Sensibilidade da membrana mitocondrial interna para na+ revela piscinas de COQ funcionais parcialmente segmentadas

Este protocolo destaca o papel do sódio como segundo mensageiro e também mostra a existência de piscinas de ubiquinol parcialmente diferenciadas. Esta técnica demonstra uma abordagem extremamente simples para o estudo de piscinas de ubiquinol que de outra forma requer modelos celulares muito específicos. Esta abordagem pode ser usada para o estudo da transferência de elétrons em outras membranas, particularmente de enzimas dentro de gotas lipídicas.

Divida as amostras em quatro subamostras de 20 microgramas cada e rotule-as de A a D.Split amostras A e B em duas subamostras de 10 microgramas cada e rotule-as como A1, A2, B1 e B2. Prepare o buffer C1/C2 conforme descrito no protocolo de texto e pré-aqueça a 37 graus Celsius. Em um cuvette de um mililitro, adicione cada uma das subamostras a 30 microlitadores de citocromo c e 10 microliters de malonato. Adicione o buffer C1/C2 para aumentar o volume para 980 microliters nas cuvetas A1 e B1 e 979 microliters em A2 e B2. Adicione 10 microlitres de cloreto de potássio de um molar nas cédonas A1 e A2 e 10 microlitrais de cloreto de sódio de um molar em B1 e B2. Adicione um microliter de rotenona de um mililitro nas cuvetas A2 e B2. Logo antes da medição, adicione 10 microliters de NADH de 10 mililitros em todas as cuvetas.