Modelo de Aneurisma De aootico Abdominal do Rato Induzido pela Aplicação Perivascular do Elastase
11 de fevereiro de 2022
O presente protocolo descreve um método cirúrgico padronizado para o modelo AAA induzido por elastase através da aplicação direta de elastase à adventitia da aorta abdominal infrarenal em camundongos.
Trata-se de um protocolo padronizado para aneurisma de aoterrorismo abdominais induzido por elastase, o que aumentaria muito a reprodutibilidade e a consistência dos estudos que utilizam esse modelo. Esta técnica tem uma taxa de indução consistente de aneurisma de ao menos abdominal. Também possui a vantagem de baixos gastos e curto tempo de operação, o que resultará em maior poder estatístico e reprodutibilidade.
Você precisa garantir que os tecidos conjuntivos que cobrem a aorta sejam removidos para que a elastase tenha mais chances de penetração, mas tenha cuidado para não danificar os vasos. Para começar, administre cinco miligramas por quilogramas de carprofeno subcutâneo, 30 minutos antes da indução da anestesia. Teste o camundongo anestesiado pela falta de resposta de beliscão do dedo do dedo antes da incisão da pele.
Faça uma incisão longitudinal de 2,5 centímetros na pele, ao longo da linha média do abdômen médio e inferior. Puxe suavemente o músculo subjacente e faça uma incisão longitudinal de 2,5 centímetros ao longo de linea alba. Use aplicadores de ponta de algodão molhado para mover os intestinos e estômago para o lado direito do camundongo, e acessar a cavidade abdominal.
Use fórceps para remover suavemente o tecido conjuntivo que cobre a aorta abdominal e a veia cava inferior. Use fórceps para dissecar suavemente a parte traseira da aorta abdominal e vena cava inferior dos músculos subjacentes. Coloque um pedaço de quatro centímetros por quatro milímetros de faixa de luva através da parte traseira da aorta abdominal e veia cava inferior, e endireitar a listra.
Coloque a faixa aproximadamente 0,5 centímetros de distância da artéria renal direita. Acima da listra, coloque um pedaço de três centímetros por dois milímetros de algodão através da parte traseira da aorta abdominal e veia cava inferior. Então, endireitar a almofada de algodão.
Para incubar a elastase, use uma pipeta para soltar 30 microlitros de elastase pancreática porcina no segmento de aorta acima da almofada de algodão. Enrole a almofada de algodão e listra ao redor da aorta e da veia cava inferior. Enxágüe um pedaço de 10 centímetros por gaze de 10 centímetros com salina estéril de 0,9% e coloque-a no abdômen.
Após 30 minutos, retire a listra e a almofada de algodão com fórceps. Irrigar a aorta e a cavidade abdominal com 500 microlitres de soro fisiológico estéril de 0,9%. Use gaze para absorver o salino restante.
Aproxime-se das camadas musculares com uma sutura de monofilamento não absorvível de 6-0. Em seguida, feche a pele com três a quatro interrompidas em suturas monofilamento não absorvíveis de 6-0. A taxa de incidência de desenvolvimento de aneurisma de ao menos abdominal no pós-operatório 14 foi de 91,7% para animais do sexo feminino, enquanto a taxa de incidência para animais do sexo masculino foi de 72,7%Entre os 19 animais em que o aneurisma aórtico abdominal foi desenvolvido, observou-se 1,7 vezes e 1,6 vezes o aumento do diâmetro máximo da aoórtica abdominal, em fêmeas e machos, respectivamente, em comparação com controles não cirúrgicos.
Imagens representativas da aorta de grupos não cirúrgicos e cirúrgicos no 14º dia pós-operatório são exibidas. Esta técnica serviu como uma ferramenta potencial para ajudar a dissecar a fisiopatologia do triplo A e ajudar na descoberta de novos potenciais alvos terapêuticos.
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Visão Geral
Este estudo apresenta um protocolo cirúrgico padronizado para induzir aneurisma da aorta abdominal (AAA) em camundongos utilizando elastase. O método garante alta reprodutibilidade e baixos custos operacionais, tornando-se uma ferramenta poderosa para o estudo do AAA.
