Name: Técnica Minimamente Invasiva e Rápida de Hemisecção Lateral da Medula Espinhal para Modelagem de Lesões Medulares Abertas em Ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 50 s
Description: Aprenda uma técnica minimamente invasiva de hemisecção lateral da medula espinal em ratos sem laminectomia. Este método cirúrgico rápido e reprodutível permite visualização microscópica e facilita estudos de regeneração neural.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Os autores agradecem a Gergely Ángyán pela obra original. Este trabalho de pesquisa foi financiado pela Universidade Semmelweis, Budapeste, Hungria. Este estudo também foi apoiado pelo Programa Operacional de Desenvolvimento de Recursos Humanos da Hungria (EFOP-3.6.2-16-2017-00006). Foi recebido apoio adicional do Programa de Excelência Temática (2020-4.1.1.-TKP2020) do Ministério da Inovação e Tecnologia da Hungria, no âmbito do programa temático de Terapia da Universidade Semmelweis.

Todos os procedimentos com animais foram realizados de acordo com a Diretiva da UE (2010/63/UE) e aprovados pelo comitê de ética animal do Escritório Nacional de Segurança da Cadeia Alimentar da Hungria (PEI/001/2894-11/2014). Todas as normas institucionais e governamentais aplicáveis quanto ao uso ético de animais foram seguidas durante este estudo.
1. Preparo antes da cirurgia
<ol><li>Esterilizar todos os instrumentos utilizados durante o procedimento (ver Tabela de Materiais) e desinfetar as superfícies onde o trabalho deve ser realizado antes do procedimento.</li>
	<li>Injetar profilaticamente uma dose única de antibióticos subcutâneos. NOTA: Consulte a Tabela de materiais para obter detalhes sobre a dosagem de antibióticos.</li>
	<li>Deixar os animais na sala de cirurgia por 1 h para aclimatá-los e diminuir o estresse antes da cirurgia.</li>
	<li>Anestesiar o rato através de uma injeção intramuscular de uma combinação de quetamina e xilazina (cetamina 80 mg/kg de peso corporal (pc) e xilazina 8 mg/kg pc). NOTA: Além da anestesia, a combinação de ketamina e xilazina fornece analgesia suficiente para este procedimento. O regime de analgesia pode ser modificado de acordo com as diretrizes institucionais de uso de animais.</li>
	<li>Mantenha o rato aquecido durante o procedimento usando uma mesa aquecida ou luz infravermelha e mantenha os olhos úmidos durante toda a anestesia usando pomada oftálmica (reaplique conforme necessário).</li>
	<li>Fixe o animal na mesa cirúrgica usando fita adesiva cirúrgica nas patas dianteiras e traseiras e cauda e, dependendo do local da lesão, também no pescoço. Se necessário, coloque o rato em uma estrutura estereotáxica para estabilizá-lo durante a cirurgia.</li>
	<li>Usando sutura cirúrgica estéril, coloque uma alça ao redor dos dentes anteriores superiores do rato e fixe-a na borda da mesa de operação.</li>
	<li>Puxe a língua para os lados para o manejo das vias aéreas.</li>
	<li>Faça a barba do pelo nas costas, pelo menos 2 cm em cada direção de onde será feita a incisão.</li>
	<li>Desinfetar a pele da área cirúrgica pelo menos três vezes, utilizando solução de iodopovidona e gaze estéril. Tome especial cuidado para molhar a pele que rodeia a área. Fixar o sítio cirúrgico com um campo estéril.</li>
	<li>Avaliar a adequação da anestesia antes de colocar a primeira incisão, pinçando os dedos e a cauda do animal. Continue monitorando a adequação da anestesia durante todo o procedimento.</li>
</ol>2. Cirurgia
<ol><li>Colocar a incisão na pele com lâmina de bisturi 20. Para abrir a área cirúrgica, coloque uma incisão de 2 a 2,5 cm de comprimento ao longo da coluna vertebral, cortando todas as camadas da pele. Posicione esta incisão paralelamente à coluna vertebral usando a vértebra L1 como ponto médio, fazendo com que ela se estenda ~1 cm no sentido cranial e caudal ao longo da coluna vertebral.</li>
	<li>Mobilize os lados da ferida cortando o tecido conjuntivo ao redor dos músculos.</li>
	<li>Colocar duas incisões paralelas ao longo da coluna vertebral, penetrando no periósteo. Coloque as incisões bem ao lado dos processos espinhais em ambos os lados, abrangendo a distância entre as vértebras Th13 e L1.</li>
	<li>Disseque os músculos ligados às vértebras com o auxílio de um raspatório até que todos os ligamentos espinhais estejam visíveis. Coloque um afastador.</li>
