Name: Determinação de Aulas De Lipídios e Lipídios Totais em Amostras Marinhas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 59 s
Description: Aprenda métodos de extração e análise de lipídios marinhos em amostras de água do mar e organismos biológicos usando cromatografia em camada fina com detecção por ionização de chama (TLC-FID).

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Esta pesquisa foi financiada pelo Conselho de Ciências Naturais e Pesquisa em Engenharia do Canadá (NSERC) 105379 para C.C. Parrish. A Rede de Treinamento de Equipamentos e Instrumentos De Pesquisa Core da Universidade Memorial (CREAIT) ajudou a financiar esta publicação.

NOTA: Para limpar vidros, instrumentos e filtros para análises lipídicas, lave-os 3 vezes com metanol seguido de 3 lavagens com clorofórmio, ou aqueça-as a 450°C por pelo menos 8 horas.
1. Procedimento de filtragem para água do mar dissolvido e lipídios particulados
NOTA: A fração específica de interesse é definida operacionalmente pelo procedimento de filtragem. Neste caso, o tamanho dos poros é de 1,2 μm.
<ol><li>Configure o coletor de filtragem sem filtro e enxágue a configuração com água do mar filtrada.</li>
	<li>O uso de fórceps limpos coloca um filtro de fibra de vidro de 47 mm (GF/C), que foi lavado, no sistema de filtragem limpo.</li>
	<li>Pegue a amostra e gire suavemente para resuspensar qualquer material que possa ter se instalado no fundo do recipiente de coleta. Meça com precisão um volume conhecido, neste caso 1 L, e filtre-o através do filtro. NOTA: O volume dependerá da quantidade de material particulado na amostra: geralmente entre 250 mL e 5 L, dependendo da estação e localização.</li>
	<li>Quando a amostra for medida, molhe suavemente o filtro com água do mar filtrada. Adicione toda a amostra lentamente ao sistema de filtragem e enxágue o cilindro graduado com água do mar filtrada para garantir que todas as partículas sejam adicionadas ao filtro. Enxágüe a configuração com água do mar filtrada nas laterais para garantir que todas as partículas sejam enxaguadas no filtro.<ol>
<li>Permita que toda a água do mar passe pelo filtro, mas não permita que o filtro seque completamente, pois pode interromper as células do filtro; quebrar a sucção como o último da água desaparece.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Usando fórceps limpos e uma pipeta limpa, dobre o filtro ao meio, em seguida, em terços e, em seguida, ao meio do comprimento para enrolar o filtro em um tubo. Coloque-o em um frasco de vidro limpo e rotulado de 10 mL.</li>
	<li>Cubra o filtro com 2 mL de clorofórmio. Encha o espaço da cabeça com nitrogênio e vedação com fita PTFE. Coloque em um rack em um congelador de -20 °C. As amostras serão estáveis a esta temperatura até um ano. NOTA: Para relacionar as concentrações lipídicas com concentrações totais de massa, também é necessária uma medição de peso seco. Isso envolve colocar um filtro pré-pesado de 24 mm em uma configuração de filtragem de peso seco, mexer a amostra e tomar uma pequena subsampleção que é filtrada sobre o pequeno filtro. Quando o filtro está quase seco, cerca de 10 mL de formato de amônio de 3,5% são adicionados ao filtro. O filtro é dobrado ao meio, devolvido a uma placa de Petri rotulada e colocado em um congelador.</li>
</ol>2. Extração líquido-líquido de água do mar ou amostras líquidas
<ol><li>
Preparando a amostra
	<ol>
<li>Meça um volume conhecido de filtrado em um cilindro de vidro limpo lipídedo graduado. Coloque esta amostra em um funil separador de 1 L limpo. Em seguida, adicione 20 mL de clorofórmio à amostra e agite por 2 minutos, ventando com frequência.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Remoção do primeiro extrato e adição de ácido após a primeira separação
	<ol>
<li>Enrole o funil em papel alumínio e espere de 5 a 10 minutos para que a separação ocorra. Retire a parte inferior da folha para ver as duas camadas. Colete a parte inferior, camada orgânica através da torneira em um frasco redondo limpo, tomando cuidado para não incluir nenhuma camada superior. Tampe o frasco de fundo redondo sob nitrogênio e coloque no congelador.</li>
		<li>Adicione 0,25 mL de H2SO4 concentrado para cada litro de amostra, à amostra no funil separador e agite o funil suavemente.</li>
		<li>Adicione 10 mL de clorofórmio e agite vigorosamente por 2 minutos enquanto ventilar com frequência. Permita que a separação ocorra.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Segunda e terceira separações
	<ol>
<li>Aguarde a separação e adicione a camada inferior no frasco de fundo redondo.</li>
		<li>Adicione um terço de 10 mL de clorofórmio, e agite por 2 minutos, novamente ventando com frequência. Após a separação, adicione a camada inferior ao frasco de fundo redondo.</li>
		<li>Transfira o extrato no frasco de fundo redondo para um evaporador rotativo, evapore e transfira para um frasco de 2 mL.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Protocolo de extração de sólidos (extração modificada de Folch et al.3)
<ol><li>
Configuração NOTA: A configuração de extração requer um recipiente isolado cheio de gelo. Os solventes incluem metanol, água extraída de clorofórmio e clorofórmio 2:1:metanol. Todos os solventes devem ser colocados no gelo para que estejam frios quando as extrações forem iniciadas. As amostras também vão para o gelo, para que tudo permaneça frio.<ol>
<li>Enxágüe todos os tubos e tampas forradas de PTFE 3 vezes com metanol e depois 3 vezes com clorofórmio. Um tubo de centrífuga e um frasco de 15 mL com tampa são necessários para cada extração.</li>
		<li>Coloque a amostra em um tubo de centrífuga contendo 2 mL de clorofórmio. O tamanho da amostra depende da quantidade de lipídio presente, aproximadamente 5 a 10 mg de lipídio preferido.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Moagem e extração
	<ol>
<li>Adicione aproximadamente 1 mL de metanol gelado e triture a amostra em uma polpa rapidamente com um homogeneizador limpo ou haste de ptfe/metal..</li>
		<li>Lave a haste de volta no tubo com aproximadamente 1 mL de clorofórmio gelado 2:1: metanol e depois com 1/2 mL de água extraída de clorofórmio gelado. Se necessário, use um conjunto limpo de fórceps para forçar as partículas de volta ao frasco antes de lavar. Tampe o tubo e sonicar a mistura por 4 minutos em um banho ultrassônico (35 - 42 kHz).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Pipetação dupla: Centrifugar a amostra por 2 min a 1800 × g. Colete toda a camada orgânica (camada inferior) usando a técnica de pipetação dupla na qual uma pipeta de 5 3/4" com a lâmpada acesa livremente é suavemente empurrada através das duas camadas, enquanto aperta a lâmpada, fazendo com que bolhas saiam.<ol>
<li>Quando a parte inferior da segunda camada for atingida, use o polegar para remover a lâmpada sem desenhar a camada orgânica na pipeta. Coloque uma pipeta de 9" dentro da de 5 3/4" e remova a camada inferior através da pipeta de 5 3/4".</li>
		<li>Coloque o extrato em um frasco limpo. Continue a tirar a camada inferior até que tudo seja removido.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Pipetas de lavagem: Enxágue a pipeta de 9" no frasco contendo a camada orgânica usando 1,5 mL de clorofórmio gelado para lavar a parte externa da pipeta e 1,5 mL para lavar por dentro. Gire suavemente essa pipeta durante a lavagem e certifique-se de que todo o clorofórmio escorre pela pipeta em frasco.<ol>
