Name: Técnicas de manuseio para reduzir o estresse em camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-25T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Aprenda a técnica de manuseio 3D para reduzir o estresse em camundongos em pesquisas de neurociência e comportamento animal. Este método melhora o bem-estar animal e a replicabilidade dos dados.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Os autores agradecem ao Comitê de Cuidados Com Animais da CAMH por apoiar este trabalho, bem como aos cuidadores de animais do CAMH que forneceram amplo feedback sobre a utilidade do procedimento, motivando a execução dos experimentos descritos e a apresentação do protocolo detalhado para outros usuários. Este trabalho foi parcialmente financiado pelo CAMH BreakThrough Challenge, concedido ao TP, e por fundos internos da CAMH.

<ol><li>Deacon, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Housing%2C+husbandry+and+handling+of+rodents+for+behavioral+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments.</a> Nature Protocols. 1 (2), 936(2006).</li>
<li>Bryda, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Mighty+Mouse%3A+the+impact+of+rodents+on+advances+in+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Missouri+Medicine%22%5BJournal%5D)">The Mighty Mouse: the impact of rodents on advances in biomedical research.</a> Missouri Medicine. 110 (3), 207-211 (2013).</li>
<li>Martic-Kehl, M., Ametamey, S., Alf, M., Schubiger, P., Honer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+inherent+variability+and+experimental+parameters+on+the+reliability+of+small+animal+PET+data%5BTitle%5D)+AND+%22EJNMMI+Research%22%5BJournal%5D)">Impact of inherent variability and experimental parameters on the reliability of small animal PET data.</a> EJNMMI Research. 2 (1), 26(2012).</li>
<li>Howard, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+Variability%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Control of Variability.</a> ILAR Journal. 43 (4), 194-201 (2002).</li>
<li>Toth, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+the+cage+environment+on+rodent+physiology+and+behavior%3A+Implications+for+reproducibility+of+pre-clinical+rodent+research%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">The influence of the cage environment on rodent physiology and behavior: Implications for reproducibility of pre-clinical rodent research.</a> Experimental Neurology. 270, 72-77 (2015).</li>
<li>Golini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Non-invasive+Digital+Biomarker+for+the+Detection+of+Rest+Disturbances+in+the+SOD1G93A+Mouse+Model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A Non-invasive Digital Biomarker for the Detection of Rest Disturbances in the SOD1G93A Mouse Model of ALS.</a> Frontiers in Neuroscience. 14 (896), (2020).</li>
<li>Singh, S., Bermudez-Contreras, E., Nazari, M., Sutherland, R. J., Mohajerani, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-cost+solution+for+rodent+home-cage+behaviour+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Low-cost solution for rodent home-cage behaviour monitoring.</a> PLoS One. 14 (8), 0220751(2019).</li>
<li>Stewart, K., Schroeder, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+Handling+and+Restraint+Techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Rodent Handling and Restraint Techniques.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2021).</li>
<li>Hurst, J. L., West, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taming+anxiety+in+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Taming anxiety in laboratory mice.</a> Nature Methods. 7 (10), 825-826 (2010).</li>
<li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+practicality+of+using+non-aversive+handling+methods+to+reduce+background+stress+and+anxiety+in+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Improving the practicality of using non-aversive handling methods to reduce background stress and anxiety in laboratory mice.</a> Scientific Reports. 9 (1), 20305(2019).</li>
<li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimising+reliability+of+mouse+performance+in+behavioural+testing%3A+the+major+role+of+non-aversive+handling%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Optimising reliability of mouse performance in behavioural testing: the major role of non-aversive handling.</a> Scientific Reports. 7, 44999(2017).</li>
<li>Ghosal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+handling+limits+the+impact+of+stress+on+metabolic+endpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints.</a> Physiology & Behavior. 150, 31-37 (2015).</li>
<li>Wahlsten, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+data+from+different+labs%3A+lessons+from+studies+of+gene-environment+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Different data from different labs: lessons from studies of gene-environment interaction.</a> Journal of Neurobiology. 54 (1), 283-311 (2003).</li>
<li>Nature Neuroscience. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Troublesome+variability+in+mouse+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Troublesome variability in mouse studies.</a> Nature Neuroscience. 12 (9), 1075(2009).</li>
<li>Sensini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+handling+technique+and+handling+frequency+on+laboratory+mouse+welfare+is+sex-specific%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The impact of handling technique and handling frequency on laboratory mouse welfare is sex-specific.</a> Scientific Reports. 10 (1), 17281(2020).</li>
<li>Ghosal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+handling+limits+the+impact+of+stress+on+metabolic+endpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints.</a> Physiology & Behavior. 150, 31-37 (2015).</li>
