Name: Um modelo de abrasão epitelial para estudar a cicatrização da ferida córnea (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 45 s
Description: Aprenda a criar um modelo de abrasão epitelial corneana em camundongos usando trephine e espátula para estudar a cicatrização de feridas. Esta técnica reproduzível permite avaliar processos inflamatórios e curativos em condições normais e patológicas.

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Financiamento: Apoiado por: NIH EY018239 (A.R.B., C.W.S., e R.E.R.), P30EY007551 (A.R.B.), e Sigma Xi Grant em Aid of Research (P.K.A.). O conteúdo é de responsabilidade exclusiva dos autores e não representa as opiniões oficiais dos Institutos Nacionais de Saúde, ou Sigma Xi.

Todos os protocolos de animais foram aprovados pelos Comitês Institucionais de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Houston e baylor College of Medicine. As diretrizes descritas na declaração da Associação de Pesquisa em Visão e Oftalmologia (ARVO) sobre o uso de animais na visão e pesquisa oftalmológica foram seguidas no manuseio e utilização dos camundongos.
1. Preparação
<ol><li>Preparação da solução fluoresceína<ol>
<li>Prepare 1% de solução de fluoresceína dissolvendo 10 mg de sal de fluoresceína de sódio em 1 mL de soro fisiológico estéril ou salina tamponada de fosfato 1x (PBS). NOTA: Prepare a solução de fluoresceína de sódio no dia do uso ou um dia antes para evitar contaminação microbiana. Quando preparado um dia antes do uso, armazene a solução de fluoresceína a 4 °C de distância da luz. Enrole tubos com papel alumínio para evitar fotobleaching.</li>
		<li>Divida a solução em alíquotas adequadas para uso em um único experimento. 1-1,5 μL de solução de fluoresceína é usado por mouse por ponto de tempo. Use a seguinte fórmula para calcular o volume de alíquota apropriada para um único experimento: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63112/63112eq01.jpg"> NOTA: Por exemplo, se seis camundongos forem estudados em um único experimento com o tamanho da ferida monitorado em cinco pontos de tempo, o volume de alíquota adequada para esse único experimento seria: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/63112/63112eq02.jpg">
</li>
	</ol>
</li>
	<li>Preparação de coquetel de cetamina/xilazina para anestesia de camundongos.<ol>
<li>Para preparar 10 mL de coquetel, misture 2,0 mL de cetamina (100 mg/mL) com 1,0 mL de xilazina (20 mg/mL) e adicione 7,0 mL de PBS estéril. Prepare o coquetel de cetamina/xilazina um dia antes ou no dia da cirurgia. NOTA: Todas as soluções devem ser usadas à temperatura ambiente, a menos que seja indicado o contrário.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Anestesia
<ol><li>Pese o mouse (8-12 semanas de idade C57BL/6 wildtype ratos) para determinar a quantidade apropriada de anestésico para administrar. Use a técnica de contenção do rato de duas mãos para conter e manusear camundongos para a injeção do anestésico18. Administre o coquetel de cetamina/xilazina intraperitoneally (i.p.) em uma concentração final de 80 mg/kg de cetamina e 8 mg/kg de xilazina.</li>
	<li>Aguarde até que a anestesia completa seja alcançada antes de realizar ferimentos na córnea no camundongo. Avalie a profundidade da anestesia avaliando o reflexo do pedal após o aperto do dedo do pé. Quando a anestesia adequada é alcançada, o rato não deve mover-se sobre a beliscar o dedo do dedo do sol. NOTA: Como os camundongos perdem rapidamente o calor corporal durante a anestesia, é importante fornecer uma fonte de calor para os camundongos para prevenir a hipotermia. Coloque os ratos em uma fonte de calor (almofada de aquecimento) durante os estágios de anestesia e recuperação.</li>
