Name: Efeitos ecotoxicológicos de microplásticos no desenvolvimento de embriões de aves por eclosão sem casca de ovo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: Aprenda a técnica de eclosão sem casca de ovo para avaliar os efeitos ecotoxicológicos de microplásticos no desenvolvimento de embriões de aves. Este método inovador melhora a confiabilidade dos estudos de poluição ambiental.

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Este trabalho foi apoiado por projetos-chave de pesquisa e desenvolvimento na Região Autônoma de Xinjiang Uygur (2017B03014, 2017B03014-1, 2017B03014-2, 2017B03014-3).

1. Preparação antes da exposição
<ol><li>Selecione ovos de codorna fertilizados nascidos no mesmo dia para o teste de exposição.</li>
	<li>Selecione ovos de codorna com pesos semelhantes. Cada ovo de codorna fertilizado é de cerca de 10-12 g.</li>
	<li>Limpe totalmente todos os ovos de codorna fertilizados de fezes externas e outros detritos.</li>
	<li>Esterilize cada ovo de codorna fertilizado pré-eclodido e os ovos a serem usados (Escolha ovos com forma de casca semelhante, especialmente a ponta do ovo) com uma solução antibiótica (penicilina e estreptomicina, 1:1000, temperatura ambiente). Esterilize a incubadora com 75% de etanol.</li>
	<li>Abra os ovos com a extremidade sem corte de uma broca dentária, deixando a casca de ovo na ponta para uso posterior. Antes de transferir os óvulos fertilizados, o conteúdo dos ovos é derramado. Isto é para manter a umidade da casca de ovo. O diâmetro de abertura do ovo foi de cerca de 3 cm. NOTA: Para reduzir o dano ao embrião de codorna, use uma broca dentária para abrir a extremidade contundente do ovo e deixar a rachadura o mais lisa possível.</li>
	<li>Após a esterilização, coloque os ovos de codorna fertilizados em uma incubadora de 38 °C com 60% de umidade para 24-48 h. Certifique-se de que a extremidade cega do ovo de codorna se destrua.</li>
	<li>Durante a incubação de ovos de codorna fertilizados, esterilize as ferramentas necessárias nos experimentos subsequentes em um pote de esterilização. Essas ferramentas incluem plástico, um béquer, água estéril, pontas de pipeta, tesoura reta cirúrgica, pinças e uma colher. NOTA: Use um filme com tolerância à temperatura alta o suficiente para evitar problemas com a esterilização de alta temperatura.</li>
</ol>2. Chocar o ovo de codorna sem casca
<ol><li>Transfira os ovos de codorna fertilizados pré-eclodidos da incubadora para um banco limpo e coloque-os no recipiente para estabilizá-los por cerca de 1-2 min.</li>
	<li>Use uma tesoura (tesoura reta cirúrgica de 12,5 cm) para fazer um pequeno orifício (diâmetro de 3 mm) no eixo central dos ovos de codorna fertilizados pré-eclodidos e cortar 1-2 cm de abertura pequena. Transfira cuidadosamente a clara de ovo e a gema dos ovos de codorna fertilizados para a casca de ovo cortada. NOTA: Ao cortar uma pequena abertura com uma tesoura, evite tocar a gema de ovos de codorna.</li>
	<li>Adicione a solução de controle (sem MPs) e a solução exposta de diferentes massas (0,1, 0,2 e 0,3 mg) de microplásticos com três tamanhos de partículas (100, 200 e 500 nm) ao conteúdo do ovo por pipeta. Ao mesmo tempo, adicione 1 gota de penicilina e 1 gota de estreptomicina com uma seringa de 1 mL.</li>
	<li>Cubra a abertura da casca de ovo com o filme esterilizado (passo 1.6).</li>
	<li>De acordo com a etapa 2.1-2.4, trate todos os ovos de codorna fertilizados.</li>
	<li>Coloque os embriões de codorna transferidos na incubadora de 38 °C com 60% de umidade durante o período necessário. Neste experimento, use um ângulo de rotação de ovos de ±30°. Vire os ovos uma vez por hora. NOTA: A transferência deve ser o mais rápida possível, o que requer mais prática na fase inicial.</li>
</ol>3. Coleta de amostras
<ol><li>Após sete dias de cultura, remova embriões bem desenvolvidos observados a olho nu da gema e lave com solução tamponada de fosfato (PBS).</li>
	<li>Seque a solução excedente fora do embrião limpo com papel absorvente e pese em uma placa de Petri limpa.</li>
	<li>Abra toda a cavidade torácica, separe o fígado e o coração das vísceras com alicates de nariz de agulha, e coloque em tubos de centrífuga de 1,5 mL imediatamente após a clareira.</li>
	<li>Registoso o peso em um equilíbrio eletrônico e calcule o índice hepatossomático (HIS = peso hepático / peso corporal x 100). Meça o comprimento do esterno e do corpo.</li>
	<li>Com base nos indicadores acima, avalie o impacto dos PMs no desenvolvimento embrionário. NOTA: A qualidade do embrião aqui refere-se à qualidade da remoção da gema.</li>
</ol>4. Análise de dados
<ol><li>Relatar os dados experimentais na forma de erro padrão de ± média (SEM).</li>
	<li>Use a análise de variância de fator único para comparar os meios de múltiplos grupos de amostras. O valor de diferença significativo foi α = 0,05.</li>
</ol>