<li>Enxágüe a pipeta de 5 3/4" no tubo contendo a camada aquosa da mesma forma.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sonicato e centrifugar as amostras e pipeta dupla quando separados, usando novas pipetas cada vez. Repita pelo menos três vezes e acumule todas as camadas orgânicas. Depois de remover a camada orgânica pela terceira vez, lave ambas as pipetas no frasco contendo a camada orgânica.</li>
	<li>Usando um fluxo suave de nitrogênio, concentre-se até o volume, depois sele com fita PTFE e armazene em um congelador.</li>
</ol>4. Desenvolvimento de sistemas e etapas para separação tlc de vara de classes lipídicas marinhas
<ol><li>
Preparando as hastes para tlc
	<ol>
<li>Digitalize as hastes no scanner FID automático três vezes</li>
		<li>
Detectando uma amostra: Aplique amostras e padrões com uma seringa nas hastes ou um pouco abaixo da origem. Dispense 0,5 μL e toque na gota na haste. Deixe secar antes de colocar a próxima gota no mesmo local. Localmente todas as amostras em uma linha em varas.</li>
		<li>
Foco em acetona: Focus amostras duas vezes (três vezes se as amostras são muito concentradas) em 70 mL de acetona. Observe a frente do solvente enquanto sobe a haste até que a parte inferior do ponto se funda com a parte superior. Retire as hastes, seque-as por cerca de 5 s e repita o procedimento para produzir uma faixa estreita de material lipíduo perto da parte inferior da haste.</li>
		<li>Seque e condiciona as hastes em uma câmara de umidade constante por 5 minutos. Uma câmara de umidade constante é um dessecador com uma solução saturada de cloreto de cálcio sob a placa.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Sequência que leva ao primeiro cromatógrafo (hidrocarboneto para cetona)
	<ol>
<li>
Primeiro sistema de desenvolvimento: O primeiro sistema de desenvolvimento é o hexano:éter de dietil:ácido formico, 98.95:1:0.05. Use uma seringa para adicionar o ácido fórmico, mas primeiro enxágue a seringa 3× com ácido fórmico. Enxágüe o ácido fórmico da seringa imediatamente depois com clorofórmio. Use 30 mL da mistura para molhar o papel e enxaguar o tanque. Descarte a solução de enxágue e adicione os 70 mL restantes ao tanque.<ol>
<li>Pegue os racks e abaixe-os suavemente para dentro do tanque. Observe até que a frente do solvente atinja os pontos de amostra e inicie o temporizador. Depois de 25 min, retire as hastes da câmara de desenvolvimento, seque na câmara de umidade constante por 5 minutos, e redesenvolve na mesma solução por mais 20 minutos.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Seque as hastes por 5 minutos no scanner FID automático e, em seguida, escaneie até o ponto mais baixo atrás do pico cetona usando uma varredura PPS de 25.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Sequência que leva ao segundo cromatógrama (triacylglycerol to diacylglycerol):
	<ol>
<li>Condiciona as hastes por 5 minutos na câmara de umidade constante.</li>
		<li>
Segundo sistema de desenvolvimento: O segundo sistema de desenvolvimento é hexano:éter de dietil:ácido formico, 79:20:1. Adicione ~30 mL ao tanque de desenvolvimento para molhar o papel e enxaguar o tanque. Em seguida, descarte e desenvolva as hastes por 40 min nos 70 mL restantes. Para a melhor separação entre os picos TAG (saturado) e TAG (poli-insaturado) use uma mistura de 79.9:20:0.1, mas para separação dos picos ST e DAG use uma mistura de 79:20:1.</li>
		<li>Seque e escaneie até o ponto mais baixo atrás do pico de diaciglicerol em uma segunda varredura parcial usando uma varredura PPS 11.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Sequência que leva ao terceiro cromatógrama (lipídio polar acetona-móvel e fosfolipídio)
	<ol>
<li>Condiciona as hastes por 5 minutos na câmara de umidade constante.</li>
		<li>Desenvolva as hastes duas vezes por 15 minutos em 70 mL de acetona. Entre os desenvolvimentos, o ar secou as hastes por cerca de 30 segundos.</li>
		<li>Condiciona as hastes por 5 minutos na câmara de umidade constante.</li>
		<li>
Terceiro sistemade desenvolvimento : O terceiro sistema de desenvolvimento é uma mistura de clorofórmio, metanol e água extraída de clorofórmio, 50:40:10. Desenvolva as hastes duas vezes por 10 minutos em 70 mL da mistura. Entre os desenvolvimentos, o ar secou as hastes por cerca de 30 segundos.</li>
		<li>Seque e escaneie toda a extensão das hastes.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Derivatização fame com H2SO4 no MeOH
<ol><li>
Fazendo o reagente Hilditch
	<ol>
<li>
Preparando o metanol: Coloque 100 mL de MeOH em um frasco volutivo limpo e, em seguida, polvilhe suavemente em NaSO4 anidro até que o fundo do frasco esteja coberto. Uma vez coberto, inverta duas vezes para que qualquer água no metanol seja absorvida pelo NaSO4. Depois de inverter e tremer, deixe descansar por pelo menos 5 minutos.</li>
		<li>
Adicionando o ácido: Decante lentamente o metanol em um frasco de vidro (até agora o NaSO4 é um caroço duro no fundo do frasco) e o H2SO4 é adicionado. Adicione lentamente 1,5 mL de ácido sulfúrico ao metanol usando uma pipeta. Adicione algumas gotas de cada vez e uma vez que todo o ácido tenha sido adicionado, tampa e mexa suavemente para misturar. A solução está agora pronta para ser usada para derivativos, mas deve ser feita semanalmente.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Fazendo os derivativos
	<ol>
<li>Transfira aproximadamente 200 μg de lipídios de um frasco extrato que teve o volume trazido até uma quantidade conhecida, em um frasco limpo de 15 mL e evaporar sob nitrogênio para secar. O valor removido será determinado pela concentração da amostra do TLC/FID. Use uma pipeta limpa para remover a amostra.</li>
		<li>Quando a amostra secar, adicione 1,5 mL de diclorometano e 3 mL do recém-feito reagente Hilditch.</li>
		<li>Vórtice a amostra, e sonicá-la em um banho ultrassônico por 4 minutos para remover lipídios que aderiram ao frasco de vidro. Encha o frasco com nitrogênio, tampa e sele-o com fita PTFE e aqueça a 100°C por 1 hora.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Parando a reação
	<ol>
<li>Deixe as amostras esfriarem completamente até a temperatura ambiente por 10 minutos após a remoção do forno e, em seguida, abra os frascos cuidadosamente.</li>
		<li>Adicione lentamente aproximadamente 0,5 mL solução de bicarbonato de sódio saturado (9 g/100 mL de água extraída de clorofórmio), depois hexano de 1,5 mL. Agite ou vórtice o frasco, em seguida, deixe-se ficar de pé para que ele separe em 2 camadas.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Colecionando os FAME's
	<ol>
<li>
Remoção da camada superior: Uma vez que a derivatização tenha sido interrompida, e haja uma separação clara, remova a fase superior, orgânica e coloque em um frasco de 2 mL limpo lipídio.</li>
		<li>Evaporar o solvente no frasco de 2 mL até a secura e recarregá-lo com hexano para aproximadamente 0,5 mL.</li>
		<li>Encha o espaço da cabeça do frasco com nitrogênio, tampa e sele o frasco com fita PTFE, sonicate por mais 4 minutos para suspender novamente os ácidos graxos, e então ele está pronto para ir para o GC. NOTA: Se forem necessárias concentrações de ácidos graxos, a camada aquosa deve ser lavada três vezes com hexano e todas as camadas orgânicas agrupadas no frasco de 2 mL. Isso envolve adicionar 2 mL de hexano, vórtice da amostra, centrifugar e remover a camada orgânica, tudo repetido 3 vezes.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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<li>Wolf, C., Quinn, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipidomics%3A+practical+aspects+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Lipidomics: practical aspects and applications.</a> Progress in Lipid Research. 47, 15-36 (2008).</li>
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</ol>