</ol>3. Criação de ferida córnea
<ol><li>Feri o olho direito ou esquerdo apenas. Mantenha a consistência com o olho (ou seja, esquerda ou direita) que é ferido ao se mover de mouse para mouse. NOTA: Como as escoriações danificam os nervos da córnea e reduzem a acuidade, ferir ambos os olhos pode causar desconforto e comprometimento significativos. Uma vez que os analgésicos têm o potencial de suprimir respostas inflamatórias, seu uso pode ser um confundimento em certos experimentos que visam compreender a inflamação da córnea. Evitar analgésicos em experimentos de feridas na córnea foi aprovado pelo Nosso Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC).</li>
	<li>Para criar a ferida córnea epitelial<ol>
<li>Sob um microscópio dissecando, use a trefina de 2 mm de diâmetro (ver Figura 1) para demarcar o centro da córnea, mantendo o olho aberto usando o polegar e o dedo indicador para segurar as pálpebras. Gire suavemente a trefina para causar uma impressão no epitélio da córnea. NOTA: Deve-se tomar cuidado para não aplicar pressão excessiva ao usar a trefina, pois isso pode resultar em perfuração corneal. Além disso, deve-se tomar cuidado para posicionar a trefina centralmente. As pupilas podem ser usadas como um marco para localizar o centro da córnea.</li>
		<li>Sob um microscópio dissecando, segure o spud do taco de golfe contundente (ver Figura 1) a aproximadamente 45° da superfície da córnea dentro da área demarcada com a trefina. Raspe cuidadosamente e continuamente o epitélio dentro da área demarcada com o spud para debridar o epitélio. NOTA: Não aplique força excessiva no desbridamento, pois isso também pode causar perfuração corneana. Os olhos dos ratos podem secar durante o processo de ferida, dificultando o debridamento. Nesse caso, aplique PBS estéril na superfície ocular para manter a hidratação ideal.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63112/63112fig01.jpg"> Figura 1: trephine de 2 mm e spud taco de golfe sem corte. A trefina é usada para demarcar uma região circular no centro da córnea, e a espiada do clube de golfe é usada para remover o epitélio dentro da região demarcada. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63112/63112fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
4. Monitoramento do fechamento de feridas e re-epitelialização
<ol><li>Pipeta 1-1,5 μL de solução de fluoresceína de 1% sobre a superfície ferida e córnea de imagem usando um microscópio digital com uma fonte de luz azul.</li>
	<li>Adquira imagens no primeiro minuto da adição da solução de fluoresceína para evitar a propagação para o epitélio circundante levando à superestimação do tamanho da ferida. Córneas feridas são imagens em horários específicos (ou seja, 0h, 12h, 18h, 24h e 30h) após ferimentos. NOTA: Em todos os pontos de tempo, a imagem é realizada sob anestesia; cetamina/xilazina é usada no momento da ferida enquanto isoflurano é usado em pontos de tempo subsequentes. Os camundongos são alojados individualmente em gaiolas separadas durante o monitoramento do fechamento de feridas. Quando alojados juntos, os ratos tendem a lamber os olhos do companheiro de ninhada, um comportamento que tem sido mostrado para afetar a cicatrização de feridas em diferentes tecidos19,20.</li>
