Radiosíntese de 1-(2-[^18F]Fluoroethyl)-L-Triptofano usando um Protocolo de Dois Passos de Um pote e Duas etapas

O objetivo geral deste protocolo é radiosintthesize um rastreador de triptofano radiolabeled F18 por uma abordagem de um pote e duas etapas. O radiotracer pode encontrar uma aplicação generalizada para o metabolismo de triptofano por imagem. A técnica utiliza o radioisótopo com uma meia-vida mais longa, menos precursor de reação e menos volume de reação, e uma fase ambientalmente benigna para purificação.

O radiotracer pode ser usado para o diagnóstico de vários distúrbios que afetam o cérebro, incluindo, mas não se limitando à epilepsia, distúrbios neuropsiquiátricos e neuro-oncologia. Este método pode ser aplicado a outros módulos de radiolabeling disponíveis comercialmente. Uma vez que a solução de flúor F18 é recebida, comece por levantamento da caixa de chumbo na superfície, e a partir da distância de um metro, registre as taxas máximas de exposição à radiação.

Depois de realizar um teste de limpeza para garantir que a caixa de transporte não esteja contaminada, registre a dose de flúor de F18 e o tempo. Transfira a solução de flúor F18 para o sistema de síntese de radioquímica. Conecte a linha de argônio com uma agulha curta e a linha de transferência de flúor F18 com uma agulha longa ao frasco de flúor F18.

Então, feche a porta de vidro da célula quente e a porta de chumbo. Ligue a linha de alimentação de argônio clicando em Argon Supply. Aumente a pressão do argônio e ligue a linha de empurrar o flúor F18 para empurrar o aquoso flúor F18 através do cartucho de luz QMA.

Uma vez que toda a radioatividade esteja presa no cartucho de luz QMA, e a leitura do detector de radioatividade seja constante, aumente a pressão do argônio e exploda argônio através do cartucho por mais cinco minutos para remover o excesso de água. Depois de desligar a linha de empurrar o flúor F18, diminua a pressão do argônio para zero e mude a válvula de duas posições de seis portas da posição de captura do flúor F18 para a posição de eluição. Abra o frasco de reação, ligue a posição MVP de entrada uma linha de argônio, e empurre a solução de carbonato K222 e potássio para a posição MVP de entrada um frasco através do cartucho de luz QMA para elute a radioatividade no frasco de reação.

Mude a posição de eluição do flúor F18 para a posição de trapping. Clique no botão Heat para aquecer o reator a 110 graus Celsius, ligue a saída da linha de argon de posição MVP-quatro que se conecta ao reator e evapore o solvente na posição MVP de saída quatro frascos. Clique no botão Esfriar para esfriar o reator à temperatura ambiente com dióxido de carbono comprimido.

Desligue a linha de varredura, mude a posição de MVP de entrada um para a posição dois e adicione o acetonitrilo anidro no frasco dois. Duas voltas na linha de varredura e aquecedor para azeotropicamente seco f18 flúor a 110 graus Celsius. Uma vez que o reator atinja a temperatura ambiente, desligue a linha de varredura, troque a posição de MVP de entrada dois para a posição três e adicione o precursor de rotulagem de radiolato no frasco três.

Feche o reator e aqueça as misturas de reação a 100 graus Celsius por 10 minutos. Para evaporar o solvente de reação, uma vez que o reator esfrie, ligue a linha de varredura e evapore o solvente de reação a 100 graus Celsius. Uma vez que o reator esfrie, desligue a linha de varredura e mude a posição de MVP de entrada três para a posição quatro.

Quando a mistura de acetonitrilo de ácido clorídrico for adicionada, aqueça a reação a 100 graus Celsius por 10 minutos para des protecionar os grupos de proteção tert-butyloxycarbonyl no precursor da rotulagem de radiolato. Para neutralizar a reação, quando o reator atingir a temperatura ambiente, troque a posição de MVP de entrada quatro para a posição cinco e adicione dois hidróxido de sódio molar à mistura de reação e desligue a entrada da linha de argônio MVP. Em seguida, comece a transferir a mistura de reação para o arquivo intermediário clicando no botão F no MVP de saída para alternar o MVP de saída da posição de ventilação quatro para a posição cinco, e, em seguida, clicando no botão F no MVP de entrada para mudar o MVP de entrada da posição cinco para a posição seis.

