Estabelecimento de um Modelo de Rato de Oclusão Superior Sagittal-Sinus através de um Método thread-embolia
4 de julho de 2021
Aqui, estabelecemos um novo modelo de rato Sprague-Dawley (SD) de trombose sagital superior (SSS) através de um método de embolização de roscas, e a estabilidade e confiabilidade do modelo foram verificadas.
Devido à falta de um modelo animal ideal, o estudo do CVST é bastante limitado. Agora, um novo tipo de modelo CVST SD-Rat foi estabelecido com sucesso inserindo embolização de rosca auto-feita centripetally no local inicial da SSS que padronizou vários ou incontroláveis fatores de interferência em condição clínica. Depois que o rato foi anestesiado com sucesso por injeção intra peritoneal, aplique lubrificante ocular oftálmico de gel após o rato ser colocado em quadro estereotaxic para proteger as córneas de secagem durante a anestesia.
Remova o cabelo na parte superior da cabeça do rato. Para realizar esse processo de forma mais eficaz, a etapa anterior pode ser realizada mais cedo na sala de preparação. Depois que o rato foi anestesiado com sucesso por máquina anestésica, também aplique lubrificante oftálmico estéril.
Esterilizar a superfície em cima da cabeça do rato com 5% de iodo povidone. Alternar isso três vezes com 75% de etanol. Faça uma incisão de pele de cerca de dois centímetros de comprimento no meio da cabeça.
A fáscia é cortada com um bisturi. E então, cuidadosamente descascar a fáscia superior e o periósteo para expor totalmente o crânio. Confirme a posição da fontanelle anterior, A e da fontanelle posterior, B.Use a área entre a sutura coronal e a sutura do cotovelo, como a área observacional do fluxo sanguíneo.
Para evitar que o crânio afete a observação durante a imagem do fluxo sanguíneo com manchas a laser, diluir o crânio na área de observação até que os vasos sanguíneos sejam claramente visíveis. Durante a moagem do crânio use uma seringa de temperatura normal para enxaguar a dura repetidamente, para evitar uma explosão de alta temperatura no córtex cerebral. Esta etapa e o seguinte são todas realizadas sob um microscópio dissecando.
Nesta figura, a área retangular forrada vermelha é a área de observação do fluxo sanguíneo. O tamanho do crânio diluído deve ser aproximadamente um centímetro multiplicado por um centímetro. E a área retangular forrada azul é a janela óssea.
Cerca de seis milímetros multiplicados por quatro milímetros. A área circular vermelha é a junta parietal e a seta aponta para a SSS. Quando o crânio pode ser visto use pinças para cuidadosamente os pedaços de osso restantes da janela óssea.
Escolha uma sonda de rosca adequada, use o ponto frontal ou como ponto de tomada. Perfure-o cuidadosamente com uma agulha de seringa de 2 milímetros e insira rapidamente uma sonda de rosca no ponto de preparação. Neste momento, o ângulo entre a extremidade da extremidade da extremidade da extremidade da rosca e o SSS deve ser de aproximadamente 30 a 45 graus.
Em seguida, ajuste o ângulo entre a extremidade da sonda de rosca e o SS para zero a 10 graus. E insira lentamente o SSS na estrutura até que a cabeça atinja a extremidade posteria da confluência sinusal. A respiração rápida pode ocorrer quando a SSS é perfurada.
Se a extremidade da sonda de rosca não puder ser rapidamente inserida no ponto de preparação ao mesmo tempo, use uma pequena gaze ou uma bola de algodão para pressionar suavemente o ponto da sonda enquanto desliza lentamente para baixo para expor o ponto de preparação cuidadosamente. Isso é feito, insira rapidamente a extremidade do fio trazido para a SSS. A seta azul mostra o estado da inserção da sonda no SSS a partir do ponto de partida.
A seta branca mostra o corpo da sonda e a seta vermelha mostra que é a cabeça. Depois disso, corte a parte excedente da cauda. Sutura a pele do rato.
Desinfete a pele três vezes e remova o rato do quadro estereotaxico. Use a fonte de luz laser para iluminar uniformemente a área observacional do fluxo sanguíneo. A imagem registra o processo dinâmico da sonda de rosca no SSS.
Nesta figura A e B mostra uma comparação do fluxo sanguíneo antes e depois da inserção da embolização da rosca. C mostra que o fluxo sanguíneo na SSS e veias cerebrais foram diminuídos significativamente em comparação com tanto na artéria cerebral média quanto nos capilares. Conserte o animal na mesa de ressonância magnética.
Calibrar a posição do cérebro posicionando-se e realizando a varredura da sequência T2WI e MRI após a confirmação da posição. A fim de observar o estado da sonda de rosca no SSS mais claramente o método montado na cabeça C2 foi usado para exibir a imagem T2WI do cérebro de rato. Nesta figura, A, B e C mostram a sonda de rosca no SSS a partir da posição horizontal, posição sagital e posição craniana.
A imagem mostra que a sonda de rosca está no lugar que confirma a embolização do SSS. Como o modelo de trombose SSS de rato é facilmente estabelecido minimizando o trauma, ofereceu boa estabilidade e permitiu controlar com precisão o tempo químico e a localização, é um novo tipo ideal de modelo CVST.
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Visão Geral
Este artigo apresenta um modelo novo e confiável de rato Sprague-Dawley (SD) para trombose do seio venoso cerebral (TVSC), direcionado especificamente ao seio sagital superior (SSS) por meio de uma técnica de embolização com fio. O modelo foi desenvolvido para padronizar as condições experimentais, minimizar o trauma e permitir um controle preciso sobre o tempo e a localização da isquemia, superando assim as limitações dos modelos animais anteriores de TVSC e facilitando o estudo da fisiopatologia da TVSC.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Modelos Experimentais de AVC
- Biologia Vascular
Contexto
- Os mecanismos da TSCV são pouco compreendidos devido a variáveis clínicas incontroláveis.
