Name: Isolamento de Células Valvares Primárias Humanas para Modelagem de Doenças In Vitro (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-16T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Aprenda o isolamento de células endoteliais e intersticiais valvares primárias humanas para modelagem de doenças in vitro. Este método garante viabilidade celular e especificidade fenotípica para estudos da patogênese da doença valvar aórtica calcificada.

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Gostaríamos de agradecer a Jason Dobbins pela discussão perspicaz e leitura crítica deste manuscrito. Gostaríamos de agradecer ao Centro de Recuperação e Educação de Órgãos por sua ajuda e apoio e agradecer aos doadores de tecidos e suas famílias por tornar este estudo possível. Todas as amostras de pacientes são coletadas de indivíduos inscritos em estudos aprovados pelo conselho de revisão institucional da Universidade de Pittsburgh, de acordo com a Declaração de Helsinque. Os tecidos cadavéricos obtidos através do Centro de Recuperação e Educação de Órgãos (CORE) foram aprovados pelo Comitê de Supervisão de Pesquisa e Treinamento Clínico Envolvendo Decedentes da Universidade de Pittsburgh (CORID).
Algumas figuras criadas com Biorender.com.
O CSH é apoiado pelo National Heart, Lung, and Blood Institute K22 HL117917 e R01 HL142932, pela American Heart Association 20IPA35260111.

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O IS recebe apoio institucional de pesquisa da Atricure e da Medtronic e atua como consultor da Medtronic Vascular. Nenhum desses conflitos está relacionado a este trabalho. Todos os outros autores não têm nada a divulgar.

A obtenção de tecidos de controle e doenças de seres humanos é fundamental para a modelagem de doenças in vitro e ex vivo; no entanto, enquanto muitas vezes se fala sobre os desafios de preencher a lacuna entre o banco à beira do leito, a ordem inversa - indo da suíte cirúrgica para o banco - é muitas vezes tão assustadora quanto uma lacuna. Essencial para um cientista básico obter espécimes de tecido humano primário é uma colaboração com um cientista cirurgião investido que tem uma equipe de enfermeiros, técnicos cirúrg...

