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A Magnetic-Bead-Based Mosquito DNA Extraction Protocol for Next-Generation Sequencing

Um protocolo de extração de DNA de mosquito baseado em contas magnéticas para sequenciamento de próxima geração

Full Text
7,178 Views
05:34 min
April 15, 2021

DOI: 10.3791/62354-v

Tse-Yu Chen1, Adam E. Vorsino2, Kyle J. Kosinski1, Ana L. Romero-Weaver1, Eva A. Buckner1, Joanna C. Chiu3, Yoosook Lee1

1Florida Medical Entomology Laboratory, Department of Entomology and Nematology, Institute of Food and Agricultural Sciences,University of Florida, 2U. S. Fish and Wildlife Service, Pacific Islands Fish and Wildlife Office, 3Department of Entomology and Nematology,University of California Davis

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Descrito aqui é um protocolo de extração de DNA usando contas magnéticas para produzir extrações de DNA de alta qualidade de mosquitos. Essas extrações são adequadas para uma abordagem de sequenciamento de próxima geração a jusante.

Este protocolo de extração de DNA baseado em contas magnéticas amigável ao orçamento torna o sequenciamento de alto rendimento acessível a laboratórios e estudos limitados de recursos. Este protocolo não requer equipamentos caros para extração de DNA de alta qualidade e pode ser útil em certas situações de diagnóstico ou pesquisa onde a obtenção de uma quantidade suficiente de DNA com uma qualidade para sequenciamento de alto rendimento é um desafio. Este protocolo é fácil de replicar com uma demonstração única.

Ele deve ser experimentado com um pequeno número de amostras primeiro para se familiarizar com o fluxo de trabalho. Para começar, hidrate as amostras de tecido do mosquito armazenadas em mais de 70% de álcool adicionando 100 microliters de água de grau PCR e incubando por uma hora a quatro graus Celsius para suavizar o tecido. Após a incubação, descarte a água e adicione 100 microliters de proteinase K mistura de enzima tampão.

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