<ol><li>Geyer, R., Jambeck, J. R., Law, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production%2C+use%2C+and+fate+of+all+plastics+ever+made%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Production, use, and fate of all plastics ever made.</a> Science Advances. 3 (7), 5(2017).</li>
<li>Thompson, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lost+at+sea%3A+Where+is+all+the+plastic%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Lost at sea: Where is all the plastic.</a> Science. 304 (5672), 838-838 (2004).</li>
<li>Barletta, M., Lima, A. R. A., Costa, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution%2C+sources+and+consequences+of+nutrients%2C+persistent+organic+pollutants%2C+metals+and+microplastics+in+South+American+estuaries%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Distribution, sources and consequences of nutrients, persistent organic pollutants, metals and microplastics in South American estuaries.</a> Science of the Total Environment. 651, 1199-1218 (2019).</li>
<li>Eriksson, C., Burton, H., Fitch, S., Schulz, M., vanden Hoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Daily+accumulation+rates+of+marine+debris+on+sub-Antarctic+island+beaches%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Pollution+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Daily accumulation rates of marine debris on sub-Antarctic island beaches.</a> Marine Pollution Bulletin. 66 (1-2), 199-208 (2013).</li>
<li>Zhang, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+offshore+sediment+in+the+Yellow+Sea+and+East+China+Sea%2C+China%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Pollution%22%5BJournal%5D)">Microplastics in offshore sediment in the Yellow Sea and East China Sea, China.</a> Environmental Pollution. 244, 827-833 (2019).</li>
<li>Obbard, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+warming+releases+microplastic+legacy+frozen+in+Arctic+Sea+ice%5BTitle%5D)+AND+%22Earths+Future%22%5BJournal%5D)">Global warming releases microplastic legacy frozen in Arctic Sea ice.</a> Earths Future. 2 (6), 315-320 (2014).</li>
<li>Van Cauwenberghe, L., Vanreusel, A., Mees, J., Janssen, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastic+pollution+in+deep-sea+sediments%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Pollution%22%5BJournal%5D)">Microplastic pollution in deep-sea sediments.</a> Environmental Pollution. 182, 495-499 (2013).</li>
<li>Wilcox, C., Van Sebille, E., Hardesty, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Threat+of+plastic+pollution+to+seabirds+is+global%2C+pervasive%2C+and+increasing%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Threat of plastic pollution to seabirds is global, pervasive, and increasing.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (38), 11899-11904 (2015).</li>
<li>Wright, S. L., Thompson, R. C., Galloway, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physical+impacts+of+microplastics+on+marine+organisms%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Pollution%22%5BJournal%5D)">The physical impacts of microplastics on marine organisms: A review.</a> Environmental Pollution. 178, 483-492 (2013).</li>
<li>Ferreira, G. V. B., Barletta, M., Lima, A. R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+estuarine+resources+by+top+predator+fishes.+How+do+ecological+patterns+affect+rates+of+contamination+by+microplastics%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Use of estuarine resources by top predator fishes. How do ecological patterns affect rates of contamination by microplastics.</a> Science of the Total Environment. 655, 292-304 (2019).</li>
<li>Provencher, J. F., Vermaire, J. C., Avery-Gomm, S., Braune, B. M., Mallory, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Garbage+in+guano%3F+Microplastic+debris+found+in+faecal+precursors+of+seabirds+known+to+ingest+plastics%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Garbage in guano? Microplastic debris found in faecal precursors of seabirds known to ingest plastics.</a> Science of the Total Environment. 644, 1477-1484 (2018).</li>
<li>Baulch, S., Perry, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+the+impacts+of+marine+debris+on+cetaceans%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Pollution+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Evaluating the impacts of marine debris on cetaceans.</a> Marine Pollution Bulletin. 80 (1-2), 210-221 (2014).</li>
<li>Rochman, C. M., Kurobe, T., Flores, I., Teh, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+warning+signs+of+endocrine+disruption+in+adult+fish+from+the+ingestion+of+polyethylene+with+and+without+sorbed+chemical+pollutants+from+the+marine+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Early warning signs of endocrine disruption in adult fish from the ingestion of polyethylene with and without sorbed chemical pollutants from the marine environment.</a> Science of the Total Environment. 493, 656-661 (2014).</li>
<li>Mattsson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+damage+and+behavioural+disorders+in+fish+induced+by+plastic+nanoparticles+delivered+through+the+food+chain%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Brain damage and behavioural disorders in fish induced by plastic nanoparticles delivered through the food chain.</a> Scientific Reports. 7, 7(2017).</li>
<li>Brown, D. M., Wilson, M. R., MacNee, W., Stone, V., Donaldson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-dependent+proinflammatory+effects+of+ultrafine+polystyrene+particles%3A+A+role+for+surface+area+and+oxidative+stress+in+the+enhanced+activity+of+ultrafines%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+and+Applied+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Size-dependent proinflammatory effects of ultrafine polystyrene particles: A role for surface area and oxidative stress in the enhanced activity of ultrafines.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 175 (3), 191-199 (2001).</li>
