Name: Modelo de Zebrafish de Metástase neuroblastoma (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 20 s
Description: Aprenda a desenvolver um modelo de zebrafish para estudar metástase de neuroblastoma usando sobreexpressão de MYCN e LMO1. Este método permite imagem in vivo em tempo real do desenvolvimento tumoral.

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Este trabalho foi apoiado por uma bolsa R01 CA240323 (S.Z.) do Instituto Nacional de Câncer; uma subvenção W81XWH-17-1-0498 (S.Z.) do Departamento de Defesa dos Estados Unidos (DoD); um prêmio V Scholar da V Foundation for Cancer Research (S.Z.) e uma Bolsa de Plataforma do Mayo Center for Biomedical Discovery (S.Z.); e suportes do Mayo Clinic Cancer Center e Centro de Medicina Individualizada (S.Z.).

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<li>Ung, C. Y., Guo, F., Zhang, X., Zhu, Z., Zhu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaic+zebrafish+transgenesis+for+functional+genomic+analysis+of+candidate+cooperative+genes+in+tumor+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Mosaic zebrafish transgenesis for functional genomic analysis of candidate cooperative genes in tumor pathogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (97), e52567(2015).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+role+for+GAB2+in+neuroblastoma+pathogenesis+through+the+promotion+of+SHP2%2FMYCN+cooperation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Critical role for GAB2 in neuroblastoma pathogenesis through the promotion of SHP2/MYCN cooperation.</a> Cell Reports. 18 (12), 2932-2942 (2017).</li>
<li>Zimmerman, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MYC+drives+a+subset+of+high-risk+pediatric+neuroblastomas+and+is+activated+through+mechanisms+including+enhancer+hijacking+and+focal+enhancer+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">MYC drives a subset of high-risk pediatric neuroblastomas and is activated through mechanisms including enhancer hijacking and focal enhancer amplification.</a> Cancer Discovery. 8 (3), 320-335 (2018).</li>
<li>Koach, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drugging+MYCN+oncogenic+signaling+through+the+MYCN-PA2G4+binding+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Drugging MYCN oncogenic signaling through the MYCN-PA2G4 binding interface.</a> Cancer Research. 79 (21), 5652-5667 (2019).</li>
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<li>DuBois, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+sites+in+stage+IV+and+IVS+neuroblastoma+correlate+with+age%2C+tumor+biology%2C+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+pediatric+hematology%2Foncology%22%5BJournal%5D)">Metastatic sites in stage IV and IVS neuroblastoma correlate with age, tumor biology, and survival.</a> Journal of pediatric hematology/oncology. 21 (3), 181-189 (1999).</li>
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<li>Postlethwait, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vertebrate+genome+evolution+and+the+zebrafish+gene+map%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Vertebrate genome evolution and the zebrafish gene map.</a> Nature Genetics. 18 (4), 345-349 (1998).</li>
<li>Opazo, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-genome+duplication+and+the+functional+diversification+of+teleost+fish+hemoglobins%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">Whole-genome duplication and the functional diversification of teleost fish hemoglobins.</a> Molecular Biology and Evolution. 30 (1), 140-153 (2013).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

O zebrafish tem sido comumente utilizado em pesquisas nas últimas décadas, especialmente em pesquisas sobre câncer, por razões óbvias, como sua facilidade de manutenção, reprodução robusta e claras vantagens para a imagem in vivo1,28. O modelo de zebrafish pode ser facilmente manipulado embrionáriamente devido à sua fertilização e desenvolvimento externo, o que complementa bem aos organismos modelos de mamíferos, como ratos e camundongos, para estudos ge...