Os autores não têm interesses financeiros concorrentes.

A velocidade com que o sistema TLC-FID fornece informações de classe lipídica sinóptica de pequenas amostras torna o TLC-FID uma ferramenta capaz de triagem de amostras marinhas antes de realizar procedimentos analíticos mais envolvidos. Tais análises geralmente requerem a liberação de compostos componentes de extratos lipídes e derivação para aumentar a volatilidade no caso da cromatografia gasosa. O TLC-FID combinado com o GC-FID foi encontrado como uma combinação poderosa para extratos de frutos do mar e outros alimen...

Os métodos aqui descritos dizem respeito a substâncias que são definidas operacionalmente como lipídios marinhos. Esta definição baseia-se em sua comodidade à extração líquido-líquido em solventes orgânicos não polares, e fornece um método conveniente para sua separação de outras substâncias em uma matriz aquática. Sua natureza hidrofóbica facilita seu isolamento da água do mar ou espécimes biológicos, bem como seu enriquecimento, e a remoção de sais e proteínas.
A medição do conteúdo lipídado e sua composição em organismos marinhos tem sido de grande interesse em ecologia alimentar, nutrição de aquicultura e ciência alimentar há décadas. Lipídios são componentes universais em organismos vivos, agindo como moléculas essenciais nas membranas celulares, como principais fontes de energia biodispondiária, fornecendo isolamento térmico e flutuação, e servindo como moléculas de sinalização. Embora os procedimentos para a determinação lipídica em outros campos tenham sido bem descritos, seu uso com amostras marinhas geralmente requer modificações para se adaptar às condições de campo, bem como ao tipo de amostra1.
Para amostras de água do mar, o primeiro passo geralmente requer a separação nas frações operacionalmente definidas de 'dissolvido' e 'partículas', normalmente por filtragem (Protocolo passo 1). A fração de partículas é o que é retido pelo filtro, e o tamanho dos poros é importante na definição do corte2. Muitas vezes, quando estamos amostrando material particulado, gostaríamos de relacionar concentrações lipídicas a concentrações totais de massa, nesse caso uma amostra separada, menor, (por exemplo, 10 mL) tem que ser tomada para este fim (Protocolo passo 1, nota). Para obter uma determinação de massa precisa é importante adicionar formato de amônio (35 g/L) no final da filtragem.
O filtrado de água do mar da amostra maior deve variar entre 250 mL e 1 L, dependendo do tipo de amostra e é submetido à extração líquido-líquido em um funil separador (Protocolo passo 2). A natureza hidrofóbica dos lipídios significa que eles podem ser separados de outros compostos por extração em um solvente não-polar, como clorofórmio. Um sistema de duas camadas é criado onde os lipídios se particionam na camada orgânica, enquanto os componentes solúveis em água permanecem na camada aquosa.
Amostras de partículas em um filtro, ou amostras biológicas são extraídas com uma extração folch et al.modificada 3,também envolvendo clorofórmio (Protocolo passo 3). Mais uma vez, um sistema orgânico/aquoso é criado no qual os lipídios se particionam para a fase orgânica, enquanto moléculas solúveis em água permanecem na fase aquosa, e as proteínas são precipitadas. De fato, para sólidos, a maioria dos laboratórios utiliza alguma variação do procedimento folch et al. extração3 envolvendo clorofórmio e metanol. Para filtros, o primeiro passo é homogeneizar em 2 mL de clorofórmio e 1 mL de metanol.
Durante a extração, deve-se tomar cuidado para proteger os lipídios de modificações químicas ou enzimáticas, mantendo amostras e solventes no gelo para reduzir a hidrólise da ligação éster ou a oxidação de ligação carbono-carbono. Tecidos e lipídios celulares são bastante bem protegidos por antioxidantes naturais e por compartimentação4; no entanto, após a homogeneização das amostras, o conteúdo celular é combinado tornando lipídios mais dispostos à alteração, quimicamente ou enzimaticamente. Alguns lipídios, como a maioria dos esteróis, são muito estáveis, enquanto outros, como os que contêm ácidos graxos poli-insaturados, são mais suscetíveis à oxidação química. Outros, como esteróis com ligações duplas conjugadas, são propensos à oxidação catalisada pela luz5. Após extrações, lipídios são muito mais suscetíveis à oxidação química, e as amostras devem ser armazenadas sob um gás inerte, como nitrogênio. Um fluxo suave de nitrogênio também seria usado para concentrar extratos.
Após a concentração, os lipídios seriam normalmente quantificados a granel, pois são um componente importante dos ecossistemas marinhos que proporcionam uma alta concentração de energia, mais que o dobro do kJ/g de carboidratos e proteínas. Invariavelmente, eles seriam quantificados em seguida como componentes individuais: a análise abrangente dos lipídios geralmente envolve a separação em categorias mais simples, de acordo com sua natureza química. Assim, uma análise completa envolve a medição de lipídios totais, classes lipídicas e compostos individuais.