<li>Salvati, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+and+theoretical+comparison+of+intracellular+import+of+polymeric+nanoparticles+and+small+molecules%3A+toward+models+of+uptake+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine-Nanotechnology+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Experimental and theoretical comparison of intracellular import of polymeric nanoparticles and small molecules: toward models of uptake kinetics.</a> Nanomedicine-Nanotechnology Biology and Medicine. 7 (6), 818-826 (2011).</li>
<li>Frohlich, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+of+polystyrene+nanoparticles+of+different+sizes+on+lysosomal+function+and+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Particle+and+Fibre+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Action of polystyrene nanoparticles of different sizes on lysosomal function and integrity.</a> Particle and Fibre Toxicology. 9, 13(2012).</li>
<li>Bexiga, M. G., Kelly, C., Dawson, K. A., Simpson, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNAi-mediated+inhibition+of+apoptosis+fails+to+prevent+cationic+nanoparticle-induced+cell+death+in+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">RNAi-mediated inhibition of apoptosis fails to prevent cationic nanoparticle-induced cell death in cultured cells.</a> Nanomedicine. 9 (11), 1651-1664 (2014).</li>
<li>Lehner, R., Weder, C., Petri-Fink, A., Rothen-Rutishauser, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+Nanoplastic+in+the+Environment+and+Possible+Impact+on+Human+Health%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science%2C+Technology%22%5BJournal%5D)">Emergence of Nanoplastic in the Environment and Possible Impact on Human Health.</a> Environmental Science, Technology. 53 (4), 1748-1765 (2019).</li>
<li>Pinsino, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino-modified+polystyrene+nanoparticles+affect+signalling+pathways+of+the+sea+urchin+%28Paracentrotus+lividus%29+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotoxicology%22%5BJournal%5D)">Amino-modified polystyrene nanoparticles affect signalling pathways of the sea urchin (Paracentrotus lividus) embryos.</a> Nanotoxicology. 11 (2), 201-209 (2017).</li>
<li>El-Ghali, N., Rabadi, M., Ezin, A. M., De Bellard, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Methods+for+Chicken+Embryo+Manipulations%5BTitle%5D)+AND+%22Microscopy+Research+and+Technique%22%5BJournal%5D)">New Methods for Chicken Embryo Manipulations.</a> Microscopy Research and Technique. 73 (1), 58-66 (2010).</li>
<li>Rashidi, H., Sottile, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chick+embryo%3A+hatching+a+model+for+contemporary+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">The chick embryo: hatching a model for contemporary biomedical research.</a> Bioessays. 31 (4), 459-465 (2009).</li>
<li>Faez, T., Skachkov, I., Versluis, M., Kooiman, K., de Jong, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+characterization+of+ultrasound+contrast+agents%3A+microbubble+spectroscopy+in+a+chicken+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+in+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">In vivo characterization of ultrasound contrast agents: microbubble spectroscopy in a chicken embryo.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 38 (9), 1608-1617 (2012).</li>
<li>Yamamoto, F. Y., Neto, F. F., Freitas, P. F., Ribeiro, C. A. O., Ortolani-Machado, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cadmium+effects+on+early+development+of+chick+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Toxicology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Cadmium effects on early development of chick embryos.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 34 (2), 548-555 (2012).</li>
<li>Li, X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caffeine+interferes+embryonic+development+through+over-stimulating+serotonergic+system+in+chicken+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Food+and+Chemical+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Caffeine interferes embryonic development through over-stimulating serotonergic system in chicken embryo.</a> Food and Chemical Toxicology. 50 (6), 1848-1853 (2012).</li>
<li>Lokman, N. A., Elder, A. S. F., Ricciardelli, C., Oehler, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+Chorioallantoic+Membrane+%28CAM%29+Assay+as+an+In+Vivo+Model+to+Study+the+Effect+of+Newly+Identified+Molecules+on+Ovarian+Cancer+Invasion+and+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an In Vivo Model to Study the Effect of Newly Identified Molecules on Ovarian Cancer Invasion and Metastasis.</a> International Journal of Molecular Sciences. 13 (8), 9959-9970 (2012).</li>
<li>Burns, E. E., Boxall, A. B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+the+aquatic+environment%3A+Evidence+for+or+against+adverse+impacts+and+major+knowledge+gaps%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Toxicology+and+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Microplastics in the aquatic environment: Evidence for or against adverse impacts and major knowledge gaps.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (11), 2776-2796 (2018).</li>
<li>Alejo-Plata, M. D., Herrera-Galindo, E., Cruz-Gonzalez, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Description+of+buoyant+fibers+adhering+to+Argonauta+nouryi+%28Cephalopoda%3A+Argonautidae%29+collected+from+the+stomach+contents+of+three+top+predators+in+the+Mexican+South+Pacific%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Pollution+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Description of buoyant fibers adhering to Argonauta nouryi (Cephalopoda: Argonautidae) collected from the stomach contents of three top predators in the Mexican South Pacific.</a> Marine Pollution Bulletin. 142, 504-509 (2019).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar. Todos os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes ou relações pessoais que possam ter aparecido para influenciar o trabalho deste artigo.