- Os modelos animais existentes para a TSCV têm produzido resultados inconsistentes e incompletos.
- São necessários modelos animais estáveis e padronizados para avançar a pesquisa sobre a TSCV.
- Modelos aprimorados podem ajudar a elucidar os mecanismos fisiopatológicos e orientar o diagnóstico e tratamento.
Objetivo do Estudo
- Estabelecer um novo modelo de rato SD estável e reprodutível de trombose da SS utilizando embolização com fio.
- Minimizar o trauma e padronizar as variáveis experimentais no modelamento de TSVS.
- Permitir o controle preciso do tempo e da localização da isquemia no modelo.
Métodos Utilizados
- Ratos Sprague-Dawley foram anestesiados e preparados para cirurgia.
- O crânio foi exposto, e uma janela craniana foi criada por meio do afinamento e remoção do osso sobre a SSF.
- Uma sonda de fio caseira foi inserida na SSF em um ângulo controlado para induzir trombose.
- A imagem de fluxo sanguíneo por laser-speckle foi utilizada para monitorar o fluxo venoso cerebral antes e após a embolização.
- Ressonância magnética (sequência T2WI) foi realizada para confirmar a posição da sonda de fio e o sucesso da embolização da SSF.
Resultados Principais
- O método de embolização com fio induziu com sucesso trombose da SS em ratos SD.
- O modelo demonstrou boa estabilidade e reprodutibilidade.
- A imagem de fluxo sanguíneo mostrou redução significativa do fluxo venoso da SS e encefálico após a embolização.
- A RNM confirmou o posicionamento preciso da sonda de fio e a oclusão eficaz da SS.
Conclusões
- O modelo de trombose SSS em ratos SD é facilmente estabelecido e minimamente traumático.
- Ele fornece resultados estáveis e reprodutíveis, superando as limitações dos modelos anteriores.
- Este modelo é valioso para o estudo dos mecanismos da TSVF e para testar terapias potenciais.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
Modelos pré-clínicos confiáveis são essenciais para reduzir riscos no estágio inicial da descoberta de medicamentos para doenças cerebrovasculares e para esclarecer mecanismos da doença onde a variabilidade clínica limita a compreensão translacional. O modelo de embolia por fio em ratos de oclusão do seio sagital superior (SSS) permite a indução padronizada e reprodutível de trombose do seio venoso cerebral (CVST), apoiando a confiança preditiva em estudos mecanicistas e terapêuticos. Este modelo aborda um ponto crítico de inflexão no processo de descoberta, permitindo testes de hipóteses controlados e comparabilidade robusta entre estudos.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia e Farmacêuticos
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Permite a investigação da fisiopatologia da TSCV em condições controladas e reprodutíveis.
- Contribui para a redução de riscos biológicos ao minimizar variáveis confundidoras inerentes à pesquisa clínica.
- Facilita a validação funcional de alvos terapêuticos para intervenções candidatas em um sistema relevante para a doença.
Triagem e Desenvolvimento de Ensaios
- Oferece uma plataforma in vivo validada para avaliação quantitativa de alterações no fluxo sanguíneo cerebral.
- Permite a padronização do tempo e da localização da isquemia para triagem farmacológica subsequente.
- Apóia a obtenção de imagens e leituras de biomarcadores reprodutíveis para o desenvolvimento de ensaios.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Alinha-se com pontos finais relevantes para a doença na avaliação translacional de biomarcadores.
- Garante a continuidade do descobrimento mecanicista até a validação pré-clínica de hipóteses terapêuticas.
- Reduz o risco biológico no avanço de candidatos rumo à investigação clínica.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
Este modelo integra-se ao continuum de descoberta, desde estudos mecanicistas iniciais até a avaliação pré-clínica de compostos promissores, fornecendo uma plataforma padronizada para testes de hipóteses e pesquisas translacionais.
- Biologia da Descoberta: Permite testes rigorosos de hipóteses nulas e esclarecimento de vias na pesquisa de TVSC.
- Triagem: Fornece resultados quantitativos e reprodutíveis de fluxo sanguíneo e imagens para avaliação de compostos.
- Análises: Apoia a comparação estatística dos efeitos de intervenções utilizando dados de ressonância magnética e imagens de espalhamento a laser.
- Pesquisa Translacional: Conecta as fases de descoberta e pré-clínica com desfechos relevantes para a doença e passíveis de controle.
- Reutilização Empresarial: Oferece um modelo padronizado e escalável para estudos entre programas e entre locais.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva e reduz a ambiguidade mecanicista na pesquisa de TVSC.
- Valor Operacional: Melhora a reprodutibilidade, padronização e escalabilidade de estudos in vivo.
- Valor Estratégico: Aprimora a qualidade das decisões de prosseguimento ou interrupção e a eficiência do capital ao reduzir riscos biológicos em estágios avançados.
- Impacto na Carteira: Permite a priorização e o avanço ajustados ao risco de candidatos terapêuticos para doenças cerebrovasculares.
Considerações sobre a Implementação
- Requer experiência em técnicas microcirúrgicas e em imagem in vivo.
- Necessita de acesso a estruturas estereotáxicas, ressonância magnética e sistemas de imagem de fluxo sanguíneo por espalhamento a laser.
- Exige padronização rigorosa entre equipes nos protocolos cirúrgicos e de imagem.
- Pode ser adaptado a outros modelos de roedores, levando em consideração as diferenças anatômicas.
- Limitações potenciais incluem variabilidade técnica e a necessidade de treinamento especializado.