	<li>Analise imagens capturadas, rastreando a área da ferida usando um software de análise de imagem. A área da ferida para cada ponto de tempo é expressa como uma porcentagem da área original da ferida em 0h.</li>
</ol>5. Imagem e análise de imunofluorescência
<ol><li>Eutanize os camundongos por um método aprovado pela IACUC (neste caso, overdose de dióxido de carbono seguido de luxação cervical) nos pontos de tempo desejados após o ferimento.</li>
	<li>Colher os globos oculares pressionando suavemente o canthus lateral para deslocar o globo ocular usando uma tesoura curva de íris. Guie a tesoura atrás do globo ocular para segurar firmemente o nervo óptico e, em seguida, corte o nervo, o que permite que o globo ocular seja removido.</li>
	<li>Fixar cada globo ocular em 1 mL de 1x PBS contendo 2% de paraformaldeído por 1h em temperatura ambiente e, em seguida, lavar três vezes em 1 mL de 1x PBS por 5 min cada.</li>
	<li>Sob um microscópio dissecando, use uma lâmina cirúrgica para fazer uma incisão na esclera, cerca de 500 μm distal para o limbus, e depois cortar através do globo. Usando fórceps, remova suavemente a matéria de íris da córnea e, em seguida, corte cuidadosamente o tecido escleral, certificando-se de deixar o limbus intacto.</li>
	<li>Faça quatro cortes radiais parciais, cada um com aproximadamente 1 mm de comprimento, que se estendem da córnea periférica e param aquém do centro para permitir que a córnea se achate.</li>
	<li>Permeabilize e bloqueie córneas em 1 mL de 2% de albumina de soro bovino (BSA) e 0,01% TritonX -100 em 1x PBS por 15 min seguido por bloqueio em 2% BSA em 1x PBS para um adicional de 45 min a temperatura ambiente.</li>
	<li>Incubar córneas durante a noite a 4 °C em um coquetel de anticorpos conjugados fluorocromo exclusivos diretamente rotulados preparados em 1x PBS contendo 2% de BSA. NOTA: Os anticorpos são direcionados para rotular células específicas e tecidos de interesse. Por exemplo, endotélio, neutrófilos e plaquetas são rotulados com anticorpos anti-CD3121,22, anti-Ly-6G23,24 e anticorpos anti-CD4125,26, respectivamente. 4',6-diamidino-2-fenilômdeo (DAPI) é adicionado ao coquetel de anticorpos para visualizar núcleos.</li>
	<li>Após a incubação, lave as córneas três vezes em 1x PBS por 15 min cada.</li>
	<li>Monte córneas em um slide de microscópio em uma gota de meio de montagem de fluorescência anti-fade, cubra com um deslizamento de tampa e imagem com a ampliação desejada (objetivo de 4x a 100x) usando um microscópio de luz de fluorescência. Tire imagens de espessura total da córnea em diferentes regiões, conforme ilustrado na Figura 2A. NOTA: O padrão de análise microscópica ilustrado na Figura 2A é utilizado para analisar alterações regionais específicas na inflamação e divisão celular. Tanto as manchas de DAPI quanto ly-6G são usadas para identificar os neutrófilos extravasculares. Com a coloração da DAPI, os neutrófilos esféricos têm uma ferradura ou núcleo em forma de donut distinto (Figura 2B).</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63112/63112fig02.jpg"> Figura 2: Estratégia de imagem córnea e infiltração de neutrófilos após abrasão central. (A) Representação esquemática de uma integral de córnea mostrando nove campos microscópicos em todo o diâmetro da córnea. A área cinza representa a área original da ferida. A largura de cada região é de 500 μm. (B) Note a forma de ferradura ou donut distinto de núcleos neutrófilos com coloração DAPI. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63112/63112fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Os autores não têm nada a revelar.