Este artigo fornece um esquema experimental eficaz para avaliar o desenvolvimento de embriões de codorna, detectando os índices básicos de desenvolvimento. No entanto, ainda há algumas limitações para este experimento. 
Primeiro, a mortalidade de embriões de codorna no estágio posterior da eclosão é maior por causa da eclosão sem casca. Há fatores artificialmente incontroláveis, como a destruição da razão proteica normal no processo experimental. Limitamos o tempo de exposição dos embriões par...

A produção de resíduos plásticos foi de cerca de 6.300 Mt em 2015, um décimo dos quais foi reciclado, e o resto foi queimado ou enterrado no subsolo. Estima-se que cerca de 12.000 mt de resíduos plásticos seriam enterrados no subsolo até 20501. Com a atenção da comunidade internacional aos resíduos plásticos, Thompson propôs pela primeira vez o conceito de microplásticos em 20042. Microplásticos (PMs) referem-se a plásticos de partículas de pequeno porte com diâmetro de partícula inferior a 5 mm. Atualmente, pesquisadores detectaram a presença onipresente de PMs no litoral de vários continentes, ilhas atlânticas, lagos do interior, ártico e habitats em alto mar3,4,5,6,7. Por isso, mais pesquisadores começaram a estudar os riscos ambientais dos PMs.
Organismos podem ingerir PMs no ambiente. Os PMs foram encontrados no trato digestivo de 233 organismos marinhos em todo o mundo (incluindo 100% espécies de tartarugas, 36% espécies de focas, 59% espécies de baleias, 59% espécies de aves marinhas, 92 tipos de peixes marinhos e 6 tipos de invertebrados)8. Além disso, os PMs podem bloquear o sistema digestivo dos organismos, acumular e migrar em seus bobies9. Verificou-se que os PMs podem ser transferidos através da cadeia alimentar, e sua ingestão difere com as mudanças de habitat, estágio de crescimento, hábitos alimentares e fontes de alimentos10. Alguns pesquisadores relataram a existência de PMs nas fezes das aves marinhas11, o que significa que as aves marinhas atuam como portadoras de PMs. Além disso, a ingestão de PMs pode afetar a saúde de alguns organismos. Por exemplo, os PMs podem ser emaranhados no trato gastrointestinal, aumentando assim a mortalidade dos cetáceos12.
Só os PMs têm efeitos tóxicos nos organismos, bem como efeitos tóxicos articulares em organismos com outros poluentes. A ingestão de concentrações ambientais de detritos plásticos pode perturbar a função do sistema endócrino de peixes adultos13. O tamanho dos microplásticos é um dos fatores importantes que afetam sua absorção e acumulação por organismos14,15. Os plásticos de pequeno porte, especialmente os plásticos nanosize, são propensos à interação com células e organismos com alta toxicidade16,17,18,19. Embora os efeitos nocivos dos microplásticos de tamanho nanopartículas em organismos excedam o nível atual de pesquisa, a detecção e quantificação de microplásticos com tamanhos inferiores a vários micrômetros, especialmente o submicron/nanoplásticos no ambiente, ainda é um grande desafio. Além disso, nanoplásticos também têm alguns efeitos sobre embriões. O poliestireno pode prejudicar o desenvolvimento de embriões de ouriço-do-mar regulando proteínas e perfis genéticos20.
