Name: Implantação direta de cânula na Cisterna Magna dos Porcos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: Aprenda a implantar cânula na cisterna magna de porcos para estudar o sistema glinfático com segurança. Esta técnica minimiza danos cerebrais e permite visualização imediata do sucesso da canulação.

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Este trabalho foi apoiado pela Fundação Knut e Alice Wallenberg, Hjärnfonden, Fundações Wenner Gren e fundação Crafoord.

Todos os procedimentos foram realizados de acordo com a diretiva europeia 2010/63/UE e aprovados pelo Comitê ético de Malmö-Lund em Pesquisa Animal (Dnr 5.8.18-05527/2019) e conduzidos de acordo com as diretrizes do CODEX do Conselho sueco de Pesquisa.
1. Preparação
<ol><li>Traçador<ol>
<li>Prepare CSF artificial (126 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 1,25 mM NaH2PO4, 2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 10 mM de glicose, 26 mM NaHCO3; pH 7.4)</li>
		<li>A 500 μL de CSF artificial, adicione 10 mg de albumina do soro bovino (BSA) conjugado com Alexa Fluor 647 (BSA-647).</li>
		<li>Centrifugar a 5.000 x g por 5 min e usar o supernaspe.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cânula<ol>
<li>Conecte uma seringa de 1 mL à conexão luer feminina da linha intravenosa (IV), toque de 3 vias com extensão de 10 cm.</li>
		<li>Coloque uma agulha de 18 G na extremidade masculina.</li>
		<li>Abra a trava de parada de 3 vias para permitir a continuidade da agulha à seringa.</li>
		<li>Desembrulhe cuidadosamente a agulha e aspire aproximadamente 300 μL do soro fisiológico na linha IV.</li>
		<li>Remova a agulha do soro fisiológico e prossiga para introduzir um pouco de ar para criar uma pequena bolha de ar (5-10 mm) na linha IV.</li>
		<li>Coloque a agulha no rastreador e aspire todos os 500 μL do rastreador. O soro fisiológico na linha IV deve ser visivelmente separado por uma bolha de ar.</li>
		<li>Descarte a agulha e feche a trava de parada de 3 vias.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Animal<ol>
<li>Sedar um porco por injeção intramuscular (i.m.) de tiletamina (3,75 mg/kg) e zolazepam (3,75 mg/kg) e dexmedetomidina (37,5 μg/kg). Espere que fique inconsciente.</li>
		<li>Prepare uma linha intravenosa inserindo uma cânula de 20 G na veia do ouvido. NOTA: Certifique-se de que a cânula está na veia injetando 5-10 mL de soro fisiológico através da cânula. Se a veia foi perdida, isso será notado por pequeno edema no tecido auditivo.</li>
		<li>Entubar o porco para garantir que a taxa de respiração possa ser regulada durante toda a cirurgia. NOTA: Certifique-se de intubação bem sucedida aplicando pressão no tórax do porco e confirme que o ar expirado à força está saindo do tubo de intubação.</li>
		<li>Conecte o tubo de intubação a um ventilador definido a uma taxa de respiração de 14 respirações/min.</li>
		<li>Conecte um oxímetro de pulso e manguito à cauda para monitorar a frequência cardíaca (HR), pressão arterial (PA) e saturação de oxigênio (sats). Insira um termômetro retal para monitorar a temperatura do núcleo.</li>
		<li>Prepare um saco IV de cetamina (5 mg/kg/min), midazolam (0,25 mg/kg/min) e fentanil (2,5 μg/kg/min), em soro fisiológico e comece a infundir através da veia da orelha a aproximadamente 2 gotas/s. NOTA: Durante toda a cirurgia, a taxa de infusão pode precisar ser aumentada ou diminuída com base nos sinais vitais do animal.</li>
		<li>Com o porco na posição propensa, palpa a parte de trás da cabeça e pescoço do animal para localizar e marcar a crista occipital e a coluna vertebral das primeiras vértebras torácicas e a base de cada orelha.</li>
		<li>Desenhe uma linha reta entre a crista e as vértebras ao longo do eixo longitudinal. Desenhe duas linhas da crista até a base de cada orelha seguindo a base do crânio (Figura 1A).</li>
		<li>Verifique se o animal está em um sono profundo, apertando cuidadosamente a cauda e observando a ausência de um reflexo da cauda. NOTA: Se o animal ainda estiver reflexivo, a taxa de infusão anestésico deve ser aumentada gradualmente até que o animal não apresente mais reflexo.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Cirurgia