<li>Novak, J., Bailoo, J. D., Melotti, L., Rommen, J., Würbel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Exploration+Based+Cognitive+Bias+Test+for+Mice%3A+Effects+of+Handling+Method+and+Stereotypic+Behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">An Exploration Based Cognitive Bias Test for Mice: Effects of Handling Method and Stereotypic Behaviour.</a> PLoS One. 10 (7), 0130718(2015).</li>
<li>Gouveia, K., Waters, J., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Handling+Tutorial%5BTitle%5D)+AND+%22NC3Rs%22%5BJournal%5D)">Mouse Handling Tutorial.</a> NC3Rs. , (2016).</li>
<li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+Mouse+Anxiety+during+Handling%3A+Effect+of+Experience+with+Handling+Tunnels%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Reducing Mouse Anxiety during Handling: Effect of Experience with Handling Tunnels.</a> PLoS One. 8 (6), 66401(2013).</li>
<li>Henderson, L. J., Smulders, T. V., Roughan, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+obstacles+preventing+the+uptake+of+tunnel+handling+methods+for+laboratory+mice%3A+An+international+thematic+survey%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Identifying obstacles preventing the uptake of tunnel handling methods for laboratory mice: An international thematic survey.</a> PLoS One. 15 (4), 0231454(2020).</li>
<li>Percie Du Sert, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ARRIVE+guidelines+2.0%3A+Updated+guidelines+for+reporting+animal+research%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Biology%22%5BJournal%5D)">The ARRIVE guidelines 2.0: Updated guidelines for reporting animal research.</a> PLOS Biology. 18 (7), 3000410(2020).</li>
<li>Golde, W. T., Gollobin, P., Rodriguez, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid%2C+simple%2C+and+humane+method+for+submandibular+bleeding+of+mice+using+a+lancet%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">A rapid, simple, and humane method for submandibular bleeding of mice using a lancet.</a> Lab Animal. 34 (9), 39-43 (2005).</li>
<li>Guilloux, J. P., Seney, M., Edgar, N., Sibille, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+behavioral+z-scoring+increases+the+sensitivity+and+reliability+of+behavioral+phenotyping+in+mice%3A+relevance+to+emotionality+and+sex%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Integrated behavioral z-scoring increases the sensitivity and reliability of behavioral phenotyping in mice: relevance to emotionality and sex.</a> Journal of Neuroscience Methods. 197 (1), 21-31 (2011).</li>
<li>LaFollette, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Animal+Welfare+Meets+Human+Welfare%3A+A+Cross-Sectional+Study+of+Professional+Quality+of+Life%2C+Including+Compassion+Fatigue+in+Laboratory+Animal+Personnel%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Laboratory Animal Welfare Meets Human Welfare: A Cross-Sectional Study of Professional Quality of Life, Including Compassion Fatigue in Laboratory Animal Personnel.</a> Frontiers in Veterinary Science. 7 (114), (2020).</li>
<li>Sorge, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+exposure+to+males%2C+including+men%2C+causes+stress+and+related+analgesia+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents.</a> Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).</li>
<li>Bailoo, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Cage+Enrichment+on+Behavior%2C+Welfare+and+Outcome+Variability+in+Female+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Effects of Cage Enrichment on Behavior, Welfare and Outcome Variability in Female Mice.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 12, (2018).</li>
<li>Spangenberg, E. M., Keeling, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+welfare+of+laboratory+mice+in+their+home+environment+using+animal-based+measures+-+a+benchmarking+tool%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Assessing the welfare of laboratory mice in their home environment using animal-based measures - a benchmarking tool.</a> Laboratory Animals. 50 (1), 30-38 (2016).</li>
<li>Theil, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+fighting+in+group-housed+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of fighting in group-housed laboratory mice.</a> Scientific Reports. 10 (1), 16649(2020).</li>
<li>Weber, E. M., Dallaire, J. A., Gaskill, B. N., Pritchett-Corning, K. R., Garner, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggression+in+group-housed+laboratory+mice%3A+why+can%27t+we+solve+the+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Aggression in group-housed laboratory mice: why can't we solve the problem.</a> Lab Animal. 46 (4), 157-161 (2017).</li>
<li>Cloutier, S., Baker, C., Wahl, K., Panksepp, J., Newberry, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Playful+handling+as+social+enrichment+for+individually-+and+group-housed+laboratory+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Animal+Behaviour+Science%22%5BJournal%5D)">Playful handling as social enrichment for individually- and group-housed laboratory rats.</a> Applied Animal Behaviour Science. 143 (2), 85-95 (2013).</li>
<li>Panksepp, J., Burgdorf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((50-kHz+chirping+%28laughter%3F%29+in+response+to+conditioned+and+unconditioned+tickle-induced+reward+in+rats%3A+effects+of+social+housing+and+genetic+variables%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">50-kHz chirping (laughter?) in response to conditioned and unconditioned tickle-induced reward in rats: effects of social housing and genetic variables.</a> Behavioural Brain Research. 115 (1), 25-38 (2000).</li>
</ol>