Para explorar o impacto potencial dos PMs nos organismos, realizamos este estudo. Devido à semelhança entre embriões de aves e embriões humanos, eles geralmente são usados em pesquisas de biologia do desenvolvimento21, incluindo angiogênese e antiangiogênese, engenharia de tecidos, implante biomaterial e tumores cerebrais22,23,24. Os embriões de aves têm as vantagens do baixo custo, um ciclo de cultura curto e fácil operação25,26. Por isso, escolhemos embriões de codorna com um curto ciclo de crescimento como animal experimental neste estudo. Simultaneamente, podemos observar diretamente as alterações morfológicas dos embriões de codorna expostos aos PMs durante o estágio de desenvolvimento embrionário usando uma tecnologia de eclosão livre de casca de ovo. Os materiais experimentais utilizados foram polipropileno (PP) e poliestireno (PS). Como o PP e o PS27 são responsáveis pela maior proporção de tipos de polímeros obtidos em sedimentos e corpos d'água em todo o mundo, os tipos de polímeros mais comuns extraídos de organismos marinhos capturados são o etileno e o propileno28. Este protocolo experimental descreve todo o processo de avaliação visual dos efeitos toxicológicos dos PMs em embriões de codorna expostos aos PMs. Podemos facilmente estender este método para examinar a toxicidade de outros poluentes para o desenvolvimento de embriões de outros animais oviparas.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; Multi moedor de tecido</td><td>de amostra Shanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd.</td><td>Tissuelyser-24</td><td>Moer plásticos de grande porte em plásticos de pequeno porte em baixa temperatura</td></tr><tr><td>Balança eletrônica</td><td>OHAUS corporation</td><td>PR Series Precision</td><td>Usado para pesar</td></tr><tr><td>ovos de codorna fertilizados</td><td>Guangzhou Cangmu Agricultural Development Co., Ltd.</td><td></td><td>Ovos de codorna para incubação sem casca</td></tr><tr><td>Partículas fluorescentes de polipropileno</td><td>Foshan Juliang Optical Material Co., Ltd.</td><td></td><td>Tipos de plásticos selecionados para o experimento</td></tr><tr><td>Incubadora</td><td>Shandong, Bangda Incubation Equipment Co., Ltd.</td><td>264 pc</td><td>Fornecer um local para o crescimento e desenvolvimento do embrião</td></tr><tr><td>Microesferas de poliestireno em escala nanométrica</td><td>Xi' uma Ruixi Biological Technology Co., Ltd.</td><td>100 nm, 200 nm, 500 nm</td><td>Tipos de plásticos selecionados para o experimento</td></tr><tr><td>Régua de aço Deli</td><td>Group</td><td>20 cm</td><td>Usado para medir o comprimento</td></tr><tr><td>Esterilizador a vapor de pressão de aquecimento vertical</td><td>Shanghai Shenan Medical Instrument Factory</td><td>LDZM-80KCS-II</td><td>Esterilize os artigos experimentais</td></tr></tbody></table>

