Name: Injeção de células de stroma derivadas de tecido adiposo porcina através da tecnologia waterjet (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-11-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 5 s
Description: Aprenda a injetar células de stroma derivadas de tecido adiposo porcina usando tecnologia waterjet sem agulha. Este método minimamente invasivo permite entrega precisa de células vivas em tecidos-alvo para terapia celular.

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Agradecemos aos nossos coautores das publicações originais pela ajuda e apoio.

<ol><li>Milsom, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+and+economic+burden+of+urgency+urinary+incontinence%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22European+Urology%22%5BJournal%5D)">Global prevalence and economic burden of urgency urinary incontinence: a systematic review.</a> European Urology. 65 (1), 79-95 (2014).</li>
<li>Lee, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+periurethral+muscle-derived+stem+cell+injection+on+leak+point+pressure+in+a+rat+model+of+stress+urinary+incontinence%5BTitle%5D)+AND+%22International+Urogynecology+Journal+and+Pelvic+Floor+Dysfunction%22%5BJournal%5D)">The effects of periurethral muscle-derived stem cell injection on leak point pressure in a rat model of stress urinary incontinence.</a> International Urogynecology Journal and Pelvic Floor Dysfunction. 14 (1), 31-37 (2003).</li>
<li>Tran, C., Damaser, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+role+of+stem+cells+in+the+treatment+of+urinary+incontinence%5BTitle%5D)+AND+%22Therapeutic+Advances+in+Urology%22%5BJournal%5D)">The potential role of stem cells in the treatment of urinary incontinence.</a> Therapeutic Advances in Urology. 7 (1), 22-40 (2015).</li>
<li>Fu, Q., Song, X. F., Liao, G. L., Deng, C. L., Cui, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myoblasts+differentiated+from+adipose-derived+stem+cells+to+treat+stress+urinary+incontinence%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Myoblasts differentiated from adipose-derived stem cells to treat stress urinary incontinence.</a> Urology. 75 (3), 718-723 (2010).</li>
<li>Corcos, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((marrow+mesenchymal+stromal+cell+therapy+for+external+urethral+sphincter+restoration+in+a+rat+model+of+stress+urinary+incontinence%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+Urodynamics%22%5BJournal%5D)">marrow mesenchymal stromal cell therapy for external urethral sphincter restoration in a rat model of stress urinary incontinence.</a> Neurourology and Urodynamics. 30 (3), 447-455 (2011).</li>
<li>Smaldone, M. C., Chen, M. L., Chancellor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+therapy+for+urethral+sphincter+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Minerva+Urologica+e+Nefrologica%22%5BJournal%5D)">Stem cell therapy for urethral sphincter regeneration.</a> Minerva Urologica e Nefrologica. 61 (1), 27-40 (2009).</li>
<li>Perin, E. C., López, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+stem+cell+delivery+in+cardiac+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Clinical+Practice+Cardiovascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Methods of stem cell delivery in cardiac diseases.</a> Nature Clinical Practice Cardiovascular Medicine. 3, Suppl 1 110-113 (2006).</li>
<li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiomyocyte+grafting+for+cardiac+repair%3A+graft+cell+death+and+anti-death+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Cardiomyocyte grafting for cardiac repair: graft cell death and anti-death strategies.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 33 (5), 907-921 (2001).</li>
