desloca para um estado animado, transita para o estado terrestre e causa apoptose. No entanto, o NIR-PIT causa necrose rápida ao destruir diretamente a membrana celular, agregando fotosensibilizadores na membrana através de uma reação fotoquímica8. NIR-PIT é superior ao PDT convencional de muitas maneiras. Fotosensibilizadores convencionais têm coeficientes de baixa extinção, exigindo a fixação de um grande número de fotosensibilizadores a uma única molécula de anticorpos, reduzindo potencialmente a afinidade vinculativa. A maioria dos fotosensibilizadores convencionais são hidrofóbicos, dificultando a vinculação dos fotosensibilizadores a anticorpos sem comprometer sua imunoreatividade ou acúmulo de alvos in vivo. Fotoensibilizadores convencionais normalmente absorvem luz na faixa visível, reduzindo a penetração de tecidos.
Vários estudos sobre nir-PIT direcionados a tumores intratoráculos, como câncer de pulmão e mesotelioma pleural maligno (MPM) foram relatados9,10,11,12,13,14,15,16,17. No entanto, apenas alguns relatórios descreveram a eficácia do NIR-PIT nos modelos de MPM disseminados pleural ou câncer de pulmão9,10,11,12. Os modelos de xenoenxerto tumor subcutâneo são considerados modelos de tumor padrão e atualmente são amplamente utilizados para avaliar os efeitos antitumorais das novas terapias18. No entanto, o microambiente tumoral subcutâneo não é permissivo para o desenvolvimento de uma estrutura tecidual adequada ou uma condição que recapitula adequadamente um verdadeiro fenótipo maligno19,20,21,22. Idealmente, os modelos de doenças ortotópicas devem ser estabelecidos para uma avaliação mais precisa dos efeitos antitumorais.
Aqui, demonstramos um método de avaliação de eficácia em um modelo de camundongo de câncer de pulmão disseminado pleural, que foi tratado usando NIR-PIT. Um modelo de camundongo de disseminação pleural é gerado pela injeção de células tumorais na cavidade torácica e confirmado usando luminescência de luciferase. O camundongo foi tratado com uma injeção intravenosa de mAb conjugada com irrasiagem IR700 e NIR no peito. O efeito terapêutico foi avaliado por luminescência de luciferase.

<table><tbody><tr><td>0,25 w / v% Tripsina-1mmol / l EDTA 4Na Solução com Fenol Vermelho</td><td>Wako</td><td>209-016941</td><td>para cultura de células</td></tr><tr><td>Seringa de 1 mL</td><td>TERUMO</td><td>SS-01T</td><td>para experimento em camundongos</td></tr><tr><td>Agulha 30G</td><td>Nipro</td><td>1907613</td><td>para experimento em camundongos</td></tr><tr><td>BALB/cSlc-nu/nu</td><td>Japão SLC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit de coloração azul colidal</td><td>Invitrogen</td><td>LC6025</td><td>uso para coloração de proteína em gel</td></tr><tr><td>Coomassie (bradford) Plus ensaio de proteína</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc (Waltham, MA, EUA)</td> <td>PI-23200</td><td>para medir a concentração de APC</td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td> <td>Wako</td><td>043-07216</td><td>uso para conjugação de IR700</td></tr><tr><td>D-Luciferina (sal de potássio)</td> <td>Cayman Chemical</td><td>14681</td><td>para imagens de bioluminescência e DLIT</td></tr><tr><td>GraphPad Prism7</td><td>Software GraphPad</td><td>para análise estatística</td>Image Studio Li-Cor Biosciences para análise de imagem fluorescente de 700 nm IRDye 700DX Ester Infrared Dye LI-COR Bioscience (Lincoln, NE, EUA)929-70011 isoflurano Wako 095-06573 para camundongos anestesia IVIS Spectrum CT PerkinElmer para captura <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> imagem bioluminescente e DLIT</td></tr><tr><td>Living Image</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td>para análise de imagem bioluminescente e DLIT</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>SIGMA-ALDRICH (St. Louis, MO, EUA)</td> <td>S9763</td><td>uso para conjugação de IR700</td></tr><tr><td>NIR Laser</td><td>Changchun New Industries Optoelectronics Technology</td><td>MRL-III-690R</td><td>para irradiação NIR</td></tr><tr><td>Novex WedgeWell 4 a 20%, Tris-Glicina, 1,0 mm, Mini Gel de Proteína, 12 poços</td><td>Invitrogen</td><td>XP04202BOX</td><td>uso para SDS-PAGE</td></tr><tr><td>NuPAGE LDS Sample Buffer (x4)</td><td>Invitrogen</td><td>NP0007</td><td>uso para SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Medidor de potência óptica</td><td>Thorlabs (Newton, NJ, EUA)</td><td>PM100</td><td>para medir a saída do laser NIR&nbsp;</td></tr><tr><td>PBS(-)</td><td>Wako</td><td>166-23555</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de imagem Pearl Trilogy</td><td>Li-Cor Biosciences</td><td></td><td>para captura de imagem fluorecente de 700 nm</td></tr><tr><td>Solução de penicilina-estreptomicina (x100)</td><td>Wako</td><td>168-23191</td><td>para cultura de células</td></tr><tr><td>Cloridrato de puromicina</td><td>ThermoFisher</td><td>A1113803</td><td>para transfecção de luciferase</td></tr><tr><td>RediFect Red-Fluc-Puromycin Lentiviral Prticles</td><td>PerkinElmer</td><td>CLS960002</td><td>para transfecção de luciferase</td></tr><tr><td>RPMI-1640 com L-glutamina e Vermelho de Fenol</td><td>Wako</td><td>189-02025</td><td>para cultura de células</td></tr><tr><td>Sephadex G25 column (PD-10)&nbsp;</td><td>GE Healthcare (Piscataway, NJ, EUA)</td><td>17-0851-01</td><td>uso para conjugação de IR700</td></tr><tr><td>UV-1900i</td><td>Shimadzu</td><td></td><td>para medir a concentração de APC</td></tr></tbody></table>