O zebrafish tem sido amplamente utilizado e aplicado em diversas áreas de pesquisa, especialmente no câncer. Este modelo oferece muitas vantagens - como sua reprodução robusta, manutenção econômica e visualização versátil do crescimento tumoral e metástase- tudo isso faz do zebrafish uma ferramenta poderosa para estudar e investigar as bases celulares e moleculares de tumorigênese e metástase. Novas técnicas para mapeamento de genomas em larga escala, transgênese, superexpressão ou nocaute de genes, transplante de células e telas químicas aumentaram imensamente o poder do modelo de zebrafish1. Nos últimos anos, muitas linhas de zebrafish foram desenvolvidas para estudar tumorigênese e metástase de uma variedade de cânceres humanos, incluindo, mas não se limitando à leucemia, melanoma, rabdomiossarcoma e carcinoma hepatocelular2,3,4,5. Além disso, o primeiro modelo de zebrafish de neuroblastoma (NB) foi gerado pela superexpressão mycn, um oncogene, no sistema nervoso simpático periférico (PSNS) sob controle do promotor dopamina-beta-hidroxilase (dβh). Com este modelo, foi demonstrado ainda que a ALK ativada pode sinergizar com MYCN para acelerar o aparecimento do tumor e aumentar a penetração do tumor no vivo6.
NB é derivado da linhagem simpática das células da crista neural, e é um câncer altamente metastático em crianças7. É responsável por 10% das mortes relacionadas ao câncer pediátrico8. Amplamente metástase no diagnóstico, a NB pode ser clinicamente apresentada como tumores originários principalmente ao longo da cadeia da gânglio simpático e da medula adrenal de PSNS9,10. A amplificação do MYCN está comumente associada a desfechos ruins em pacientes com NB11,12. Além disso, o LMO1 foi identificado como um gene crítico de suscetibilidade de NB em casos de alto risco13,14. Estudos descobriram que a coexpressão transgênica de MYCN e LMO1 no PSNS do modelo de zebrafish não só promove o início precoce do RN, mas também induz metástase generalizada aos tecidos e órgãos semelhantes aos locais comumente vistos em pacientes com NB13 de alto risco. Muito recentemente, outro fenótipo metastático de NB também foi observado em um modelo mais recente de zebrafish de NB, no qual tanto MYCN quanto Lin28B, codificando uma proteína de ligação de RNA, são superexpressos sob controle do promotor dβh16.
A abordagem transgênica estável no zebrafish é frequentemente usada para estudar se a superexpressão de um gene de interesse poderia contribuir para o desenvolvimento normal e a patogênese da doença14,15. Esta técnica tem sido usada com sucesso para demonstrar a importância de múltiplos genes e caminhos para a tumorigênese do RN6,16,17,18,19,20. Este artigo introduzirá como a linha de peixes transgênicos que sobreexpressa tanto o MYCN quanto o LMO1 no PSNS foi criada e como foi demonstrado que a cooperação desses dois oncogenes acelera o surgimento da tumorigênese e metástase do NB13. Primeiro, a linha transgênica que sobreexpressa o EGFP-MYCN sob controle do promotor dβh (linha MYCN designada) foi desenvolvida injetando a construção dβh-EGFP-MYCN em um estágio de uma célula de embriões AB do tipo selvagem (WT), como descrito anteriormente6,17. Uma linha transgênica separada que sobreexpressa lMO1 na linha PSNS (designada LMO1) foi desenvolvida por cunhar duas construções de DNA, dβh-LMO1 e dβh-mCherry, em embriões WT no estágio de uma célula13. Foi demonstrado anteriormente que construções de DNA duplo coinjetados podem ser cunhadas no genoma do peixe; portanto, LMO1 e mCherry são coexpressos nas células PSNS dos animais transgênicos. Uma vez que os embriões F0 injetados atingiram a maturidade sexual, eles foram então superados com peixes WT para a identificação de peixes positivos com integração transgene(s). Resumidamente, a prole F1 foi examinada pela primeira vez por microscopia fluorescente para expressão mCherry nas células PSNS. A integração germinal de LMO1 em peixes mCherry-positivo foi confirmada ainda por PCR genômico e sequenciamento. Após a identificação bem sucedida de cada linha transgênica, a prole de peixes transgênicos HEterozigous MYCN e LMO1 foram interladas para gerar uma linha de peixes compostos expressando tanto MYCN quanto LMO1 (denominada MYCN; Linha LMO1). MYCN portador de tumor; Os peixes LMO1 foram monitorados por microscopia fluorescente quinzenalmente para a evidência de tumores metastáticos nas regiões distantes do local primário, região da glândula interrenal (IRG, zebrafish equivalente à glândula adrenal humana)13. Confirmar a metástase dos tumores no MYCN; Foram aplicadas análises histológicas e imunohistoquímicas de peixes LMO1, histológicas e imunohistoquímicas.