<li>Amer, M. H., White, L. J., Shakesheff, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+injection+using+narrow-bore+needles+on+mammalian+cells%3A+administration+and+formulation+considerations+for+cell+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacy+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The effect of injection using narrow-bore needles on mammalian cells: administration and formulation considerations for cell therapies.</a> Journal of Pharmacy and Pharmacology. 67 (5), 640-650 (2015).</li>
<li>Amer, M. H., Rose, F. R. A. J., Shakesheff, K. M., Modo, M., White, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+considerations+in+injectable+cell-based+therapeutics+for+neurological+applications%3A+concepts%2C+progress+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Translational considerations in injectable cell-based therapeutics for neurological applications: concepts, progress and challenges.</a> NPJ Regenerative Medicine. 2, 23-23 (2017).</li>
<li>Linzenbold, W., Fech, A., Hofmann, M., Aicher, W. K., Enderle, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Techniques+to+Improve+Precise+Cell+Injection%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Novel Techniques to Improve Precise Cell Injection.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (12), 6367(2021).</li>
<li>Adamo, A., Roushdy, O., Dokov, R., Sharei, A., Jensen, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+jet+injection+for+delivering+macromolecules+into+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Micromechanics+and+Microengineering%3A+Structures%2C+Devices%2C+and+Systems%22%5BJournal%5D)">Microfluidic jet injection for delivering macromolecules into cells.</a> Journal of Micromechanics and Microengineering: Structures, Devices, and Systems. 23, 035026(2013).</li>
<li>Jäger, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+waterjet+technology+for+transurethral+cystoscopic+injection+of+viable+cells+in+the+urethral+sphincter+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+Urodynamics%22%5BJournal%5D)">A novel waterjet technology for transurethral cystoscopic injection of viable cells in the urethral sphincter complex.</a> Neurourology and Urodynamics. 39 (2), 594-602 (2020).</li>
<li>Weber, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrojet-based+delivery+of+footprint-free+iPSC-derived+cardiomyocytes+into+porcine+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Hydrojet-based delivery of footprint-free iPSC-derived cardiomyocytes into porcine myocardium.</a> Scientific Reports. 10 (1), 16787(2020).</li>
<li>Jäger, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+waterjet+technology+for+transurethral+cystoscopic+injection+of+viable+cells+in+the+urethral+sphincter+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+Urodynamics%22%5BJournal%5D)">A novel waterjet technology for transurethral cystoscopic injection of viable cells in the urethral sphincter complex.</a> Neurourology and Urodynamics. 39 (2), 594-602 (2020).</li>
<li>Linzenbold, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+precise+delivery+of+cells+in+the+urethral+sphincter+complex+by+a+novel+needle-free+waterjet+technology%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Rapid and precise delivery of cells in the urethral sphincter complex by a novel needle-free waterjet technology.</a> BJU International. 127 (4), 463-472 (2021).</li>
<li>Danalache, M., Tiwari, A., Sigwart, V., Hofmann, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+Atomic+Force+Microscopy+to+Detect+Early+Osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Application of Atomic Force Microscopy to Detect Early Osteoarthritis.</a> Journal of Visualized Experiments. (159), e61041(2020).</li>
<li>Gálvez-Martín, P., Hmadcha, A., Soria, B., Calpena-Campmany, A. C., Clares-Naveros, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+the+stability+of+packaging+and+storage+conditions+of+human+mesenchymal+stem+cell+for+intra-arterial+clinical+application+in+patient+with+critical+limb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Study of the stability of packaging and storage conditions of human mesenchymal stem cell for intra-arterial clinical application in patient with critical limb ischemia.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 86 (3), 459-468 (2014).</li>
