Mantendo culturas laboratoriais de Gryllus bimaculatus, um modelo ortopéde versátil para agricultura de insetos e fisiologia de invertebrados

Essas técnicas retratam métodos práticos e comprovados para a criação de Gryllus bimaculatus, uma mini espécie de pecuária-chave cultivada para ração animal e alimentos humanos e organismo modelo alternativo cada vez mais importante. Estes métodos laboratoriais para a cultura de Gryllus bimaculatus são derivados de técnicas comuns em toda a indústria agrícola de críquete norte-americana e representam um fac-símile em escala laboratorial de operações agrícolas de críquete. Para começar, rechee um recipiente limpo em um equilíbrio, e pese uma massa de coir de coco seco aproximadamente do tamanho de um punho humano.

Em seguida, coloque coir em um recipiente vedado e limpo, que pode acomodar a expansão até seis vezes o volume original. Com as mãos limpas, separe suavemente pedaços de coir da peça removida do bloco maior. Em seguida, usando um cilindro graduado de 250 mililitros, meça o volume correto de água deionizada para alcançar uma proporção de cinco para um por massa de cinco partes de água para uma parte de coir seco, e adicione a água deionizada medida lentamente, hidratando uniformemente todas as partículas de coir.

Depois, macerate manualmente aglomerados para garantir a hidratação uniforme, e re-tare o recipiente em que o coir foi anteriormente pesado. Pese 75 gramas de coir molhado, e transfira-o para uma placa de Petri de 100 milímetros por 15 milímetros usando uma colher de plástico limpa para garantir que o coir esteja uniformemente espalhado ao redor do fundo da placa e que não haja aglomerados. Em seguida, rotule o lado da placa de Petri com fita de laboratório com uma colônia de natal rotulada e data do evento de coleta de ovos.

Meça mais 45 mililitros de água deionizada em um cilindro graduado, e adicione água uniformemente sobre a superfície do coir embalado na placa de Petri para garantir a hidratação uniforme. Uma vez que a placa de Petri tenha sido embalada, sele o coir molhado restante em um vaso hermético para armazenamento a menos 20 graus Celsius. Coloque o substrato de oviposição hidratada em gaiolas contendo os estoques parentais desejados de grilos o mais longe possível da alimentação, e documente a data e a hora.

Em seguida, coloque um recipiente de lixo pequeno e autoclavável na superfície de trabalho. Em seguida, coloque uma gaiola de plástico limpa, vazia e 29,3 litros no banco ao lado do recipiente de lixo. Coloque outra gaiola de 29,3 litros contendo os estoques de críquete dos pais e substrato de oviposition no lado oposto do recipiente de lixo da gaiola vazia.

Após 24 horas, remova o substrato de oviposition da gaiola de críquete dos pais, e localize-o sobre o vaso de resíduos autoclavável. Inspecione o topo do substrato de oviposição para qualquer partícula de frass ou ração que os grilos possam ter chutado para a superfície do coir. Em seguida, remova os contaminantes de coir no vaso de resíduos com uma Scoopula limpa ou colher de plástico, e coloque a colher de plástico no recipiente de resíduos.

Em seguida, coloque o substrato de oviposição limpo na gaiola limpa de 29,3 litros. Depois, coloque a gaiola em uma incubadora fixada a 27 graus Celsius a 60% de umidade relativa em um fotopertouto de luz escuro de 12 horas. Devolva a gaiola contendo o estoque de reprodução para o local original e limpe todos os itens da superfície de trabalho.

Em seguida, coloque o recipiente de resíduos em um freezer in-facility dedicado ao armazenamento de itens potencialmente contaminados com ovos de críquete. Em seguida, higienize a superfície de trabalho com solução de alvejante de 10%, e deixe-a sentar por 60 segundos. Limpe a superfície de trabalho seca com uma toalha de papel limpa.