O lipídio total pode ser determinado tomando a soma das classes lipídicas medidas individualmente separadas pela cromatografia6. Um extrato lipídeto marinho pode conter mais de uma dúzia de classes de fontes biogênicas e antropogênicas. A grande variedade de estruturas lipídicas significa que muita informação pode ser obtida determinando agrupamentos individuais de estruturas. As classes lipídicas individualmente, ou em certos grupos, têm sido utilizadas para sinalizar a presença de certos tipos de organismos, bem como seu estado fisiológico e atividade2. Eles também têm sido usados como um indicador das origens dos materiais orgânicos, incluindo matéria orgânica dissolvida (DOM), bem como contaminantes hidrofóbicos.
Triacilglycerols, fosfolipídios e esteróis estão entre as classes lipídicas biogênicas mais importantes. Os dois primeiros estão bioquimicamente relacionados, pois possuem uma espinha dorsal glicerol à qual dois ou três ácidos graxos são esterificados(Figura 1). Triacylglycerols, juntamente com ésteres de cera são substâncias de armazenamento muito importantes, enquanto outras classes lipídicas contendo ácidos graxos, como diacilicoglicerols, ácidos graxos livres e monoacírgicos são geralmente constituintes menores. Os ácidos graxos livres estão presentes em concentrações mais baixas em organismos vivos, pois os insaturados podem ser tóxicos7. Esteróis (tanto em suas formas livres quanto esterificadas) e álcoois gordurosos também estão incluídos entre os lipídios menos polares, enquanto glicólipídios e fosfolipídios são lipídios polares. Os lipídios polares têm um grupo hidrofílico, que permite a formação de bicamadas lipídicas encontradas em membranas celulares. Esteróis livres também são componentes estruturais de membrana, e quando tomados em relação aos triacylglices fornecem uma condição ou índice nutricional (TAG : ST) que tem sido amplamente utilizado8. Quando tomados em razão para fosfolipídios (ST : PL) podem ser usados para indicar sensibilidade da planta ao sal: valores mais elevados mantêm a integridade estrutural e diminuem a permeabilidade da membrana9. O inverso dessa razão (PL : ST) tem sido estudado em tecidos bivalve durante a adaptação da temperatura10.
As classes lipídicas marinhas podem ser separadas por cromatografia de camada fina (TLC) em hastes revestidas de gel de sílica (Protocolo passo 4) e, em seguida, detectadas e quantificadas pela detecção de ionização de chama (FID) em um scanner FID automático. O TLC/FID tornou-se rotineiramente usado para amostras marinhas, pois fornece rapidamente dados de classe lipídica sinóptica de pequenas amostras, e ao tomar a soma de todas as classes, um valor para lipídios totais. O TLC/FID foi submetido a uma avaliação de garantia de qualidade (QA) e foi encontrado para atender aos padrões necessários para calibração externa consistente, baixos espaços em branco e análise precisa de replicação11. Os coeficientes de variação (CV) ou desvios padrão relativos estão em torno de 10%, e os dados lipídicos totais do scanner FID são normalmente cerca de 90% daqueles obtidos por gravimétricos e outros métodos2. A gravimetria dá lipídios totais mais elevados provavelmente porque o scanner FID mede apenas compostos não voláteis, e também como resultado da possível inclusão de material não lipídico em medidas gravimétricas.
As informações fornecidas pela análise da classe lipídica são especialmente úteis quando combinadas com determinações de ácidos graxos como indivíduos, ou esteróis, ou os dois em combinação. O primeiro passo para essas análises envolve a liberação de todos os ácidos graxos componentes juntamente com esteróis nos extratos lipídicos (Protocolo passo 5). A grande variedade de estruturas e funções lipídicas significa que eles têm visto amplo uso em estudos ecológicos e biogeoquímicos que avaliam a saúde do ecossistema e até que ponto foram influenciados por insumos antropogênicos e terrestres. Eles têm sido usados para medir a biossíntese de substâncias de valor dietético para a fauna marinha, bem como para indicar a qualidade das amostras de água. Medir lipídios em amostras de núcleos de sedimentos ajuda a mostrar a sensibilidade dos sedimentos às mudanças no uso da terra humana perto da margem terrestre-marítima.
A principal ferramenta para identificar e quantificar compostos lipídicos individuais tem sido tradicionalmente cromatografia gasosa (GC) com FID. Antes da análise, porém, esses compostos são mais voláteis por derivatização. Os ácidos graxos são liberados na presença de um catalisador ácido (H2SO4) das classes lipídicas aciis(Figura 1). Em química orgânica, o grupo acil (R-C=O) é geralmente derivado de um ácido carboxílico (R-COOH). Eles são então reestrificados para ésteres de metila ácidos graxos (FAME) que dá melhores separações nas colunas GC (Protocolo passo 5).