NOTA: Durante toda a cirurgia, é necessário ter pelo menos um assistente para aspirar o sangramento leve e cauterizar quaisquer vasos decepos.
<ol><li>Usando um bisturi com uma lâmina de 21, faça uma incisão dérmica ao longo da linha longitudinal até o músculo.</li>
	<li>Estender duas incisões dérmicas perpendiculares mais ao longo dos ombros, 10-15 cm de comprimento.</li>
	<li>Das cristas occipitais, faça incisões dérmicas ao longo da linha até a base de cada orelha.</li>
	<li>Agarrando os cantos da pele formados na crista occipital com fórceps anatômicos, separada cuidadosamente a pele do músculo subjacente, executando levemente a lâmina do bisturi sobre a fáscia, movendo-se do rostral para caudal. Uma vez que a pele tenha sido resseccionada após cada uma das cinco incisões, partes dos músculos trapézio devem então ser visíveis.</li>
	<li>Faça uma incisão longitudinal com o bisturi, aproximadamente 1 cm de profundidade, onde o trapézio se junta na linha média. NOTA: Ao cortar os músculos, há uma propensão aumentada para sangramento, por isso o cauterizador deve estar pronto. Se um vaso maior for cortado, uma pessoa deve comprimi-lo rapidamente com a gaze, enquanto a outra pessoa usa o cauterizador.</li>
	<li>Usando uma combinação de fórceps cirúrgicos retos e curvados, realize dissecção contundente trabalhando ao longo do corte longitudinal nos músculos. Isso separará as barrigas do trapézio, bem como o músculo semi-pinalis capitus biventer subjacente.</li>
	<li>Corte as fibras musculares persistentes com um bisturi e continue a dissecção contundente até que o complexo semiespinhal se torne visível.</li>
	<li>Corte as origens dos músculos trapézio e semi-pinalis capitus biventer ao longo do aspecto posterior do crânio. Separe-os longitudinalmente com o bisturi realizando dissecção contundente até que o complexo semiespinhal capitus seja totalmente visível.</li>
	<li>Retraia os músculos trapézio e semi-pinalis capitus biventer usando retículas auto-retentor.</li>
	<li>Onde as barrigas do complexo semicírdio capitus se reúnem na linha média, fazem uma incisão longitudinal com o bisturi de aproximadamente 1 cm de profundidade. NOTA: Esteja ciente de qualquer sangramento adicional aqui. O sangramento pode ser controlado usando uma combinação de cotonetes de algodão e cauterização.</li>
	<li>Usando fórceps cirúrgicos, realize uma dissecção contundente trabalhando ao longo do corte longitudinal entre as barrigas musculares até que o aspecto dorsal do atlas (IC) seja palpável.</li>
	<li>Corte as origens dos músculos semispinalis capitus complexus ao longo do aspecto posterior do crânio e separe-o longitudinalmente das vértebras subjacentes por bisturi e dissecção contundente.</li>
	<li>Retraia os músculos semispinalis capitus complexus usando outro conjunto de retentores auto-retentores.</li>
	<li>Usando um bisturi, remova cuidadosamente qualquer tecido remanescente sobrepondo a região onde o atlas encontra a base do crânio.</li>
	<li>Colocar um braço sob o pescoço do animal e um dedo na conjuntura do atlas e crânio, elevar simultaneamente a cabeça e flexionar o pescoço enquanto palpating com o dedo para revelar a cisterna magna usando a outra mão. NOTA: A cisterna magna é reconhecível quando palpating como uma estrutura elástica forte com uma pequena quantidade de rebote à medida que a pressão é liberada com o dedo.</li>
</ol>3. Cannulação e injeção
NOTA: Esta etapa também requer pelo menos duas pessoas e é realizada com a cabeça do animal elevada e o pescoço flexionado.
<ol><li>Certifique-se de que uma pessoa eleva e flexiona a cabeça e o pescoço do animal enquanto a outra palpates para a cisterna magna fazendo uma nota de sua localização anatômica.</li>
	<li>Introduza lentamente e cuidadosamente uma cânula de 22 G através da dura e na cisterna magna em um ângulo oblíquo para o eixo longitudinal. NOTA: Não insira a cânula muito profunda, pois isso pode causar danos ao cérebro. Saber até onde inserir a cânula vem com experiência em entender como se sente para a cânula furar a dura. Essencialmente, assim como a dura foi perfurada, a cânula é então profunda o suficiente para uma injeção de rastreador bem sucedida. Esta profundidade é de aproximadamente 3-5 mm, mas difere com base no tamanho ou idade do animal. A canulação bem sucedida deve ser imediatamente evidente através da visualização de CSF claro e pulsante subindo a cânula. Para o melhor resultado, recomenda-se praticar várias cannulações antecipadamente em animais eutanizados para obter a compreensão do piercing dural.</li>
