Análise do Fator de Crescimento Transformador ß Produtos de Decote Familiar Secretados Na Blastocoele de Embriões Xenopus laevis

Este protocolo pode ser usado para estudar o processo pelo qual uma gama mais ampla de proteínas precursoras segregadas, incluindo membros da família TGF-beta, são convertidas em proteínas ativas após o decote protelítico. A principal vantagem deste protocolo é que ele fornece métodos muito rápidos e baratos para obter um produto de decote TGF-beta altamente concentrado in vivo sob condição visualizada. Para começar, após a injeção no dia seguinte, remova a solução Ficoll e quaisquer embriões mortos ou moribundos, depois enxágue os embriões uma ou duas vezes com MBS e cultue os embriões em MBS no banco à temperatura ambiente ou a 16 graus Celsius na incubadora para retardar o desenvolvimento.

Aqueça e puxe os capilares de vidro para um ponto fino usando um puxador de micropipette com as configurações desejadas. Usando fórceps, corte a ponta de uma agulha puxada. Para evitar entupimento, a abertura da agulha de aspiração blastocele deve ser maior do que a agulha de microinjeção.