O objetivo deste artigo de métodos era descrever um protocolo para a criação de uma ferida de abrasão epitelial córnea central no rato usando uma trefina e um taco de golfe sem corte. Este modelo de murina tem sido usado para estudar inflamação córnea e sua contribuição para a cicatrização de feridas. Esse tipo de modelo pode ser usado para estudar mecanismos de cicatrização de feridas córneas em condições fisiológicas normais e em patologias 17,28,29,41,42....

A córnea é o anterior transparente um terço do olho. A córnea serve várias funções, incluindo proteger as estruturas internas do olho e formar uma barreira estrutural que protege o olho contra infecções1. Mais importante, a córnea é fundamental para a visão, fornecendo cerca de dois terços do poder refrativo do olho 2,3. Crucial para o papel da córnea na visão é a sua transparência. No entanto, devido à sua posição externa, a córnea é exposta a uma grande variedade de lesões no dia-a-dia que podem levar à interrupção de sua função de barreira, perda de transparência e eventual cegueira. A perda de transparência da córnea é uma das principais causas de deficiência visual em todo o mundo, 4,5. As abrasões corneais são um motivo comum para as visitas ao pronto-socorro (PS), respondendo por metade dos casos relacionados aos olhos apresentados no PS6. Estima-se que mais de 1 milhão de indivíduos sofra de lesões relacionadas aos olhos anualmente nos Estados Unidos7. A cura eficiente da ferida córnea em resposta a essas lesões é fundamental para manter a homeostase da córnea e a preservação de suas capacidades de transparência e refração. Em eventos de cicatrização comprometida da córnea, a córnea torna-se vulnerável a infecções, ulcerações e cicatrizesde 8,9. Além disso, a crescente popularidade das cirurgias refrativas coloca um desafio traumático único na córnea10. Dada a importância fundamental da cicatrização da ferida córnea para a preservação da transparência e visão da córnea, uma melhor compreensão do processo normal de cicatrização da ferida córnea é um pré-requisito para a compreensão da cicatrização prejudicada da ferida córnea associada à infecção e doença.
Para isso, foram desenvolvidos diversos modelos animais de cicatrização de feridas córneas, 11,12,13,14,15. Modelos de murina de cicatrização de feridas córneas têm se mostrado úteis para promover nossa compreensão dos mecanismos de cura da ferida córnea que operam sob condições fisiológicas normais. Diferentes tipos de feridas córneas têm sido empregados no estudo da cicatrização de feridas córneas, cada uma adequada para investigar diferentes aspectos do processo de cicatrização da ferida. Os modelos de feridas mais comuns usados em estudos de cicatrização de feridas córneas são os modelos mecânicos e químicos de feridas. As feridas córneas químicas, principalmente envolvendo a criação de queimaduras alcalinas na córnea, são úteis para o estudo de úlceras córneas, opificação e neovascularização13. As feridas mecânicas da córnea envolvem ferimentos de desbridamento (abrasão) e ferimentos de ceratectomia 14,15,16. Uma membrana de porão epitelial de córnea intacta ou rompida define feridas de debridamento e ceratectomia, respectivamente. Nas feridas de desbridamento, a membrana do porão epitelial permanece intacta, enquanto nas feridas da querotetomia, a membrana do porão é rompida com penetração principalmente no estroma anterior. As feridas de desbridamento são mais úteis para estudar a re-epitelialização, a proliferação de células epiteliais, a resposta imune e a regeneração nervosa após o ferimento na córnea. As feridas de ceratectomia, por outro lado, são mais úteis para estudar cicatrizes na córnea 14,15.
Aqui, um protocolo para criar uma ferida de abrasão epitelial córnea central no rato usando uma trefina e um taco de golfe sem corte é descrito. Este modelo simples de cura de feridas na córnea é altamente reprodutível e bem publicado e agora está sendo usado para avaliar a cicatrização comprometida da ferida córnea no contexto da doença17.

<table><tbody><tr><td>Anticorpo anti-CD31</td><td>BD Bioscience, Pharmingen</td><td>550274</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-CD41</td><td>BD Bioscience, Pharmingen</td><td>553847</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-Ly6G</td><td>BD Bioscience, Pharmingen</td><td>551459</td><td></td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino (BSA)</td><td>ThermoFisher científico</td><td>B14</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 camundongos</td><td>Jackson Laboratories</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8417</td><td></td></tr><tr><td>DeltaVision microscópio de fluorescência de deconvolução de campo amplo</td><td>GE Life Sciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de dissecação</td><td>Leica microsystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Electronic Toploading Balances (balança)</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>ThermoFisher</td><td>scientific T038181000CS</td><td></td></tr><tr><td>Taco de golfe spud</td><td>Stephens instruments</td><td>S2-1135</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de curva de íris</td><td>Fisher Scientific</td><td>31212</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Patterson veterinário</td><td>07-893-1389</td><td></td></tr><tr><td>Cetamina</td><td>Patterson veterinário</td><td>07-890-8598</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (PBS)</td> <td>ThermoFisher científico</td><td>AM9624</td><td></td></tr><tr><td>Sal de fluoresceína de sódio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>46970</td><td></td></tr><tr><td>Lâmina cirúrgica (lâmina de escape)</td><td>Ferramentas de ciência fina</td><td>10022-00</td><td></td></tr><tr><td>Trephine</td><td>Integra Miltex</td><td>33-31</td><td></td></tr><tr><td>TritonX -100</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-295-34</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps</td> Ferramentas <td>de ciência fina</td><td>11923-13</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Patterson veterinária</td><td>07-808-1947</td><td></td></tr></tbody></table>