A valvopatia aórtica calcifica (CAVD) é uma patologia crônica caracterizada por inflamação, fibrose e macrocalcificação dos folhetos valvares aórticos. O remodelamento progressivo e a calcificação dos folhetos (denominada esclerose aórtica) podem levar à obstrução do fluxo sanguíneo (estenose aórtica), o que contribui para o acidente vascular cerebral e leva à insuficiência cardíaca. Atualmente, o único tratamento para CAVD é a substituição cirúrgica ou transcateter da valva aórtica (SAVR e TAVR, respectivamente). Não há opção não cirúrgica para interromper ou reverter a progressão da DAV, e sem a troca valvar, as taxas de mortalidade se aproximam de 50% dentro de 2-3 anos 1,2,3. Definir os mecanismos subjacentes que impulsionam esta patologia identificará potenciais novas abordagens terapêuticas.
Em um adulto saudável, os folhetos valvares aórticos têm aproximadamente um milímetro de espessura, e sua principal função é manter o fluxo unidirecional de sangue para fora do ventrículo esquerdo4. Cada um dos três folhetos é composto por uma camada de células endoteliais da válvula (VECs) que reveste a superfície externa do folheto e funciona como uma barreira. Os VECs mantêm a homeostase valvar regulando a permeabilidade, a adesão das células inflamatórias e a sinalização parácrina 5,6,7. As células intersticiais valvares (VICs) compreendem a maioria das células dentro do folheto valvar8. Os VICs estão dispostos em três camadas distintas no folheto. Essas camadas são conhecidas como ventricular, espongiosa e fibrosa9. O ventricular está voltado para o ventrículo esquerdo e contém fibras de colágeno e elastina. A camada intermediária, a espongiosa, contém alto teor de proteoglicanos que proporciona flexibilidade de cisalhamento durante o ciclo cardíaco. A camada externa de fibrosa está localizada próxima à superfície de saída no lado aórtico e é rica em colágeno fibrilar Tipo I e Tipo III, que fornecem força para manter a coaptação durante a diástole10,11,12. As VICs residem em estado quiescente, no entanto, fatores como inflamação, remodelamento da matriz extracelular (MEC) e estresse mecânico podem interromper a homeostase da CIV 8,9,13,14,15,16. Com a perda da homeostase, os VICs ativam e adquirem um fenótipo semelhante ao miofibroblasto capaz de proliferação, contração e secreção de proteínas que remodelam o milieu extracelular17. VICs ativadas podem fazer a transição para células calcificantes que lembram a diferenciação de uma célula-tronco mesenquimal (CTM) em um osteoblasto 15,17,18,19,20,21,22,23,24,25.
A calcificação parece iniciar-se na camada fibrosa rica em colágeno a partir de contribuições de VECs e VICs, mas se expande e invade as demais camadas do folheto8. Assim, fica claro que tanto os VECs quanto os VICs respondem a estímulos para regular positivamente a expressão de genes osteogênicos, no entanto, os eventos precisos que impulsionam a ativação de genes osteogênicos, bem como a complexa interação entre as células e a matriz extracelular do folheto, permanecem mal definidos. Os modelos murinos não são uma fonte ideal para estudar os fatores não genéticos da patogênese da DACD, pois camundongos não desenvolvem CAVD de novo26,27, portanto, o uso de tecidos humanos primários e das linhagens celulares primárias isoladas desses tecidos é necessário. Em particular, a obtenção dessas células em grande número e boa qualidade é imperativa, pois o campo das culturas de células 3D e modelagem organoide está se expandindo e provavelmente se tornará uma alternativa humana ex vivo aos modelos murinos.
O objetivo do presente método é compartilhar um fluxo de trabalho que estabeleceu as condições para isolar e cultivar de forma eficiente VECs e VICs obtidos de válvulas removidas cirurgicamente de doadores humanos. Estudos anteriores mostraram o isolamento bem-sucedido de VECs e VICs de válvulas suínas28 e murinas29, até onde sabemos, este é o primeiro a descrever o isolamento dessas células em tecidos humanos. O protocolo descrito aqui é aplicável a válvulas excisadas humanas e contorna e melhora grandemente os danos causados pelo tempo de colheita muitas vezes longo entre a excisão do tecido e o processamento laboratorial, introduzindo a utilização de uma solução de armazenamento a frio, uma solução tamponada clinicamente utilizada em transplantes de órgãos que estabiliza grandemente as células do tecido excisado. O protocolo aqui descrito também mostra como determinar o fenótipo celular e garantir alta eficiência da sobrevivência celular com o mínimo de contaminação cruzada celular.