<li>Danalache, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+of+Porcine+Adipose+Tissue-Derived+Stromal+Cells+by+a+Novel+Waterjet+Technology%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Injection of Porcine Adipose Tissue-Derived Stromal Cells by a Novel Waterjet Technology.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (8), (2021).</li>
<li>Amend, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+injection+of+human+mesenchymal+stromal+cells+in+the+urethral+sphincter+complex+of+G%C3%B6ttingen+minipigs+without+unspecific+bulking+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+Urodynamics%22%5BJournal%5D)">Precise injection of human mesenchymal stromal cells in the urethral sphincter complex of Göttingen minipigs without unspecific bulking effects.</a> Neurourology and Urodynamics. 36 (7), 1723-1733 (2017).</li>
<li>Danalache, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+of+Porcine+Adipose+Tissue-Derived+Stromal+Cells+by+a+Novel+Waterjet+Technology%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Injection of Porcine Adipose Tissue-Derived Stromal Cells by a Novel Waterjet Technology.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (8), 3958(2021).</li>
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<li>Fischer, T., Hayn, A., Mierke, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Nuclear+Stiffness+on+Cell+Mechanics+and+Migration+of+Human+Breast+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Effect of Nuclear Stiffness on Cell Mechanics and Migration of Human Breast Cancer Cells.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 393(2020).</li>
<li>Kuznetsova, T. G., Starodubtseva, M. N., Yegorenkov, N. I., Chizhik, S. A., Zhdanov, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atomic+force+microscopy+probing+of+cell+elasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Micron%22%5BJournal%5D)">Atomic force microscopy probing of cell elasticity.</a> Micron. 38 (8), 824-833 (2007).</li>
<li>Schillers, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+Nanomechanical+Atomic+Force+Microscopy+Procedure+%28SNAP%29+for+Measuring+Soft+and+Biological+Samples%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Standardized Nanomechanical Atomic Force Microscopy Procedure (SNAP) for Measuring Soft and Biological Samples.</a> Scientific Reports. 7 (1), 5117(2017).</li>
<li>Costa, K. D., Yin, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+indentation%3A+implications+for+measuring+mechanical+properties+with+atomic+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Analysis of indentation: implications for measuring mechanical properties with atomic force microscopy.</a> Journal of Biomechanical Engineering. 121 (5), 462-471 (1999).</li>
<li>Stolz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+elastic+modulus+of+porcine+articular+cartilage+determined+at+two+different+levels+of+tissue+organization+by+indentation-type+atomic+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Dynamic elastic modulus of porcine articular cartilage determined at two different levels of tissue organization by indentation-type atomic force microscopy.</a> Biophysical Journal. 86 (5), (2004).</li>
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<li>Usukura, E., Narita, A., Yagi, A., Ito, S., Usukura, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Unroofing+Method+to+Observe+the+Cytoskeleton+Directly+at+Molecular+Resolution+Using+Atomic+Force+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">An Unroofing Method to Observe the Cytoskeleton Directly at Molecular Resolution Using Atomic Force Microscopy.</a> Scientific Reports. 6 (1), 27472(2016).</li>
</ol>