um modelo de abrasão epitelial para estudar a cicatrização da ferida córnea

An Epithelial Abrasion Model for Studying Corneal Wound Healing

A córnea é fundamental para a visão, representando cerca de dois terços do poder refrativo do olho. Crucial para o papel da córnea na visão é a sua transparência. No entanto, devido à sua posição externa, a córnea é altamente suscetível a uma grande variedade de lesões que podem levar à perda de transparência corneal e eventual cegueira. A cicatrização eficiente da ferida corneal em resposta a essas lesões é fundamental para a manutenção da homeostase da córnea e preservação da transparência corneal e capacidades de refração. Em eventos de cicatrização comprometida da ferida córnea, a córnea torna-se vulnerável a infecções, ulcerações e cicatrizes. Dada a importância fundamental da cicatrização da ferida córnea para a preservação da transparência e visão da córnea, uma melhor compreensão do processo normal de cicatrização da ferida córnea é um pré-requisito para a compreensão da cicatrização prejudicada da ferida córnea associada à infecção e doença. Em direção a este objetivo, modelos de murina de woundarás córneas têm se mostrado úteis para promover nossa compreensão dos mecanismos de cura da ferida córnea que operam sob condições fisiológicas normais. Aqui, um protocolo para criar uma abrasão epitelial córnea central em rato usando uma trefina e um taco de golfe sem cortes é descrito. Neste modelo, uma trefina circular de 2 mm de diâmetro, centrada sobre a córnea, é usada para demarcar a área da ferida. O taco de golfe spud é usado com cuidado para debridar o epitélio e criar uma ferida circular sem danificar a membrana do porão epitelial da córnea. A resposta inflamatória resultante prossegue como uma cascata bem caracterizada de eventos celulares e moleculares que são críticos para a cicatrização eficiente das feridas. Este modelo simples de cura de feridas na córnea é altamente reprodutível e bem publicado e agora está sendo usado para avaliar a cicatrização comprometida da ferida córnea no contexto da doença.

A Figura 3 mostra um micrografo eletrônico de transmissão de uma ferida córnea criada com o taco de golfe sem corte, demonstrando que a membrana do porão epitelial está de fato intacta após a lesão.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63112/63112fig03.jpg"> Figura 3: A membrana do porão epitelial permanece intacta após a abrasão da córnea. Micrografia eletrôn...

Aqui, um protocolo para criar uma ferida de abrasão epitelial córnea central no rato usando uma trefina e um taco de golfe sem corte é descrito. Este modelo de cura de feridas na córnea é altamente reprodutível e agora está sendo usado para avaliar a cicatrização comprometida da ferida córnea no contexto das doenças.

Um modelo de abrasão epitelial para estudar a cicatrização da ferida córnea

The cornea is critical for vision, accounting for about two-thirds of the refractive power of the eye. Crucial to the role of the cornea in vision is its ...