	<li>Remover os processos espinhais da13ª vértebra torácica e da1ª vértebra lombar utilizando pinça óssea dentária para visualização de toda a área cirúrgica. A partir daí, controle o procedimento visualizando uma imagem microscópica ampliada (aumento de 4x-16x).</li>
	<li>Use gaze estéril para controlar o sangramento durante todo o procedimento, quando necessário.</li>
	<li>Levante cuidadosamente o restante dos processos espinhais de L1, elevando o arco vertebral de L1. Cortar o ligamento amarelo para acessar a medula espinhal. Eleve ainda mais os processos espinhais caudais, permitindo o acesso à dura-máter espinhal, que também é seccionada. Inclinar os processos espinhais caudais na direção cranial para visualizar a pia-máter.</li>
	<li>Olhe através da pia-máter para a veia mediana posterior, mostrando a linha média da coluna vertebral.</li>
	<li>Usando a veia como bissetriz direcional, coloque uma incisão usando um bisturi microcirúrgico enquanto poupa a veia. Colocar a incisão sob a veia, no plano transversal através do diâmetro anteroposterior da medula espinhal. Separar metade da medula espinhal movendo a lâmina lateralmente para longe da linha central. OBS: A incisão é unilateral, do lado direito, no4º segmento lombar.</li>
	<li>Tente colocar a incisão para evitar o corte da artéria espinhal anterior. Certifique-se de que o excesso de pressão não seja aplicado no corpo vertebral ao cortar a medula espinhal para poupar a artéria espinhal anterior no lado ventral da medula espinhal.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63534/63534fig01.jpg"> Figura 1: Arte mostrando os passos da nova técnica de LM aberta em ratos. (A) As vértebras expostas. (B) Processos espinhais removidos (Th13 e L1). (C) O arco vertebral levantado e inclinado da vértebra L1. (D) Hemissecção realizada do lado direito, com hemisecção medular mostrada separadamente, ampliada. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63534/63534fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<ol start="11"><li>Não feche a dura-máter diretamente durante o fechamento da ferida. Sutura firme (sutura tamanho 4-0) dos músculos ao longo dos processos espinhais, fechando indiretamente a pequena ferida na dura-máter.</li>
	<li>Fechar a camada de tecido conjuntivo dorsal com suturas.</li>
	<li>Finalmente, suture a pele ao redor do local da incisão.</li>
</ol>3. Cuidados e seguimento pós-cirúrgicos
<ol><li>Permita que os animais despertem em suas gaiolas. Mantenha o(s) animal(is) aquecido(s) usando uma lâmpada de calor, além da sala com temperatura controlada. Não deixe os ratos sozinhos depois que eles despertarem após a cirurgia, e não os coloque junto com outros ratos na mesma gaiola.</li>
	<li>Monitore sua frequência respiratória pelo menos a cada 10 minutos até que estejam totalmente acordados. Se necessário, aplique estimulação suave (por exemplo, esfregue a cabeça) para ajudar no despertar da anestesia.</li>
	<li>Quando os animais estiverem alertas e adequadamente ativos, transporte-os com segurança de volta ao biotério.</li>
	<li>Mantenha os ratos sob vigilância rigorosa durante as primeiras 24 horas após a cirurgia. Após as primeiras 24 h pós-operatórias, verificar os animais pelo menos duas vezes ao dia até o final do experimento, monitorando sinais de angústia.</li>
	<li>Avalie-os minuciosamente uma vez por dia em busca de sinais de angústia usando o protocolo institucional de bem-estar animal relevante e tome cuidado especial para verificar suas feridas em busca de sinais de infecção e inflamação. NOTA: O stress e a infecção afectam o bem-estar dos animais e o resultado das experiências.</li>
	<li>Administrar antibióticos por via subcutânea todos os dias até o final dos experimentos. Manter os animais em gaiolas estéreis, um animal por gaiola, e dar comida e água ad libitum, como antes. No final das experiências (ou se for observada qualquer reacção adversa grave durante o período de tempo da experiência), eutanasiar os animais humanamente, de acordo com o protocolo institucional de bem-estar animal relevante. OBS: Os animais foram eutanasiados (em sono profundo induzido pela combinação de ketamina e xilazina) administrando-se primeiramente uma perfusão salina fisiológica (1/3 mL/g pc) seguida de uma perfusão de paraformaldeído a 4% (1 mL/g pc).</li>
</ol>