<table><tbody><tr><td>0,45 &mu; m filtro</td><td>Thermo Scientific</td><td>7211345</td><td>Placa de preparação com revestimento de colágeno</td></tr><tr><td>Placa de cultura de células de 10 cm</td><td>Greiner Bio-One</td><td>664160</td><td>Cultura de células/expansão de linha celular</td></tr><tr><td>10 mL pipeta sorológica</td><td>Fisher</td><td>14955234</td><td>Isolamento VEC/VIC, cultura de células, expansão de linha celular</td></tr><tr><td>1000 &mu; Pontas de filtro L</td><td>VWR</td><td>76322-154</td><td>Cultura de células/expansão de linha celular</td></tr><tr><td>10XL pontas de filtro</td><td>VWR</td><td>76322-132</td><td>Cultura de células/expansão de linha celular</td></tr><tr><td>Tubos cônicos de 15 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>339650</td><td>Armazenamento de tecidos, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>Solução aquosa de paraformaldeído a 16%</td><td>Microscopia eletrônica Sciences</td><td>15710S</td><td>Fixador de tecidos e células</td></tr><tr><td>190 proof etanol</td><td>Decon</td><td>2801</td><td>Desinfecção</td></tr><tr><td>1x DPBS: sem cálcio, sem magnésio</td><td>Gibco</td><td>14190250</td><td>solução salina. Isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Fisher</td><td>BP2944100</td><td>solução salina. Preparação de tecidos, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>20 &mu; Pontas de filtro L</td><td>VWR</td><td>76322-134</td><td>Cultura celular/expansão da linha celular</td></tr><tr><td>Etanol à prova de 200</td><td>Decon</td><td>2701</td><td>Desparafinização de amostras de tecido</td></tr><tr><td>2-propanol</td><td>Fisher</td><td>A416P 4</td><td>Fabricação de placas revestidas de colágeno</td></tr><tr><td>5 mL pipeta sorológica</td><td>Fisher</td><td>14955233</td><td>Isolamento VEC/VIC, cultura celular, expansão da linha celular</td></tr><tr><td>50 mL tubos cônicos</td><td>Thermo Scientific</td><td>339652</td><td>Armazenamento de tecidos, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>prato de 60 mm</td><td>GenClone</td><td>25-260</td><td>Isolamento VEC</td></tr><tr><td>Placa de cultura de células de 6 poços</td><td>Corning</td><td>3516</td><td>Cultura de células/expansão da linha celular</td></tr><tr><td>Ácido acético, glacial</td><td>Fisher</td><td>BP2401 500</td><td>Fabricação de placas revestidas de colágeno</td></tr><tr><td>AlexaFluor 488 faloidina</td><td>Invitrogen</td><td>A12379</td><td>Fluorescente contracoloração de f-actina</td></tr><tr><td>Belzer UW Solução de Transplante de Armazenamento a Frio</td><td>Ponte para a Vida</td><td>BUW0011L</td><td>Solução de Armazenamento de Tecidos</td></tr><tr><td>Albumina de Soro Bovino, Fração V - Livre de Ácidos Graxos 25g</td><td>Bioworld</td><td>220700233</td><td>confirmação VEC com anticorpo CD31+ Dynabeads</td></tr><tr><td>Calponin 1&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab46794</td><td>Anticorpo primário (coloração positiva para VIC)</td></tr><tr><td>CD31 (PECAM-1) (89C2)</td><td>Sinalização celular</td><td>3528</td><td>Anticorpo primário (coloração positiva para VEC)</td></tr><tr><td>CD31+ Dynabeads</td><td>Invitrogen</td><td>11155D</td><td>Confirmação de VEC com CD31+ Dynabeads</td></tr><tr><td>CDH5</td><td>Cell Signaling</td><td>2500</td><td>Anticorpo primário (coloração positiva para VEC)</td></tr><tr><td>Filtro celular com 0,70 &mu; m poros</td><td>Corning</td><td>431751</td><td>VIC isolamento</td></tr><tr><td>Colágeno 1, proteína de cauda de rato</td><td>Gibco</td><td>A1048301</td><td>Fabricação de placas revestidas</td></tr><tr><td>de colágeno Colagenase II</td><td>Worthington Biochemical Corporation</td><td>LS004176</td><td>Digestão de tecidos. Preparação de tecidos, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>Conflikt Spray desinfetante pronto para uso Decon</td><td></td><td>4101</td><td>Desinfecção</td></tr><tr><td>Contador de células automatizado Countess II</td><td>Invitrogen</td><td>A27977</td><td>Contador de células</td></tr><tr><td>automatizado Countess II lamínulas deslizantes reutilizáveis</td><td>Invitrogen</td><td>2026h</td><td>Contador de células automatizado necessário Tampa de deslizamento</td></tr><tr><td></td><td>Fisher</td><td>125485E</td><td>Amostras de válvula de montagem</td></tr><tr><td>Frascos criogênicos</td><td>Olympus Plastics</td><td>24-202</td><td>Congelando células/amostras de tecido</td></tr><tr><td>Desinfectando Alvejante com CLOROMAX - Fórmula