Os autores J.K., M.D., T.A., A.S., W.K.A. não têm nada a revelar. Os autores W.L. e M.D.E. são funcionários da ERBE Medizintechnik Tenente Tübingen, produtora do ERBEJet2 e do protótipo WJ empregado neste estudo.

No presente estudo, demonstramos e apresentamos uma abordagem passo a passo para o procedimento de entrega de células WJ e empregamos uma sequência de investigações quantitativas para avaliar o efeito da entrega de WJ em características celulares: viabilidade celular e características biomecânicas (ou seja, EM). Após a injeção de WJ, 85,9% das células colhidas eram viáveis. Em termos de injeção de WN, 97,2% das células mantiveram sua viabilidade após a injeção. Assim, a abordagem do WJ preenche um requisito absoluto para...

A incontinência urinária (UI) é uma doença generalizada com prevalência de 1,8 - 30,5% nas populações europeias1 e caracteriza-se principalmente pelo mau funcionamento do esfíncter uretral. Do ponto de vista clínico, o tratamento cirúrgico é frequentemente oferecido aos pacientes quando terapias conservadoras ou fisioterapia não conseguem abordar e aliviar os sintomas emergentes.
A terapia celular para o potencial reparo regenerativo do mau funcionamento do complexo esfíncter vem surgindo como uma abordagem vanguardista para o tratamento da patologia da interfacedo usuário 2,3. Seus principais objetivos são substituir, reparar e restaurar a funcionalidade biológica do tecido danificado. Em modelos animais para interface do usuário, o transplante de células-tronco tem mostrado resultados promissores em desfechos uroddinâmicos 2,4,5. As células-tronco surgem como candidatos celulares ideais, pois têm a capacidade de se submeter à autoconexão e diferenciação multipotente, auxiliando assim a regeneração tecidual afetada6. Apesar do próximo potencial regenerativo, o uso prático da terapia celular permanece dificultado, pois o parto minimamente invasivo das células ainda enfrenta vários desafios em relação à precisão da injeção e à cobertura do alvo. Embora a abordagem atual usada para o parto celular seja a injeção através de um sistema de seringaagulha 7, geralmente resulta em um déficit geral de células viáveis, com viabilidades relatadas tão baixas quanto 1%- 31% pós-transplante8. Além disso, a entrega de células por injeção de agulha também tem sido demonstrada para afetar a colocação, a taxa de retenção, bem como a distribuição de células transplantadas no tecido alvo 9,10,11. Uma abordagem viável e nova que supera a limitação acima mencionada é a entrega de células livres de agulhas através da tecnologia de jatos d'água.
A tecnologia waterjet (WJ) está emergindo como uma nova abordagem que permite a entrega de alta throughput de células por cistoscópio sob controle visual no esfíncter uretral12,13. O WJ permite a entrega de células em diferentes pressões (E = efeitos na barra) que variam de E5 a E8013. Na primeira fase, a solução isotônica (fase de penetração tecidual) é aplicada com alta pressão (ou seja, E60 ou E80) a fim de afrouxar a matriz extracelular em torno do tecido direcionado e abrir pequenas micro-lacunas interligadas. Na segunda fase (fase de injeção), a pressão é reduzida dentro de milissegundos (ou seja, até E10) a fim de entregar suavemente as células no tecido alvo. Após esta aplicação em fase de duas etapas, as células não são submetidas a pressão adicional contra o tecido quando ejetadas, mas estão flutuando em um fluxo de baixa pressão em uma área cavernosa cheia de líquido13. Em uma configuração modelo ex vivo onde as células-tronco foram injetadas via WJ em tecido uretra cadavérico, as células viáveis poderiam ser posteriormente aspiradas e recuperadas do tecido e expandidas in vitro13. Embora um estudo de 2020 da Weber et al. tenha demonstrado a viabilidade e aplicabilidade do WJ para fornecer cardiomiócitos sem pegada no miocárdio14, é preciso ter em mente que a tecnologia WJ ainda está em fase de protótipo.
O protocolo a seguir descreve como preparar e rotular células estromais derivadas de tecido suíno (pADSC) e como entregá-las em tecido fluido de captura e cadavérico através da tecnologia WJ e agulhas de cistoscopia williams (WN). A injeção pós-celular, a vitalidade celular e a elasticidade via microscopia de força atômica (AFM) são avaliadas. Por meio de instruções passo a passo, o protocolo oferece uma abordagem clara e concisa para adquirir dados confiáveis. A seção de discussão apresenta e descreve as principais vantagens, limitações e perspectivas futuras da técnica. A entrega de células wj, bem como as análises de pós-tradução sequela relatadas aqui estão substituindo a injeção padrão da agulha e fornecem uma estrutura de entrega de células sólidas para cicatrização regenerativa do tecido alvo. Em nossos estudos recentes, fornecemos evidências de que o WJ forneceu células com mais precisão e pelo menos viabilidade comparável quando comparadas às injeções de agulha15,16.

