In vivo Métodos para avaliar a função e estrutura do gânglio de gânglios da retina e da estrutura em animais grandes

Oi, pessoal. Este é Yikui Zhang do Hospital Wenzhou Eye. O nervo superior não tem Exxons das células gânglios de orexina, e depois transmite o sinal visual para o cérebro.

Modelo maior de lesão nervosa superior são essenciais para traduzir o novo tratamento do modelo robô para a aplicação linfática. Aqui, descrevemos alguns métodos in vivo para avaliar a estrutura e a função das células gânglios orexinas no nervo superior em animais de grande porte. Ao apresentar este método passo a passo, esperamos aumentar as deficiências reprodutivas experimentais e facilitar o uso de modelos maiores de neurose óptica.

Raspe a lâmina eletrônica. E, prepare-o com 70% de álcool três vezes, para limpar a pele e expor a veia subcutânea. Insira um rodízio venoso periférico por via intravenosa.

Em seguida, gotejar atropina e propofol. Entubar a cabra com um tubo traqueal de seis milímetros e conectar-se a um respirador artificial. A anestesia foi mantida com 3,5% de isoflurane em oxigênio a uma taxa de fluxo gerenciada constante de dois litros.

Coloque o sensor de temperatura sob a língua da cabra. Corte a saturação de oxigênio na extremidade proximal da orelha de cabra. Amarre o manguito da pressão arterial na base da coxa.

Grampo ECG ceia nos membros em ordem. Então, podemos monitorar os indicadores vitais da cabra. Raspe o cabelo e desinfete a pele com betadina e 70% de álcool três vezes no centro do osso frontal.

Abra o saco de esterilizador contendo tesouras e as unhas. Faça incisões de pele para expor o crânio com uma tesoura. Parafusos de aço para implantados no centro do osso frontal.

Raspe o cabelo e desinfete a pele com betadina e 70% de álcool três vezes em um ponto médio de duas orelhas no osso occipital. Faça incisões na pele. Parafusos de aço para implantados no ponto médio de duas orelhas em osso occipital.

O eletrodo da agulha moída é inserido subcutâneamente sob o parafuso frontal do crânio. O eletrodo ativo e o eletrodo de referência estão conectados a parafusos frontais e occipitais, respectivamente, com clipes de jacaré para reduzir a impotência do eletrodo. Remendar um olho.

Aplique colírios de anestesia tópico na superfície ocular. Pupilas de ambos os lados são dilatadas por colírios de micose. Coloque a cabeça da cabra em um estimulador cheio de gás com luz ambulante.

Coloque o cobertor preto sobre o estimulador e a cabeça de cabra por cinco minutos de adaptação. O espéculo das pálpebras é usado para expor totalmente sua pupila. Verifique a impotência de contato do tecido eletrodo.

Certifique-se de que a impotência seja inferior a 10 quilômetros para cada um evitar interferência eletromagnética de outros dispositivos elétricos na mesma sala. Verifique o ruído da linha de base sem estimulação da luz. Inicie a gravação do FVEP.

Observe que a gravação de FVEP em cada intensidade de luz é realizada duas vezes. Note que úmido a córnea com lágrima artificial se ela parecer seca. Repita sobre os passos para o olho contralateral.

Inicie a gravação do FVEP em diferentes intensidades de luz consecutivamente. Para cada gravação, 64 traços são mediados para produzir uma forma de onda. O primeiro pico positivo e ativo na forma de onda FVEP foi designado como P1 e N1. O eletrodo terrestre esterilizado está posicionado no lóbulo da orelha.

Os eletrodos ativos e de referência esterilizados são inseridos subcutâneamente ao longo da linha média e do osso frontal e occipital, respectivamente. O espéculo das pálpebras é usado para expor totalmente sua pupila. Remendar um olho.

Regisso padrão de respostas VEP do outro olho em diferentes frequências espaciais consecutivamente. Conecte-se ao eletrodo de terra com um clipe de jacaré. Dois eletrodos de referência de agulha esterilizado são colocados sob a pele um centímetro atrás do canthus lateral em ambos os lados.