Concentrada&nbsp;</td><td>Clorox</td><td>N/A</td><td>Desinfecção</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>10569044</td><td>Meios de crescimento. Expansão VIC</td></tr><tr><td>EBM - Meio de Célula Endotelial, Meio Basal, Vermelho de Fenol livre 500</td><td>Lonza Walkersville</td><td>CC3129</td><td>Meio de crescimento. Expansão VEC</td></tr><tr><td>EGM-2 Endothelial Cell Medium-2 - 1 kit SingleQuot Kit</td><td>Lonza Walkersville</td><td>CC4176</td><td>Suplemento de mídia de crescimento. Expansão</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> VEC <tr><td>EVOS FL Microscópio</td><td>Life Technologies</td><td>Número do modelo: AME3300</td><td>Imagem fluorescente</td></tr><tr><td>EVOS XL Microscópio</td><td>Life Technologies</td><td>AMEX1000</td><td>Visualização de células durante a expansão da linha celular Soro</td></tr> bovino <tr><td>fetal - Premium Select</td><td>R& D Systems</td><td>S11550</td><td>VIC expansão</td></tr><tr><td>Tesoura fina</td><td>Fine Science Tools</td><td>14088-10</td><td>Preparação de tecidos, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>Fisherbrand Cell Scrapers Fisher</td><td></td><td>08-100-241</td><td>Expansão VIC</td></tr><tr><td>Fungizone</td><td>Gibco</td><td>15290-026</td><td>Antifúngico: Preparação de tecidos, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>Gentamicina</td><td>Gibco</td><td>15710-064</td><td>Antibiótico: Preparação de tecidos, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>Lâminas de vidro</td><td>Globe Scientific Inc</td><td>1358L</td><td>amostras de válvula de montagem</td></tr><tr><td>Cabra anti-rato 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11001</td><td>Anticorpo secundário fluorescente</td></tr><tr><td>Cabra anti-rato 594</td><td>Invitrogen</td><td>A11005</td><td>Anticorpo secundário fluorescente</td></tr><tr><td>Cabra anti-coelho 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>Fluorescente anticorpo secundário</td></tr><tr><td>Cabra anti-coelho 594</td><td>Invitrogen</td><td>A11012</td><td>Anticorpo secundário fluorescente</td></tr><tr><td>Invitrogen Countess II FL Slide reutilizável</td><td>Invitrogen</td><td>A25750</td><td>Contador de células automatizado necessário Slide</td></tr><tr><td>Invitrogen NucBlue Fixed Cell ReadyProbes Reagent (DAPI)</td><td>Invitrogen</td><td>R37606</td><td>Contracoloração fluorescente</td></tr><tr><td>do núcleo LM-HyCryo-STEM - 2X Meios de criopreservação para células-tronco</td><td>HyClone Laboratories, Inc.</td><td>SR30002</td><td>Armazenamento de células congeladas</td></tr><tr><td>Meio de montagem</td><td>Fisher Chemical Permount</td><td>SP15-100 Amostras de</td><td>válvula de montagem</td></tr><tr><td>Mr. Recipiente de congelamento gelado</td><td>Nalgene</td><td>51000001</td><td>Recipiente para congelamento controlado de amostras</td></tr><tr><td>Mycoplasma-ExS Spray</td><td>PromoCell</td><td>PK-CC91-5051</td><td>Desinfecção</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140163</td><td>Antibiótico. Expansão VIC</td></tr><tr><td>Plasmocin</td><td>Invivogen</td><td>ANTMPT</td><td>Anti-micoplasma. Isolamento e expansão de VIC/VEC</td></tr><tr><td>Anticorpo SM22a</td><td>Abcam</td><td>ab14106</td><td>Anticorpo primário (coloração positiva VIC)</td></tr><tr><td>Tesoura de padrão padrão</td><td>Fine Science Tools</td><td>14001-14</td><td>Preparação de tecidos, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr><td>Cotonete estéril</td><td>Puritano</td><td>25806 10WC</td><td>Isolamento VEC</td></tr><tr><td>de tecido humano</td><td>Simport Scientific</td><td>M515-2</td><td>Recipiente para incorporação de tecidos</td></tr><tr><td>Taylor Forceps (17cm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11016-17</td><td>Preparação de tecidos, isolamento VIC/VEC</td></tr><tr>Solução de azul de tripano, solução <td>de contagem de</td><td>células</td>15250061<td>Gibco 0,4%</td><td></td></tr> <tr><td>TrypLE Express Enzyme</td><td>Gibco</td><td>12604021</td><td>Splitting VIC/VECs</td></tr><tr><td>Kit Von Kossa</td><td>Polysciences</td><td>246331</td><td>Coloração de seções de parafina de tecidos para calcificação</td></tr><tr><td>anticorpo do fator de von Willebrand</td><td>Abcam</td><td>ab68545</td><td>Anticorpo primário (coloração positiva para VEC)</td></tr><tr><td>Xilenos</td><td>Fisher Chemical</td><td>X3S-4</td><td>Desparafinização de amostras de tecido</td></tr><tr><td>&alfa;Anticorpo SMA</td><td>Abcam</td><td>ab7817</td><td>Anticorpo primário (coloração positiva para VIC)</td></tr></tbody></table>