	<li>Retire a agulha da cânula e coloque uma tampa na fechadura.</li>
	<li>Primeiro, aplique supercola e um acelerador onde a cânula entra no tecido, seguido pela aplicação do cimento dentário. Espere 5 min para o cimento endurecer.</li>
	<li>Remova cuidadosamente a tampa da cânula e conecte a extremidade masculina da torneira de linha IV previamente preparada com extensão de 10 cm, com o rastreador, à cânula.</li>
	<li>Injete lentamente o rastreador manualmente ou usando uma bomba de micro infusão a uma taxa de 100 μL/min. Remova a torneira da linha IV de 3 vias com extensão de 10 cm e substitua-a pela tampa. O rastreador deve agora ser visível pulsando na base da cânula (Vídeo Suplementar 1). NOTA: Se injetar à mão, faça isso até que o rastreador ainda esteja visível no eixo da cânula, aproximadamente 1-2 mm acima de onde o cimento dental está cobrindo o eixo.</li>
	<li>Após a injeção, coloque sacos de areia sob o pescoço para manter alguma flexão. A cabeça pode então ser liberada, e o animal é deixado em uma posição propensa a repouso.</li>
	<li>Solte os retículas auto-retentores e coloque os músculos como eles estavam antes. Aproxime a pele sobre os músculos usando grampos cirúrgicos de toalha.</li>
	<li>Cubra os grampos de toalha e a incisão com gaze e, em seguida, um cobertor para limitar a perda de calor.</li>
	<li>Permita que o rastreador circule pelo tempo desejado antes de eutanásia do animal por i.v. Injeção pentobarbital (140 mg/kg). Confirme a eutanásia pela ausência de sons cardíacos sobre a auscultação com um estetoscópio.</li>
</ol>4. Extração e processamento cerebral
<ol><li>Usando um bisturi com 20 lâminas, estenda a incisão dérmica longitudinal da crista occipital até aproximadamente 7 cm acima do nariz.</li>
	<li>Reflita a pele sobrepondo o aspecto dorsal do crânio usando o bisturi. NOTA: Existem várias maneiras de cortar e remover o aspecto dorsal do crânio de porco em uma base animal por animal. O que se segue é o procedimento que mais tem funcionado para este experimento.</li>
	<li>Usando uma serra compacta portátil, faça um corte coronal no crânio, aproximadamente 3 cm acima das duas veias grandes vistas saindo do crânio. Estenda-se a mais dois cortes verticais dos cortes coronais e mais dois cortes adicionais para reunir os cortes verticais na linha média. NOTA: Mantenha uma aderência firme da serra ao fazer os cortes nos ossos do crânio, pois tenderá a se afastar após o primeiro contato com o osso ou tecido, o que pode levar a uma lesão grave.</li>
	<li>Certifique-se de que os cortes do crânio são através de toda a espessura do osso, seguindo-se com um martelo e cinzel estreito (10 mm) para cada um dos cortes.</li>
	<li>Usando o martelo, finalmente bata um cinzel largo (25-30 mm) no corte coronal. Com uma pessoa apoiando a cabeça, certifique-se de que a outra pessoa aplique alavancagem no cinzel para estremecer abrir o crânio dorsal.</li>
	<li>Uma vez que o fragmento dorsal do crânio tenha sido removido, disseca a dura-máter sobrelada usando uma tesoura cirúrgica curva.</li>
	<li>Use uma espátula para cortar a medula espinhal do cerebelo no aspecto rostral. Em seguida, prossiga para guiar a espátula sob o cérebro a partir da frente, cortando as lâmpadas olfativas, glândula pituitária e nervos cranianos.</li>
	<li>Coloque a espátula atrás do cerebelo e aplique uma boa quantidade de pressão para desalojar o cérebro da cavidade craniana, levantando-a cuidadosamente uma vez solta.</li>
	<li>Fixar imediatamente todo o cérebro por imersão tecidual em 4% de paraformaldeído durante a noite. NOTA: Após esta etapa, é possível realizar toda a imagem cerebral usando um estereoscópio (Figura 1E).</li>
	<li>No dia seguinte, faça fatias coronais do cérebro usando uma faca de salmão e conserte as fatias durante a noite por imersão tecidual em 4% de paraformaldeído.</li>
	<li>Por fim, coloque as fatias em 0,01% azide no PBS para armazenamento a longo prazo.</li>
</ol>

