Name: Um modelo de rato para pancreatite crônica através da infusão TNBS do ducto biliar (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-28T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Aprenda a criar um modelo de pancreatite crônica em camundongos através da infusão de TNBS no ducto biliar. Este protocolo otimizado permite estudar dor neuropática e fibrose pancreática.

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Este estudo foi apoiado pelo Departamento de Assuntos dos Veteranos (VA-ORD BLR&D Mérito I01BX004536), e pelo Instituto Nacional de Saúde ( 1R01DK105183, DK120394 e DK118529 à HW). Agradecemos ao Dr. Hongju Wu por compartilhar experiência técnica.

Todos os procedimentos foram conduzidos com a aprovação dos Comitês Institucionais de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Médica da Carolina do Sul e do Ralph H. Johnson Medical Center. Neste estudo, foram utilizados camundongos machos C57BL/6J entre 8 e 10 semanas de idade. Os camundongos estavam alojados sob um ciclo escuro padrão de 12 luz/12 com litbitumaccess ad libitumaccess à comida e à água.
1. Preparação da solução TNBS para injeção
<ol><li>Prepare 10% de etanol em 0,9% salina. Dissolver o estoque TNBS (ver Tabela de Materiais) em 10% de etanol para uma concentração final de 7,5 mM adicionando 7,5 μL de TNBS em 1 mL de 10% de etanol. ATENÇÃO: A TNBS apresenta um risco químico. Prepare a solução dentro de um capô de fumaça e use equipamentos de proteção individual, como luvas, óculos e um jaleco para evitar contato direto com a TNBS.</li>
	<li>Carregue 50 μL de solução TNBS de 0,75% em uma seringa de insulina com uma agulha de calibre 31. Carregue 50 μL de 10% de etanol em soro fisiológico em uma seringa do mesmo tamanho do controle do veículo. Coloque as seringas no gelo e proteja-as da luz até que seja necessário.</li>
</ol>2. Preparação e cirurgia do rato
<ol><li>Raspe o cabelo da área cirúrgica abdominal.</li>
	<li>Injete uma dose preventiva do analgésico (por exemplo, buprenorfina 0,1 mg/kg i.p.) antes da cirurgia.</li>
	<li>Induzir e manter o rato sob anestesia geral com 1,5-2% de isoflurane e 1 L/min de oxigênio. Confirme a anestesia beliscando os dedo dos dedo e observando o animal por falta de reflexo.</li>
	<li>Coloque o mouse em uma almofada cirúrgica aquecida durante a cirurgia. Aplique pomada veterinária em cada olho quando o rato estiver sob anestesia.</li>
	<li>Desinfetar o local cirúrgico limpando a área cirúrgica 3x com 2% de iodo, seguido por 70% de álcool(Tabela de Materiais).</li>
	<li>Faça uma laparotomia com micro tesoura para gerar uma incisão de 0,5-1 cm.</li>
	<li>Exponha suavemente o duodeno e localize o ducto biliar comum utilizando cotonetes de algodão (Tabela de Materiais).</li>
	<li>Coloque um micro clipe de micro hemo retosobreo duto comum proximal para evitar o fluxo de TNBS ou soluções de veículo no fígado e na vesícula biliar(Figura 1A,B).</li>
	<li>Exponha suavemente o duodeno e insira a agulha no ducto pancreático através da papila de Vater.</li>