Depois de ligar a linha de argon MVP de saída, empurre a mistura de reação através do óxido de alumínio neutro empilhado e cartuchos C8 para o frasco intermediário instalado antes do loop de amostra HPLC. Para enxaguar o reator, troque a posição de MVP de saída cinco para a posição seis, empurre a solução de enxágue no frasco de saída da posição MVP seis através do frasco de reação, cartuchos e o frasco intermediário, sucessivamente. Em seguida, comece a purificação da mistura alternando o laço HPLC da posição de injeção para a posição de carga e ligando a linha de argônio MVP de entrada.

Quando a mistura estiver carregada no loop HPLC de cinco mililitros, troque o botão Carregar para Injetar, clique em Injetar HPLC para iniciar o cromatograma HPLC a uma taxa de fluxo de três mililitros por minuto e, em seguida, clique no botão HPLC Monitor para acessar o cromatógrafo HPLC em tempo real. Clique no botão 'Desvio' PARA desviar a fração HPLC de destino para a curta coluna C18 em aproximadamente 12 minutos. Depois que a radioatividade alvo for coletada na coluna C18, troque a válvula de desvio de duas posições de quatro portas para a posição de coleta de resíduos e lave a coluna quiral à taxa de quatro mililitros por minuto durante seis minutos para remover o menor enantiomer D F18 FETrp e outras impurezas ultravioletas.

Clique no botão Diversion MVP para desviar a fase móvel HPLC de volta para a posição MVP de formulação um a três mililitros por minuto. Observe que a fase móvel passa pela coluna quiral e coluna C18 para purificar o FETrp L-F18 retido na coluna C18. Em aproximadamente 32 a 34 minutos, colete a fração alvo na formulação MVP posição dois frasco.

Em seguida, empurre a formulação SOLUÇÃO DE MVP dois frascos através da linha de entrega e filtro estéril para o frasco de dose final. Ensaio a atividade e o volume da dose final após a remoção do filtro estéril. Lave o sistema com água ultra pura seguida de etanol a uma vazão de quatro mililitros por minuto por pelo menos 15 minutos por lavagem.

Desligue a bomba HPLC e a caixa PLC, feche o programa, desligue a companhia aérea compactada, a linha de argônio, a linha de dióxido de carbono e a principal potência do módulo. Retire aproximadamente 0,1 mililitros da dose final em uma inserção de 0,2 mililitro de um frasco QC. Execute a amostra quente como o programa de sequência parcial é descrito no manuscrito do texto.

Analise os dados do QC calculando as purezas químicas e radioquímicas em excesso téreo e atividade molar. Depois de determinar o valor do pH, libere a dose se todos os resultados dos testes passarem pelo intervalo aceitável. Os cromatogramas HPLC representativos para QC são mostrados.

Os picos insignificantes entre o volume vazio em 10 minutos do programa foram detectados no cromatógrafo em branco. A referência padrão não radiolabeled L-fluoroethyl-triptofano mostrou a presença de um único isômero separado bem da referência padrão de sua contraparte D. A dose final do triptofano L-F18 mostrou alta pureza química e pureza radioquímica.

Os testes de estabilidade do produto final na maior concentração de dose por até oito horas mostraram que o triptofano L-F18 foi estável em termos de pureza química, pureza radioquímica, excesso enantiomerico e valor de pH. As purezas químicas e radioquímicas superiores a 95% foram alcançadas por meio deste protocolo. Duas colunas são usadas para purificação de rastreadores.

Lembre-se de mudar para a coluna C18 para remover as impurezas químicas. Podemos adaptar rapidamente este método à produção clínica do radiotracer triptofano de flúor-18.