isolamento de células valvares primárias humanas para modelagem de doenças in vitro

Isolation of Human Primary Valve Cells for In vitro Disease Modeling

A valvopatia aórtica calcifica (CAVD) está presente em quase um terço da população idosa. O espessamento, o enrijecimento e a calcificação da válvula aórtica causam estenose aórtica e contribuem para a insuficiência cardíaca e o acidente vascular cerebral. A patogênese da doença é multifatorial, e estresses como inflamação, remodelamento da matriz extracelular, fluxo turbulento e estresse mecânico e deformação contribuem para a diferenciação osteogênica das células endoteliais e intersticiais valvares. No entanto, os fatores iniciais precisos que impulsionam a transição osteogênica de uma célula saudável para uma célula calcificante não estão totalmente definidos. Além disso, a única terapia atual para estenose aórtica induzida por CAVD é a substituição da válvula aórtica, pela qual a válvula nativa é removida (substituição cirúrgica da válvula aórtica, SAVR) ou uma válvula de substituição totalmente dobrável é inserida através de um cateter (substituição da válvula aórtica transcateter, TAVR). Esses procedimentos cirúrgicos têm um alto custo e com sérios riscos; portanto, a identificação de novos alvos terapêuticos para a descoberta de medicamentos é imperativa. Para esse fim, o presente estudo desenvolve um fluxo de trabalho em que tecidos removidos cirurgicamente de pacientes e tecidos de cadáveres de doadores são usados para criar linhas primárias específicas do paciente de células valvares para modelagem de doenças in vitro. Este protocolo introduz a utilização de uma solução de armazenamento a frio, comumente utilizada no transplante de órgãos, para reduzir os danos causados pelo tempo de captação muitas vezes longo entre a excisão do tecido e o processamento laboratorial, com o benefício de estabilizar grandemente as células do tecido excisado. Os resultados do presente estudo demonstram que as células valvares isoladas retêm sua capacidade proliferativa e fenótipos endoteliais e intersticiais em cultura mais de vários dias após a retirada valvar do doador. O uso desses materiais permite a coleta de células de controle e CARD, a partir das quais as linhagens celulares de controle e doença são estabelecidas.

O protocolo acima descreve as etapas necessárias para o manuseio de tecidos valvares humanos e o isolamento e estabelecimento de linhagens celulares viáveis a partir desses tecidos. Os folhetos da valva aórtica são processados para incorporação de parafina, congelados para armazenamento a longo prazo para análise bioquímica ou genética e digeridos para o isolamento de VECs e VICs (Figura 1). Enquanto os espécimes cirúrgicos provavelmente terão diagnóstico clínico de estenose aórtica e podem ...

Este protocolo descreve a coleta de valvas aórticas humanas extraídas durante procedimentos cirúrgicos de substituição valvar aórtica ou de tecido cadavérico e o subsequente isolamento, expansão e caracterização de células endoteliais e intersticiais valvares primárias específicas do paciente. Estão incluídos detalhes importantes sobre os processos necessários para garantir a viabilidade celular e a especificidade do fenótipo.

Isolamento de Células Valvares Primárias Humanas para Modelagem de Doenças In Vitro

Calcific aortic valve disease (CAVD) is present in nearly a third of the elderly population. Thickening, stiffening, and calcification of the aortic valve ...

O isolamento da célula endotelial e intersticial da válvula primária humana é fundamental para a compreensão do mecanismo subjacente da patogênese da doença valvar aórtica calcificada. Quando a válvula é excisada do tecido nativo, a viabilidade celular cai. Então, identificamos um método que prolonga a viabilidade celular.Depois de receber as amostras de tecido valvar extraídas, extraia a raiz da aorta e submerja o tecido em um tubo cônico de 50 mililitros contendo solução de enxágue estéril. Após uma incubação de 10 minutos em um balde de gelo em um balancim, pulverize os tubos com etanol a 70%. Em um capuz de cultura de tecidos estéreis, transfira o tecido para uma placa de Petri e expiregue dois folhetos valvares.Coloque um folheto em um frasco criogênico e congele o tecido em nitrogênio líquido para armazenamento de menos 80 graus Celsius. Para fixar o tecido para coloração do conteúdo de cálcio, corte o segundo folheto ao meio do nódulo à dobradiça e coloque ambos os pedaços de tecido em um que esteja submerso em 4% de paraformaldeído. Em seguida, coloque toda a configuração no balancim à temperatura ambiente por um período mínimo de duas, mas não mais de quatro horas.Para iso

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Nós fornecemos um método para isolar e populações de cultura pura de células endoteliais válvula cardíaca (VEC). VEC pode ser isolado de ambos os lados da cúspide ou folheto e imediatamente a seguir, a célula intersticial subjacente isolamento (VIC) é simples.