<ol><li>Failli, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+neurological+recovery+after+spinal+cord+injury+is+impaired+in+patients+with+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Functional neurological recovery after spinal cord injury is impaired in patients with infections.</a> Brain. 135, Pt 11 3238-3250 (2012).</li>
<li>Guan, B., Chen, R., Zhong, M., Liu, N., Chen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+Oxymatrine+against+acute+spinal+cord+injury+in+rats+via+modulating+oxidative+stress%2C+inflammation+and+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolic+Brain+Disease%22%5BJournal%5D)">Protective effect of Oxymatrine against acute spinal cord injury in rats via modulating oxidative stress, inflammation and apoptosis.</a> Metabolic Brain Disease. 35 (1), 149-157 (2020).</li>
<li>Kjell, J., Olson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+models+of+spinal+cord+injury%3A+from+pathology+to+potential+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Rat models of spinal cord injury: from pathology to potential therapies.</a> Disease Models & Mechanisms. 9 (10), 1125-1137 (2016).</li>
<li>Minakov, A. N., Chernov, A. S., Asutin, D. S., Konovalov, N. A., Telegin, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+spinal+cord+injury+in+laboratory+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Naturae%22%5BJournal%5D)">Experimental models of spinal cord injury in laboratory rats.</a> Acta Naturae. 10 (3), 4-10 (2018).</li>
<li>Borbély, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+rat+spinal+cord+injury+%28hemisection%29+on+the+ex+vivo+uptake+and+release+of+%5B3H%5Dnoradrenaline+from+a+slice+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Effect of rat spinal cord injury (hemisection) on the ex vivo uptake and release of [3H]noradrenaline from a slice preparation.</a> Brain Research Bulletin. 131, 150-155 (2017).</li>
<li>Brown, A. R., Martinez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thoracic+spinal+cord+hemisection+surgery+and+open-field+locomotor+assessment+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Thoracic spinal cord hemisection surgery and open-field locomotor assessment in the rat.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (148), e59738(2019).</li>
<li>Taoka, Y., Okajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+injury+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Spinal cord injury in the rat.</a> Progress in Neurobiology. 56 (3), 341-358 (1998).</li>
<li>Hou, S., Saltos, T. M., Iredia, I. W., Tom, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+techniques+influence+local+environment+of+injured+spinal+cord+and+cause+various+grafted+cell+survival+and+integration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Surgical techniques influence local environment of injured spinal cord and cause various grafted cell survival and integration.</a> Journal of Neuroscience Methods. 293, 144-150 (2018).</li>
<li>Mattucci, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+traumatic+cervical+dislocation+spinal+cord+injury+model+with+residual+compression+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Development of a traumatic cervical dislocation spinal cord injury model with residual compression in the rat.</a> Journal of Neuroscience Methods. 322, 58-70 (2019).</li>
<li>Ahmed, R. U., Alam, M., Zheng, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+spinal+cord+injury+and+behavioral+tests+in+laboratory+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Heliyon%22%5BJournal%5D)">Experimental spinal cord injury and behavioral tests in laboratory rats.</a> Heliyon. 5 (3), 01324(2019).</li>
<li>Ashammakhi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+therapies+for+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+B%2C+Reviews%22%5BJournal%5D)">Regenerative therapies for spinal cord injury.</a> Tissue Engineering. Part B, Reviews. 25 (6), 471-491 (2019).</li>
</ol>

Os autores declaram não ter interesses financeiros concorrentes conhecidos ou relações pessoais que possam ter influenciado o trabalho relatado neste artigo.

Esta técnica minimamente invasiva de lesão medular foi desenvolvida ao estudar ratos com lesão medular, e a equipe se deparou com problemas decorrentes da própria cirurgia (lascas ósseas da laminectomia causando compressão e danificando a medula espinhal, cirurgia demorando muito, cicatrização lenta de uma grande ferida óssea). Ao eliminar a laminectomia, o procedimento tornou-se muito mais rápido (11 min vs. 35 min), a estrutura do canal vertebral permaneceu intacta, a ferida óssea era muito menor e não havia lascas óss...