Os autores não têm conflito de interesses para divulgar.

Este estudo e o desenvolvimento de métodos baseiam-se na observação de que as técnicas de manuseio em camundongos ainda são negligenciadas pela comunidade científica, e que alguns laboratórios ainda estão relutantes em implementar técnicas de habitação ou manuseio para reduzir o estresse e a reatividade de seus animais antes dos experimentos. Ao mesmo tempo em que representa um compromisso de tempo, o manejo animal proporciona efeitos benéficos aos animais que podem contribuir para o sucesso dos experimentos a serem real...

Camundongos e ratos são ativos essenciais para estudos pré-clínicos1,2 para múltiplos fins, incluindo estudos endocrinas, fisiológicos, farmacológicos ou comportamentais2. A partir do crescente número de estudos envolvendo animais, surgiu que variáveis ambientais descontroladas, incluindo a interação humana, influenciam vários desfechos em pesquisas biomédicas3,4,5. Isso é responsável pela variabilidade significativa observada em experimentos e laboratórios de pesquisa4,5, representando uma grande ressalva na pesquisa animal.
Várias abordagens foram implementadas com o objetivo de limitar o impacto dos estressores ambientais e reduzir a reatividade à interação humana. Por exemplo, para limitar o impacto dos estressores ambientais, a padronização das condições de habitação e os sistemas de habitação automatizados6,7 foram implementados em laboratórios. Quanto à interação com os seres humanos, abordagens comumente utilizadas para o manuseio e transporte de animais tinham pouca consideração pelo desconforto e estresse animal. Por exemplo, pegar animais pela cauda ou usar fórceps8 aumenta a ansiedade da linha de base9,10,11, reduz a exploração9,12 e contribui muito para a variabilidade inter-individual dentro e entre os estudos13,14. Como resultado, outras abordagens foram desenvolvidas, como a técnica de manuseio de copos, que é aplicável a ratos e ratos. Nesta abordagem, os animais são "acotosados" para fora de sua gaiola, e mantidos pelos experimentadores com as mãos formando um copo9,10,11. Outra alternativa útil ao manuseio da cauda envolve o uso de um túnel de policarbonato para transferir camundongos9,10,15. Esta abordagem elimina a interação direta entre o mouse e o experimentador. Tanto as abordagens do copo quanto do túnel mostraram eficácia na redução de comportamentos semelhantes à ansiedade e medo do experimentador que pode ser exagerado por técnicas de manuseio aversivo, como o manuseio da cauda9,10.
Portanto, o aumento das evidências demonstra a utilidade do manejo adequado do camundongo para reduzir a variabilidade entre os indivíduos9,11e melhorar o bem-estar animal10. No entanto, as técnicas mencionadas acima ainda enfrentam limitações. A técnica de manuseio do copo foi implementada com horários que variam de 10 dias (10 sessões ao longo de 2 semanas16) até 15 semanas17, o que é uma quantidade considerável de tempo para funcionários e experimentadores de instalações. Além disso, a eficácia do manuseio do copo varia de acordo com a tensão9 e o manuseio convencional do copo em mãos abertas pode levar a ratos ingênuos ou particularmente cepas saltitantes para saltar da mão9,18. O manuseio do túnel resulta em resultados mais consistentes e geralmente mais rápidos na gentling19. Túneis também são usados como enriquecimento de gaiolas domésticas. Eles ajudam os animais a se habituarem a manusear rapidamente e fornecem os benefícios adicionais do enriquecimento. O manuseio do túnel, no entanto, tem limitações na transferência de animais entre aparelhos. Curiosamente, Hurst e West9, e Henderson et al.20 demonstraram que o uso de manuseio manual suave e breve para transferir animais do túnel para o aparelho não afeta seu fenótipo.
Para fornecer uma alternativa aos métodos existentes, com habitação alcançável em um curto período de tempo, este artigo descreve uma nova técnica que se expande na técnica de manuseio do copo, não necessitando, portanto, de nenhum equipamento específico. Esta abordagem usa marcos para medir o nível de conforto que os ratos têm com o processo de manuseio. Mostra eficácia na diminuição da reatividade e estresse do camundongo (nos níveis comportamental e hormonal), facilita o manuseio rotineiro e contribui para reduzir a variabilidade entre os animais. Detalhes dessa técnica são fornecidos aqui, e sua eficácia na redução de comportamentos semelhantes à ansiedade, melhorando a interação com experimentadores e limitando a liberação periférica de hormônio do estresse (corticosterona) são demonstradas em dois estudos separados (camundongos masculinos e femininos), em comparação com técnicas de manuseio de túneis (controle positivo) e controle de cauda (controle negativo).

