Um sistema de imagem de alta definição ajustável para estudos comportamentais de adultos drosophila

Devido ao seu tamanho estranho, drosophila é difícil de imagem. Este método demonstra a imagem do comportamento e morfologia das moscas através do uso de um microscópio estéreo. Este protocolo pode ser usado tanto para pesquisa científica quanto para ensino.

Demonstrando o procedimento será Ms.Li Tong e Sra. Weng Yujia, graduandos fazendo treinamento de pesquisa sob minha orientação. Para começar, faça uma câmara de observação de comportamento de mosca, ou FBOC, usando uma tampa de garrafa plástica translúcida de cerca de 17 por 22 milímetros ou cortando uma seção de 17 milímetros da extremidade grossa de uma ponta de pipeta de cinco milímetros. Despeje 1% de ágar no FBOC para ajustar sua profundidade.

Se o alimento precisar ser colocado no FBOC, despeje o ágar para obter uma profundidade de 12 milímetros. Se a comida não precisar ser colocada no FBOC, despeje o ágar a uma profundidade de cinco milímetros para rastrear o paradeiro das moscas de frutas com mais facilidade. Se usar uma ponta de pipeta para fazer um FBOC, coloque a seção de ponta de pipeta de corte em uma placa de Petri de 35 ou 60 milímetros.

Despeje o gel de 1% de ágar na placa de Petri até uma espessura de cerca de cinco milímetros e espere que o ágar se solidifique e sele o fundo do FBOC. Em seguida, despeje o gel de ágar no FBOC até a espessura desejada. Faça uma base FBOC furando um buraco de 10 milímetros de profundidade no centro de um pedaço de folha de espuma de etilamina com o mesmo diâmetro do FBOC.

Insira o FBOC no orifício. Faça alimentos de mosca, se necessário, com fermento médio, dieta artificial ou sacarose pura ou glicose, dependendo da finalidade da observação. Para determinar visualmente se as moscas estão se alimentando, adicione corantes alimentares ao alimento a uma concentração final de 12,5 miligramas por 100 mililitros.

Despeje a comida preparada em uma placa de Petri a uma altura de oito milímetros. Após a solidificação, coloque o alimento em um retangular desenhado no papel e corte o alimento em conformidade e coloque-o em um pedaço de plástico e corte em uma pirâmide quadrangular ou pirâmide de frustum quadrangular para permitir o registro do comportamento da mosca de diferentes ângulos à medida que as moscas pousam sobre a comida. Corte um pedaço de plástico e use pinças para colocar o plástico e os alimentos no centro do FBOC.

Despeje 1% de gel de ágar em uma garrafa vazia limpa até uma espessura de 1-2 centímetros e coloque-o em temperatura ambiente por 1-2 horas. Transfira as moscas para a garrafa e coloque-a a 25 graus Celsius por 36 horas ou mais. Esfrie e inative as moscas em gelo esmagado, classifique-as em uma bolsa de gelo e transfira-as para o FBOC como descrito anteriormente.

Depois de transferir as moscas para o FBOC, cubra-a com 30-40 milímetros de UV ou filtro claro para a câmera formar um complexo FBOC. Coloque o complexo FBOC sob o microscópio estéreo para observação. Ilumine o FBOC.

Monte luzes de vídeo mini LED para piscar as arquibancadas de suporte de sapato quente e coloque as luzes nos lados esquerdo e direito do FBOC. Acenda as luzes e ajuste a temperatura da cor para 5.000 a 5.600 Kelvin e o brilho a 100% Ligue as luzes de vídeo LED e ajuste o microscópio de zoom estéreo até que a borda do FBOC possa ser claramente vista a olho nu. Mova o FBOC para o centro do campo de visão.

Conecte o grampo do adaptador de câmera digital do telescópio universal a uma ocular do microscópio estéreo. Em seguida, conecte uma câmera digital compacta ao adaptador com segurança, girando alternadamente o parafuso de montagem da câmera e o parafuso de fixação da câmera. Ligue a câmera digital e gire os botões de ajuste fino horizontal/vertical até que a borda do FBOC apareça claramente no centro do campo de visão circular brilhante na tela LCD da câmera.

Gire o mostrador de modo para o modo automático prioritário de abertura. Pressione o modo de foco no multi-seletor, escolha o close-up macro e pressione o botão OK. Mova o interruptor de zoom da extremidade grande angular para a extremidade telefoto e amplie na imagem circular até que sua parte central preencha a tela LCD completa.

Pressione o botão de gravação de filme e comece a gravar o comportamento da mosca. Gire o botão de foco do microscópio até que as moscas do FBOC estejam claramente visíveis. Escolha o comportamento de tempo de voo para observação ou gravação de vídeo.

Gire o botão de zoom para ampliar e sair para obter a ampliação desejada para observação ou gravação de vídeo. A fotografia representativa tirada através do filtro UV é clara e nítida, muito semelhante à fotografia tirada quando o frasco de cultura não é coberto. A qualidade da foto tirada através do vidro da placa de Petri é muito ruim e parcialmente borrada.

Uma foto tirada da gravação de vídeo mostrando os detalhes de cada parte do corpo da mosca é mostrada aqui. Como a câmera está conectada a um microscópio estéreo de zoom, é muito fácil filmar de fotos panorâmicas a close-up usando o sistema de zoom. Usando este protocolo, o comportamento da mosca pode ser observado e documentado para múltiplos ângulos de visão.

Por exemplo, a mosca fêmea está constantemente esfregando o ovipositor com suas patas traseiras durante o processo de colocação de ovos. Este detalhe do comportamento de colocação de ovos não pode ser visto claramente de lado. Usando este método simples e econômico, podemos fazer um panorâmico ou close-up do comportamento e morfologia das moscas e obter um vídeo ou foto de boa qualidade.