<table><tbody><tr>3,3' - ácido acético do <td>vetor</td><td>SK-4100</td><td></td> <td>do vetor do jogo do vetor da diaminobenzidina (DAB)</td></tr><tr><td></td><td>Fisher científico/Acros orgânico</td><td>64-19-7</td><td></td></tr><tr><td>Agarose GP2</td><td>Midwest Scientific</td><td>009012-36-6</td><td></td></tr><tr>Anticorpo <td>Pel-Freez</td><td>P40101</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Avidin/Biotina que obstrui o vetor</td><td></td><td>SP-2001 do jogo de bloqueio da hidroxilase (TH)</td><td></td></tr><tr><td>Detecção intensa de BOND R</td><td>Leica Biosystems</td><td>DS9263</td><td></td></tr><tr><td>BOND diluente de anticorpo primário</td><td>Leica Biosystems Newcastle, Ltd.</td><td>AR9352</td><td></td></tr><tr><td>Instrumento BOND-MAX IHC</td><td>Leica Biosystems Newcastle, Ltd.</td><td>N/A</td><td>sistema de coloração IHC totalmente automatizado</td></tr><tr><td>CH211-270H11 BAC clone</td><td>BACPAC centro de recursos (BRFC)</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio composto equipado com câmera DP71</td><td>Olympus</td><td>AX70</td><td></td></tr><tr><td>Cytoseal XYL (meio de montagem à base de xileno)</td><td>Richard-Allan Scientific</td><td>8312-4</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Leica</td><td>3801601</td><td>pronto para uso (sem necessidade de preparação)</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Carolina</td><td>86-1263</td><td></td></tr><tr><td>Expandir Sistema de PCR de Modelo Longo</td><td>Roche Applied Science, IN</td><td>11681834001</td><td></td></tr><tr><td>Gateway BP Clonase II mistura enzimática</td><td>Invitrogen, CA</td><td>11789-020</td><td></td></tr><tr><td>Gateway LR Clonase II mistura enzimática</td><td>Invitrogen, CA</td><td>11791-100</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secundário anti-Rb de cabra (Biotinilado)</td><td>Dako</td><td>E0432</td><td></td></tr><tr><td>Solução de hematoxilina, Harris Modified</td><td>Sigma Aldrich Chemical Company Inc. / SAFC</td><td>HHS-32-1L</td><td></td></tr><tr><td>HRP Avidin D</td><td>Vector</td><td>A-2004</td><td></td></tr><tr><td>Ácido clorídrico</td><td>Aqua Solutions</td><td>4360-1L</td><td></td></tr><tr><td>Peróxido de hidrogênio, 3%</td> <td>Fisher Scientific</td><td>H324-500</td><td></td></tr><tr><td>I-SceI enzima</td><td>New England Biolabs, MA</td><td>R0694L</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de canamicina</td><td>Teknova, Inc.</td><td>K2150</td><td></td></tr><tr><td>Kimberly-Clark Professional Kimtech Science Kimwipes</td><td>Fisher Scientific</td><td>34133</td><td></td></tr><tr><td>Carbonato de Lítio</td><td>Sigma Aldrich Chemical Company Inc. / SAFC</td><td>554-13-2</td><td></td></tr><tr><td>Micrótomo para seccionamento</td><td>Leica Biosystems</td><td>RM2255</td><td></td></tr><tr><td>One Shot TOP10 Quimicamente Competente&nbsp;E. coli</td><td>Invitrogen</td><td>C404006</td><td></td></tr><tr><td>p3E-polyA</td><td>&nbsp;Dr. Chi-Bin Chien, Univ. de Utah</td><td>N/A</td><td>um presente generoso (Consulte a página da web http://tol2kit.genetics.utah.edu/index.php/Main_Page para obter material, que é distribuído livremente conforme descrito.)</td></tr><tr><td>Cera de parafina</td><td>Surgipath Paraplast</td><td>39603002</td><td>Parrafin para parafina</td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>Alfa Aesar</td><td>A11313</td><td></td></tr><tr><td>vetor pDEST (vetor de destino modificado contendo locais de reconhecimento I-SceI)</td><td>Dr. C. Grabher, Instituto de Tecnologia de Karlsruhe, Karlsruhe, Alemanha</td><td>N / A</td><td>um presente generoso</td></tr><tr><td>pDONR 221 vetor doador de gateway</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12536-017</td><td></td></tr><tr><td>pDONRP4-P1R vetor doador</td><td>&nbsp;Dr. Chi-Bin Chien, Univ. de Utah</td><td>N/A</td><td>um generoso presente</td></tr><tr><td>vermelho de fenol, 0,5%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>&nbsp; P0290</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (PBS), 10X</td><td>BioRad</td><td>1610780</td><td></td></tr><tr><td>Kit de coloração vermelha Picrosirrius</td><td>Polysciences</td><td>24901-250</td><td></td></tr><tr><td>pME-mCherry</td><td>Addgene</td><td>26028</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K, recombinante, PCR Grau</td><td>Roche</td><td>21712520</td><td></td></tr><tr><td>QIAprep Spin MiniPrep Kit</td><td>Qiagen</td><td>27104</td><td></td></tr><tr><td>RDO Descalcificador Rápido</td><td>Apex Enginerring</td><td>RDO04</td><td></td></tr><tr><td>Azida de Sódio (NaN3)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>26628-22-8</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de fluorescência estéreo</td><td>Leica</td><td>MZ10F</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de fluorescência estereoscópica equipado com uma câmera digital de mira DS-U1 para imagem de imagem</td><td>Nikon</td><td>SMZ-1500</td><td></td></tr><tr><td>Taq DNA Polimerase</td><td>New England Biolabs, MA</td><td>M0273L</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek VIP&reg; &nbsp; 6 Processador de Infiltração a Vácuo AI</td><td>Sakura</td><td>N/A</td><td>Modelo #: VIP-6-A1</td></tr><tr><td>Tricaine-S</td><td>Western Chemical Incorporated</td><td>20513</td><td></td></tr><tr><td>Xileno</td><td>Thermo Fisher</td><td>Scientific X3P1GAL</td><td></td></tr></tbody></table>