<table><tbody><tr><td>23 G x 1 pol. Agulha hipodérmica estéril de uso geral BD PrecisionGlide. Tipo de parede regular e chanfro regular.</td><td>BD</td><td>2546-CABD305145</td><td>Agulhas para coleta de sangue</td></tr><tr><td>BD Vacutainer&reg; Coleta de Sangue Venoso Tubos EDTA com Lavanda BD Hemogard&trade; fechamento, 2,0 ml (13x75 mm), 100 / pk</td><td>BD</td><td>367841</td><td>Tubos revestidos com EDTA para coleta de sangue</td></tr><tr><td>Leito' o espigas &frac14; &rdquo; Cama para animais de laboratório de espiga de milho</td><td>Bed-O-Cobs</td><td>BEDO1/4</td><td>Roupa de cama nova para alimentação suprimida de novidade</td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Eppendorf</td><td>Centrífuga 5424 R</td><td>Para centrifugação de sangue.</td></tr><tr><td>Kit Corticosterona ELISA</td><td>Arbor Assays</td><td>K003-H1W</td><td></td></tr><tr><td>Câmera Digital</td><td>Panasonic</td><td>HC-V770</td><td>Câmera para gravar interações EPM/Experimenter</td></tr><tr><td>Labirinto Elevado Plus</td><td>Home Made</td><td>n/a</td><td>Labirinto personalizado feito de quatro braços de acrílico preto (dois braços abertos (29 cm de comprimento por 7 cm de largura) e dois braços fechados (29 cm de comprimento x7 cm de largura com paredes de 16 cm de altura)) que formam uma forma de cruz com os dois braços abertos opostos um ao outro mantido a 55 cm acima do chão</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Medstore House Marca</td><td>39753-P016-EA95</td><td>Diluir a 70% com água destilada, para limpeza</td></tr><tr><td>Ethovision XT 15</td><td>Noldus</td><td>n/a</td><td>Software automatizado de rastreamento de animais</td></tr><tr><td>Dieta de roedores de laboratório</td><td>LabDiet</td><td>Dieta de roedores 5001</td><td>Dieta padrão de roedores</td></tr><tr><td>Cartão de memória</td><td>Kingstone Technology</td><td>SDA3/64GB</td><td>Para gravação de vídeo e a</td></tr><tr><td>novidade suprimiu a novidade que alimenta</td><td>a câmara feita em casa</td><td>n/a</td><td>câmara feita sob encomenda do teste do plexiglás com assoalhos e paredes desobstruídos 62cm por muito tempo, por 31cm largamente por 40cm altos.</td></tr><tr><td>Tubos de carbonato de parlicarbonato caseiros</td><td></td><td>n/a</td><td>13 cm de comprimento e 5 cm de diâmetro</td></tr><tr><td>Purina Yesterday' s notícias jornal reciclado roupa de cama</td><td>Purina</td><td>n / a</td><td>Espectrofotômetro de cama padrão</td></tr><tr><td></td><td>Biotek</td><td>Epoch Microplate Reader</td><td></td></tr></tbody></table>