<ol><li>Redzic, Z. B., Segal, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+choroid+plexus+and+the+physiology+of+the+choroid+plexus+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">The structure of the choroid plexus and the physiology of the choroid plexus epithelium.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 56 (12), 1695-1716 (2004).</li>
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<li>D'Angelo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+fluid+collection+technique+from+the+atlanto-occipital+space+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Veterinaria+Brno%22%5BJournal%5D)">Spinal fluid collection technique from the atlanto-occipital space in pigs.</a> Acta Veterinaria Brno. 78 (2), 303-305 (2009).</li>
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</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Aqui está descrito, um protocolo detalhado para realizar a cannulação direta da cisterna magna em suínos, incluindo a preparação necessária, procedimento cirúrgico, infusão de rastreadores e extração do cérebro. Isso requer alguém com experiência e certificação para trabalhar com animais de grande porte. Se realizado corretamente, isso permite a entrega de moléculas desejadas com garantia diretamente no CSF, após a qual uma série de diferentes modalidades avançadas de imagem luminosa podem ser usadas para explorar a dist...

O fluido cefalorraquidiano (CSF) é um ultrafiltrato de sangue que é encontrado dentro e ao redor do sistema nervoso central (CNS)1,2. Além de dar flutuação ao cérebro ou absorver forças mecânicas prejudiciais, a CSF também desempenha um papel fundamental na limpeza de resíduos metabólicos do CNS3. O despejo de resíduos é facilitado pelo sistema glicêtico recentemente caracterizado que permite o fluxo convectivo de CSF através do parenchyma cerebral através de espaços perivasculares (PVS), que circundam artérias penetrantes3,4,5. Este processo mostrou-se dependente da aquaporina-4 (AQP4), um canal de água expresso principalmente no endfeta astrócito, vinculado ao PVS4,6. O estudo do sistema glicêmático é realizado por imagens in vivo e ex vivo, utilizando microscopia de luz avançada ou ressonância magnética (RM), após a introdução de um rastreador fluorescente/radioativo ou agente de contraste no CSF7,8,9,10,11.
Uma maneira eficaz de introduzir um rastreador no CSF sem incorrer em danos ao parênquim cerebral é através da cisterna magna cannulation (CMc)12,13. A grande maioria de todos os estudos glifáticos, até agora foram realizados em roedores e evitados em mamíferos superiores devido à invasividade do CMC acoplado à simplicidade prática de trabalhar com um pequeno mamífero. Além disso, os crânios finos de camundongos permitem imagens in vivo sem a necessidade de uma janela craniana e, posteriormente, permitem uma extração cerebral descomplicada11,14. Experimentos realizados em humanos produziram um valioso dados in vivo macroscópicos sobre a função glifática, mas se basearam em injeções de rastreador intratecal na coluna lombar distal e, além disso, utilizam ressonância magnética que não produz resolução suficiente para capturar a micronatomia do sistema glicêntico7,15,16 . Compreender a arquitetura e a extensão do sistema glicêtico em mamíferos superiores é essencial para sua tradução para humanos. Para facilitar a tradução glifática para humanos, é importante aplicar técnicas que são realizadas em roedores a mamíferos superiores, de modo a permitir comparações diretas do sistema glicêtico entre espécies de crescente cognição e complexidade cerebral17. Os cérebros de porco e humano são gyrencephalic, possuindo uma neuroarquitetura dobrada, enquanto cérebros de roedores são lisscérefálicos, tendo assim uma diferença substancial entre si. Em termos do tamanho geral, os cérebros de porco são, também, mais comparáveis aos humanos, sendo 10-15 vezes menores que o cérebro humano, enquanto os cérebros de camundongos são 3.000 vezes menores18. Ao entender melhor o sistema glicêtico em grandes mamíferos, pode ser possível utilizar o sistema glicêtico humano para futura intervenção terapêutica em condições como derrame, lesão cerebral traumática e neurodegeneração. CMc direto em suínos in vivo é um método que permite a microscopia leve de alta resolução do sistema glicêtico em um mamífero superior. Além disso, devido ao tamanho dos suínos utilizados, é possível aplicar sistemas de monitoramento semelhantes aos utilizados em cirurgias humanas, tornando viável documentar e regularmente funções vitais, a fim de avaliar como estes contribuem para a função glifática.