<table><tbody><tr><td>Frascos para injetáveis de 15 ml</td><td>VWR</td><td>66009-560</td><td></td></tr><tr><td>1-hexadecanol</td><td>Sigma</td><td>258741-1G</td><td></td></tr><tr><td>1-Monopalmitoil-rac-glicerol</td><td>Sigma</td><td>M1640-1g</td><td></td></tr><tr><td>Frascos para injetáveis de 2 ml</td><td>VWR</td><td>46610-722</td><td></td></tr><tr><td>Filtros de fibra de vidro de 25 mm</td><td>Fisher</td><td>09 874 32A</td><td></td></tr><tr><td>2 ml bulbos de pipeta</td><td>VWR</td><td>82024-554</td><td></td></tr><tr><td>Filtros de fibra de vidro de 47 mm</td><td>Pipetas Fisher</td><td>09 874 32</td><td></td></tr><tr><td>5 3/4"</td><td>Fisher</td><td>1367820A</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de 9"</td><td>Fisher</td><td>1367820C</td><td></td></tr><tr><td>Acetona</td><td>VWR</td><td>CAAX0116-1</td><td></td></tr><tr><td>Agilent GC-FID 6890</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de Cálcio ANHS 500gm</td><td>VWR</td><td>CACX0160-1</td><td></td></tr><tr><td>Tampas para frascos para injetáveis de 2 ml</td><td>VWR</td><td>46610-712</td><td></td></tr><tr><td>clorofórmio</td><td>VWR</td><td>CACX1054-1</td><td></td></tr><tr><td>Palmitato de colesterol</td><td>Sigma</td><td>C6072-1G</td><td></td></tr><tr><td>Chromarod S5</td><td>Shell USA</td><td>3252</td><td></td></tr><tr><td>Diclorometano</td><td>VWR</td><td>CADX0831-1</td><td></td></tr><tr><td>DL-a-fosfatidilcolina, ditalmotoyl</td><td>Sigma</td><td>P5911-1g</td><td></td></tr><tr><td>Éter Etílico, Anidrado de grau ACS 4L</td><td>VWR</td><td>CAEX0190-4</td><td></td></tr><tr><td>Tripalmitato de Glicerilo</td><td>Sigma</td><td>T5888-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Seringa Hamilton 702SNR 25&micro; l</td><td>Sigma</td><td>58381</td><td></td></tr><tr><td>Hélio</td><td>Air Liquide</td><td>A0492781</td><td></td></tr><tr><td>Hexano</td><td>VWR</td><td>CAHX0296-1</td><td></td></tr><tr><td>Regulador de hidrogênio</td><td>VWR</td><td>55850-484</td><td></td></tr><tr><td>Iatroscan MK6</td><td>Shell USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Fisher</td><td>066662</td><td></td></tr><tr><td>Medical Air</td><td>Liquide</td><td>A0464563</td><td></td></tr><tr><td>Luvas de nitrilo médias</td><td>Fisher</td><td>191301597C</td><td></td></tr><tr><td>Luvas de nitrilo L</td><td>VWR</td><td>CA82013-782</td><td></td></tr><tr><td>Nitrogênio</td><td>Air Liquide</td><td>A0464775</td><td></td></tr><tr><td>Regulador de nitrogênio</td><td>VWR</td><td>55850-474</td><td></td></tr><tr><td>Nonadecane</td><td>Sigma</td><td>74158-1G</td><td></td></tr><tr><td>Ácido palmítico</td><td>Sigma</td><td>P0500-10G</td><td></td></tr><tr><td>Dispensador de repetição</td><td>Sigma</td><td>20943</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato de sódio 1kg</td><td>VWR</td><td>CA97062-460</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de sódio Anhy ACS 500gr</td><td>VWR</td><td>CA71008-804</td><td></td></tr><tr><td>Ácido sulfúrico</td><td>VWR</td><td>CASX1244-5</td><td></td></tr><tr><td>Fita de teflon</td><td>Fisher</td><td>14610120</td><td></td></tr><tr><td>tissue master 125 115V c/homogeneizador de 7mm</td><td>OMNI International</td><td>TM125-115</td><td></td></tr><tr><td>TLC tanque de desenvolvimento</td><td>Shell USA</td><td>3201</td><td></td></tr><tr><td>UHP hidrogênio</td><td>Air Liquide</td><td>A0492788</td><td></td></tr><tr><td>VWR repippetter solvente VWR</td><td></td><td>82017-766</td><td></td></tr><tr><td>VWR temporizador LED intermitente 2 canais</td><td>VWR</td><td>89140-196</td><td></td></tr><tr><td>Zebron ZB-Wax GC coluna</td><td>Phenomenex</td><td>7HM-G013-11</td><td></td></tr></tbody></table>

determinação de aulas de lipídios e lipídios totais em amostras marinhas

Determination of Total Lipid and Lipid Classes in Marine Samples

Os lipídios são em grande parte compostos de carbono e hidrogênio e, portanto, fornecem uma energia específica maior do que outras macromoléculas orgânicas no mar. Por serem ricos em carbono e hidrogênio, eles também são hidrofóbicos e podem atuar como um portador de solvente e absorção de contaminantes orgânicos e, portanto, podem ser condutores de bioacumulação poluente em ecossistemas marinhos. Sua natureza hidrofóbica facilita seu isolamento da água do mar ou espécimes biológicos: a análise lipídica marinha começa com a amostragem e, em seguida, a extração em solventes orgânicos não polares, fornecendo um método conveniente para sua separação de outras substâncias em uma matriz aquática.
Se a água do mar foi amostrada, o primeiro passo geralmente envolve a separação em facções 'dissolvidas' e 'partículas' definidas operacionalmente por filtragem. Amostras são coletadas e lipídios isolados da matriz amostral tipicamente com clorofórmio para matéria verdadeiramente dissolvida e coloides, e com misturas de clorofórmio e metanol para sólidos e espécimes biológicos. Esses extratos podem conter várias classes de fontes biogênicas e antropogênicas. Neste momento, podem ser determinados lipídios totais e classes lipídicas. O lipídio total pode ser medido somando classes lipídicas individualmente determinadas que normalmente foram separadas cromatograficamente. A cromatografia de camada fina (TLC) com detecção de ionização de chamas (FID) é regularmente utilizada para a análise quantitativa de lipídios a partir de amostras marinhas. O TLC-FID fornece informações de classe lipídica sinóptica e, por meio de aulas de resumição, uma medição lipídica total.
As informações de classe lipídica são especialmente úteis quando combinadas com medidas de componentes individuais, por exemplo, ácidos graxos e/ou esteróis, após sua liberação de extratos lipídicos. A grande variedade de estruturas e funções lipídicas significa que elas são amplamente utilizadas em pesquisas ecológicas e biogeoquímicas que avaliam a saúde do ecossistema e o grau de influência por impactos antropogênicos. Eles têm sido empregados para medir substâncias de valor dietético à fauna marinha (por exemplo, aquafeeds e/ou presas), e como um indicador da qualidade da água (por exemplo, hidrocarbonetos).