As lesões medulares (LMT) são, infelizmente, lesões prevalentes em humanos. As LMs podem ser complicadas de diferentes maneiras, por exemplo, por infecções, sendo clinicamente importante o estudo dessas lesões1. Como não há cura única e definitiva para a LMT, modelos animais ainda são necessários para aprofundar o entendimento dos pesquisadores e avançar em possíveis tratamentos 2,3. Embora as lesões fechadas sejam mais comumente modeladas (compressão e contusão), é clinicamente importante entender as lacerações, que só podem ser modeladas em lesõesabertas4. Modelos de feridas abertas usando transecção ou hemissecção podem ser usados para demonstrar uma localização mais precisa de uma ferida em comparação com modelos de lesão fechada, devido à natureza da lesão (contusão vs. corte cirúrgico). Experimentos com feridas abertas podem esclarecer lesões neuronais mais específicas de forma controlada, confiável e replicável5. A transecção completa ou parcial da medula espinhal é uma técnica amplamente utilizada na ferida aberta e pode ser vista em detalhes no artigo de Brown e Martinez6.
Ao estudar a lesão medular aberta em ratos, vários animais apresentaram problemas decorrentes da cirurgia: lascas ósseas da laminectomia ficaram embutidas na medula espinhal e causaram inchaço; a ferida óssea maior precisou de muito tempo para cicatrizar; A cirurgia demorou muito. Uma técnica cirúrgica alternativa foi desenvolvida para eliminar esses problemas. O objetivo era desenvolver uma técnica mais rápida e suave para o animal. Esta técnica recém-desenvolvida é muito mais rápida do que as técnicas tradicionais de LM. A abordagem cirúrgica é minimamente invasiva, resultando em uma ferida óssea menor e eliminando os problemas decorrentes da laminectomia.
Todas as técnicas de feridas abertas envolvem a abertura da dura-máter7. Vários estudos recentes têm examinado diferentes técnicas recém-desenvolvidas, com o objetivo de aprimorar os métodos anteriores 8,9. Embora a abertura da dura-máter não possa ser excluída com essa nova técnica, ela causa uma ferida menor na dura-máter, ao mesmo tempo em que oferece uma lesão confiável e controlada da medula espinhal. Consultando a literatura sobre técnicas de lesão medular, muitos autores tentaram minimizar o tempo cirúrgico implementando pequenas modificações na técnicaoriginal10. A laminectomia sempre faz parte desses procedimentos cirúrgicos, embora seja demorada e necessite de uma ferida óssea maior6. Esta técnica cirúrgica pode ser apropriada para pesquisadores que utilizam modelos de lesão medular de ferida aberta, especificamente transecção completa ou hemissecção lateral realizada nos espaços intervertebrais (Figura 1).