O espéculo das pálpebras é usado para expor totalmente sua pupila. Dois eletrodos de gravação ERG desinfetados são centrados em ambas as córneas após a aplicação tópica de lágrima artificial. Dois estimuladores são colocados na frente de cada olho com uma distância de visualização de 50 centímetros.

Certifique-se de que a impotência está abaixo de 10 quilômetros. Rastreie o ruído da linha de base sem estimulação da luz. Aponte a luz ambulante.

Inicie a gravação do ERG padrão de ambos os olhos simultaneamente em diferentes frequências espaciais consecutivamente. Finalmente, o retorno da tela para gravar o padrão ERG sem estimuladores visuais e um controle ativo. O filtro bandpass está programado para variar de um a 75 Hertz para três ERG padrão CPD.

O filtro bandpass é de um a 50 Hertz para suavizar a forma sem afetar sua amplitude. Os primeiros picos positivos e ativos na forma de onda são designados como P1 e N1. O padrão de amplitude ERG medido de N1 a P1.To reduzir a impotência de eletrodos, uma referência de agulha esterilizada é colocada sob a pele frontal. E um eletrodo de referência de agulha esterilizado é colocado sob a pele um centímetro atrás do canthus lateral de um lado.

Um eletrodo de gravação ERG desinfetado é colocado na córnea em uma aplicação tópica de lágrima artificial. Remendar um olho. Um display é colocado a uma distância de visualização de 50 centímetros.

O espéculo das pálpebras é usado para expor totalmente sua pupila. Em seguida, a cabra é colocada no descanso do queixo. Alinhe a cabra com a câmera para enviar sua cabeça de nervo óptico na imagem de oftalmoscopia a laser do scan confocal modificando sua posição da cabeça.

Clique no botão iniciar para entrar na fase final de detecção. Espere a máquina terminar de carregar. Pressione o botão de partida amarelo para iniciar a imagem formal.

Ajuste o joystick para iluminar uniformemente a imagem infravermelha para melhorar a qualidade da imagem. Deslize a câmera para a frente até que a imagem OCT de retina vertical seja mostrada na tela superior direita. Modifique o joystick para que dance uniformemente em uma imagem de OCT de retina horizontal.

Pressione o botão no joystick para capturar sua imagem automaticamente. Segure este joystick para manter a qualidade da imagem na tela de imagem ao vivo até que a execução da imagem seja concluída. Em seguida, pressione adquirir.

Selecione uma foto inicial de alta qualidade. Clique com o botão direito do mouse e selecione definir referência. Pressione o botão de acompanhamento para permitir que o programa corresponda automaticamente à varredura atual com a varredura da linha de base.

Uma vez combinado, pressionou o botão no joystick para ativar o rastreamento automático em tempo real. Clique no botão de medição para entrar na plataforma de medição. Escolha a borracha de uma ferramenta e limpe a linha RFL, que é automaticamente rotulada por máquina.

Escolha a ferramenta de desenho de linha para delinear manualmente o limite entre IPL e INL. Entre as linhas vermelha e azul está o complexo GCC. A imagem alterada de retina no macaque rhesus é realizada utilizando-se o mesmo equipamento e procedimento que os utilizados em cabra.

Figura A mostra representante FVEP em cabra. A figura B mostra forma de onda ERG padrão representativa em cabra. Figura C mostra padrão representativo FVEP em rhesus macaque.

E, figura D mostra forma de onda ERG padrão representativa em rhesus macaque. A Figura dois mostra imagens representativas de OCT de retina ao redor da cabeça do nervo óptico e a espessura do complexo GCC em diferentes regiões periféricas em cabra e no macaque rhesus. O grande modelo animal desempenha um papel importante na pesquisa translacional.

Em muitos casos, efeitos terapêuticos promissores em pequenos modelos animais não foram traduzidos para pacientes humanos. Neste estudo, apresentamos protocolo de vídeo da FVEP, PERG e OCT em cabra e o macaque rhesus. Este método in vivo pode ser aplicado em modelo maior de várias neurose óptica, como neuropatia isquêmica de glaucoma ou traumática óptica e neurite óptica.