	<li>Uma vez que a agulha esteja dentro do duto, coloque um micro clipe de micro hemo curva(Tabela de Materiais) sobre o duodeno ao redor da agulha (Figura 1A) para fixar a agulha no lugar e evitar que a solução injetada entre no duodeno.</li>
	<li>Infundir gradualmente a solução (TNBS ou veículo) no duto pancreático ao longo de um minuto. NOTA: O TNBS precisa ser infundido lentamente ao longo de um minuto de tempo, e é fácil controlar a velocidade de infusão quando o pâncreas é perfundido com uma seringa de insulina com uma agulha de 5/16 polegadas e 31G. Mantenha a mão o mais estável possível para evitar picar o ducto biliar. Se o TNBS for injetado com sucesso, a cor amarela pode ser visível dentro do pâncreas.</li>
	<li>Após a infusão, remova cuidadosamente o micro grampo perto do fígado e, em seguida, remova o micro grampo segurando a agulha e o duodeno.</li>
	<li>Retorne cuidadosamente o duodeno à sua posição original.</li>
	<li>Deixe 0,5 mL de soro estéril quente (36-37 °C) na cavidade abdominal antes do fechamento, para ajudar o duodeno a retornar à sua posição original e auxiliar na recuperação da peristalse.</li>
	<li>Feche a incisão na camada muscular usando sutura contínua com um ponto de 5-0. Feche a pele usando sutura interrompida com um ponto 4-0.</li>
	<li>Coloque a gaiola contendo ratos em uma almofada de aquecimento para permitir a recuperação da anestesia.</li>
	<li>Confirme se os ratos são quentes e capazes de movimento espontâneo antes de devolvê-los para a sala de espera.</li>
	<li>Continue fornecendo um analgésico (por exemplo, buprenorfina 0,1 mg/kg i.p.) a cada 12h e calor suplementar para 48 h pós-cirurgia.</li>
</ol>3. Monitorando o comportamento do mouse
<ol><li>Remova as suturas no 7º dia pós-cirurgia.</li>
	<li>Monitore a saúde e o comportamento do rato diariamente durante a primeira semana pós-cirurgia. Cuidado com sinais de angústia, como vocalização, postura curvada nas costas ou menor locomoção. Meça o peso corporal dia não.</li>
	<li>Use monofilamentos Von Frey (VFFs) para medir a hipersensibilidade mecânica abdominal antes, e 2, 3 semanas após a cirurgia, conforme descrito9,14.<ol>
<li>Aplique VFFs de diferentes forças aplicadas na ordem ascendente à área abdominal superior 10x a cada 1-2 s. Considere o aumento, retração ou lambida do abdômen (resposta de retirada) como uma resposta positiva.</li>
		<li>Aplique um estímulo mais forte se uma resposta positiva não for observada, e um estímulo mais fraco se uma resposta positiva for observada. O limiar de retirada é a força com que o mouse responde 50% das vezes.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Coleta e análise histológica do tecido pancreático
<ol><li>Sacrifique os camundongos sob anestesia por deslocamento cervical, e disseca cuidadosamente o pâncreas do intestino e outros órgãos.</li>
	<li>Fixar o pâncreas em 10% de paraformaldeído por 24 horas, incorporar em parafina, cortar seções teciduais de 5 μm de espessura e colocá-los em lâminas de vidro para coloração.</li>
	<li>Realize a hematoxylin-eosina, e a coloração tricrática de Masson usando métodos padrão como relatado anteriormente4.</li>
</ol>