Como o setor de produção de alimentos que mais cresce, a aquicultura está evoluindo em termos de inovações tecnológicas e adaptações para atender às necessidades em mudança. Uma delas é reduzir a dependência de farinha de peixe de origem selvagem e óleo de peixe, que fornecem ingredientes de ração para muitas espécies de aquicultura. Os óleos de plantas terrestres estão sendo investigados como substitutos sustentáveis e econômicos para o óleo de peixe em aquafeeds, e o fígado é um tecido alvo para análise, pois é o local...

Este protocolo é para a determinação de lipídios na água do mar e espécimes biológicos. Lipídios em filtrados são extraídos com clorofórmio ou misturas de clorofórmio e metanol no caso de sólidos. As classes lipídicas são medidas pela cromatografia de camada fina da haste com detecção de ionização de chamas e sua soma dá o teor lipíduo total.

Determinação de Aulas De Lipídios e Lipídios Totais em Amostras Marinhas

Lipids are largely composed of carbon and hydrogen and, therefore, provide a greater specific energy than other organic macromolecules in the sea. Being ...

Os métodos descritos aqui dizem respeito a compostos que podem ser operacionalmente definidos como lipídios marinhos. A base dessa definição é sua comodidade à extração líquido-líquido em solventes orgânicos não polares, o que fornece um meio conveniente de separá-los de outros compostos em uma matriz aquosa. Sua natureza hidrofóbica facilita seu isolamento da água do mar ou espécimes biológicos, bem como seu enriquecimento e remoção de sais e proteínas.Para amostras de água do mar, o primeiro passo normalmente envolve a separação em frações dissolvidas e partículas definidas operacionalmente, geralmente por filtragem. A fração de partículas é aquela retida por filtros, e o tamanho dos poros é importante na definição do corte. Usando fórceps limpos lipídicos, coloque um filtro de fibra de vidro de 47 milímetros que foi ashed em um sistema de filtragem limpo lipídico.Pegue a amostra e gire-a suavemente para resuspensar todas as partículas que possam ter se resolvido. Meça um volume conhecido. O volume dependerá da quantidade de material particulado na amostra.Quando o volume for medido, adicione sucção ao sistema de filtragem e molhe suavemente o filtro com água do mar filtrada. Adicione toda a amostra lentamente ao funil de filtragem e enxágue o cilindro graduado com água do mar para garantir que todas as partículas sejam adicionadas ao filtro. Enxágüe o funil do aparelho para garantir que todas as partículas sejam enxaguadas no filtro.Puxe todo o líquido através do filtro, mas não deixe o filtro secar, pois pode romper células que estão no filtro. Pegue as fórceps limpas lipídicas, dobre o filtro ao meio, depois dobre-o em terços mais uma vez e, em seguida, ao meio do comprimento. Em seguida, o filtro é colocado em um frasco limpo de lipídios.Cubra o filtro com dois mls de clorofórmio, tampa sob nitrogênio e vedação com fita Teflon. Neste ponto, a amostra estará estável em armazenamento a menos 20 Celsius por até um ano. Preparando a amostra.Meça um volume conhecido do filtrado em um cilindro graduado em vidro limpo lipídeo. Coloque a amostra em um funil separador limpo de lipídios e adicione aproximadamente 20 mls de clorofórmio. Agite esta mistura por pelo menos dois minutos ventando com frequência.Após a primeira separação, remoção do primeiro extrato e adição de ácido. Depois de agitar a solução por dois minutos, enrole o funil em papel alumínio e espere até que a separação tenha ocorrido, aproximadamente cinco minutos. Depois de esperar pela separação, retire a parte inferior da folha de alumínio para ver as duas camadas.Colete a camada inferior em um frasco de fundo redondo limpo lipídeca, tomando cuidado para não incluir nenhuma camada superior. Tampe o frasco de fundo redondo sob nitrogênio, e coloque em um congelador. Recupere o funil separador e adicione ácido sulfúrico ao líquido.Adicione 0,25 mls para cada litro de água do mar presente. Uma vez adicionado o ácido sulfúrico, agite a água do mar suavemente, depois adicione mais 10 mls de clorofórmio, e agite vigorosamente enquanto ventilar por mais dois minutos. Então permita a separação.Segunda e terceira separações. Adicione a camada inferior ao frasco fundo redondo novamente sem incluir água. Adicione uma terceira quantidade de 10 mls de clorofórmio e agite por mais dois minutos com ventilação.Após a separação, coloque a porção final de clorofórmio no mesmo frasco, e os extratos combinados podem ser evaporados por evaporador rotativo e transferidos para um frasco de dois ml. Configuração. Para a configuração de extração, você precisará de um recipiente isolado cheio de gelo. Os solventes incluem clorofórmio, água extraída de clorofórmio, e clorofórmio-metanol 2:1.Desta solução, você precisa de aproximadamente um ml por amostra, então coma-a em conformidade. Todos esses solventes devem ser colocados no gelo para que estejam frios quando as extrações forem iniciadas. As amostras também vão para o gelo para que tudo permaneça frio.Moagem e extração. Amostras foram armazenadas congeladas em dois mls de clorofórmio, então adicione um ml de metanol gelado ou meio tubo. Tenha cuidado ao adicionar o metanol para não tocar no frasco com a tubulação.Limpe e homogeneize três vezes com metanol e três vezes com clorofórmio. Ao moer, tenha cuidado para não cortar o frasco de extração na mão no caso de quebrar o frasco e evitar aquecer a amostra. Moer rapidamente.Uma vez que a amostra tenha sido completamente moída, suporte-a no gelo e lave todas as partículas restantes do moedor de volta para o frasco usando um ml de clorofórmio-metanol 2:1. Se necessário, use um conjunto de fórceps limpos lipídicos para forçar as partículas de volta ao frasco antes de lavar. Tenha