Isolamento de Valvular Células Endoteliais

Este artigo irá fornecer um método para isolar e cultura de codorna ou frango...

Isolamento e Cultura da Avian embrionárias Células Progenitoras Valvular

Neste vídeo, demonstramos o isolamento de células intersticiais da válvula aórtica do coração de um camundongo adulto usando um procedimento de colagenase em duas etapas e sua subsequente cultura em meio de crescimento de baixo volume.

Isolamento de células intersticiais da válvula de camundongo: um método enzimático para isolar e cultivar VICs da válvula aórtica de camundongo

A capacidade de isolar células endoteliais da válvula cardíaca (VECs) é fundamental para a compreensão dos mecanismos de desenvolvimento, manutenção e doença da válvula.  Aqui descrevemos o isolamento de VECs de camundongos Tie2-GFP embrionários e adultos usando FACS que permitirá estudos determinando a contribuição de VECs em processos de desenvolvimento e doença.

O isolamento de células endoteliais de Murino Válvula

Aqui, apresentamos um modelo de fluxo ex vivo no qual as válvulas cardíacas murinas podem ser cultivadas, permitindo o estudo da biologia da válvula.

Cultura Rato Cardiac Valves no Sistema de Cultura de Tecidos Miniature

Este protocolo descreve o isolamento, cultura e calcificação de células intersticiais do rato-derivado da válvula, um modelo altamente fisiológica em vitro da doença valvar aórtica calcífica (CAVD). Exploração deste modelo de rato facilita a pesquisa CAVD em explorar a célula e os mecanismos moleculares que estão subjacentes a este complexo processo patológico.

Isolamento e caracterização de rato primário válvula células intersticiais: um novo modelo para estudar a calcificação da válvula aórtica

Neste estudo, descrevemos o processo de isolamento de linfócitos T a partir de amostras frescas de válvulas aórticas calcificadas e as etapas analíticas da clonagem de células T para a caracterização dos subconjuntos leucócitos adaptativos usando a análise de citometria de fluxo.

Investigando a calcificação da válvula aórtica através do isolamento e cultura de linfócitos T usando células alimentadoras do casaco de buffy irradiado

Este artigo descreve o isolamento das células da válvula aórtica do rato por um procedimento de colagem de duas etapas. Células de válvulas isoladas do rato são importantes para a realização de diferentes ensaios, como este ensaio de calcificação in vitro, e para investigar as vias moleculares que levam à mineralização da válvula aórtica.

Isolamento de células válvulas intersticiais do rato para estudar a calcificação da válvula aórtica in vitro

Este artigo descreve um método baseado em cultura explant para o isolamento e cultivo de células musculares humanas aórticas humanas primárias e específicas do paciente e fibroblastos dérmicos. Além disso, é apresentado um novo método para medir a contração celular e a análise subsequente, que pode ser usado para estudar diferenças específicas do paciente nessas células.

Isolamento de células musculares lisas aórticas específicas do paciente primário e medidas de contração em tempo real semiquantitativas in vitro

Hepatócitos primários proporcionar uma ferramenta valiosa para avaliar as funções bioquímicas, moleculares, e metabólicas em um sistema fisiologicamente relevante experimental. Nós descrevemos um protocolo confiável para rato em perfusão de fígado in situ, que sempre gera hepatócitos viáveis ​​até to1.0 ×...

Isolamento e cultura primária de células hepáticas de ratos

Aprenda o isolamento de células endoteliais e intersticiais valvares primárias humanas para modelagem de doenças in vitro. Este método garante viabilidade celular e especificidade fenotípica para estudos da patogênese da doença valvar aórtica calcificada.

Isolamento de Células Valvares Primárias Humanas para Modelagem de Doenças In Vitro

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