<ol><li>Klauss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+induced+vs.+classical+animal+models+of+chronic+pancreatitis%3A+a+critical+comparison%5BTitle%5D)+AND+%22The+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology+Journal%22%5BJournal%5D)">Genetically induced vs. classical animal models of chronic pancreatitis: a critical comparison.</a> The Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 32, 5778-5792 (2018).</li>
<li>Liao, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+2+is+involved+in+%C2%B5-opioid+receptor+suppression+in+the+spinal+dorsal+horn+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase 2 is involved in µ-opioid receptor suppression in the spinal dorsal horn in a rat model of chronic pancreatitis pain.</a> Molecular Medicine Reports. 17 (2), 2803-2810 (2018).</li>
<li>Gui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypsin+activity+governs+increased+susceptibility+to+pancreatitis+in+mice+expressing+human+PRSS1R122H%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Trypsin activity governs increased susceptibility to pancreatitis in mice expressing human PRSS1R122H.</a> The Journal of Clinical Investigation. 130 (1), 189-202 (2020).</li>
<li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Stem+Cell+Therapy+Mitigates+Chronic+Pancreatitis+via+Differentiation+into+Acinar-like+Cells+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Adipose Stem Cell Therapy Mitigates Chronic Pancreatitis via Differentiation into Acinar-like Cells in Mice.</a> Molecular Therapy. 25 (11), 2490-2501 (2017).</li>
<li>Aghdassi, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+investigating+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Fibrogenesis+and+Tissue+Repair%22%5BJournal%5D)">Animal models for investigating chronic pancreatitis.</a> Fibrogenesis and Tissue Repair. 4 (1), 26(2011).</li>
<li>Scoggins, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53-dependent+acinar+cell+apoptosis+triggers+epithelial+proliferation+in+duct-ligated+murine+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">p53-dependent acinar cell apoptosis triggers epithelial proliferation in duct-ligated murine pancreas.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 279 (4), 827-836 (2000).</li>
<li>Bradley, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+duct+pressure+in+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Pancreatic duct pressure in chronic pancreatitis.</a> The American Journal of Surgery. 144 (3), 313-316 (1982).</li>
<li>Zhao, J. B., Liao, D. H., Nissen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+pancreatitis%3A+can+it+be+translated+to+human+pain+study%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Animal models of pancreatitis: can it be translated to human pain study.</a> World Journal of Gastroenterology. 19 (42), 7222-7230 (2013).</li>
<li>Winston, J. H., He, Z. J., Shenoy, M., Xiao, S. Y., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+behavioral+changes+in+nociception+in+a+novel+rat+model+of+chronic+pancreatitis+for+the+study+of+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Molecular and behavioral changes in nociception in a novel rat model of chronic pancreatitis for the study of pain.</a> Pain. 117 (1-2), 214-222 (2005).</li>
<li>Cattaruzza, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+receptor+potential+ankyrin+1+mediates+chronic+pancreatitis+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Transient receptor potential ankyrin 1 mediates chronic pancreatitis pain in mice.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 304 (11), 1002-1012 (2013).</li>
<li>Bai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+insular+cortex+mediates+hyperalgesia+induced+by+chronic+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Anterior insular cortex mediates hyperalgesia induced by chronic pancreatitis in rats.</a> Molecular Brain. 12 (1), 76(2019).</li>
<li>Puig-Diví, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PAX4+Gene+Transfer+Induces+alpha-to-beta+Cell+Phenotypic+Conversion+and+Confers+Therapeutic+Benefits+for+Diabetes+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">PAX4 Gene Transfer Induces alpha-to-beta Cell Phenotypic Conversion and Confers Therapeutic Benefits for Diabetes Treatment.</a> Molecular Therapy. 24 (2), 251-260 (2016).</li>
<li>Ceppa, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+proteases+mediate+inflammatory+pain+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Serine proteases mediate inflammatory pain in acute pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (6), 1033-1042 (2011).</li>
<li>Puig-Divi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Xu, G. Y., Winston, J. H., Shenoy, M., Yin, H., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+excitability+and+suppression+of+A-type+K%2B+current+of+pancreas-specific+afferent+neurons+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Enhanced excitability and suppression of A-type K+ current of pancreas-specific afferent neurons in a rat model of chronic pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 291 (3), 424-431 (2006).</li>
<li>Drewes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+in+chronic+pancreatitis%3A+the+role+of+neuropathic+pain+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Pain in chronic pancreatitis: the role of neuropathic pain mechanisms.</a> Gut. 57 (11), 1616-1627 (2008).</li>
</ol>