Este protocolo é significativo porque é um excelente modelo para estudar a inflamação da córnea e sua contribuição para a cicatrização de feridas em condições normais e patológicas. A principal vantagem dessa técnica é que ela cria uma ferida epitelial precisa e reprodutível sem romper a membrana do porão. Este modelo de woundamento córnea é simples e rápido de executar.Demonstrando o procedimento estará o Príncipe Akowuah, um estudante de doutorado do meu laboratório. Para começar, prepare uma solução de 1%fluoresceína dissolvendo 10 miligramas de sal de fluoresceína de sódio em um mililitro de soro fisiológico estéril ou PBS. Em seguida, para anestesia, prepare 10 mililitros de um coquetel de cetamina-xilazina misturando dois mililitros de cetamina, um mililitro de xilazina, e sete mililitros de PBS estéril.Depois de anestesiar um rato C57 preto 6 preto de 8 a 12 semanas, avalie a profundidade da anestesia avaliando o reflexo do pedal após o aperto do dedo do pé. Para criar a ferida córnea epitelial, coloque o rato anestesiado sob um microscópio de dissecção. Fera apenas o olho direito ou esquerdo e mantenha a consistência com o olho sendo ferido ao mover-se de rato para rato.Mantenha os olhos abertos segurando as pálpebras com o polegar e o dedo indicador. Em seguida, usando uma trefina estéril de dois milímetros de diâmetro, demarca o centro da córnea e gire suavemente a trefina para causar uma impressão no epitélio córnea. Não aplique pressão excessiva, pois isso pode resultar em perfuração corneal.Em seguida, segurando o estéril taco de golfe contundente spud em um ângulo de aproximadamente 45 graus da superfície da córnea, debrida o epitélio por raspagem cuidadosa e contínua dentro da área demarcada usando o spud. Não aplique força excessiva e mantenha a hidratação usando PBS estéril, se necessário. Para monitorar o fechamento da ferida e a re-epitelização, pipeta de 1 a 1,5 microlitros de solução de 1%fluoresceína na superfície ferida e imagem da córnea usando um microscópio digital com uma fonte de luz azul.Imagem da córnea ferida em momentos específicos após o ferimento. Tire imagens no primeiro minuto da solução de fluoresceína para evitar a disseminação da solução para o epitélio circundante, o que pode levar a uma superestimação do tamanho da ferida. Em seguida, usando um software de análise de imagem, rastreie a área da ferida e expresse a área da ferida em cada ponto de tempo como uma porcentagem da área original da ferida a zero hora.Um micrografo eletrônico de transmissão da ferida córnea demonstra que a membrana do porão do epitélio permanece intacta mesmo após a lesão. Em camundongos de 8 a 12 semanas de idade, o fechamento da ferida é completo 24 horas após o ferimento. A resposta inflamatória ao ferimento é caracterizada por imagens celulares no limbus.Mostrada aqui é a vasculatura limbal de uma córnea desenrolada com neutrófilos extra-vasculares, e a de uma córnea ferida com plaquetas extravasculares e neutrófilos 30 horas após a abrasão. Para reproduzir com sucesso este protocolo, a mesma cepa em cada gama de mouse deve ser usada, e o tamanho e profundidade da ferida devem ser criados conforme descrito.

an-epithelial-abrasion-model-for-studying-corneal-wound-healing

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Descrito aqui é o estabelecimento de um modelo de cirurgia de catarata simulada ex vivo clinicamente relevante que pode ser usado para investigar mecanismos de resposta à lesão de tecidos epiteliais dentro de seu microambiente nativo.

Estabelecimento de um clinicamente relevantes<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mock Cataract Surgery Modelo para investigar Epithelial Wound Repair em um microambiente Native

Este protocolo descreve um método para infligir uma abrasão na superfície ocular do mouse e a seguir a ferida que daí em diante o processo de cura. O protocolo se aproveita de uma rebarba ocular para remover parcialmente o epitélio superficial do olho em camundongos anestesiados.

Cicatrização de feridas abrasão epitelial da córnea com Burr Ocular como um modelo para córnea

Um protocolo para uma ex modelo de cultura da córnea órgão vivo, útil para estudos de cicatrização de feridas é descrita. Este sistema de modelo pode ser usado para avaliar os efeitos de agentes para promover a cicatrização regenerativa ou toxicidade de drogas em ambiente 3D multicelular organizada.

Ex Vivo modelo de cultura órgão da córnea para cicatrização de feridas estudos

Aqui, modelos animais baseados em camundongos e coelhos são desenvolvidos para lesão mecânica e química do epitélio corneano para triagem de novas terapêuticas e do mecanismo subjacente.

Modelos Animais Ex Vivo e In Vivo para Lesões Mecânicas e Químicas do Epitélio da Córnea

O presente protocolo demonstra as diferentes etapas envolvidas na ferida da córnea de um filhote embrionário em ovo. As córneas regeneradoras ou totalmente restauradas podem ser analisadas para potencial regenerativo usando várias técnicas celulares e moleculares após o procedimento de ferir.

Investigando regeneração de tecido sem cicatrizes em córneas de filhotes feridos embrionários

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Cura da ferida corneal de zebrafish: da abrasão à análise de imagem de fechamento da ferida

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Desenvolvemos um modelo de rato de inflamação grave da córnea por meio de curetagem do epitélio da córnea combinada com suturas da córnea. O estudo avaliou os padrões de inflamação da córnea, proliferação epitelial e alterações nas células-tronco límbicas sob condições inflamatórias.

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