<table><tbody><tr><td>Augmentin (1.000 mg/200 mg em pó)</td><td>GlaxoSmithKline, Reino Unido</td><td></td><td>Dose única de antibióticos s.c. profilaticamente (10 mg de amoxicilina e 2 mg de ácido clavulânico; Augmentin 1.000 mg/200 mg em pó). Todos os dias após a cirurgia, 10 mg de amoxicilina e 2 mg de ácido clavulânico (Augmentin 1.000 mg/200 mg em pó) por dia por animal</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>EGIS, Hungria</td><td></td><td>Desinfete a pele da área cirúrgica usando uma solução de iodopovidona</td></tr><tr><td>Calypsol (50 mg/mL)</td><td>Richter Gedeon, Hungria</td><td></td><td><forte>Anestesia: combinação de cetamina 80 mg/kg e xilazina 8 mg/kg por via intramuscular</forte></td></tr><tr><td>CP XILAZINA 2% (20 mg/mL)</td><td>Produlab Pharma B.V., Holanda</td><td></td><td><forte>Anestesia: combinação de cetamina 80 mg/kg e xilazina 8 mg/kg por via intramuscular</forte></td></tr><tr><td>pinça óssea dentária</td><td>Dentech, Hungria</td><td>BS 0127</td><td>Remova os processos espinhosos da vértebra torácica 13th e da vértebra lombar 1st usando pinça óssea dentária</td></tr><tr><td>micromotor cirúrgico odontológico</td><td>W& H, Áustria</td><td>MF-TECTORQUE</td><td>Usando um micromotor cirúrgico odontológico, uma laminectomia é realizada no microscópio óptico de vértebra L1</td></tr><tr><td></td><td>Zeiss, Alemanha</td><td>OPMI19-FC</td><td>Controle o procedimento visualizando uma imagem microscópica ampliada (ampliação de 16x)</td></tr><tr><td>solução salina fisiológica (NaCl 0,9%)</td><td>Fresenius Kabi, Alemanha</td><td></td><td>Mantenha os olhos do rato úmidos durante toda a anestesia usando gotas de solução salina fisiológica (reaplique conforme necessário)</td></tr><tr><td>raspatorium</td><td>Dentech, Hungria</td><td>FK 1164</td><td>Disseque os músculos presos às vértebras com o auxílio de um raspatório, até que todos os ligamentos espinhais estejam visíveis.</td></tr><tr><td>retrator</td><td>Dentech, Hungria</td><td>RT 1253</td><td></td></tr><tr><td>bisturi</td><td>Dentech, Hungria</td><td>BB 173</td><td></td></tr><tr><td>bisturi</td><td>Dentech, Hungria</td><td>BB 184</td><td></td></tr><tr><td>lâmina de bisturi 12</td><td>B. Braun, Alemanha</td><td>12</td><td></td></tr><tr><td>lâmina de bisturi 20</td><td>B. Braun, Alemanha</td><td>20</td><td></td></tr><tr><td>gaze de corte estéril 10 x 10 cm</td><td>Sterilux, Hartmann, Alemanha</td><td></td><td></td></tr><tr><td>suturas (monofilamento, sintéticas; absorvíveis e não absorvíveis), tamanho: 4-0</td><td>B. Braun, Alemanha</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pinça (13 cm)</td><td>Dentech, Hungria</td><td>Pinça BD 1555</td><td></td></tr><tr><td>(pinça de tecido delicado)</td><td>Dentech, Hungria</td><td>BD 1670</td><td></td></tr></tbody></table>

técnica minimamente invasiva e rápida de hemisecção lateral da medula espinhal para modelagem de lesões medulares abertas em ratos

A Minimally Invasive, Fast Spinal Cord Lateral Hemisection Technique for Modeling Open Spinal Cord Injuries in Rats

As técnicas abertas de lesão medular modelando lesões laceradas são demoradas e invasivas, pois envolvem laminectomia. Esta nova técnica elimina a laminectomia removendo dois processos espinhosos e levantando, inclinando em seguida o arco vertebral caudal. A área cirúrgica abre-se sem a necessidade de laminectomia. A hemissecção lateral é então realizada com controle visível direto ao microscópio. O trauma é minimizado, necessitando apenas de uma pequena ferida óssea. 
Essa técnica tem várias vantagens: é mais rápida e, portanto, menos onerosa para o animal, e a ferida óssea é menor. Como a laminectomia é eliminada, há menos chance de lesão indesejada na medula espinhal, e não há lascas ósseas que possam causar problemas (lascas ósseas embutidas na medula espinhal podem causar inchaço e danos secundários). O canal vertebral permanece íntegro. A principal limitação é que a hemissecção só pode ser realizada nos espaços intervertebrais. 
Os resultados mostram que esta técnica pode ser realizada muito mais rapidamente do que a abordagem cirúrgica tradicional, utilizando laminectomia (11 min vs. 35 min). Esta técnica pode ser útil para pesquisadores que trabalham com modelos animais de lesão medular aberta, pois é amplamente adaptável e não requer nenhuma instrumentação especializada adicional.

Após a hemissecção, os ratos apresentam paralisia no membro posterior ipsilateral (prova in vivo de hemisecção bem-sucedida). A avaliação completa do espécime só pode ser feita após a remoção da medula espinhal (ver Figura 2, onde a medula espinhal removida pode ser vista dos lados ventral e dorsal).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63534/63534fig02.jpg"> Figura 2<...

Aqui, descrevemos uma nova e rápida técnica de modelagem da lesão medular aberta em ratos que elimina a laminectomia. A hemissecção lateral é realizada durante a visualização através de um microscópio. A técnica é versátil e também pode ser utilizada nas regiões cervical, torácica e lombar da medula espinhal de outros animais.

Técnica Minimamente Invasiva e Rápida de Hemisecção Lateral da Medula Espinhal para Modelagem de Lesões Medulares Abertas em Ratos

Open spinal cord injury techniques modeling laceration-like injuries are time-consuming and invasive because they involve laminectomy. This new technique ...