Todos os autores declaram que não têm conflito de interesses.

A infusão do ducto biliar de TNBS para induzir pancreatite crônica é tecnicamente desafiadora em camundongos, pois até 22,5% dos camundongos podem morrer dentro de 3-4 dias de infusão de medicamentos10. Aqui, este relatório refinou o procedimento com base em estudos anteriores e reduziu a mortalidade precoce do camundongo para <10%. Por exemplo, o aumento do volume de drogas (de 35 μL a 50μL) pode garantir que as drogas atinjam todo o pâncreas. O uso de uma seringa de insulina e um tamanho menor d...

Pancreatite crônica (PC) é uma doença inflamatória crônica caracterizada pela atrofia do pâncreas, fibrose, dor abdominal e eventual perda das funções exócrina e endócrina1. Os tratamentos médicos e cirúrgicos atuais não são curativos, mas são realizados para aliviar sintomas que são consequência da doença: dor abdominal refratária, disfunção endócrina e exócrina. Portanto, tratamentos mais eficazes são urgentemente necessários2. Os modelos animais fornecem uma ferramenta essencial para desenvolver uma melhor compreensão da doença e investigar possíveis terapêuticas3. Vários modelos de mouse para CP foram desenvolvidos, dos quais modelos de ceruleina e/ou álcool são comumente usados. Cerulein, um oligopeptide estimulando a secreção pancreática, tem sido mostrado para induzir reproduivelmente um modelo de CP com atrofia pancreática, fibrose, entre outros4. Outro modelo comum utiliza injeções seriais de L-arginina, que produz insuficiência exócrina semelhante à observada em pacientes humanos5. A CP também pode ser induzida por ligadura completa ou parcial do ducto pancreático, bem como hipertensão do ducto pancreático6,7. Apesar da variedade de modelos animais disponíveis para PC, nenhum desses modelos reproduz efetivamente a dor abdominal experimentada pelos pacientes de PC8.
Estudos anteriores mostraram que a injeção pancreática local de 2,4,6 -trinitrobenzene ácido sulfônico (TNBS) replica a dor persistente experimentada pelos pacientes de PC9,10,11. Os camundongos tratados com TNBS demonstraram hipersensibilidade abdominal e aumentaram os comportamentos relacionados à dor, bem como uma "hipersensibilidade generalizada" a estímulos dolorosos, fenômeno que tem sido observado em pacientes com PC10. Além de imitar com precisão a dor de CP, o modelo TNBS também replica outras características patológicas da condição humana, como fibrose, infiltração de células mononucleares e substituição de células acinar por tecido gorduroso10,12. No entanto, a infusão de TNBS via ducto biliar é um procedimento tecnicamente desafiador em camundongos que pode causar a morte. Pelo que sabemos, não há protocolo visual para mostrar como a infusão do ducto biliar é realizada. Neste artigo, demonstramos o procedimento da infusão de dução bile de TNBS para gerar um modelo de mouse CP. Este procedimento ajudará a gerar modelos animais valiosos para o estudo de CP e outras doenças pancreáticas e pode ser usado para infundir outros materiais (por exemplo, vírus, células) no pâncreas13.

<table><tbody><tr><td>10% de formalina tamponada neutra v/v</td><td>Fisher Scientific</td><td>23426796</td><td></td></tr><tr><td>Almofadas de preparação de álcool, estéreis</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de anestesia animal</td><td>VetEquip, Inc.</td><td></td><td></td>901806</tr><tr><td>Cloridrato de buprenorfina, injeção</td><td>Par Sterile Products, LLC</td><td>NDC 42023-179-05</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga, 15 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>0553859A</td><td></td></tr><tr><td>Etanol, absoluto (200 provas), grau de biologia molecular</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de microdissecação extra fina 4" reta afiada</td><td>Roboz Surgical Instrumento Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Graefe 4" ponta extra delicada</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5136</td><td></td></tr><tr><td>Almofada aquecida</td><td>Amazon</td><td>B07HMKMBKM</td><td></td></tr><tr><td>Suporte de agulha Hegar-Baumgartner 5,25"</td><td>Roboz Instrumento Cirúrgico Co.</td><td>Seringa de insulina RS-7850</td><td></td></tr><tr><td>com agulha de calibre 31</td><td>BD</td><td>324909</td><td></td></tr><tr><td>almofadas de preparação de iodo</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027048</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal Critical Care</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>Micro clipe aplicando fórceps 5.5"</td><td>Roboz Instrumento Cirúrgico Co.</td><td>RS-5410</td><td></td></tr><tr><td>Micro clipe, reto forte curvo 1x6mm</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5433</td><td></td></tr><tr><td>Micro clipe, reto, largura do clipe de 0,75 mm</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5420</td><td></td></tr><tr><td>Solução de ácido picrilsulfônico, TNBS, 1M em H2O</td><td>Millipore Sigma</td><td>92822-1ML</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de polipropileno 4-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8683</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de polipropileno 5-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8661</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de sódio, solução intravenosa a 0,9%</td><td>VWR</td><td>2B1322Q</td><td></td></tr><tr><td>Campo cirúrgico, estéril</td><td>Med-Vet International</td><td>DR1826</td><td></td></tr><tr><td>de tecido</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-272416</td><td></td></tr><tr><td>Filamentos de Von Frey</td><td>Bioseb</td><td>EB2-VFF</td><td></td></tr></tbody></table>

