Técnicas de manuseio para reduzir o estresse em camundongos

Meu nome é Dr. Thomas Prevot. Sou cientista do Centro de Dependência e Saúde Mental, ou CAMH, e professor assistente na Universidade de Toronto no Departamento de Psiquiatria. Meu grupo tem um interesse particular em reduzir a ansiedade e a reatividade da linha de base em camundongos, a fim de reduzir a variabilidade dos dados e melhorar o bem-estar animal.

Camundongos provaram ser ativos inestimáveis em ciência básica e pesquisa pré-científica, no entanto, muito poucos laboratórios em todo o mundo controlam a ansiedade da linha de base e a reatividade de seus animais de laboratório, portanto, complicando a replicabilidade de dados entre laboratórios. Um dos principais fatores contribuintes para a ansiedade na linha de base são as variáveis ambientais descontroladas, como condições de moradia, enriquecimento ambiental e exposição ao estresse. Embora a padronização das condições de moradia e do enriquecimento tenha ajudado a melhorar essa questão, a exposição ao estresse durante a interação com experimentadores ainda é em grande parte não tratada em camundongos.

O manuseio da cauda, o processo de elevação do mouse pela cauda, ainda é a técnica de manuseio do mouse amplamente utilizada pelo mouse, apesar de ser particularmente estressante. Embora tenham surgido alternativas ao manuseio de cauda, incluindo manuseio de túneis e manuseio de copos. A adoção dessas técnicas tem sido lenta.

Aqui descrevemos uma nova técnica, semelhante ao manuseio de copos, que pode ser implementada com apenas três dias de habituação, ou manuseio 3D. Ao aumentar gradualmente o grau e a complexidade da interação e progredir em resposta à reatividade do mouse a certos marcos de manuseio, podemos reduzir o estresse e facilitar o manuseio rotineiro. Avaliamos a eficácia do manuseio 3D em camundongos em testes comportamentais, avaliando comportamentos semelhantes à ansiedade, interação com experimentadores e hormônio do estresse periférico, corticosterona, níveis, e fornecemos uma comparação com técnicas de manuseio de túneis e manuseio de cauda.

Abra suavemente a gaiola e coloque a tampa ao lado. Introduza sua mão enluvada na gaiola de casa antes de tentar pegar o mouse. Deixe o mouse habituar à presença da mão por cerca de 30 segundos.

Em seguida, tente pegar o rato em mãos com as mãos. Se o mouse não pode ser facilmente pego, misture as duas mãos e use-as para guiar o mouse até o canto da gaiola. Em seguida, use as duas mãos para pegar o mouse.

Uma vez que o mouse seja removido da gaiola, mantenha as mãos o mais planas e abertas possível. Deixe o mouse explorar livremente. Isso fornece uma plataforma plana para o mouse pisar e limita o risco de mordida.

Segure a mão aberta e plana, com a palma para cima. Coloque a outra mão adjacente ao mouse e deixe que o mouse se mova livremente de mão em mão, sem qualquer restrição. Depois de um minuto de manuseio com as mãos planas, relaxe a palma da mão e levemente coloque o mouse na cabeça, antes de rolar suavemente o mouse entre as mãos.

Continue por quatro minutos, alternando entre o rolamento suave entre as mãos e a exploração livre de suas mãos abertas. Durante os últimos dois minutos, faça um teste de abrigo. Deixe o mouse mover-se para a borda da sua mão e unir as duas mãos.

Muito lentamente, coloque as mãos para que o rato se encaixe dentro de um abrigo formado pelas mãos. Certifique-se de deixar uma abertura, para que o mouse possa escapar se necessário. Tente manter o rato no abrigo por cinco a 10 segundos sem qualquer restrição.

Repita o teste de abrigo três a quatro vezes nos últimos dois minutos. Não apresse o processo. Se o rato aparecer estressado por estar confinado dentro da mão, continue rolando entre as mãos e exploração livre por 30 segundos e, em seguida, tente novamente o teste de abrigo.

Deixe a exploração livre em mãos por 30 segundos e substitua suavemente o mouse em sua gaiola. Limpe a parte superior do banco de quaisquer fezes e urina com 70% de etanol ou uma solução de limpeza apropriada. Limpe as luvas de fezes e urina conforme necessário, e ao mudar para uma nova gaiola, enxágue luvas com 70% de etanol ou troque luvas.

Até o segundo dia, já deve ser viável remover o rato da gaiola em mãos com as mãos. Se o mouse parecer reativo, realize a mão plana e a exploração livre de cabeças abertas por 30 segundos a um minuto. Caso contrário, prossiga para o rolo entre as mãos e o teste de abrigo.

Faça o papel entre as mãos e os passos de abrigo do primeiro dia por dois a três minutos. Execute cada passo várias vezes. Se o rato parece à vontade no teste de abrigo, tente acariciar o rato nas costas e na cabeça.

