Uma tela comportamental para convulsões induzidas pelo calor em modelos de epilepsia de mouse

O objetivo do método é testar para hipertermia ou convulsões induzidas pelo calor em modelos de camundongos. O protocolo descreve o uso de uma câmara personalizada com monitoramento contínuo da temperatura corporal para determinar se a temperatura corporal elevada leva a convulsões.

GeFS+mutações causam convulsões febris em pacientes. A capacidade de estudar convulsões induzidas por hipotermia em camundongos GEFS+nos permite examinar a relação entre mutações específicas e perfil de convulsão. O controlador de temperatura digital ajuda a definir o gradiente de temperatura na caixa de aquecimento de forma reproduzível.

Assim, a temperatura do corpo do rato pode ser aumentada a uma taxa lenta e constante. Este protocolo pode ser usado para identificar terapias potenciais, como drogas ou restrições alimentares, que podem ser usadas para reduzir ou eliminar convulsões febris. Para inserir a sonda de temperatura retal no mouse sem ferimentos, recomendamos anestesiar brevemente o mouse e lubrificar a ponta da sonda retal.

Comece ligando a câmara de calor do mouse com o botão liga-alimentação e, em seguida, pressione o botão de aquecimento. Usando o teclado no controlador de temperatura digital, coloque a temperatura da câmara de calor em 50 graus Celsius. Forque o chão da câmara de calor com roupa de cama de espiga.

Monte uma câmera de gravação de vídeo na frente da câmara de calor. Forra uma placa de Petri de 140 milímetros de diâmetro com camadas grossas de papel de tecido e coloque-a no gelo para servir como uma almofada de resfriamento. Para o ensaio de triagem, certifique-se de que o peso corporal do mouse seja de 15 gramas ou mais.

Antes de iniciar o procedimento, confirme se o mouse está completamente anestesiado com uma pitada de dedo do dedo do dedo. Cubra a ponta metálica da sonda de temperatura retal com um lubrificante e insira-a suavemente no mouse. Fixar a sonda retal na cauda do mouse com fita adesiva.

Coloque o mouse em uma nova gaiola de recuperação forrada com roupa de cama de espiga. Inicie um temporizador e observe o mouse por cinco minutos enquanto monitora a temperatura corporal do núcleo, até que o mouse se recupere completamente da anestesia e a temperatura se estabilize em 35 a 36 graus Celsius. Ao final de cinco minutos, observe a temperatura corporal do mouse como a temperatura corporal inicial em zero minuto.

Transfira o mouse rapidamente para o chão da câmara de calor do rato pré-aquecido para iniciar o teste de experiência. Depois que o mouse é colocado na câmara do mouse pré-aquecido, inicie a câmera e o cronômetro, aumente a temperatura da câmara de calor em intervalos regulares, de tal forma que a temperatura corporal do mouse aumente a uma taxa de 25, 2,5 graus Celsius por minuto. Comece a registrar a temperatura corporal do mouse em intervalos de um minuto durante a duração do experimento.

Em 9,5 minutos, acerte a temperatura da câmara de calor para 55 graus Celsius para estabilizar a temperatura da câmara de calor a 55 graus Celsius até o décimo minuto. Da mesma forma, alcançar uma temperatura estável da câmara de calor a 60 graus Celsius até o 20º minuto. Cada teste de triagem de convulsões dura 30 minutos.

Se o rato tiver uma convulsão, regissou a temperatura corporal do camundongo durante a convulsão, como uma temperatura limiar de convulsão. Tome nota das características de comportamento de convulsão exibidas pelo mouse, em seguida, rapidamente pegar o mouse da câmara e colocá-lo na almofada de resfriamento. Se um rato não experimentar convulsões induzidas pelo calor dentro do período de observação de 30 minutos, ou a temperatura corporal do mouse atingir 44 graus Celsius, coloque o mouse na almofada de resfriamento.

Quando a temperatura do corpo do mouse descer para 36 a 37 graus Celsius, transfira o mouse para uma gaiola de recuperação. Para remover a sonda retal do mouse, corte cuidadosamente a fita entre a cauda do rato e o fio da sonda retal. Limpe e limpe a ponta metálica da sonda retal com 70% de etanol.

Observe o mouse até que ele se recupere antes de devolvê-lo para a gaiola doméstica. Continue monitorando o estado do mouse. Marque o fim do teste de experiência.

Reinicie a temperatura da câmara de calor do mouse para 50 graus Celsius e deixe-a equilibrar antes do próximo ensaio. No ensaio de convulsão de calor, a temperatura corporal média dos camundongos foi registrada a cada minuto usando o protocolo de aquecimento, e a taxa de mudança de temperatura corporal ao longo do tempo foi avaliada. Não houve diferença na taxa de mudança de temperatura corporal entre camundongos mutantes heterozigosos e selvagens, nos respectivos antecedentes genéticos.

Grupos experimentais e de controle de camundongos apresentaram comportamentos diferentes quando expostos a um aumento periódico da temperatura corporal. Todos os camundongos mutantes heterozigos de 129X1 ou B6NJ apresentaram convulsões induzidas pelo calor. Nenhum dos camundongos do tipo selvagem no fundo enriquecido 129X1 experimentou convulsões, enquanto apenas um terço dos camundongos do fundo B6NJ sensível à convulsão mostrou convulsões.

Uma temperatura média do limiar de convulsão de camundongos mutantes de 129X1 não foi significativamente diferente da temperatura média do limiar de convulsão vista em camundongos B6NJ. Um terço dos camundongos do tipo selvagem B6NJ que apresentaram convulsões induzidas pelo calor, tinha uma temperatura de limiar de convulsão significativamente maior que os camundongos mutantes heterozigosos B6NJ. A gravidade das convulsões foi medida utilizando-se a escala racina modificada.

A pontuação máxima de Racine de camundongos mutantes heterozigos em 129X1 não foi significativamente diferente dos camundongos mutantes heterozigosos no fundo genético B6NJ. Ao definir o protocolo de aquecimento, certifique-se de que a temperatura do corpo do rato não aumente a uma taxa mais rápida que 25 graus Celsius por minuto, ou pode ser prejudicial à saúde do animal. Seria muito legal combinar o protocolo de aquecimento com gravações simultâneas de EEG, que nos permitiria correlacionar diferentes padrões de atividade cerebral com diferentes tipos de comportamento convulsivo.