um modelo de rato para pancreatite crônica através da infusão tnbs do ducto biliar

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Pancreatite crônica (PC) é uma doença complexa que envolve inflamação pancreática e fibrose, atrofia glandular, dor abdominal e outros sintomas. Vários modelos de roedores foram desenvolvidos para estudar CP, dos quais o ducto biliar 2,4,6 -trinitrobenzeno modelo de infusão de ácido sulfônico (TNBS) replica as características da dor neuropática vista em CP. No entanto, a infusão de drogas de ducto biliar em camundongos é tecnicamente desafiadora. Este protocolo demonstra o procedimento de infusão tnbs do ducto biliar para a geração de um modelo de mouse CP. TNBS foi infundido no pâncreas através da ampola de Vater no duodeno. Este protocolo otimizeu o volume de medicamentos, técnicas cirúrgicas e o manuseio de drogas durante o procedimento. Os camundongos tratados com TNBS apresentaram características de CP refletidas por reduções de peso corporal e pâncreas, alterações nos comportamentos associados à dor e morfologia pancreática anormal. Com essas melhorias, a mortalidade associada à injeção de TNBS foi mínima. Este procedimento não é apenas crítico na geração de modelos de doenças pancreáticas, mas também é útil na entrega de medicamentos pancreáticos locais.

Os procedimentos de infusão do ducto biliar foram otimizados para reduzir a mortalidade do camundongo associada a este procedimento10. O TNBS foi dado pela primeira vez em um volume total de 35 μL ou 50 μL. A injeção de TNBS em um volume de 50 μL poderia atingir todo o pâncreas e induzir um fenótipo de doença mais homogêneo(Figura 1B). Além disso, a injeção de TNBS usando seringa de insulina com agulha 31G poderia controlar melhor a velocidade de infusão em relação às...

Pancreatite crônica (PC) é uma doença caracterizada por inflamação e fibrose do pâncreas, frequentemente associada a dor abdominal intratável. Este artigo se concentra na refinação da técnica para gerar um modelo de camundongo de CP via infusão de ducto biliar com ácido sulfônico de 2,4,6 -trinitrobenzene (TNBS).

Um modelo de rato para pancreatite crônica através da infusão TNBS do ducto biliar