<table><tbody><tr><td>Tubo de centrífuga de 50 mL</td><td>Greiner BioOne</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>1 mL BD Luer-LokTM Seringa</td><td>BD Plastik Inc</td><td>n.a.100</td><td></td></tr> <tr><td>&micro; peneira de células m</td><td>Greiner BioOne</td><td>542000</td><td></td></tr><tr><td>tubo de centrífuga de 15 mL</td><td>Greiner BioOne</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>frasco de cultura de tecidos de 75 cm2</td><td>Corning Incorporated</td><td>353136</td><td></td></tr><tr><td>cabeça AFM</td> <td>(CellHesion 200) JPK</td><td>JPK00518</td><td></td></tr><tr><td>software de processamento</td><td>AFM Bruker</td><td>JPK00518</td><td></td></tr><tr><td>software</td> <td>AFMSistema Bruker</td><td>JPK00518</td><td></td></tr><tr><td>AFM Cell Hesion 200</td><td>Bruker</td><td>JPK00518</td><td></td></tr><tr><td>All-In-One-Al cantilever</td><td>Budget Sensors</td><td>AIO-10</td><td>ponta A, Modo Conatct, Forma: Feixe Constante de Força: 0,2 N/m (0,04 - 0,7 N/m) Frequência de Ressonância: 15 kHz (10 - 20 kHz) Comprimento: 500 &micro; m (490 - 510 &micro; m) Largura: 30 &micro; m (35 - 45 &micro; m) Espessura: 2.7 &micro; m (1,7 - 3,7 &micro; m)</td></tr> <tr><td>Solução de anfotericina B</td><td>Sigma</td><td>A2942</td><td>250 &micro; g/ml</td></tr><tr><td>Microscópio de Força Atômica (AFM)</td><td>CellHesion 200, JPK Instruments, Berlim, Alemanha</td><td>JPK00518</td><td></td></tr><tr><td>BD Microlance 3 18G</td><td>BD</td><td>304622</td><td></td></tr><tr><td>albumina de soro bovino</td><td>Gibco</td><td>A10008-01</td><td></td></tr><tr><td>Cantilever</td><td>&nbsp; All-In-One-AleTl, Budget Sensors, Sofia, Bulgária</td><td>AIO-TL-10</td><td>ponta A, k &frac14; Hemocitômetro descartável C-chip de 0,2 N/m</td></tr><tr><td></td><td>Centrífuga NanoEnTek</td><td>631-1098</td><td></td></tr><tr><td>: Rotina 420R</td><td>Hettich Zentrifugen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Collagenase, Tipo I, pó</td><td>Gibco</td><td>17100-017</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Águia Modificada' s Medium - low glucose</td><td>Sigma</td><td>D5546</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi descartável de penas (N.º 10)</td><td>Feather</td><td>02.001.30.010</td><td></td></tr><tr><td>soro bovino fetal (FBS)</td>Solução de sal de sódio <td>Sigma</td><td>F7524</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Microscópio</td> de contraste de fase invertida Sigma <td>H3662</td><td></td></tr><tr><td>(Integrado com AFM)</td><td>AxioObserver D1, Carl Zeiss Microscopy, Jena, Alemanha</td><td>L201306_ 03</td><td></td></tr><tr><td>bolsas de laboratório</td><td>Marca</td><td>759705</td><td></td></tr><tr><td>Meio L-15 da Leibovitz sem l-glutamina</td><td>Merck</td><td>F1315</td><td></td></tr><tr><td>Meio L-15 da Leibovitz sem L-glutamina</td>(<td>Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha)</td><td>F1315</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamina</td><td>Lonza</td><td>BE 17-605C1</td><td>200 mM</td></tr><tr><td>LIVE/DEADTM Kit</td> <td>de Viabilidade/CitotoxicidadeInvitrogen by Thermo Fisher Scientific</td><td>L3224</td><td>Calcein AM e EthD-1 são usados a partir deste kit.</td></tr><tr><td>Software do microscópio: Zen 2.6</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscópio: AxioVertA.1</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nelaton-Cateter fêmea</td><td>Bicakcilar</td><td>19512051</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>10000 U/ml Penicilina 10000 &micro; g/ml</td></tr> Aquecedor de placa de Petri estreptomicina <tr><td>associado ao AFM</td><td>Bruker</td><td>T-05-0117</td><td></td></tr><tr><td>Aquecedor de placa de Petri associado ao AFM</td><td>JPK Instruments AG, Berlim, Alemanha</td><td>T-05-0117</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (PBS)</td><td>Gibco</td><td>10010-015</td><td></td></tr><tr><td>Software estatístico: SPSS Statistics 22</td><td></td> IBM <td></td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri estéril - CellStar</td><td>Greiner BioOne</td><td>664160</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultura de tecidos</td><td>TPP AG</td><td>TPP93040</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultura de tecidos</td><td>TPP Techno Plastic Products AG, Trasadingen, Suíça</td><td>TPP93040</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue 0,4% 0,85% NaCl</td><td>Lonza</td><td>17-942E</td><td></td></tr><tr><td>Solução de tripsina-EDTA</td><td>Sigma</td><td>T3924</td><td></td></tr><tr><td>Jato de água: dispositivo ERBEJET2</td><td>Erbe Elektromedizin GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Williams Agulha de Injeção Cistoscópica</td><td>Cook Medical</td><td>G14220</td><td>23G, 5.0 Fr, 35 cm</td></tr></tbody></table>

injeção de células de stroma derivadas de tecido adiposo porcina através da tecnologia waterjet