<table><tbody><tr><td>0,01% de azida em PBS</td><td>Sigmaaldrich</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>18G agulha</td><td>Mediq</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1ml Seringa</td><td>FischerSci</td><td>15849152</td><td></td></tr><tr><td>cânula 20G</td><td>Cânula Mediq</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>22G</td><td>Mediq</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>4% paraformaldeído</td><td>Sigmaaldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Anatômica fórceps</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino Alexa-Fluor 647 Conjugado</td><td>ThermoFischer</td><td>A34785</td><td>2 frascos (10mg)</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigmaaldrich</td><td>C1016</td><td></td></tr><tr><td>Cinzel</td><td>ClasOhlson</td><td>40-8870</td><td></td></tr><tr><td>Cimento dentário</td><td>Agnthos</td><td>7508</td><td></td></tr><tr><td>serra compacta</td><td>ClasOhlson</td><td>40-9517</td><td></td></tr><tr><td>Glicose</td><td>Sigmaaldrich</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>Martelo</td><td>ClasOhlson</td><td>40-7694</td><td></td></tr><tr><td>Insta-Set CA Accelerator</td><td>BSI-Inc</td><td>BSI-151</td><td></td></tr><tr><td>IV linha TAP, 3-VIAS com extensão de 10cm</td><td>Bbraun</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigmaaldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>Caneta marcadora</td><td>NA NA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Sigmaaldrich</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>MilliQ água</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>NaCL</td><td>Sigmaaldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sigmaaldrich</td><td>S8282</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigmaaldrich</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>No. 20 lâmina</td> <td>de bisturiAgnthos</td><td>BB520</td><td></td></tr><tr><td>No. 21 Lâmina de bisturi</td><td>Agnthos</td><td>BB521</td><td></td></tr><tr><td>No. 4 Cabo de bisturi</td><td>Agnthos</td><td>10004-13</td><td></td></tr><tr><td>Saline</td><td>Mediq</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Faca de salmão</td><td>Fiskers</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Afastadores auto-retentores</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Supercola</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica curva</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Pinça cirúrgica</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Grampos de toalha cirúrgica</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr></tbody></table>