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

Pancreatite crônica é uma doença complexa que envolve inflamação pancreática, fibrose, dor abdominal e outros sintomas. O modelo de infusão tnbs do ducto biliar replica a dor neuropática observada em pacientes com pancreatite crônica. Este protocolo de infusão TNBS do ducto biliar foi otimizado para induzir a geração de um modelo de pancreatite crônica em camundongos.Como a fusão de medicamentos de ducto biliar em camundongos é tecnicamente desafiadora, sua visualização será útil para os pesquisadores novos no método. Antes e duas e três semanas após a cirurgia, use monofilamentos Von Frey para aplicar diferentes níveis de força em ordem ascendente à área abdominal superior de oito a dez semanas de idade, C57 preto seis rato, 10 vezes por um a dois segundos por aplicação. Considere levantar a retração ou lamber o abdômen como uma resposta positiva.Em seguida, carregue uma seringa de insulina equipada com uma agulha calibre 31 com 50 microliters de uma solução TNBS recém-preparada de 0,75%. Carregue uma segunda seringa com 50 microlitres de 10% de etanol em soro fisiológico como controle de veículos e coloque ambas as seringas no gelo protegidas da luz. Após confirmar a falta de resposta ao reflexo do pedal, remova os cabelos da região abdominal do camundongo anestesiado raspando ou aplicando creme de depilação e coloque o rato em uma almofada cirúrgica aquecida sob um microscópio dissecando.Aplique pomada veterinária em cada olho, e desinfete o local cirúrgico com três iodo sequenciais e três lenços de etanol de 70% usam micro tesouras para fazer uma incisão de 0,5 a um centímetro em um movimento contínuo e usar cotonetes para expor suavemente o duodeno e localizar o ducto biliar comum. Para evitar o fluxo do tratamento para o fígado e a vesícula biliar, use o microscópio para colocar um micro-hemoclip direto sobre o ducto comum proximal, e inserir a agulha da seringa carregada TNBS através da papila do vater no ducto pancreático. Use um micro hemoclip curvo para fixar a agulha e infundir a solução no duto pancreático ao longo de um minuto.Quando toda a solução tiver sido entregue, remova cuidadosamente os micro grampos e confirme que o duodeno retornou à sua posição original. Antes do fechamento da cavidade abdominal, adicione 500 microlitadores de 36 a 37 graus salina estéril para ajudar o duodeno a retornar à sua posição original e ajudar na recuperação da peristalse. Use uma sutura contínua com um ponto de cinco-O para fechar a incisão na camada muscular, e feche a pele usando uma sutura interrompida com um ponto de quatro-O.Em seguida, coloque o mouse em uma gaiola de recuperação em uma almofada de aquecimento com monitoramento até a recumedência total. Monitore a saúde e o comportamento do rato diariamente durante a primeira semana pós-cirurgia para sinais de angústia, como vocalização, postura curvada nas costas ou redução da locomoção e medir o peso corporal a cada dois dias. Como observado, a injeção de 50 microlitros de tinta como demonstrado resulta na infiltração de todo o pâncreas, permitindo a indução de um fenótipo de doença mais homogêneo.Nesta análise representativa, nos três primeiros dias após a cirurgia, os camundongos do grupo controle perderam cerca de seis por cento de seu peso corporal original antes de se recuperarem gradualmente e ganharem mais de 100% de seu peso corporal original até o dia 21. Em contraste, os camundongos que receberam TNBS perderam cerca de 15% de seu peso corporal original durante os primeiros cinco dias após a cirurgia e recuperaram pouco menos de 100% de seu peso corporal original até o dia 21. Em comparação com os camundongos de controle, os animais injetados por TNBS apresentaram uma hipersensibilidade mecânica abdominal aumentada durante a segunda e terceira semanas após a cirurgia.O tamanho e o peso por peso corporal dos pâncreas foram significativamente reduzidos em camundongos TNBS em comparação com pâncreas colhidos de animais de controle, sugerindo uma atrofia pancreática marcada em animais tratados com TNBS consistentes com os achados em humanos com pancreatite crônica grave e de longo prazo. A análise histológica das seções de tecido pancreático de camundongos tratados com etanol de controle mostrou uma morfologia normal, enquanto seções de tecidos de camundongos tratados com TNBS apresentaram realização vazia com uma perda maciça de células acinar que foram substituídas por infiltração de células de gordura e fibrose. Evitar que o TNBS injetado entre na bexiga da gal e o intestino é importante, pois um TNBS tem efeitos nocivos teciduais.Durante a infusão, mantenha a mão o mais estável possível para evitar perfurar esse ducto biliar. Além de induzir o desenvolvimento de pancreatite crônica, essa arte de infundir camundongos de infusão de ductos biliares pode ser usada para o desenvolvimento de outros modelos de doenças pancreáticas. Este modelo de pancreatite crônica de pancreatite tnbs pode ser usado para estudar tanto a patogênese quanto o tratamento de pancreatite crônica, bem como outras doenças pancreáticas.

a-mouse-model-for-chronic-pancreatitis-via-bile-duct-tnbs-infusion

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Este vídeo descreve o procedimento para a geração de um modelo de camundongo com pancreatite biliar aguda por infusão pancreática de taurocolato de sódio. Este modelo ajuda a estudar as alterações fisiopatológicas induzidas pelo taurocolato de sódio no pâncreas.