modelo de zebrafish de metástase neuroblastoma

Zebrafish Model of Neuroblastoma Metastasis

O zebrafish emergiu como um importante modelo animal para estudar doenças humanas, especialmente o câncer. Juntamente com as robustas tecnologias transgênicas e de edição de genomas aplicadas na modelagem de zebrafish, a facilidade de manutenção, produtividade de alto rendimento e poderosa imagem ao vivo fazem do zebrafish um valioso sistema modelo para estudar metástase e bases celulares e moleculares subjacentes a esse processo in vivo. O primeiro modelo de metástase do neuroblastoma de zebrafish (NB) foi desenvolvido superexpressando dois oncogenes, MYCN e LMO1, sob controle do promotor de dopamina-beta-hidroxilase (dβh). O MYCN e o LMO1 co-superexpressos levaram à redução da latência e ao aumento da penetração da neuroblastomagênese, bem como à metástase distante acelerada das células tumorais. Este novo modelo reitera de forma confiável muitas características-chave da NB metastática humana, incluindo o envolvimento de alterações genéticas clinicamente relevantes e associadas à metástase; desenvolvimento natural e espontâneo da metástase in vivo; e locais conservados de metástases. Portanto, o modelo de zebrafish possui vantagens únicas para dissecar o complexo processo de metástase tumoral in vivo.

Para determinar se o LMO1 sinergiza com MYCN para afetar a patogênese NB, construções transgênicas que impulsionam a expressão de LMO1 (dβh:LMO1 e dβh:mCherry) ou MYCN (dβh:EGFP-MYCN) nas células PSNS sob controle do promotor dβh foram injetadas em embriões de zebrafish13. Conforme ilustrado na Figura 1A, após o desenvolvimento de linhas transgênicas estáveis e a validação de seus genótipos, os pe...