Componentes Principais do Estudo
Área de Pesquisa
- Biologia cardiovascular
- Patofisiologia das doenças aórticas
- Modelagem experimental em camundongos
Contexto
- Aneurisma da aorta abdominal é uma condição médica grave com morbidade significativa.
- Os modelos atuais variam em reprodutibilidade e custo.
- Uma abordagem padronizada poderia melhorar os resultados da pesquisa.
Métodos Utilizados
- Aplicação direta de elastase pancreática de suíno na adventícia da aorta.
- Modelo murino (C57BL/6 ou linhagens semelhantes).
- Técnicas de dissecação cirúrgica e avaliações de acompanhamento.
Resultados Principais
- 91,7% de incidência de AAA em camundongos fêmeas e 72,7% em machos até o 14º dia pós-operatório.
- Aumentos significativos no diâmetro máximo da aorta abdominal observados.
- Apoia a aplicabilidade do modelo para melhor compreensão do AAA e descoberta de alvos terapêuticos.
Conclusões
- Este protocolo demonstra um método confiável para indução de AAA.
- Tem o potencial de aprimorar a pesquisa em biologia cardiovascular e no desenvolvimento de terapias.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
Modelos padronizados em camundongos para aneurisma da aorta abdominal (AAA) são essenciais para reduzir os riscos no descobrimento precoce de alvos cardiovasculares e permitir estudos mecanicistas reprodutíveis. O protocolo de aplicação perivascular de elastase oferece alta consistência e poder estatístico, apoiando testes de hipóteses robustos e comparabilidade entre estudos. Este modelo fortalece a confiança no portfólio ao fornecer um sistema pré-clínico confiável para a avaliação da patogênese do AAA e de alvos terapêuticos.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Permite a investigação da fisiopatologia da AAA e a identificação de mecanismos impulsionadores da doença.
- Apóia a validação funcional de alvos candidatos em um contexto in vivo reprodutível.
- Facilita a confiança preditiva para programas cardiovasculares em estágios iniciais.
Triagem e Desenvolvimento de Ensaios
- Oferece um sistema in vivo validado para avaliar intervenções farmacológicas direcionadas à AAA.
- Fornece leituras padronizadas e quantitativas, como alterações no diâmetro aórtico, para o desenvolvimento de ensaios.
- Permite reprodutibilidade e escalabilidade para triagem de compostos em estudos pré-clínicos.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Alinha-se a desfechos relevantes para doenças na exploração translacional de biomarcadores.
- Apóia a continuidade desde a descoberta mecanicista até a avaliação de eficácia pré-clínica.
- Reduz o risco biológico ao modelar características-chave da AAA humana em camundongos.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
Este modelo se integra ao continuum de descoberta a pré-clínico, conectando estudos mecanicistas e identificação de compostos líderes para terapias de AAA.
- Biologia da Descoberta: Apoia testes baseados em hipóteses sobre mecanismos de AAA e o papel de alvos.
- Triagem: Fornece resultados quantitativos e reprodutíveis para avaliação da eficácia de compostos.
- Análises: Permite comparação estatística da dilatação aórtica e das taxas de incidência entre grupos experimentais.
- Pesquisa Translacional: Facilita a associação com características clínicas de AAA no desenvolvimento de biomarcadores e desfechos.
- Reutilização Institucional: Oferece um modelo padronizado e economicamente eficiente, adaptável a diferentes equipes de pesquisa cardiovascular.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva e reduz a ambiguidade mecanicista na pesquisa de AAA.
- Valor Operacional: Aprimora a reprodutibilidade, padronização e produtividade em estudos in vivo.
- Valor Estratégico: Melhora a qualidade das decisões de avanço ou interrupção de projetos e a alocação de capital em fases iniciais de pipelines cardiovasculares.
- Impacto no Portfólio: Permite a priorização ajustada ao risco de alvos e candidatos terapêuticos para AAA.
Considerações sobre a Implementação
- Exige experiência cirúrgica e treinamento procedural padronizado para resultados consistentes.
- Requer acesso a salas cirúrgicas para animais e ferramentas de imagem quantitativa ou medição.
- Exige rigorosa adesão ao protocolo entre equipes para minimizar a variabilidade entre estudos.
- Pode ser necessária adaptação para diferentes linhagens de camundongos ou pontos experimentais.
- Limitações potenciais incluem variabilidade técnica e características fisiopatológicas específicas do modelo.