Modelo de pancreatite biliar aguda: um método para gerar modelo de camundongo com pancreatite biliar aguda por meio de infusão de ducto pancreático

Modelos animais para pancreatite aguda grave permitem o estudo de alterações fisiodicosiológicas no estágio inicial, facilitando a observação da evolução dos eventos inflamatórios. Aqui fornecemos um protocolo para a indução de pancreatite biliar aguda grave por infusão retrógrada de taurocholate de sódio no ducto pancreático de camundongos C57BL/6 anestesiados.

Taurocholate de sódio induziu pancreatite aguda grave em C57BL/6 camundongos

Um modelo de rato de pancreatite aguda grave é descrito aqui. O procedimento aqui apresentado é muito rápido, simples e acessível, permitindo, assim, potencialmente o estudo dos mecanismos moleculares e diferentes intervenções terapêuticas na pancreatite aguda de forma conveniente.

Estabelecimento de um modelo de pancreatite aguda grave do rato usando injeção retrógrada de taurocholate de sódio no ducto biliopancreático

Estabelecemos um modelo murino de fibrose hepática crônica, que fornece um modelo animal adequado para o estudo mecanístico da atresia biliar (AB) induzida por vírus e uma plataforma para futuros tratamentos de AB.

Um Modelo Murino de Fibrose Hepática Crônica para o Estudo da Atresia Biliar

A administração intraperitoneal de medicamentos é uma abordagem não invasiva segura e eficaz para induzir lesão pancreática. Este estudo comparou cinco protocolos distintos de injeção intraperitoneal em camundongos para induzir graus variados de lesão pancreática e estabeleceu um modelo de lesão pancreática grave para investigar as alterações patológicas e estratégias de tratamento para pancreatite aguda grave (SAP).

Preparando um modelo de camundongos de pancreatite aguda grave por meio de uma combinação de injeção intraperitoneal de ceruleína e lipopolissacarídeo

O presente protocolo descreve uma nova abordagem para modelar a pancreatite obstrutiva crônica, que envolve a visualização do ducto pancreático e a eletrocoagulação do ducto pancreático para causar obstrução do ducto pancreático.

Um modelo de pancreatite crônica obstrutiva estabelecido por eletrocoagulação

Um protocolo para a canulação do mouse glândula salivar submandibular via ducto de Wharton, é descrito. Para este experimento, a solução de azul de tripano é usado como um tintureiro para demonstrar como esta técnica efetivamente oferece infusões na glândula alvo, e sugerir a confiabilidade dessa nova abordagem como uma potencial terapia medicamentosa / célula clínicos para a regeneração das glândulas salivares.

Canulação da glândula submandibular do rato através do duto salivar de Wharton

Um método de visualização e quantificação da estrutura 3-dimensional do rato da veia porta hepática ou ducto biliar intra-hepático é descrito. Esta técnica de fundição em resina pode também ser aplicada a outros sistemas do tipo ductal ou vascular e...

3-Dimensional Fundição de resina e Imagem da Veia Rato Portal ou Sistema intra-hepática Duto Biliar

Um protocolo para as infusões crónicas de glicose e Intralipid no rato é descrito. Este modelo pode ser utilizado para estudar o impacto do excesso de nutrientes sobre a função do órgão de parâmetros fisiológicos.

Um Modelo de Infusão Crónica de nutrientes no Rato

Hipertensão ocular crônica é induzida pelo uso de fotocoagulação a laser da malha trabecular em rato olhos. A pressão intra-ocular (IOP) é ​​elevada durante vários meses após o tratamento com laser. A diminuição da acuidade visual e sensibilidade ao contraste de animais experimentais são monitorados por meio do teste optomotor.

Um modelo de rato induzida por laser de crônica Ocular Hypertension para Caracterizar defeitos visuais

Aprenda a criar um modelo de pancreatite crônica em camundongos através da infusão de TNBS no ducto biliar. Este protocolo otimizado permite estudar dor neuropática e fibrose pancreática.

Um modelo de rato para pancreatite crônica através da infusão TNBS do ducto biliar

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