Injection of Porcine Adipose Tissue-Derived Stroma Cells via Waterjet Technology

A incontinência urinária (UI) é uma condição altamente prevalente caracterizada pela deficiência do músculo esfíncter uretral. Os ramos da medicina regenerativa, particularmente a terapia celular, são novas abordagens para melhorar e restaurar a função de esfíncter uretral. Embora a injeção de células funcionais ativas seja realizada rotineiramente em ambientes clínicos por agulha e seringa, essas abordagens têm desvantagens e limitações significativas. Neste contexto, a tecnologia de jato d'água livre de agulhas (WJ) é um método viável e inovador que pode injetar células viáveis por cistoscopia guiada visual no esfíncter uretrais. No presente estudo, utilizamos o WJ para fornecer células estromais derivadas do tecido adiposo porcina (pADSCs) em tecido uretral cadavérico e, posteriormente, investigamos o efeito da entrega de WJ no rendimento e viabilidade celular. Também avaliamos as características biomecânicas (ou seja, elasticidade) por medições de microscopia de força atômica (AFM). Mostramos que o WJ entregou pADSCs foram significativamente reduzidos em sua elasticidade celular. A viabilidade foi significativamente menor em relação aos controles, mas ainda está acima de 80%.

Após a entrega de células através das duas abordagens, a viabilidade das células entregues através da WN (97,2 ± 2%, n=10, p&lt;0,002) foi maior quando comparada às injeções por WJ utilizando as configurações E60-10 (85,9 ± 0,16%, n=12) (Figura 2). Os resultados da avaliação biomecânica mostraram que: as injeções de WN de células em fluido de captura não apresentaram diferença significativa em relação ao moduli elástico (EM; 0,992 kPa) quando comparado com os controles (1.176 kPa; <strong cl...

Apresentamos um método de injeção celular através da tecnologia de jato de água livre de agulhas, juntamente com uma sequência de investigações pós-entrega em termos de viabilidade celular, proliferação e medidas de elasticidade.

Injeção de células de stroma derivadas de tecido adiposo porcina através da tecnologia waterjet

Urinary incontinence (UI) is a highly prevalent condition characterized by the deficiency of the urethral sphincter muscle. Regenerative medicine ...

Injeções de jato d'água de componentes ativos, como líquidos, nanopartículas, micropartículas, drogas encapsuladas ou mesmo células vivas podem ser aplicadas muito mais precisas quando comparadas às injeções de agulha em diferentes tecidos visados. Abordagens minimamente invasivas requerem localização precisa da medicação em camadas predeterminadas do tecido alvo, pré-seleção de pressões de injeção. Nosso foco atual é a terapia celular para incontinência urinária.No entanto, essa técnica já foi estendida à regeneração do tecido muscular infectado após ataques cardíacos graves. Atualmente, a técnica só pode ser aplicada por pesquisadores experientes ou médicos licenciados em estudos pré-clínicos. Não se destina a ser utilizado em procedimentos laboratoriais de rotina, pois é desenvolvido para fins clínicos futuros.Para começar, coloque a uretra com a bexiga de conexão dissecada de um porco fêmea adulta em uma esponja que imita a elasticidade do assoalho pélvico inferior. Em seguida, usando a bexiga, determine a orientação da uretra. Isso é possível devido à localização do ureter e dos três ligamentos, que fixam a bexiga na cavidade abdominal e pélvica.Depois de orientar corretamente

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

As células-tronco perivascular (PSC) é um romance classe de células-tronco para a regeneração do tecido ósseo semelhante a células-tronco mesenquimais (MSCs). PSCs pode ser isolado por FACS (classificação de células activadas por fluorescência) a partir de tecido adiposo adquiridos durante procedimentos padrão lipoaspiração, então combinada com um andaime osteoindutora para alcançar a formação de...

Uso de Células-tronco humanas perivasculares para Regeneração Óssea

Este protocolo descreve o isolamento de derivadas de tecido adiposo a partir de células do estroma lipoaspirado e a criação de um defeito de 4 milímetros de tamanho crítico calvária em avaliar a regeneração óssea.