fotoimunoterapia infravermelha próxima para modelos de mouse de disseminação pleural

Near Infrared Photoimmunotherapy for Mouse Models of Pleural Dissemination

A eficácia da fotoimmunoterapia pode ser avaliada com mais precisão com um modelo de rato ortotópico do que com um subcutâneo. Um modelo de disseminação pleural pode ser utilizado para a avaliação de métodos de tratamento para doenças intratorácicas, como câncer de pulmão ou mesotelioma pleural maligno.
A fotoimuneterapia quase infravermelha (NIR-PIT) é uma estratégia de tratamento de câncer recentemente desenvolvida que combina a especificidade dos anticorpos alvo de tumores com toxicidade causada por um fotoabsorto (IR700Dye) após a exposição à luz NIR. A eficácia do NIR-PIT tem sido relatada usando vários anticorpos; no entanto, apenas alguns relatórios mostraram o efeito terapêutico dessa estratégia em um modelo ortotópico. No presente estudo, demonstramos um exemplo de avaliação da eficácia do modelo de câncer de pulmão disseminado pleural, que foi tratado utilizando NIR-PIT.

Anticorpo anti-podoplanina NZ-1 foi conjugado com IR700 para gerar NZ-1-IR700. Confirmamos a vinculação de NZ-1 e IR700 em um SDS-PAGE(Figura 8). A luciferase-expressing H2373 (H2373-luc) foi preparada por células de mesotelioma malignas transfecionantes (H2373) com um gene luciferase10.
Nós anestesiamos camundongos nus homozigote atímicos de 8-12 semanas de idade e injetamos 1 × 10 células H2373-luc na cavidade torácica. O dia d...

A fotoimunoterapia quase infravermelha (NIR-PIT) é uma estratégia terapêutica emergente do câncer que utiliza um conjugado de anticorpos fotoabsorto (IR700Dye) e luz NIR para destruir células cancerosas. Aqui, apresentamos um método para avaliar o efeito antitumoral do NIR-PIT em um modelo de camundongo de câncer de pulmão disseminado pleural e mesotelioma pleural maligno usando bioluminescência por imagem.

Fotoimunoterapia infravermelha próxima para modelos de mouse de disseminação pleural

The efficacy of photoimmunotherapy can be evaluated more accurately with an orthotopic mouse model than with a subcutaneous one. A pleural dissemination ...