técnicas de manuseio para reduzir o estresse em camundongos

Handling Techniques to Reduce Stress in Mice

Animais de laboratório são submetidos a múltiplas manipulações por cientistas ou prestadores de cuidados com animais. O estresse que isso causa pode ter efeitos profundos no bem-estar animal e também pode ser um fator de confusão para variáveis experimentais, como medidas de ansiedade. Ao longo dos anos, técnicas de manuseio que minimizam o estresse relacionado ao manuseio foram desenvolvidas com um foco especial em ratos, e pouca atenção aos ratos. No entanto, foi demonstrado que os ratos podem ser habituados a manipulações usando técnicas de manuseio. Habituar camundongos ao manuseio reduz o estresse, facilita o manuseio de rotina, melhora o bem-estar animal, diminui a variabilidade dos dados e melhora a confiabilidade experimental. Apesar dos efeitos benéficos do manuseio, a abordagem de captação de cauda, que é particularmente estressante, ainda é amplamente utilizada. Este artigo fornece uma descrição detalhada e demonstração de uma técnica recém-desenvolvida de manuseio de camundongos destinada a minimizar o estresse experimentado pelo animal durante a interação humana. Esta técnica manual é realizada ao longo de 3 dias (técnica de manuseio 3D) e foca na capacidade do animal de habituar ao experimentador. Este estudo também mostra o efeito das técnicas previamente estabelecidas de manuseio de túneis (usando um túnel de policarbonato) e da técnica de captação de cauda. Especificamente estudados são seus efeitos sobre comportamentos semelhantes à ansiedade, usando testes comportamentais (Elevated-Plus Maze e Novelty Suppressed Feeding), interação voluntária com experimentadores e medição fisiológica (níveis de corticosterona). A técnica de manuseio 3D e a técnica de manuseio do túnel reduziram fenótipos semelhantes à ansiedade. No primeiro experimento, usando camundongos machos de 6 meses de idade, a técnica de manuseio 3D melhorou significativamente a interação dos experimentadores. No segundo experimento, usando fêmea de 2,5 meses, reduziu os níveis de corticosterona. Como tal, o manuseio 3D é uma abordagem útil em cenários onde a interação com o experimentador é necessária ou preferida, ou onde o manuseio do túnel pode não ser possível durante o experimento.

Dois estudos separados foram realizados com camundongos C57BL/6. O estudo #1 incluiu homens de 6 meses de idade e #2 de estudo incluiu mulheres de 2,5 meses de idade (N=36/estudo) dos Laboratórios Jackson (Cat #000664). Os ratos chegaram à instalação aos 2 meses de idade. Enquanto o Estudo #2 fêmeas foram tratadas e testadas duas semanas após a chegada, o Estudo #1 os machos só foram tratados e testados aos 6 meses de idade (atraso devido à paralisação pandêmica global). Durante esse tempo, um rato de Study #2 morreu, an...

Este artigo descreve uma técnica de manuseio em camundongos, a técnica de manuseio 3D, que facilita o manuseio rotineiro reduzindo comportamentos semelhantes à ansiedade e apresenta detalhes sobre duas técnicas relacionadas existentes (manuseio de túneis e caudas).

Técnicas de manuseio para reduzir o estresse em camundongos

Laboratory animals are subjected to multiple manipulations by scientists or animal care providers. The stress this causes can have profound effects ...

