Análise constante da mola molecular por espectroscopia da sonda de força biomembrana

Este vídeo descreve procedimentos passo a passo sobre o uso da Sonda de Força Biomembrana, ou BFP para medir a constante da mola molecular. Em sonda de força, o BFP surgiu recentemente na superfície celular nativa ou na análise de espectroscopia da Força Dinâmica SITU. O principal objetivo desta técnica é medir a genética de ligação de molécula única.

Este procedimento de análise de dados é uma mensagem simples, mas poderosa, e fornece informações mecânicas, especificamente a força dinâmica e inflamação da membrana celular expressando moléculas. Durante o ciclo de experimentos da BFP, o microbioma da sonda apostou com a célula vermelha e o probatório, a célula-alvo e a ligação molecular do receptor de ligante entre a sonda e o alvo podem ser considerados como uma série de sistema cerebral conectado. Com base na lei de Hooke, a recíproca da constante total da primavera de uma série de sistemas de molas conectados é igual à soma da constante de mola inversa de cada componente, como mostra a equação.

A constante de mola das células vermelhas é calculada com base no movimento de eventos, que depende da radial da micropipette da sonda no orifício. O glóbulo vermelho, a área de contato circular entre o glóbulo vermelho e o probatório e a micro-pipeta aspirando pression. Os dados rodoviários de BFP são obtidos por um instrumento virtual de visão esquerda caseiro, que controla o movimento da micro-pipeta alvo por um Tradutor de PAs.

Um ciclo completo de toque PFP consiste em cinco estágios. Abordagem.Impinge.Contato. Retraia e dissocia. No início, enfatiza que a posição robusto APICS é denotada como X é igual a 0 em deshine preto.

O alvo é então conduzido por uma peça ou tradutor para implicar e comprimir o robusto para causar movimento de probatório negativo. Você nota como X menor que zero na linha de traço vermelho. Na fase de retração, o busto apex vermelho move-se do X menor que zero posição de volta para a posição X igual a zero referida como a fase compressiva.

Se uma ligação for formada entre o complexo da molécula do receptor de ligante, o glóbulo vermelho seria ainda diferente de outra direção positiva. Este período X maior que zero é referido como a fase de tração da fase de retração. O estágio de retração é a parte mais crítica para determinar a constante de mola da molécula de ligação.

Coletar dados de força versus estrada de tempo usando a plataforma de aquisição de dados BSP. Cada experimento geralmente registra de 50 a 200 ciclos de toque, abra o software de análise de dados PFP. Clique no ícone da pasta amarela e selecione o arquivo de dados de linha correspondente clicando duas vezes neles.

Estamos no programa. Em seguida, clique nos botões de seta para cima e para baixo para alternar entre os eventos. Usando os critérios de exclusão outlier para selecionar eventos inválidos.

Selecione o tipo de dados de exportação que é forçado a cronometrar o formato e escolha a faixa de tempo de estado apropriada. Clique no botão de dados do plot de exportação. Os dados exportados são salvos como arquivo de texto em padrão.

Este arquivo de texto contém duas colunas de dados. É a primeira coluna representando o tempo daddies e a segunda coluna representando a força correspondente em cada ponto de tempo. Plote a curva força versus tempo usando o software de planilhas para obter a curva forçada versus deslocamento.

Multiplique o valor de tempo de cada ponto de dados pelo movimento Willow Steel PSO. Zero o primeiro ponto de dados subtraindo o menor valor de deslocamento de cada ponto de dados. Essa transformação horizontal não afeta o cálculo constante da primavera subsequente.

Na curva força versus deslocamento, dois atores distintos eram diferentes se a nova inclinação de força pudesse ser identificada. Cada um representando a fase compressiva e a fase de 10 estilos. Encaixe uma linha de regressão em cada grupo de dados.

A linha com inclinação mais íngreme representa a constante total da mola em uma fase compressora denotada como K1. E a linha que era menor top representa a linha nesta fase de 10 estilos denotada como K2.As eu mencionei, a constante total da primavera é a recíproca do filho da série mola constante de cada componente. Durante a fase compressiva da batida ao modo celular, a ligação molecular não é esticada, portanto, a constante de mola de ligação molecular não é levada em consideração. A constante de mola da célula alvo é descrita como a equação exibida onde K1 representa a constante total da mola durante a fase do compressor.

Na fase de 10 estilos da batida para vender o modo, a constante total da mola é o sol da constante de mola úversa da ligação molecular da célula de sangue vermelha. E a célula alvo, use a equação exibida para calcular a constante de mola de ligação de molécular, que K2 representa a constante total da mola. Você leu a fase de 10 paradas.

No modo batida para bater, uma vez que a deformação B é insignificante, o termo que descreve o inverso da aproximação constante da mola da célula alvo zero, portanto a constante total de mola na fase do compressor é equivalente à constante da mola do sangue vermelho mostrando-se como a equação seguinte. Na fase de tração, a constante de mola da ligação molecular pode ser calculada subtraindo o efeito da célula vermelha do sangue mostrando como a seguinte equação. Colete as constantes de mola da atitude de integração do vento lateral B, complexo Beta 3, a célula K562 e a febrifugina integrando a atitude B Beta três complexo, calcule o desvio médio e padrão das constantes de mola derivadas na escala de Newton ou nanômetros.

Agora você deve ter uma melhor compreensão de quais são os requisitos para medir e mola constante fora dos dados VFD. As diferenças entre a batida para o modo celular e o modo batida para bater devem ser notadas. Diferentes moléculas que apresentam serviço terão diferentes defesas para a medida da constante da mola.

Em conclusão, este procedimento passo-a-passo descreve como realizar análises constantes de mola molecular usando BFP. Prevemos que esforços futuros serão feitos para automatizar e integrar a aquisição de dados BFP e a análise do DFS em um programa de descanso de computador. Tornando toda a análise de dados de operação BFP mais amigável e alta durante todo o tempo.