Este artigo introduz o método de desenvolver, caracterizar e rastrear em tempo real a metástase tumoral no modelo de zebrafish de neuroblastoma, especificamente na linha de zebrafish transgênico com superexpressão de MYCN e LMO1, que desenvolve metástase espontaneamente.

Modelo de Zebrafish de Metástase neuroblastoma

Zebrafish has emerged as an important animal model to study human diseases, especially cancer. Along with the robust transgenic and genome editing ...

Esses métodos foram utilizados para desenvolver o primeiro modelo de zebrafish de metástase neuroblastoma. E para demonstrar que esse modelo pode recapitular fielmente muitas características da metástase observadas em pacientes com alto risco de neuroblastoma. A principal vantagem desse modelo metastático de zebrafish é a imagem in vivo em tempo real da disseminação do tumor para entender melhor quando, e possivelmente como a metástase ocorre.Esta técnica não é específica para neuroblastoma. Pode ser aplicado a modelos de zebrafish de diversos tipos de câncer, desde que as células tumorais possam ser identificadas e rastreadas levando a uma série de possibilidades. Para começar, desenvolva uma linha de peixes transgênicos heterozigosos que expresse tanto MYCN quanto LMO1, intercalando linhas transgênicas MYCN e LMO1.Em um dia pós-fertilização, use um microscópio de fluorescência estereoscópica para classificar a progênidade do outcross para a expressão EGFP, que apresenta como pontos positivos EGFP. Após a classificação, isole embriões selecionados em pratos Petri separados e rotule pratos como MYCN positivo ou MYCN negativo. Visualize e classifique embriões de ambos os grupos para expressão LMO1 de três a quatro dias após a fertilização.Procure por manchas de fluorescência vermelha tanto no gânglio cervical superior quanto nas células neuronais não PSNS dopaminérgicas, especialmente na medula oblongata do cérebro traseiro. Realize a triagem antes que os embriões atinjam cinco dias após a fertilização. Em seguida, isole os peixes classificados em quatro grupos de genótipos diferentes e rotule apenas como MYCN, somente LMO1, MYCN e LMO1, ambos e tipo selvagem.Elevá-los em condições idênticas de acordo com os protocolos padrão. Visualize tumores com um microscópio de fluorescência estereoscópica lançando peixes suavemente com uma espátula metálica em ambos os lados laterais para ver o tumor. Após a identificação do possível peixe portador de tumor, isole-os em um tanque separado com rótulos apropriados que incluem a data de nascimento, data em que o tumor foi examinado e genótipo.Com seis semanas após a fertilização, repita etapas anteriores para a triagem de peixes portadores de tumores e peixes sem tumores para confirmar a presença de tumores para peixes previamente examinados ou identificar novos possíveis peixes portadores de tumores. Procure o tamanho sustentado ou aumentado da massa positiva da fluorescência e peixes com tumor confirmados. Depois de identificar peixes portadores de tumores, monitore-os quinzenalmente para obter evidências de migração de células tumorais, que apresentam como pequenas massas tumorais EGFP ou mCherry positivas longe do local principal da gênese tumoral.Isole esses peixes em tanques separados conforme necessário e rotule adequadamente para indicar possíveis metástases. Depois de interpretar o HEterozigos MYCN em peixes LMO1, e ao classificar sua descendência, a expressão EGFP MYCN foi proeminente nas células neuronais não PSNS dopaminérgicas em um dia após a fertilização. Em contraste, a expressão LMO1 foi proeminente em ambas as células PSNS e células neuronais não PSNS.Massas tumorais positivas fluorescentes foram detectadas em tecidos em órgãos, distantes do local do tumor primário no composto de peixes transgênicos com superexpressão tanto do MYCN quanto do LMO1, mas não apenas nos peixes transgênicos com a expressão de MYCN. A coloração de H&E das seções cirúrgicas mostra que o tumor primário surgiu da região da glândula interrenal, o equivalente a zebrafish da glândula suprarrenal humana que é o local mais comum da doença primária no paciente neuroblastoma. Massas tumorais distantes da glândula interrenal foram detectadas em várias regiões, incluindo a porção distal do rim, órbita, brânquia, baço e a parede interna da câmara atrial do coração.A linhagem neuroblasto do PSNS de células tumorais no tumor primário e todos os locais metastáticos foi confirmada. Quantidades significativamente amplificadas e aumento da espessura das fibras de colágeno manchadas de PSR foram encontradas em tumores MYCN LMO1 quando comparados com os tumores que expressam apenas MYCN. Após o uso desse procedimento, podem ser aplicadas terapias de rastreamento e teste de novos cânceres, o que pode potencialmente levar ao desenvolvimento de agentes alternativos para prevenir e tratar cânceres metastáticos.