Reparação de um modelo de defeito crítico porte calvária Usando derivadas de tecido adiposo células do estroma colhidas lipoaspirado

Em 2001, pesquisadores da UCLA descreveu o isolamento de uma população de células-tronco adultas, chamadas células-tronco derivadas de tecido adiposo ou ASC, a partir de tecido adiposo. Este artigo descreve o isolamento de ASC de lipoaspirates usando, um protocolo de digestão enzimática manual utilizando colagenase.

Isolamento manual de células-tronco adiposo-derivadas de Lipoaspirates Humanos

Este protocolo descreve o isolamento de células-tronco derivadas do tecido adiposo de porco (pADSC) de tecidos adiposos subcutâneos com exame de multipotência. O pADSC multipotente é usado para delinear processos de diferenciação de adipócitos e estudar a transdiferenciação em múltiplas linhagens celulares de mesênquima mesodérmico ou outras linhagens de ectoderma e endoderme para estudos regenerativos.

Isolamento e diferenciação de células tronco derivadas de tecido adiposo de Suínos Subcutânea tecidos adiposos

Tecido adiposo branco (WAT) tem deficiências críticas em seus modelos de cultura primária atual, dificultando o Desenvolvimento farmacológico e estudos metabólicos. Aqui, apresentamos um protocolo para produzir um sistema de microphysiological de tecido adiposo por WAT imprensar entre lençóis de células do estroma. Essa construção fornece uma plataforma estável e adaptável para a cultura primária de WAT.

Uma plataforma de Microphysiologic para gordura humana: imprensado tecido adiposo branco

Aqui, apresentamos um protocolo para produzir uma tecido adiposo-derivado do estroma vascular fração e sua aplicação para melhorar as funções de joelho Regenerando o tecido da cartilagem, como em pacientes humanos com osteoartrite.

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Aqui, apresentamos um protocolo para obter a fração vascular do estroma do tecido adiposo através de uma série de processos mecânicos, que incluem emulsificação e múltiplas centrifugações.

Micronização mecânica de Lipoaspirates para terapia regenerativa

A fração vascular estromal isolada mecanicamente (SVF) em combinação com um hidrogel de fibrina oferece um transportador fácil e eficiente para células estromais derivadas de tecido adiposo viáveis para várias indicações, incluindo engenharia de tecidos e/ou fins de cicatrização de feridas. Aqui, apresentamos a preparação de uma construção mecânica de SVF (mSVF)-hidrogel de fibrina para pesquisa translacional e aplicação clínica.

A combinação de fração vascular estromal isolada mecanicamente e hidrogel de fibrina: um protocolo de processamento

Aqui, apresentamos um protocolo demonstrando o uso de hidrogel como uma estrutura de cultura de células tridimensional (3D) para cultura de células-tronco derivadas do tecido adiposo (ADSC) e introduzindo fotobiomodulação (PBM) para aumentar a proliferação de ADSCs dentro do ambiente de cultura 3D.

Cultura Celular Tridimensional de Células-Tronco Derivadas do Tecido Adiposo em Hidrogel com Aumento da Fotobiomodulação

Aqui, apresentamos um protocolo que pode transformar o tecido adiposo autólogo em várias substâncias componentes adiposas com diferentes propriedades e funções físico-químicas.

Fracionamento inovador de tecido adiposo para transformar gordura em componentes especializados

Aqui, apresentamos um método padrão para isolar eficientemente células-tronco e adipócitos derivados do adiposo, caracterizado por redução de &gt;90% no tempo de processamento, alta viabilidade celular e ampla compatibilidade.

Isolamento Eficiente de Células-Tronco e Adipócitos Derivados do Adiposo a partir do Tecido Adiposo Suíno

Aprenda a injetar células de stroma derivadas de tecido adiposo porcina usando tecnologia waterjet sem agulha. Este método minimamente invasivo permite entrega precisa de células vivas em tecidos-alvo para terapia celular.

Injeção de células de stroma derivadas de tecido adiposo porcina através da tecnologia waterjet

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