cuidado para não tocar na tubulação do moedor ou do moedor para o frasco.Em seguida, adicione 0,5 mls ou um quarto de tubulação de água extraída de clorofórmio sem tocar no moedor ou no moedor ao frasco. Quando o moedor for lavado, toque na gota pendurada no moedor até o frasco. Cap e mantê-lo no gelo até pronto para sonicar.Pipetação dupla. Após a centrifugação, haverá duas camadas no frasco: as camadas orgânicas e aquosas. Para obter a camada orgânica, a técnica de pipetação dupla é usada.Para isso, uma tubulação curta de cinco centímetros com a lâmpada colocada livremente é agarrada entre o dedo indicador e o dedo médio. Empurre suavemente o tubo para baixo através das duas camadas enquanto aperta a lâmpada fazendo com que bolhas saiam até o final. Quando a parte inferior da segunda camada for atingida, use o polegar para tirar a lâmpada sem desenhar a camada orgânica na tubulação.Com uma tubulação de nove centímetros esprema a lâmpada completamente. Coloque a extremidade longa da tubulação na tubulação de cinco centímetros e remova a camada inferior através da tubulação de cinco centímetros. Este extrato é então colocado em um frasco limpo lipídicos.Continue a tirar a camada inferior até que tudo seja removido. Todas as camadas de agrupamento no frasco limpo lipídicos. Lavando cachimbos.Remova a lâmpada da tubulação de nove centímetros. Coloque-o no frasco com o extrato nele. Pegue um tubo cheio de clorofórmio limpo, e sem tocar na tubulação para aquele que está sendo lavado, esguiche o clorofórmio ao redor do interior da tubulação.Gire suavemente essa pipeta durante a lavagem. Pegue um segundo tubo cheio de clorofórmio e faça a mesma coisa do lado de fora da tubulação. Certifique-se de que todo o clorofórmio escorre pela tubulação e pelo frasco de extração.Quando terminar com a tubulação longa, pegue a curta e repita, mas lave-a no frasco com a amostra. Detectando uma amostra. Limpe uma seringa com clorofórmio.Pegue uma amostra de volume conhecido e enxágue a seringa na amostra. Puxe a amostra além da quantidade que você deseja detectar. Em seguida, leve o êmbolo para baixo para a quantidade que você quer garantir nenhuma bolha de ar.Use o botão para distribuir 0,5 microliters e toque na haste para a haste. Deixe secar antes de colocar a próxima gota no mesmo local. Localmente todas as amostras em uma linha em hastes realizadas sobre a extremidade de uma placa quente quente.Focando em acetona. O foco da amostra é feito em 100% de acetona. Adicione aproximadamente 70 mls de acetona ao fundo do tanque de desenvolvimento.Pegue os dois racks e abaixe-os suavemente no tanque de desenvolvimento. Observe a frente do solvente enquanto sobe a haste até que a parte inferior do ponto se funda com a parte superior do ponto. Remova as hastes.Seque-os por cerca de cinco segundos e repita o procedimento. Se as amostras estiverem muito concentradas, esse foco pode ser feito uma terceira vez. Primeiro sistema de desenvolvimento.O primeiro sistema de desenvolvimento consiste em hexano, éter etílico e ácido fórmico de 98,5 a 1 a 0,5. Comece enxaguando um cilindro graduado três vezes com hexano e descartando. Encha o cilindro graduado um pouco além de 85 mls com hexano.Em seguida, use uma pipeta e a garrafa de hexano para encher o cilindro graduado a 90 mls. Em seguida, leve o fundo do menisco para a linha de 91 ml usando éter etílico, que dará um ml de éter etílico. Adicione 0,5 mls de ácido fórmico usando a seringa Hamilton.Mas primeiro enxágue a seringa Hamilton três vezes com o ácido fórmico para garantir que nenhum clorofórmio que foi usado para enxaguar a amostra dos restos da seringa. Adicione duas seringas completas ou 25 microliters de cada vez para um total de 50 microlitres. É importante que o ácido fórmico seja enxaguado da seringa imediatamente com clorofórmio para evitar corroer o metal na seringa.Uma vez que a seringa Hamilton esteja limpa, faça a solução até exatamente 100 mls usando hexano e uma tubulação. Então cap e inverter três ou quatro vezes. Despeje aproximadamente 30 mls no tanque de desenvolvimento.Use estes 30 mls para molhar o papel e enxaguar o tanque. Descarte a solução de enxágue. Adicione os 70 ml restantes ao tanque de desenvolvimento.Adicionando racks ao sistema de desenvolvimento. Adicionar hastes ao sistema de desenvolvimento é o mesmo para todos os desenvolvimentos. Certifique-se de que o temporizador está definido para o tempo que as hastes devem ser desenvolvidas.E, em seguida, pegue os racks e abaixe-os suavemente para dentro do tanque. Observe até que a frente do solvente atinja os pontos de amostra e inicie o temporizador. Segundo sistema de desenvolvimento.O segundo sistema de desenvolvimento é o hexano, o etileno e o ácido fórmico, 79 a 20 a um. Assim como antes, enxágue o cilindro graduado três vezes com hexano. Adicione exatamente 20 mls de éter e, em seguida, um ml de ácido fórmico, que leva o volume a 21 mls.Em seguida, leve o volume para 100 mls com hexano. Adicione cerca de 75 mls de hexano usando as bombas de garrafa. E para a porção, use uma pipeta.Cap e inverter várias vezes. Adicione aproximadamente 30 ml ao tanque de desenvolvimento para molhar o papel e enxaguar o tanque. Descarte os 30 mls.Adicione os 70 restantes e está pronto para o conjunto de hastes. Terceiro sistema de desenvolvimento. O terceiro sistema de desenvolvimento é uma mistura de clorofórmio, metanol e água extraída de clorofórmio, 50, 40 a 10.Enxágüe o cilindro graduado três vezes com clorofórmio. Adicione cerca de 45 mls de clorofórmio. Usando uma pipeta, leve o fundo do menisco para a marca de 50 ml.Adicione cerca de 38 mls de metanol. Traga o fundo do menisco para a linha de 90 ml. Em seguida, encha os últimos 10 mls com água extraída de clorofórmio.Como com os outros sistemas de desenvolvimento, inverta