Isolamento de núcleo de baixa entrada e multiplexing com anticorpos de código de barras de ganglia simpatizante do rato para sequenciamento de RNA de núcleo único

Neste protocolo JoVE, usamos sequenciamento de RNA unipartidária à base de gotículas para caracterizar a arquitetura biológica dos neurônios simpáticos cardíacos na saúde e na doença. Este método permite o sequenciamento de uma grande coleção de amostras neuronais ao longo de um período de tempo. Ao puxar núcleos com hashtag oligos, este método permite o multiplexing das amostras.

Este método tem o potencial de ser estendido ao sequenciamento de neurônios do gânglio humano, o que tem sido desafiador devido ao seu grande tamanho celular e à difícil coleta simultânea de amostras. Demonstrando o procedimento estará Conny van Munsteren, técnico de pesquisa, e Lieke van Roon, estudantes de doutorado do nosso laboratório Begin coletando todos os materiais necessários para dissecção, em seguida, corrigir o rato no quadro de dissecção. Molhe o mouse com 70% de etanol para minimizar a dispersão da pele.