Esse protocolo é significativo, pois as lesões medulares ainda são prevalentes nos dias de hoje, e pesquisas são necessárias para aprofundar o entendimento dessas lesões e desenvolver possíveis terapias. Esta técnica é mais precisa e reprodutível do que as lesões por compressão e contusão e menos invasiva do que as lesões com laminectomia completa. Portanto, pode ser uma melhor opção para uma simulação de lesão medular do que os procedimentos descritos anteriormente.Para começar, use uma lâmina de bisturi 20 para abrir a área cirúrgica, colocando uma incisão de dois a 2,5 centímetros de comprimento através de todas as camadas da pele ao longo da coluna vertebral. Posicione esta incisão paralelamente à coluna vertebral usando a vértebra L1 como ponto médio, estendendo-a aproximadamente um centímetro no sentido cranial e coddle ao longo da coluna vertebral. Mobilize os lados da ferida cortando o tecido conjuntivo ao redor dos músculos.Em seguida, coloque duas incisões paralelas ao longo da coluna vertebral, penetrando no periósteo. Coloque as incisões bem ao lado dos processos espinhais em ambos os lados, abrangendo a distância entre as vértebras torácicas 13 e L1. Disseque os músculos ligados às vértebras com os oito de um respirador até que todos os ligamentos espinhais estejam visíveis.Coloque um afastador. Em seguida, remova os processos espinhais da 13ª vértebra torácica e da primeira vértebra lombar Usando pinça óssea dentária para visualizar toda a área cirúrgica. Use gaze estéril para controlar o sangramento durante todo o procedimento, quando necessário.Levante cuidadosamente o restante dos processos espinhais de L1, elevando o arco vertebral de L1. Remova o ligamento amarelo para acessar a medula espinhal. Eleve ainda mais os processos espinhais da criança, permitindo o acesso à dura-máter espinhal cortada.Incline os processos espinhais da criança na direção craniana para visualizar a pia-máter. Olhe através da pia-máter para a veia mediana posterior, mostrando a linha média da coluna vertebral. Usando a veia como bissetriz direcional, coloque uma incisão usando um bisturi microcirúrgico enquanto poupa a veia.Coloque a incisão sob a veia no plano transversal através do diâmetro anterior posterior da medula espinhal. Realizar a hemissecção afastando a lâmina lateralmente da linha central. Coloque a incisão para evitar o corte da artéria espinhal anterior.Certifique-se de que o excesso de pressão não seja aplicado no corpo vertebral ao cortar a medula espinhal para poupar a artéria espinhal anterior no lado ventral da medula espinhal. Não feche a dura-máter diretamente durante o fechamento da ferida. Sutura firmemente os músculos e processos espinhais, fechando indiretamente a pequena ferida na dura-máter.Fechar a camada de tecido conjuntivo dorsal com suturas. Este novo método minimamente invasivo de lesão medular é realizado muito mais rápido do que a abordagem cirúrgica tradicional usando laminectomia e não requer instrumentação especializada adicional. Hematoxilina e eosina foram utilizadas para visualização do local da lesão.Outros cortes podem ser realizados ao longo da medula espinhal mimetizando lesões neurais específicas. A regeneração também pode ser estudada, uma vez que eletrodos ou células-tronco podem ser colocados usando este método. A maioria das técnicas que utilizam modelos de feridas abertas de lesão medular implementando hemissecção ou transação pode ser simplificada e acelerada com o uso desta técnica.

a-minimally-invasive-fast-spinal-cord-lateral-hemisection-technique

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Uma maneira confiável e repetível para produzir uma lesão da medula espinhal cervical unilateral utilizando o pêndulo horizonte infinito é descrito. O método leva vantagem de um quadro projetado e grampo para estabilizar a coluna. O procedimento padronizado e biomecânica lesão os parâmetros resultam em lesões suficientes e sustentados.

Um Modelo contundente de lesão da medula espinhal cervical unilateral Usando o Impactor horizonte infinito

Fonte: Zweckberger, K., et al. Uso sinérgico de células precursoras neurais e peptídeos auto-montáveis em lesão experimental da medula espinhal cervical.  J. Vis. Exp. (2015).Este protocolo demonstra uma abordagem de injeção direcionada para reparo de lesão medular em um modelo de rato. Envolve a entrega de peptídeos de automontagem (SAPs) no núcleo da lesão para criar um andaime de suporte, seguido por injeções de células precursoras neurais (NPC) ao redor da lesão para remodelar o tecido.