Meu nome é Dr. Thomas Prevot. Sou cientista do Centro de Dependência e Saúde Mental, ou CAMH, e professor assistente na Universidade de Toronto no Departamento de Psiquiatria. Meu grupo tem um interesse particular em reduzir a ansiedade e a reatividade da linha de base em camundongos, a fim de reduzir a variabilidade dos dados e melhorar o bem-estar animal.Camundongos provaram ser ativos inestimáveis em ciência básica e pesquisa pré-científica, no entanto, muito poucos laboratórios em todo o mundo controlam a ansiedade da linha de base e a reatividade de seus animais de laboratório, portanto, complicando a replicabilidade de dados entre laboratórios. Um dos principais fatores contribuintes para a ansiedade na linha de base são as variáveis ambientais descontroladas, como condições de moradia, enriquecimento ambiental e exposição ao estresse. Embora a padronização das condições de moradia e do enriquecimento tenha ajudado a melhorar essa questão, a exposição ao estresse durante a interação com experimentadores ainda é em grande parte não tratada em camundongos.O manuseio da cauda, o processo de elevação do mouse pela cauda, ainda é a técnica de manuseio do mouse amplamente utilizada pelo mouse, apesar de ser particularmente estressante. Embora tenham surgido alternativas ao manuseio de cauda, incluindo manuseio de túneis e manuseio de copos. A adoção dessas técnicas tem sido lenta.Aqui descrevemos uma nova técnica, semelhante ao manuseio de copos, que pode ser implementada com apenas três dias de habituação, ou manuseio 3D. Ao aumentar gradualmente o grau e a complexidade da interação e progredir em resposta à reatividade do mouse a certos marcos de manuseio, podemos reduzir o estresse e facilitar o manuseio rotineiro. Avaliamos a eficácia do manuseio 3D em camundongos em testes comportamentais, avaliando comportamentos semelhantes à ansiedade, interação com experimentadores e hormônio do estresse periférico, corticosterona, níveis, e fornecemos uma comparação com técnicas de manuseio de túneis e manuseio de cauda.Abra suavemente a gaiola e coloque a tampa ao lado. Introduza sua mão enluvada na gaiola de casa antes de tentar pegar o mouse. Deixe o mouse habituar à presença da mão por cerca de 30 segundos.Em seguida, tente pegar o rato em mãos com as mãos. Se o mouse não pode ser facilmente pego, misture as duas mãos e use-as para guiar o mouse até o canto da gaiola. Em seguida, use as duas mãos para pegar o mouse.Uma vez que o mouse seja removido da gaiola, mantenha as mãos o mais planas e abertas possível. Deixe o mouse explorar livremente. Isso fornece uma plataforma plana para o mouse pisar e limita o risco de mordida.Segure a mão aberta e plana, com a palma para cima. Coloque a outra mão adjacente ao mouse e deixe que o mouse se mova livremente de mão em mão, sem qualquer restrição. Depois de um minuto de manuseio com as mãos planas, relaxe a palma da mão e levemente coloque o mouse na cabeça, antes de rolar suavemente o mouse entre as mãos.Continue por quatro minutos, alternando entre o rolamento suave entre as mãos e a exploração livre de suas mãos abertas. Durante os últimos dois minutos, faça um teste de abrigo. Deixe o mouse mover-se para a borda da sua mão e unir as duas mãos.Muito lentamente, coloque as mãos para que o rato se encaixe dentro de um abrigo formado pelas mãos. Certifique-se de deixar uma abertura, para que o mouse possa escapar se necessário. Tente manter o rato no abrigo por cinco a 10 segundos sem qualquer restrição.Repita o teste de abrigo três a quatro vezes nos últimos dois minutos. Não apresse o processo. Se o rato aparecer estressado por estar confinado dentro da mão, continue rolando entre as mãos e exploração livre por 30 segundos e, em seguida, tente novamente o teste de abrigo.Deixe a exploração livre em mãos por 30 segundos e substitua suavemente o mouse em sua gaiola. Limpe a parte superior do banco de quaisquer fezes e urina com 70% de etanol ou uma solução de limpeza apropriada. Limpe as luvas de fezes e urina conforme necessário, e ao mudar para uma nova gaiola, enxágue luvas com 70% de etanol ou troque luvas.Até o segundo dia, já deve ser viável remover o rato da gaiola em mãos com as mãos. Se o mouse parecer reativo, realize a mão plana e a exploração livre de cabeças abertas por 30 segundos a um minuto. Caso contrário, prossiga para o rolo entre as mãos e o teste de abrigo.Faça o papel entre as mãos e os passos de abrigo do primeiro dia por dois a três minutos. Execute cada passo várias vezes. Se o rato parece à vontade no teste de abrigo, tente acariciar o rato nas costas e na cabeça.Se o mouse não tentar fugir do contato, proceda ao puxão de nariz. Toque suavemente o mouse na ponta do focinho. Se ele não morder ou tentar virar a cabeça, isso é um bom sinal de habitação.Para