Este método pode ser usado para avaliar os efeitos terapêuticos do NIR-PIT em tumores torácicos em um modelo tumoral clinicamente relevante. Os procedimentos NIR-PIT utilizando o modelo de câncer disseminado pleural são fáceis de entender e realizar. Para configurar um modelo de disseminação do mouse, use espuma de poliestireno para fazer uma rolha e desinfete-a com 70% de etanol.Coloque a agulha na rolha com a ponta estendendo cinco milímetros para fora da rolha. Dobre a ponta de uma agulha de calibre 30 com fórceps limpos ou contra um objeto duro limpo com 70% de etanol, e encha uma seringa com uma vez 10 para as seis células tumorais alvo em 100 microlitres de PBS. Confirme a falta de resposta ao reflexo do pedal em um anestinado, de 19 a 21 gramas, de oito a 12 semanas de idade, feminino, homozigote, rato nude atímico.Insira a agulha no peito através do espaço intercostal, movendo a agulha para cima e para baixo para evitar entrar em contato com as costelas. Quando a ponta tiver passado pelo espaço intercostal, posicione a seringa para que ela seja pressionada contra o mouse e injete todo o volume de células-alvo. Após a injeção, role o mouse duas a três vezes para espalhar as células por toda a cavidade torácica, e devolva o rato à sua gaiola com monitoramento até a recuperação completa.24 horas após a injeção celular e todos os dias depois, injete os camundongos injetados por células tumorais anestesiadas com 200 microlitres de 15 miligramas por mililitro de D-luciferina. Após 10 minutos, coloque os ratos em um imager de bioluminescência e abra o Painel de Controle de Aquisição no software imager. Selecione Luminescent, Photograph e Overlay.Defina o Tempo de Exposição para Auto, o Binning para Small, o F/Stop para um para Luminescent e para oito para Photograph, e o Field of View to C.Click Acquire para imagem da bioluminescência. Defina o formato de exibição para radians e selecione o círculo das ferramentas regionais de interesse no painel Paleta de ferramentas. Clique em Medir Regiões de Interesse para medir a intensidade bioluminescente da superfície e use Configurar medição para selecionar os valores relevantes para o experimento.Exporte esta tabela de dados como um arquivo csv. Em seguida, use os valores totais de fluxo para a quantificação da intensidade bioluminescente no arquivo. Antes de realizar fototerapia quase infravermelha dos camundongos injetados pelo tumor, use um medidor de energia para medir a dose leve de um laser de comprimento de onda de 690 nanômetros e ajustar a saída para 100 miliwatts por centímetro quadrado.24 horas antes do tratamento, injetou por via intravenosa 100 microgramas de fotoensitizer de anticorpos conjugados em 50 a 200 microlitres de PBS através da veia traseira do animal injetado pelo tumor. No dia do tratamento de fototerapia, coloque o camundongo anestinado injetável, carregado de tumor, na posição supina, e proteja os locais não alvo com papel alumínio. Quando todos os escudos forem colocados, use um laser de 100 joules por centímetro quadrado para irradiar a cavidade torácica com luz quase infravermelha por cerca de 30 segundos.Quando a irradiação estiver completa e o rato acordar, devolva o animal para sua gaiola, e meça a bioluminescência diariamente como demonstrado. Nesta análise representativa, a conjugação de anticorpo anti-podoplanina com IR700 foi confirmada pela análise SDS-PAGE. Após a injeção de células tumorais, a imagem de bioluminescência e a tomografia de imagem de luminescência difusa devem ser realizadas para determinar quais camundongos expressam atividade de luciferase suficiente na cavidade torácica para estudos posteriores.No quinto dia após a injeção, o anticorpo anti-podoplanina IR700-injected ratos demonstram alta fluorescência IR700 e atividade luciferase em tumores torácicos, indicando que anticorpos conjugados ir700 injetados por via intravenosa atingem locais de tumor pleural disseminados. Notavelmente, camundongos disseminados pleural tratados com fotoimuneterapia quase infravermelha demonstram uma atividade de luciferase reduzida, enquanto as unidades de luz relativa no grupo controle apresentam um aumento gradual da intensidade. Uma vez que a energia de irradiação NIR necessária depende da linha celular e anticorpos, certifique-se de verificar as condições com antecedência in vitro.

near-infrared-photoimmunotherapy-for-mouse-models-pleural

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

A terapia fotodinâmica (PDT) é um método não invasivo e não cirúrgico para o tratamento do câncer de pulmão. Os fotossensibilizadores se acumulam seletivamente no tecido tumoral e levam à morte das células tumorais na presença de oxigênio e no comprimento de onda adequado da luz. Este vídeo descreve a análise de eficácia antitumoral in vivo usando fotossensibilizador contendo nanopartículas em um camundongo portador de tumor, para determinar o potencial fototóxico do fotossensibilizador.

Análise de eficácia antitumoral in vivo da PDT: uma técnica para determinar o potencial fototóxico de um fotossensibilizador em camundongos portadores de tumor

Este vídeo demonstra um método para gerar um modelo de disseminação pleural em camundongos injetando suspensão de células de câncer de pulmão na cavidade torácica de um camundongo imunodeficiente.

Estabelecendo um modelo de camundongo de câncer de pulmão disseminado pleural

Este vídeo demonstra uma técnica de fotoimunoterapia de infravermelho próximo para tratar o câncer de pulmão em um modelo de camundongo projetado exibindo células tumorais que expressam luciferase. Ao injetar um conjugado anticorpo-fotossensibilizador (APC) que se liga a antígenos específicos nas células tumorais, o camundongo é exposto à radiação infravermelha próxima, induzindo alterações fotoquímicas no APC e levando à morte necrótica das células tumorais ligadas. A eficácia do tratamento é...