Injeção de peptídeos automontáveis e células precursoras neurais para reparo da medula espinhal em um modelo de rato

Este vídeo demonstra o procedimento cirúrgico para a realização de uma hemissecção da medula espinhal torácica em ratos. Ele descreve as etapas para expor o segmento da medula espinhal T8, realizar a hemissecção para interromper o trato neural de um lado e fornecer cuidados pós-operatórios.

Realização de cirurgia de hemissecção da medula espinhal torácica em ratos

Fonte: Lakshman, N., et al. Um ensaio de neuroesfera para avaliar a ativação endógena de células-tronco neurais em um modelo de camundongo com lesão mínima da medula espinhal. J. Vis. Exp. (2018). Este vídeo demonstra a ativação e migração de células-tronco neurais (NSCs) em um modelo de lesão medular de camundongo. Para expor a medula espinhal, uma vértebra da região torácica da coluna vertebral é removida de um camundongo anestesiado. Uma lesão superficial é então criada na substância branca...

 Um modelo mínimo de lesão medular para estudar a ativação e migração de células-tronco neurais

Um modelo de contusão grave lesão da medula espinhal é descrito. As etapas detalhadas no pré-operatório, operatório e pós-operatório são descritos para obter um modelo consistente.

Um modelo de contusão grave de lesão medular em ratos

A lesão medular é uma condição traumática que causa grave morbidade e mortalidade elevada. Neste trabalho, descrever em detalhes um modelo contusão de lesão medular em ratos, seguido por um transplante de células-tronco neurais.

Neural Stem Cell Transplantation em Experimental contusão Model of Spinal Cord Injury

Aqui apresentamos uma combinação de perfusão de Doppler laser de imagem (LDPI) e do laser Doppler perfusão monitoramento (LDPM) para medir spinal cord fluxos de sangue local e saturação de oxigênio (SO2), bem como um procedimento padronizado para a introdução da medula espinhal trauma no rato.

Usando Laser Doppler Imaging e acompanhamento para analisar a microcirculação na medula espinhal em ratos

Aqui descrevemos procedimentos cirúrgicos para produzir uma hemiseção lateral medular confiável (HX) no nível9 torácico em ratos adultos e avaliações neurocomportamentais projetadas para detectar déficits assimétricos após tal lesão unilateral.

Hemiseção Lateral da Medula Espinhal e Avaliações Comportamentais Assimétricas em Ratos Adultos

O hemisection espinal torácico do rato é um modelo valioso e reprodutível de ferimento unilateral da medula espinal para investigar os mecanismos neural da recuperação locomotora e da eficácia do tratamento. Este artigo inclui um guia detalhado passo a passo para realizar o procedimento de hemisection e avaliar o desempenho locomotor em uma arena de campo aberto.

Cirurgia do Hemisection da medula espinal torácica e avaliação do locomotor do aberto-campo no rato

Técnicas minimamente invasivas e um simples dispositivo laboratorial melhoram a reprodutibilidade do modelo de lesão medular, reduzindo os danos operatórios aos animais experimentais e permitindo a manutenção da morfologia anatômica. O método vale a pena porque os resultados confiáveis e o procedimento reprodutível facilitam as investigações dos mecanismos de reparação da doença.

Estabelecendo um Modelo de Lesão da Medula Espinhal por Contusão de Camundongo Baseado em uma Técnica Minimamente Invasiva

Este protocolo cirúrgico é um guia passo a passo para inserir um cateter intratecal no espaço subdural espinhal de um roedor para fornecer tratamento direcionado.

Acessando o espaço subdural da medula espinhal de roedores para administração de tratamento

Aprenda uma técnica minimamente invasiva de hemisecção lateral da medula espinal em ratos sem laminectomia. Este método cirúrgico rápido e reprodutível permite visualização microscópica e facilita estudos de regeneração neural.

Técnica Minimamente Invasiva e Rápida de Hemisecção Lateral da Medula Espinhal para Modelagem de Lesões Medulares Abertas em Ratos (Vídeo) | JoVE Journal

Técnica Minimamente Invasiva e Rápida de Hemisecção Lateral da Medula Espinhal para Modelagem de Lesões Medulares Abertas em Ratos

Explorar mais vídeos