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

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Este vídeo descreve um método de microinjeção para entrega de células de câncer de mama no espaço perivitelino de embriões transgênicos de peixe-zebra. Após a incubação, visualizamos o embrião sob um microscópio fluorescente para observar a invasão, disseminação e metástase das células cancerígenas.

zPDX-Análise de Invasividade: Investigando o Comportamento Invasivo de Células Cancerígenas Metastáticas em Xenoenxertos de Embrião de Peixe-Zebra

Uma forma rápida de tela para modificadores de melanoma, utilizando um modelo de tumor zebrafish autóctone é apresentado. Leva vantagem de o vector miniCoopR que permite a expressão de genes candidatos de melanoma nos melanócitos. Um método para obtenção das curvas de sobrevida livre de melanoma, um ensaio de invasão, um protocolo para a coloração de anticorpos de melanócitos de escala e um ensaio de transplante de melanoma são descritos.

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O objetivo deste estudo é demonstrar como a estratégia de transgênese em mosaico pode ser usada em peixe-zebra para avaliar de forma rápida e eficiente as contribuições relativas de múltiplos oncogenes na iniciação e progressão do tumor in vivo.

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Teste da capacidade Vascular invasiva das células cancerosas no peixe-zebra (<em&gt; Danio rerio</em&gt;)

Aqui, descrevemos modelos peixe-zebra xenotransplante usando dois locais de injecção diferentes, ou seja, espaço perivitelínico e duto de Cuvier, para investigar o comportamento invasivo e avaliar a intravasation e extravasamento potencial das células de câncer de mama humanos, respectivamente.

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O transplante de células cancerosas é uma ferramenta importante para a identificação de mecanismos de câncer e respostas terapêuticas. As técnicas atuais dependem de animais imune-incompetentes. Descrevemos aqui um método para transplantar células tumorais de zebrafish em embriões imunocompetentes para a análise a longo prazo do comportamento de células tumorais e respostas de fármacos in vivo .

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Relatamos uma técnica que permite imagens ao vivo da dinâmica dos microtúbulos em células de glioblastoma (GBM) invadindo um tecido cerebral de vertebrados. O acoplamento da injeção ortotópica de células GBM marcadas fluorescentemente em um cérebro transparente de peixe-zebra com imagens intravitais de alta resolução permite a medição da dinâmica do citoesqueleto durante a invasão do câncer in situ .

Imagem ao vivo da dinâmica dos microtúbulos em células de glioblastoma invadindo o cérebro do peixe-zebra

Descrevemos um protocolo de xenotransplante na gema de embriões transparentes de peixe-zebra que é otimizado por um método de estadiamento simples e rápido. As análises pós-injeção incluem sobrevida e avaliação da carga da doença de células xenotransplantadas por citometria de fluxo.

Um método simples, rápido e eficaz para análise de xenotransplante tumoral em embriões transparentes de peixe-zebra

Aprenda a desenvolver um modelo de zebrafish para estudar metástase de neuroblastoma usando sobreexpressão de MYCN e LMO1. Este método permite imagem in vivo em tempo real do desenvolvimento tumoral.

Modelo de Zebrafish de Metástase neuroblastoma

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