implantação direta de cânula na cisterna magna dos porcos

Direct Cannula Implantation in the Cisterna Magna of Pigs

O sistema glicênico é um sistema de liberação de resíduos no cérebro que se baseia no fluxo de fluido cefalorraquidiano (CSF) em espaços perivasculares ligados a astrocitos e foi implicado no despejo de peptídeos neurotóxicos como amilóide-beta. A função glifática prejudicada exacerba a patologia da doença em modelos animais de doenças neurodegenerativas, como o Alzheimer, que destaca a importância de entender esse sistema de liberação. O sistema glicênico é frequentemente estudado por cisterna magna cannulations (CMc), onde os rastreadores são entregues diretamente no fluido cefalorraquidiano (CSF). A maioria dos estudos, no entanto, tem sido realizada em roedores. Aqui, demonstramos uma adaptação da técnica CMc em suínos. Usando CMc em suínos, o sistema glicêtico pode ser estudado em alta resolução óptica em cérebros giroscéceis e ao fazê-lo faz a ponte entre roedores e gglifáticos humanos.

Uma vez que o porco está inconsciente, ele é palpatado, e sua anatomia superficial é marcada, começando na crista occipital (OC) e trabalhando em direção às vértebras torácicas (TV) e cada base de ouvido (EB). É nesse sentido que as incisões dérmicas são feitas (Figura 1A). As três camadas musculares, incluindo trapézio, semi-pinalis capitus biventer e semispinalis capitus complexus são ressecadas e mantidas abertas por dois conjuntos de retentores auto-retentores para expor a cisterna magna...

Este artigo apresenta um protocolo passo-a-passo para a implantação direta de cânula na cisterna magna dos suínos.

Implantação direta de cânula na Cisterna Magna dos Porcos

The glymphatic system is a waste clearance system in the brain that relies on the flow of cerebrospinal fluid (CSF) in astrocyte-bound perivascular spaces ...

Este protocolo é importante, pois permite a investigação do sistema glifático em um grande mamífero, aproximando-nos da compreensão do sistema glicêntico em humanos. Há duas vantagens nessa técnica. A introdução de traços na cisterna magna evita qualquer dano direto ao cérebro, o que contrasta com as injeções intraventriculares.Em segundo lugar, trata-se de uma abordagem direta que permite a visualização imediata da cannulação e saber se ela foi ou não bem sucedida. Comece colocando o porco em uma posição propensa. Palpa a parte de trás de sua cabeça e pescoço para localizar e marcar a crista occipital, a coluna das primeiras vértebras torácicas, e a base de cada orelha.Desenhe uma linha reta entre a crista e as vértebras ao longo do eixo longitudinal. Em seguida, seguindo a base do crânio, desenhe duas linhas da crista até a base de cada orelha. Fixar cuidadosamente a cauda do animal e observar um reflexo para ver se ele está em um sono profundo.Comece fazendo uma incisão dérmica ao longo da linha longitudinal até o músculo usando um bisturi com uma lâmina número 21, em seguida, estender duas incisões perpendiculares mais ao longo dos ombros, cada uma de 10 a 15 centímetros de com

direct-cannula-implantation-in-the-cisterna-magna-of-pigs

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Curta descrição visual da técnica cirúrgica e um dispositivo usado para a entrega de gene (e celular) terapias para a medula espinhal. A técnica é demonstrada no animal, mas é completamente traduzíveis e sendo utilizado para a aplicação em seres humanos.