isso três ou quatro vezes, e depois despeje 30 mls no tanque para molhar o papel. Descarte esses 30 mls e adicione os últimos 70 mls no tanque. Preparando o metanol.Para compor a solução Hilditch usada para derivação, encha um frasco volumoso limpo e limpo lipídeca que também foi seco ou enxaguado três vezes mais com metanol para remover qualquer clorofórmio. Adicione metanol até que o fundo do menisco esteja na linha de contenção. Depois de medir o metanol, adicione sulfato de sódio que foi seco por pelo menos 24 horas a 60 graus Celsius.Adicione sulfato de sódio suficiente para cobrir a parte inferior do frasco métrico de volume. Uma vez coberto, inverta duas vezes para que qualquer água que esteja no metanol seja absorvida pelo sulfato de sódio. Depois de inverter e tremer, deixe descansar por pelo menos cinco minutos.Adicionando o ácido. Depois que o metanol se estabeleceu cinco minutos, lentamente decanta-o na garrafa de vidro final garantindo que todo o sulfato de sódio permaneça na parte inferior do frasco volumoso. O sulfato de sódio geralmente permanece na parte inferior, então todo o metanol deve derramar.Deixe o volumoso com o sulfato de sódio na parte de trás do capô de fumaça para secar. Adicione lentamente ácido sulfúrico ao metanol usando um PIPETMAN. Adicione algumas gotas de cada vez para que o metanol não cuspa.Uma vez que todo o ácido tenha sido adicionado, tampa e mexa suavemente para misturar. A solução está agora pronta para ser usada para derivativos, mas deve ser feita semanalmente. Fazendo os derivados.A partir de um frasco extrato que teve o volume trazido até uma quantidade conhecida, redemoinho, em seguida, remover uma parte do extrato em lipídio-limpo, marcado frasco de 15 ml. A quantidade que você remover será determinada pela concentração da amostra do iatroscano. Use uma pipeta Drummond limpa lipídica para remover a amostra.Uma vez que a amostra tenha sido removida, coloque o frasco de 15 ml sob nitrogênio para evaporar completamente o clorofórmio. A amostra original pode ser mantida e devolvida ao congelador. Quando a amostra estiver seca, adicione 1,5 mls de diclorometano ou um pipetful e três mls da solução Hilditch que foi feita mais cedo naquele dia ou dois pipetfuls.Esta solução é então mantida sob nitrogênio, vórtice e colocada no sonicator por quatro minutos antes de ser colocada em um forno a 100 graus Celsius por uma hora. Parando a reação. Depois de aquecer a 100 Celsius por uma hora e esfriar, adicione lentamente 0,5 mls de solução de bicarbonato de sódio saturado.Bolhas serão produzidas à medida que o ácido for neutralizado. Em seguida, adicione 1,5 mls de hexano. Recapitulando e agite vigorosamente.Deixe-o de pé para que se separe em duas camadas. Processe todas as amostras. Quando todos terminarem, o primeiro estará pronto para o próximo passo.Removendo a camada superior. Uma vez que a derivatização tenha sido interrompida e haja uma separação clara no frasco de 15 ml, remova a camada superior e coloque-a em um frasco de dois ml limpo lipídicos. É melhor deixar um pouco da camada superior do que obter qualquer camada inferior no frasco de dois ml.Uma vez que a maioria da camada superior tenha sido removida, o resto da solução pode ser descartada. O extrato que está no dois ml deve ser evaporado completamente sob um fluxo suave de nitrogênio. Uma vez que o frasco esteja completamente seco, o hexano pode ser reassurado, e então a amostra deve ser sônica, mantida sob nitrogênio, e então está pronta para ir para o GC. Resultados representativos.Esta figura mostra cromatógramas TLC-FIC crus do nosso padrão, uma dieta feita com óleo de colza e tecido hepático de um salmão alimentado com essa dieta. A aquicultura, o setor de produção de alimentos que mais cresce, tem que reduzir sua dependência de farinha de peixe de origem selvagem e óleo de peixe. Óleos vegetais estão sendo investigados como substitutos do óleo de peixe em aquafeeds.E o fígado, o local principal para o metabolismo lipídico, é alvo de análise. Podemos ver a prevalência de triaciglicerols na dieta no fígado, e também a importância de fosfolipídios de membrana no fígado. Esta figura mostra cromatogramas de um padrão.Lipídios e partículas de assentamento coletadas ao largo da costa aqui e lipídios no mysid coletados perto da mesma profundidade. Aqui, cromotogramas foram processados através de software de plotagem. Sendo ricos em carbono com um valor energético muito alto, os lipídios são um componente importante da produtividade das áreas de prateleira, que são particularmente importantes para o ciclismo de carbono.Mais produção primária de superfície atinge o fundo do mar em águas rasas. Descobrimos que o pequeno mysid tinha a maior concentração lipídica em nossas amostras. Cera e ésteres estéreis são combinados aqui.E há um pico de divisão devido à presença de altos níveis de ácidos graxos poli-insaturados. A rapidez com que o sistema Chromarod Iatroscan TLC-FID fornece dados de classe lipídica sinóptica de pequenas amostras torna-o uma ferramenta poderosa para a triagem de amostras marinhas antes de realizar análises cromatográficas mais detalhadas. Tais análises geralmente requerem a liberação de compostos componentes de extratos lipídes e derivatização para aumentar a volatilidade.

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Descrevemos um novo método lipidomics quantitativos para identificação de espécies de lipídios numerosos em levedura utilizando pesquisa scan-espectrometria de massa de ionização electrospray (ESI / MS). Este método ultrapassa atualmente os métodos disponíveis para identificação e quantificação de lipídios na capacidade de resolver diversas formas moleculares de lipídeos, sensibilidade e velocidade.

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