efeitos ecotoxicológicos de microplásticos no desenvolvimento de embriões de aves por eclosão sem casca de ovo

Ecotoxicological Effects of Microplastics on Bird Embryo Development by Hatching without Eggshell

Os microplásticos são um tipo emergente global de poluentes que representa uma grande ameaça à saúde dos animais devido à sua absorção e translocação em tecidos e órgãos animais. Não são conhecidos os efeitos ecotoxicológicos dos microplásticos no desenvolvimento de embriões de aves. O ovo de pássaro é um sistema completo de desenvolvimento e nutrição, e todo o desenvolvimento de embriões ocorre na casca de ovo. Portanto, um registro direto do desenvolvimento de embriões de aves sob o estresse de poluentes como microplásticos é altamente limitado pela casca de ovo opaca na eclosão tradicional. Neste estudo, os efeitos dos microplásticos no desenvolvimento de embriões de codorna foram monitorados visualmente pela eclosão sem casca de ovo. Os principais passos incluem a limpeza e desinfecção de ovos fertilizados, a incubação antes da exposição, a incubação a curto prazo após a exposição e a extração da amostra. Os resultados mostram que, em comparação com o grupo controle, o peso úmido e o comprimento corporal do grupo exposto aos microplásticos apresentaram uma diferença estatística e a proporção hepática de todo o grupo exposto aumentou significativamente. Além disso, avaliamos fatores externos que afetam a incubação: temperatura, umidade, ângulo de rotação de ovos e outras condições. Este método experimental fornece informações valiosas sobre a ecotoxicologia dos microplásticos e uma nova maneira de estudar os efeitos adversos dos poluentes no desenvolvimento de embriões.

Para a análise dos dados experimentais, comparamos o peso úmido, o comprimento do corpo, o comprimento do esterno e a mudança do índice hepatosomático entre o grupo controle e os 6 grupos experimentais, medindo e refletindo o crescimento e o desenvolvimento dos embriões de codorna a partir de uma perspectiva macro. Detectamos seis embriões normais de codorna em cada grupo. Cada embrião atingiu a etapa necessária de Hambúrguer e Hamilton (HH).
Na Figura 1,transferi...

Este artigo introduz um método de eclosão sem o uso de casca de ovo para estudos toxicológicos de poluentes de partículas, como microplásticos.

Efeitos ecotoxicológicos de microplásticos no desenvolvimento de embriões de aves por eclosão sem casca de ovo

Microplastics are an emerging global pollutant type that poses a great health threat to animals due to their uptake and translocation in animal tissues ...

Este experimento incluirá quatro partes. Preparação antes da exposição, eclodido de ovo de codorna sem casca, processo de incubação e coleta de amostras, e resultados representativos. Assista ao vídeo a seguir para o processo experimental específico. No teste de exposição, o mesmo lote de ovos fertilizados por codorna foi selecionado para o experimento. Os ovos com tamanho semelhante foram selecionados para reduzir o erro experimental. Ao mesmo tempo, todas as codornas fertilizam os ovos e ovos devem ser completamente limpos, porque haverá fezes e outras substâncias em suas conchas. Depois disso, os pré-nascidos, os ovos de codorna fertilizados e os ovos a serem usados foram desinfetados com penicilina e uma miecina Ao colocar você precisa prestar atenção na parte superior virada para baixo e, em seguida, a extremidade cega voltada para cima. O processo de limpeza do ovo não é mostrado no vídeo. O próximo passo é o processo de aterramento da casca de ovo. É o passo mais importante na preparação. A casca de ovo entoada é um corte no tamanho do ovo central com uma broca dentária, mas não pode ser quebrada. Tentando tornar a superfície da fratura da incisão suave o suficiente, então a incubadora foi desinfetada com solução acinol de 75%. Ovo fertilizado de codorna colocado na incubadora com umidade de 60% e 38

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A facilidade de acesso do embrião tem permitido experimentos para mapear destinos célula usando várias abordagens, incluindo pintinho de codorna quimeras e rotulagem corante focal. Neste artigo vamos demonstrar um método de preparação de ovo que foi otimizado para os tempos de sobrevivência a longo.