Depois de abrir o congelador, descarte a toalha de papel no recipiente de resíduos. Selecione dois apartamentos de caixa de ovos comerciais não usados de 30,8 centímetros por 30,8 centímetros. E com uma faca de utilidade ou tesouras fortes, corte-as em seis tiras separadas de 10,1 centímetros de largura de tamanho igual.

Em seguida, escove as bordas cortadas com as mãos para remover partículas pendentes de papelão. Em seguida, coloque os seis pedaços individuais de 10,1 centímetros por 30,8 centímetros de caixa verticalmente na parte inferior da gaiola, com o eixo mais longo da caixa abrangendo o eixo horizontal mais estreito de uma gaiola de 29,3 litros. Coloque um sétimo pedaço de caixa plana no topo das seis peças eretas.

Depois de selecionar três pedaços de papel toalha áspera e marrom de aproximadamente 25 centímetros por 25 centímetros, dobre cada um ao meio. Em seguida, coloque dois de tal forma que eles cobrem a parte superior do lado proximal da estrutura da caixa, e coloque um sobre a pilha de caixa no lado distal. No 11º dia, mova o substrato de oviposition para o canto direito proximal da gaiola.

Quando uma escotilha é observada, misture as toalhas de papel colocadas sobre o topo das caixas, até que sejam molhadas, mas não derramando ativamente água. Em seguida, limpe completamente ambos os lados de uma tampa petri de 100 milímetros com 70% de etanol, e deixe-o secar. Em seguida, colher 50 gramas da ração em um liquidificador de 60 watts, de uma única porção, e moinho a 10.000 rpm por um minuto.

Depois de medir um grama da ração, agite-o na tampa da placa de Petri na gaiola. Usando a extremidade limpa de uma colher ou Scoopula, espalhe o ração o mais uniformemente possível sobre a parte inferior do prato. Depois, substitua a alimentação a cada dois dias.

Descarte a ração antiga no recipiente de resíduos autoclaváveis. Monitor para o crescimento do molde na alimentação. E se a ração começar a parecer branca ou esverdeado, descarte a placa de Petri e se alimente imediatamente.

Aos 14 dias após a oviposição, use um pincel de 2,54 centímetros para remover grilos agarrados ao substrato de coir natal, escovando todos os grilos da superfície coir e laterais da placa de Petri na gaiola. Em seguida, coloque o substrato de oviposição removido no recipiente de resíduos autoclaváveis e armazene-o no congelador até que se autoclave. Em seguida, substitua o substrato natal por um prato de coir fresco para hidratação.

Usando uma garrafa de lavagem de água deionizada, adicione água até que a superfície do coir brilhe, mas não esteja agrupando. Grilos foram estocados de uma população com massa média de 21 miligramas. No final do experimento, a massa média de todos os grilos juvenis e adultos combinados foi de 0,724 gramas.

Aos 65 dias de idade, quando o experimento terminou, 30 homens adultos estavam presentes, e a massa média foi de 0,721 gramas, enquanto para as 58 fêmeas adultas, a massa média foi de 0,841 gramas. A sobrevivência entre meia e colheita foi de 89% e foi medida semanalmente por contagem total de todos os grilos individuais em todas as gaiolas. No dia 65, aproximadamente 68% de todos os grilos tinham alcançado a estrela adulta.

Evite a formação de gotículas de água no fundo do gabinete ao regar ou neblina. Colocar papel toalha sobre a refugia permite um gradiente de umidade e absorve gotículas de água da neblina. Este procedimento serve como um modelo para pesquisadores em muitos campos de ciências da vida para criar Gryllus bimaculatus como um organismo modelo.

Até o momento, foram publicados poucos protocolos formais para a criação de Gryllus bimaculatus ou qualquer outro organismo modelo paurometabolous. Codificar e padronizar métodos de criação de insetos usados na agricultura de insetos permitirá melhor a comparação dos resultados entre grupos de pesquisa.