Se o mouse não tentar fugir do contato, proceda ao puxão de nariz. Toque suavemente o mouse na ponta do focinho. Se ele não morder ou tentar virar a cabeça, isso é um bom sinal de habitação.

Para o teste de acariciar e cutucar o nariz, não apresse o processo. Se o mouse aparecer estressado por estar confinado dentro das mãos, ou não quiser ser tocado, continue rolando entre as mãos por alguns minutos e depois tente novamente. Pare esta sessão após cerca de três minutos de manuseio, se o animal reagir bem ao abrigo, acariciando a cabeça e cutucando o nariz.

E se o animal parece estar disposto a explorar suas mãos sem qualquer sinal de estresse, como tentativas de fuga, pular das mãos ou evitar contato com as mãos. Se o mouse continuar a apresentar sinais de estresse ou não estiver reagindo bem ao teste de abrigo ou ao teste de cutucada no nariz, continue a sessão até chegar a cinco minutos, como no primeiro dia. Substitua o mouse em sua gaiola e limpe a parte superior do banco e as luvas.

No terceiro dia, siga pelos mesmos passos naquele segundo dia. Pegue o rato na palma da mão. Transfira o mouse entre as mãos.

Confine suavemente o rato em mãos com as mãos. Se o mouse responder bem a estas etapas, tente acariciar o mouse e tentar o teste de cutucada no nariz. No terceiro dia, o rato deve ser relaxado o suficiente para sentar na palma da mão sem se mover, e você deve ser capaz de prosseguir através desses passos ao longo de aproximadamente dois a três minutos.

Substitua o mouse em sua gaiola, e limpe a parte superior do banco e as luvas. No terceiro dia. se o animal for contido para fins experimentais, como gavage oral ou injeção intra peritoneal, os camundongos podem ser submetidos ao teste de beliscão do pescoço.

Segure o mouse pela nuca, entre o polegar e o dedo indicador e levante o mouse cinco centímetros acima da mão por dois a três segundos. Esta é normalmente uma posição desconfortável para ratos adultos, e se os ratos permanecem perto de imóveis, eles estão bem habituados ao manuseio e serão fáceis de conter para injeções. Coloque o mouse de volta em sua mão plana e deixe que ele explore livremente por um minuto.

Os animais foram testados por sua vontade de interagir voluntariamente com o experimentador e a facilidade de manuseio em um contexto experimental. No estudo um, os camundongos manipulados pelo manuseio do tubo ou pelo manuseio 3D eram menos propensos a fugir quando um experimentador tenta pegar um rato. Além disso, o estudo de um camundongo manipulado usando a técnica 3D passou mais tempo no mesmo quadrante que a mão do experimentador, indicando uma maior disposição de interagir com o experimentador.

No estudo dois, os camundongos manipulados pelo manuseio do tubo ou pelo manuseio 3D eram menos propensos a fugir quando um experimentador tenta pegar o mouse em comparação com ratos manuseados na cauda. No entanto, no segundo estudo, a técnica de manuseio não influenciou significativamente o tempo gasto no mesmo quadrante que a mão do experimentador. O efeito do manuseio 3D e do túnel foi comparado ao manuseio da cauda em dois testes de comportamentos semelhantes à ansiedade, o teste de alimentação suprimido da novidade e o elevado labirinto plus.

No primeiro estudo, no teste de alimentação suprimido da novidade, houve uma tendência de redução da ansiedade em camundongos manuseados em túnel e manuseados em 3D. No labirinto mais elevado, não houve efeito global do manuseio. Quando resumido como um escore Z, houve uma redução significativa da ansiedade geral em camundongos manuseados por túnel e 3D em comparação com ratos manuseados por cauda.

No segundo estudo, não houve efeito global do manuseio de medidas de ansiedade no teste de alimentação suprimido da novidade ou no labirinto mais elevado. Quando resumida como pontuação Z, a técnica de manuseio não teve efeito geral sobre a ansiedade. Como medida fisiológica de estresse, coletamos soro de cauda manuseada, manuseado em 3D e camundongos manuseados em túnel 15 minutos após uma breve sessão de manuseio e níveis testados de corticosterona.

Não houve efeito global do manuseio no estudo um. No segundo estudo, o manuseio 3D reduziu significativamente os níveis de corticosterona em comparação com o manuseio da cauda. Com base em observações de que as técnicas de manuseio em camundongos não são amplamente reconhecidas pela comunidade científica, descrevemos o uso de uma nova técnica de manuseio.

Em ambos os estudos apresentados, o manuseio de túneis e 3D reduziu as tentativas de fuga de camundongos ao serem recolhidos, potencialmente facilitando o manuseio de rotina. Além disso, em camundongos machos mais velhos, essa técnica reduziu comportamentos semelhantes à ansiedade e aumentou a interação com o experimentador. Em mulheres jovens.

esta técnica diminuiu os níveis de corticosterona observados em resposta ao manuseio. A implementação dessa técnica tem o potencial de reduzir a variabilidade dos dados, melhorar o bem-estar animal e facilitar o manuseio rotineiro.