Um teste métrico para avaliar a memória espacial de trabalho em ratos adultos após lesão cerebral traumática

Lesão cerebral traumática é comumente associada com prejuízo de memória. Aqui, apresentamos um protocolo para avaliar a memória de trabalho espacial após lesão cerebral traumática, através de uma tarefa métrica. As principais vantagens das tarefas métricas incluem a possibilidade de observação dinâmica, reprodutibilidade de baixo custo, relativa facilidade de implementação e ambiente de baixo estresse.

Para avaliar o escore de gravidade neurológica após lesão de percussão de fluido parasagittal, coloque o rato Adulto Sprague Dawley no centro de um círculo de 50 centímetros de diâmetro, três vezes e monitore sua capacidade de sair do círculo. Para testar a perda do reflexo de redocimento, coloque o animal de costas na palma da mão e dê uma pontuação de um se o rato for capaz de se corrigir. Para testar a hemiplegia, avalie a incapacidade do rato de resistir ao posicionamento forçado.

Para testar a dobra reflexiva do membro traseiro, levante o animal pela cauda. Para testar a habilidade de andar em linha reta, coloque o rato no chão. Para testar o reflexo de pinna, realize estimulação leve e tátil para observar a retração da orelha.

Para testar o reflexo da córnea, aplique levemente uma vara macia no olho e meça a resposta piscante. Para testar o reflexo do tempo, arraste uma caneta pela parte superior da gaiola de arame e registe a resposta do animal. Para avaliar a perda de comportamento em prostração, coloque o rato em um novo ambiente e observe se o rato move seus bigodes, cheira ou corre.

Em seguida, teste os reflexos do membro para colocação nos membros dianteiros esquerdo e direito seguidos pelos membros traseiros esquerdo e direito. Para testar o equilíbrio, realize uma tarefa de balanceamento do feixe colocando o rato em um feixe de 1,5 centímetros de largura, para uma sessão de 20, 40 e maior que a segunda sessão. Em seguida, execute um teste de caminhada de feixe usando três feixes de larguras diferentes.

Antes de realizar a tarefa métrica, coloque uma plataforma circular preta de 200 centímetros de espessura, de um centímetro de espessura, em uma mesa de 80 centímetros de altura e coloque dois objetos no centro da plataforma, com 68 centímetros de distância. Instale uma câmera com o software de computador necessário para capturar, salvar e processar dados, a uma altura de 290 centímetros do chão. Um dia antes da análise colocar o rato na plataforma por 10 minutos para habituar o animal ao novo ambiente.

No dia da tarefa, coloque o rato no final da plataforma, equidistante dos objetos por um período de 15 minutos de habituação e comece a gravar. Ao final do período experimental de habituação, transfira o rato para uma gaiola individual por cinco minutos e limpe a plataforma com 5 a 10% de álcool. Reduza a distância entre os objetos para 34 centímetros e coloque o rato na plataforma por cinco minutos enquanto registra sua atividade de exploração.

Limpe a plataforma novamente, antes de prosseguir com o próximo animal. Antes de analisar os arquivos de vídeo, insira a chave de hardware do software e inicie o software de rastreamento de vídeo e abra o modelo predefinido. Depois de verificar, duplicar e renomear as configurações de controle de teste e detecção da arena no campo de exibição principal, clique com o botão direito do mouse para selecionar o plano de fundo de captura.

No menu de navegação selecione a localização do arquivo de vídeo a ser usada como imagem de fundo. Capture a imagem e marque as áreas e zonas investigadas para calibrar a imagem para análise. Execute a mesma configuração para as configurações de controle de teste e detecção.

Depois de baixar a lista de arquivos de vídeo para análise da lista de testes, adicione os vídeos e indique o local com as configurações necessárias. Em seguida, selecione a aquisição e inicie o teste e exporte todos os dados em uma planilha. O grupo controle não mostra nenhum déficit neurológico, 48 horas após a lesão falsa.

Após o TCE, os déficits neurológicos são significativamente maiores em animais feridos tanto no sexo masculino quanto no feminino. Durante a tarefa métrica, o tempo de exploração de objetos é significativamente mais curto para os ratos TBI machos do que para os ratos operados por sham masculino. O mesmo padrão é observado para as fêmeas TBI e ratos femininos operados por sham.

Seguindo a tarefa métrica, podemos executar outros métodos para avaliação de memória, como o labirinto barnes e tarefas topológicas e de labirinto de água. A tarefa métrica também permite mais pesquisas sobre o prejuízo de memória em modelos comparáveis de danos neurológicos, como modelos de lesão cerebral axonal difusa e derrame.