o teste de acariciar e cutucar o nariz, não apresse o processo. Se o mouse aparecer estressado por estar confinado dentro das mãos, ou não quiser ser tocado, continue rolando entre as mãos por alguns minutos e depois tente novamente. Pare esta sessão após cerca de três minutos de manuseio, se o animal reagir bem ao abrigo, acariciando a cabeça e cutucando o nariz.E se o animal parece estar disposto a explorar suas mãos sem qualquer sinal de estresse, como tentativas de fuga, pular das mãos ou evitar contato com as mãos. Se o mouse continuar a apresentar sinais de estresse ou não estiver reagindo bem ao teste de abrigo ou ao teste de cutucada no nariz, continue a sessão até chegar a cinco minutos, como no primeiro dia. Substitua o mouse em sua gaiola e limpe a parte superior do banco e as luvas.No terceiro dia, siga pelos mesmos passos naquele segundo dia. Pegue o rato na palma da mão. Transfira o mouse entre as mãos.Confine suavemente o rato em mãos com as mãos. Se o mouse responder bem a estas etapas, tente acariciar o mouse e tentar o teste de cutucada no nariz. No terceiro dia, o rato deve ser relaxado o suficiente para sentar na palma da mão sem se mover, e você deve ser capaz de prosseguir através desses passos ao longo de aproximadamente dois a três minutos.Substitua o mouse em sua gaiola, e limpe a parte superior do banco e as luvas. No terceiro dia. se o animal for contido para fins experimentais, como gavage oral ou injeção intra peritoneal, os camundongos podem ser submetidos ao teste de beliscão do pescoço.Segure o mouse pela nuca, entre o polegar e o dedo indicador e levante o mouse cinco centímetros acima da mão por dois a três segundos. Esta é normalmente uma posição desconfortável para ratos adultos, e se os ratos permanecem perto de imóveis, eles estão bem habituados ao manuseio e serão fáceis de conter para injeções. Coloque o mouse de volta em sua mão plana e deixe que ele explore livremente por um minuto.Os animais foram testados por sua vontade de interagir voluntariamente com o experimentador e a facilidade de manuseio em um contexto experimental. No estudo um, os camundongos manipulados pelo manuseio do tubo ou pelo manuseio 3D eram menos propensos a fugir quando um experimentador tenta pegar um rato. Além disso, o estudo de um camundongo manipulado usando a técnica 3D passou mais tempo no mesmo quadrante que a mão do experimentador, indicando uma maior disposição de interagir com o experimentador.No estudo dois, os camundongos manipulados pelo manuseio do tubo ou pelo manuseio 3D eram menos propensos a fugir quando um experimentador tenta pegar o mouse em comparação com ratos manuseados na cauda. No entanto, no segundo estudo, a técnica de manuseio não influenciou significativamente o tempo gasto no mesmo quadrante que a mão do experimentador. O efeito do manuseio 3D e do túnel foi comparado ao manuseio da cauda em dois testes de comportamentos semelhantes à ansiedade, o teste de alimentação suprimido da novidade e o elevado labirinto plus.No primeiro estudo, no teste de alimentação suprimido da novidade, houve uma tendência de redução da ansiedade em camundongos manuseados em túnel e manuseados em 3D. No labirinto mais elevado, não houve efeito global do manuseio. Quando resumido como um escore Z, houve uma redução significativa da ansiedade geral em camundongos manuseados por túnel e 3D em comparação com ratos manuseados por cauda.No segundo estudo, não houve efeito global do manuseio de medidas de ansiedade no teste de alimentação suprimido da novidade ou no labirinto mais elevado. Quando resumida como pontuação Z, a técnica de manuseio não teve efeito geral sobre a ansiedade. Como medida fisiológica de estresse, coletamos soro de cauda manuseada, manuseado em 3D e camundongos manuseados em túnel 15 minutos após uma breve sessão de manuseio e níveis testados de corticosterona.Não houve efeito global do manuseio no estudo um. No segundo estudo, o manuseio 3D reduziu significativamente os níveis de corticosterona em comparação com o manuseio da cauda. Com base em observações de que as técnicas de manuseio em camundongos não são amplamente reconhecidas pela comunidade científica, descrevemos o uso de uma nova técnica de manuseio.Em ambos os estudos apresentados, o manuseio de túneis e 3D reduziu as tentativas de fuga de camundongos ao serem recolhidos, potencialmente facilitando o manuseio de rotina. Além disso, em camundongos machos mais velhos, essa técnica reduziu comportamentos semelhantes à ansiedade e aumentou a interação com o experimentador. Em mulheres jovens.esta técnica diminuiu os níveis de corticosterona observados em resposta ao manuseio. A implementação dessa técnica tem o potencial de reduzir a variabilidade dos dados, melhorar o bem-estar animal e facilitar o manuseio rotineiro.

