Um ensaio celular baseado em repórter para monitorar a eficiência do splicing

Este protocolo descreve um ensaio celular para monitorar a eficiência do splicing, usando um repórter gerenciador adaptável. Este repórter Assay pode ser usado para estudar os efeitos da doença Mutações associadas nos locais da Exxon ou emendas, e para projetar terapia, em particular uma das partículas, para melhorar o reconhecimento de locais de emenda mutante a cinco pontos. A passagem nas células Hela aspira o meio gasto e incuba as células com três mililitros de 0,2 5% de viagens contendo um EDTA milimola, a 37 graus Celsius por três minutos.

Após a incubação em sete mililitros de DMEM frescos e transfira a suspensão celular para um tubo de 10 mililitros. Centrifugar as células. Em seguida, resuspenque a pelota celular em 10 mililitros de DMEM fresco, e plaque as células em um novo prato de cultura tecidual em 20% de confluência, para transsfecção transitória.