Windowing Ovos de galinha para Estudos do Desenvolvimento

Neste artigo, apresentamos uma metodologia simples para ativar a longo...

Um Ex-ovo Sistema de Cultura de embriões de frango Indicado para aplicações de imagem e Microcirurgia

O tentilhão-zebra (Taeniopygiaguttata) é um organismo modelo valioso; no entanto, os estágios iniciais do desenvolvimento do tentilhão-zebra não foram extensivamente estudados. O protocolo descreve como dissecar embriões precoces para aplicações moleculares e de desenvolvimento.

Dissecção e Análise de Downstream da Zebra Finch embriões em estágios iniciais de desenvolvimento

Exposição a toxinas ambientais aguda pode afetar o desenvolvimento de embriões. Endócrinos produtos químicos tais como bisfenóis são conhecidos por afetar o sistema nervoso. Aqui descrevemos um protocolo utilizando um modelo de rede neuronal in vitro vertebrado (embrião do pintinho) para estudar o impacto funcional de exposição toxina em embriões adiantados.

Avaliação dos efeitos endócrinos compostos no desenvolvimento da função de vertebrados Rede Neural utilizando eletrodos multi matrizes

Exposição a tóxicos ambientais aguda pode afetar o desenvolvimento, com efeitos a longo prazo. Protocolos detalhados são fornecidos para ilustrar uma estratégia usando um modelo eficaz de laboratório para estudar o efeito da exposição embrionária precoce ao Bisfenol A. Nós fornecemos a fecundidade e ensaios comportamentais para monitorar a eficácia da nossas bio-ensaios de exposição tóxica.

A longo prazo consequências comportamentais e reprodutivas de embrionária exposição a baixas doses tóxicas para

Este protocolo descreve três métodos sobre como obter e usar embriões de frango de 5 a 8 dias de idade e sua membrana corioalantóica (CAM) como um modelo in vivo para estudar imagens de ultrassom com contraste e entrega de drogas mediadas por microbolhas.

A preparação de embriões de frango ex ovo e vasos de membrana corioalantóica como modelo in vivo para imagens de ultrassom com contraste e estudos de liberação de drogas mediados por microbolhas

Este é um método eficaz para testar supressores ou condutores de metástase de câncer. As células, transduzidas com uma biblioteca de expressão, são injetadas na vasculatura da membrana corioallantóica do frango para formar colônias metastáticas. Colônias que têm diminuído ou aumentado a invasividade são extirpadas, expandidas, reinjetadas para confirmar seu fenótipo e, finalmente, analisadas usando alto sequenciamento de rendimento.

Descoberta de reguladores metastáticos usando um modelo de membrana corioallantóica intravital rápida e quantitativa

Os embriões/larvas de zebrafish desenvolvem-se externamente e são opticamente transparentes. A bioacúscula de microplásticos em peixes em estágios iniciais da vida é prontamente avaliada com microesferas fluorescentes rotuladas.

Acumulação e Distribuição de Microplásticos Fluorescentes nos Estágios Iniciais da Vida dos Zebrafish

Embriões de frango, como modelo de desenvolvimento clássico, são usados em nosso laboratório para avaliar cardiotoxicções de desenvolvimento após a exposição a vários contaminantes ambientais. Métodos de exposição e métodos de avaliação morfológica/funcional estabelecidos estão descritos neste manuscrito.

Usando embrião de frango como ferramenta poderosa na avaliação de cardiotoxi cidades do desenvolvimento

O ensaio de contas encharcada envolve a entrega direcionada de reagente de teste em qualquer ponto de desenvolvimento para estudar a regulação da diferenciação celular e morfogênese. Um protocolo detalhado, aplicável a qualquer modelo animal experimental, para preparar três tipos diferentes de contas encharcadas e implantá-las no interdigit de um embrião de frango é apresentado.

Análise da diferenciação celular, morfogênese e padronização durante a embriogênese de frango usando o ensaio de contas encharcadas

Aprenda a técnica de eclosão sem casca de ovo para avaliar os efeitos ecotoxicológicos de microplásticos no desenvolvimento de embriões de aves. Este método inovador melhora a confiabilidade dos estudos de poluição ambiental.

Efeitos ecotoxicológicos de microplásticos no desenvolvimento de embriões de aves por eclosão sem casca de ovo

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