handling-techniques-to-reduce-stress-in-mice

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Este vídeo demonstra o método de indução de estresse crônico em um camundongo por meio de imobilização repetida, levando à liberação de corticosterona e redução da atividade do receptor de glutamato nos neurônios, o que resulta em comportamento semelhante à depressão.

Induzindo comportamento semelhante à depressão em um camundongo por meio do estresse de imobilização

O protocolo de estresse leve crônico imprevisível (UCMS) é um método validado para estudar mudanças comportamentais e fisiológicas associadas ao estresse crônico e sintomas depressivos. Oito semanas de imposição do protocolo UCMS induzem mudanças comportamentais e maus resultados de saúde em roedores de ambos os sexos.

Uma crônica Protocolo de estresse leve Imprevisível para sintomas depressivos Instigando, mudanças de comportamento e resultados negativos de saúde em Roedores

Aqui nós apresentamos o protocolo imprevisíveis stress leve crônica em ratos. Este protocolo induz um fenótipo de depressivo, como a longo prazo e permite avaliar a eficácia dos antidepressivos putativos em reverter os défices de depressiva como comportamentais e neuromolecular.

O protocolo de estresse suave crônico imprevisível para induzir Anhedonia em ratos

Este artigo fornece um protocolo simplificado e estandardizado para a indução do comportamento depressivo-como em ratos cronicamente imobilizados usando um restringidor. Além disso, explicam-se comportamentos e técnicas fisiológicas para verificar a indução da depressão.

Um protocolo de estresse de imobilização crônica para induzir o comportamento semelhante à depressão em camundongos

A tarefa da barreira do labirinto Y é um teste de comportamento que examina a motivação para gastar esforço para recompensa. Aqui, discutimos o teste de múltiplos estressores crônicos bem validados, incluindo corticosterona crônica e estresse de derrota social com esse comportamento, bem como o novo estresse crônico de derrota social não discriminatória (CNSDS), que é eficaz nas mulheres.

Estresse crônico muda comportamento de escolha relacionado ao esforço em uma tarefa de barreira y-maze em camundongos

Desenvolvemos um modelo de estresse de derrota social acelerada para camundongos adolescentes C57BL/6, que funciona em machos e fêmeas e permite a exposição durante períodos discretos da adolescência. A exposição a esse modelo induz evitação social, mas apenas em um subconjunto de camundongos machos e fêmeas derrotados.

Modelo de estresse de derrota social para camundongos adolescentes C57BL / 6 machos e fêmeas

A maioria dos experimentos de comportamento para roedores foi originalmente concebida para ratos. Devido às diferenças comportamentais entre ratos e camundongos, às vezes são necessárias modificações para camundongos. Apresentamos um método para testar a memória de trabalho espacial em camundongos, minimizando o estresse durante a tarefa de memória de trabalho.

Uma tarefa apetitiva de memória de trabalho espacial para camundongos em um labirinto radial semiautomatizado de 8 braços, reduzindo a associação de memória de medo no labirinto

Ao integrar quatro estressores sociais diários, o presente estudo descreve um modelo de estresse social integrado múltiplo (MISS) para transtornos psiquiátricos em camundongos C57BL / 6J fêmeas. Após dez dias de exposição repetida ao MISS, os camundongos desenvolveram fenótipos depressivos e ansiosos, fornecendo assim um modelo animal natural baseado em etiologia para estudar transtornos psiquiátricos em mulheres.

Um modelo de estresse social integrado múltiplo para transtornos psiquiátricos em camundongos C57BL / 6J fêmeas

Este artigo aborda os procedimentos para induzir respostas ao estresse usando o estresse de contenção física em camundongos e ratos. Considerações adicionais que devem ser observadas ao selecionar e usar o estresse de contenção em modelos de roedores são discutidas.

Contenção para induzir estresse em camundongos e ratos

Este artigo descreve o uso de residente intruso estresse social crônico como um paradigma ethologically relevantes para a depressão pós-parto modelo e ansiedade em roedores lactantes.

Usando Social Stress Crônico ao Modelo depressão pós-parto em lactação Roedores

Aprenda a técnica de manuseio 3D para reduzir o estresse em camundongos em pesquisas de neurociência e comportamento animal. Este método melhora o bem-estar animal e a replicabilidade dos dados.

Técnicas de manuseio para reduzir o estresse em camundongos

Explorar mais vídeos