Técnica cirúrgica para entrega da Medula Espinhal de Terapias: Demonstração de Processo em Göttingen porquinhos

Fonte: Xavier, A. L. R., et al. Implantação de cânula na cisterna magna de roedores. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra o procedimento para implantar uma cânula na cisterna magna de um camundongo anestesiado. A técnica envolve guiar uma cânula montada em agulha através da dura-máter até a cisterna magna triangular invertida e prendê-la para entrega direcionada no líquido cefalorraquidiano.

Implantação de cânula na cisterna magna em um modelo de camundongo

Neste vídeo, descrevemos o procedimento para entregar células tumorais derivadas de humanos na cisterna magna do cérebro de um camundongo. O modelo de camundongo ortotópico pode ser usado para estudar a disseminação metastática do câncer para as meninges cranianas.

Injeção Cirúrgica de Cisterna Magna: Um Método para Administração de Células Tumorais Diretamente no Sistema Nervoso Central do Modelo Murino

Neste vídeo, descrevemos um método para acessar a cisterna magna em um modelo de porco. A cisterna magna é um local preferencial para estudos sobre o líquido cefalorraquidiano.

Localizando a Cisterna Magna em um Modelo de Porco: Um Método Cirúrgico para Acesso à Cisterna Magna em um Modelo de Porco para Canulação Direta

Este vídeo descreve o protocolo para entrega de moléculas traçadoras por meio de canulação direta da cisterna magna em um cérebro de porco. Este método ajuda a visualizar a distribuição do líquido cefalorraquidiano no sistema glinfático.

Entrega de moléculas traçadoras na cisterna magna: um método para entregar moléculas traçadoras fluorescentes via canulação direta da cisterna magna em suínos

Este vídeo descreve a técnica de colocação intratecal de um dreno lombar em um modelo isquêmico suíno, que auxilia na drenagem do líquido cefalorraquidiano para um sistema de drenagem. A pressão do líquido cefalorraquidiano é monitorada pelo sistema de drenagem e o fluido é drenado para manter uma pressão constante do líquido cefalorraquidiano.

Colocação intratecal de dreno lombar: uma técnica para retirar líquido cefalorraquidiano da coluna lombar em modelo suíno

Aqui descrevemos um protocolo para realizar a cateterização da cisterna magna (CMc), uma forma minimamente invasiva para entregar traçadores, substratos e moléculas sinalizadoras no fluido cerebrospinal (CSF). Combinado com diferentes modalidades de imagem, CMc permite sistema de glymphatic e avaliação de dinâmica do CSF, bem como a entrega de todo o cérebro de vários compostos.

Cânula de implantação para a Cisterna Magna de roedores

O protocolo descreve um método para injetar células tumorais através da via de punção percutânea na cisterna magna que induz metástase leptomeníngea em camundongos, reduzindo o trauma e a carga tumoral extracraniana.

Modelo de injeção minimamente invasiva de cisterna magna para estudos de metástase leptomeníngea em camundongos

Estimulação transcraniana por corrente (ETCC) é uma técnica estabelecida para modular a excitabilidade...

Posicionamento do eletrodo e Montage na estimulação transcraniana por corrente

Este artigo descreve uma sequência otimizada de eventos para imagiologia multimodal de enxertos celulares no cérebro de roedores por meio de: (i) na bioluminescência vivo e ressonância magnética, e (ii) a análise post mortem histológica. A combinação destas modalidades de imagem em um único animal permite uma avaliação do enxerto celular com alta resolução, sensibilidade e especificidade.

Imagem Multimodal de implante de células-tronco no sistema nervoso central de camundongos

Aprenda a implantar cânula na cisterna magna de porcos para estudar o sistema glinfático com segurança. Esta técnica minimiza danos cerebrais e permite visualização imediata do sucesso da canulação.

Implantação direta de cânula na Cisterna Magna dos Porcos

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