Uma técnica de fotoimunoterapia no infravermelho próximo para tratar o câncer de pulmão em um modelo murino

Este vídeo demonstra uma técnica para remover seletivamente células específicas de uma cultura de células 3D mista por meio de fotoimunoterapia de infravermelho próximo. Neste método, as células-alvo são identificadas com precisão usando um anticorpo conjugado com um fotoabsorvedor NIR. A irradiação subsequente com luz infravermelha induz a morte celular, eliminando efetivamente as células-alvo da cultura 3D.

Fotoimunoterapia de infravermelho próximo para eliminação celular direcionada em culturas 3D mistas

Eliminar células específicas sem danificar outras células é extremamente difícil, especialmente em tecidos estabelecidos, mas há uma necessidade urgente de um método de eliminação celular no campo da engenharia de tecidos. Aqui, apresentamos um método para eliminação celular específica de uma cultura de células 3D mista usando fotoimunoterapia no infravermelho próximo (NIR-PIT).

Eliminação celular seletiva de Cultura 3D Mixed usando uma técnica de infravermelho próximo Photoimmunotherapy

Pesquisa sobre estratégias de tratamento para os teratomas de células-tronco derivadas de pluripotentes é importante para a tradução clínica de terapia de células-tronco. Aqui, descrevemos um protocolo para, em primeiro lugar, gerar células-tronco derivadas os teratomas em camundongos e, depois, para seletivamente alvo e tratar estes tumores in vivo usando uma difusora de pequenos animais.

Tratamento orientado e seletivo de Teratomas células-tronco derivadas de pluripotentes usando radiação de feixe externo em um modelo animal de pequeno

Este artigo descreve a geração de um modelo de camundongo ortotópico de mesotelioma pleural humano a implantação de células mesotelioma H2052/484 na cavidade pleural de camundongos atímicos imunocomprometidos. O monitoramento longitudinal do desenvolvimento de tumores intrapleural foi avaliado por imagens multimodais não invasivas [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose positron e imagens de tomografia computadorizada.

Implantação e monitoramento por PET/CT de um modelo ortotópico de mesotelioma pleural humano em camundongos atímicos

Este protocolo apresenta um conjunto de experimentos adotados para a avaliação de peptídeos anticâncer fotocomutáveis, que podem ser utilizados na triagem pré-clínica destes compostos. Isso inclui a avaliação da citotoxicidade em culturas de células 2D e 3D, a avaliação da eficiência de fotoisomerização ex vivo (tecido modelo) e a eficácia in vivo .

Avaliação in vitro e in vivo de compostos biologicamente ativos fotocontrolados - potenciais candidatos a fármacos para a fotofarmacologia do câncer

Apresentamos um método para estudo da redisseminação de células tumorais a partir de metástases pulmonares envolvendo um protocolo cirúrgico para fotoconversão seletiva de metástases pulmonares, seguido da identificação de células tumorais redisseminadas em órgãos terciários.

Rastreando a Disseminação de Células Tumorais a partir de Metástases Pulmonares Usando Fotoconversão

A tradução dos achados da microscopia intravital é desafiada por sua penetração em profundidade rasa no tecido. Aqui, descrevemos um modelo de camundongo com câmara de janela dorsal que permite o co-registro de microscopia intravital e modalidades de imagem clinicamente aplicáveis (por exemplo, TC, RM) para correlação espacial direta, potencialmente simplificando a tradução clínica dos achados da microscopia intravital.

Um modelo de camundongo tumoral de câmara de janela de dobra cutânea dorsal para microscopia intravital combinada e ressonância magnética na pesquisa translacional do câncer

Este protocolo apresenta técnicas e metodologia necessárias para terapia hipertérmica direcionada em modelos de tumores sólidos. A abordagem aproveita a conversão fototérmica da luz infravermelha próxima por nanobastões de ouro injetados intratumoralmente para induzir o aquecimento localizado dentro do microambiente tumoral.

Induzindo hipertermia leve direcionada em modelos de tumores murinos por meio da conversão fototérmica de luz infravermelha próxima por nanobastões de ouro intratumorais

Aprenda a avaliar os efeitos antitumorais da fotoimunoterapia infravermelha próxima (NIR-PIT) em modelo de disseminação pleural de câncer de pulmão em camundongos. Este método utiliza imagem por bioluminescência para monitorar respostas terapêuticas em tempo real.

Fotoimunoterapia infravermelha próxima para modelos de mouse de disseminação pleural

Explorar mais vídeos