Um modelo de rato para pancreatite crônica através da infusão TNBS do ducto biliar

Pancreatite crônica (PC) é uma doença caracterizada por inflamação e fibrose do pâncreas, frequentemente associada a dor abdominal intratável. Este artigo se concentra na refinação da técnica para gerar um modelo de camundongo de CP via infusão de ducto biliar com ácido sulfônico de 2,4,6 -trinitrobenzene (TNBS).

Pancreatite crônica é uma doença complexa que envolve inflamação pancreática, fibrose, dor abdominal e outros sintomas. O modelo de infusão tnbs do ducto biliar replica a dor neuropática observada em pacientes com pancreatite crônica. Este protocolo de infusão TNBS do ducto biliar foi otimizado para induzir a geração de um modelo de pancreatite crônica em camundongos.

Como a fusão de medicamentos de ducto biliar em camundongos é tecnicamente desafiadora, sua visualização será útil para os pesquisadores novos no método. Antes e duas e três semanas após a cirurgia, use monofilamentos Von Frey para aplicar diferentes níveis de força em ordem ascendente à área abdominal superior de oito a dez semanas de idade, C57 preto seis rato, 10 vezes por um a dois segundos por aplicação. Considere levantar a retração ou lamber o abdômen como uma resposta positiva.

Em seguida, carregue uma seringa de insulina equipada com uma agulha calibre 31 com 50 microliters de uma solução TNBS recém-preparada de 0,75%. Carregue uma segunda seringa com 50 microlitres de 10% de etanol em soro fisiológico como controle de veículos e coloque ambas as seringas no gelo protegidas da luz. Após confirmar a falta de resposta ao reflexo do pedal, remova os cabelos da região abdominal do camundongo anestesiado raspando ou aplicando creme de depilação e coloque o rato em uma almofada cirúrgica aquecida sob um microscópio dissecando.

Aplique pomada veterinária em cada olho, e desinfete o local cirúrgico com três iodo sequenciais e três lenços de etanol de 70% usam micro tesouras para fazer uma incisão de 0,5 a um centímetro em um movimento contínuo e usar cotonetes para expor suavemente o duodeno e localizar o ducto biliar comum. Para evitar o fluxo do tratamento para o fígado e a vesícula biliar, use o microscópio para colocar um micro-hemoclip direto sobre o ducto comum proximal, e inserir a agulha da seringa carregada TNBS através da papila do vater no ducto pancreático. Use um micro hemoclip curvo para fixar a agulha e infundir a solução no duto pancreático ao longo de um minuto.

Quando toda a solução tiver sido entregue, remova cuidadosamente os micro grampos e confirme que o duodeno retornou à sua posição original. Antes do fechamento da cavidade abdominal, adicione 500 microlitadores de 36 a 37 graus salina estéril para ajudar o duodeno a retornar à sua posição original e ajudar na recuperação da peristalse. Use uma sutura contínua com um ponto de cinco-O para fechar a incisão na camada muscular, e feche a pele usando uma sutura interrompida com um ponto de quatro-O.

Em seguida, coloque o mouse em uma gaiola de recuperação em uma almofada de aquecimento com monitoramento até a recumedência total. Monitore a saúde e o comportamento do rato diariamente durante a primeira semana pós-cirurgia para sinais de angústia, como vocalização, postura curvada nas costas ou redução da locomoção e medir o peso corporal a cada dois dias. Como observado, a injeção de 50 microlitros de tinta como demonstrado resulta na infiltração de todo o pâncreas, permitindo a indução de um fenótipo de doença mais homogêneo.

Nesta análise representativa, nos três primeiros dias após a cirurgia, os camundongos do grupo controle perderam cerca de seis por cento de seu peso corporal original antes de se recuperarem gradualmente e ganharem mais de 100% de seu peso corporal original até o dia 21. Em contraste, os camundongos que receberam TNBS perderam cerca de 15% de seu peso corporal original durante os primeiros cinco dias após a cirurgia e recuperaram pouco menos de 100% de seu peso corporal original até o dia 21. Em comparação com os camundongos de controle, os animais injetados por TNBS apresentaram uma hipersensibilidade mecânica abdominal aumentada durante a segunda e terceira semanas após a cirurgia.

O tamanho e o peso por peso corporal dos pâncreas foram significativamente reduzidos em camundongos TNBS em comparação com pâncreas colhidos de animais de controle, sugerindo uma atrofia pancreática marcada em animais tratados com TNBS consistentes com os achados em humanos com pancreatite crônica grave e de longo prazo. A análise histológica das seções de tecido pancreático de camundongos tratados com etanol de controle mostrou uma morfologia normal, enquanto seções de tecidos de camundongos tratados com TNBS apresentaram realização vazia com uma perda maciça de células acinar que foram substituídas por infiltração de células de gordura e fibrose. Evitar que o TNBS injetado entre na bexiga da gal e o intestino é importante, pois um TNBS tem efeitos nocivos teciduais.

Durante a infusão, mantenha a mão o mais estável possível para evitar perfurar esse ducto biliar. Além de induzir o desenvolvimento de pancreatite crônica, essa arte de infundir camundongos de infusão de ductos biliares pode ser usada para o desenvolvimento de outros modelos de doenças pancreáticas. Este modelo de pancreatite crônica de pancreatite tnbs pode ser usado para estudar tanto a patogênese quanto o tratamento de pancreatite crônica, bem como outras doenças pancreáticas.