April 21st, 2022
Um chip micro-padronizado recém-desenvolvido com janelas de óxido de grafeno é fabricado aplicando técnicas de sistema microeletromecânico, permitindo imagens eficientes e de microscopia criogênica de elétrons de vários biomoléculas e nanomateriais.
Este protocolo é importante para regular a espessura do tamanho da imagem na escala nano para observar com sucesso proteínas e nano materiais de diferentes tamanhos usando crio EM. A técnica de fabricação do Mem permite a produção em massa do microchip. Também permite a seleção de profundidades e desenhos dos poços de micro padrão. Dependendo dos propósitos experimentais.
A técnica pode contribuir para aumentar a eficiência da análise de estrutura 3D de alta produtividade das biomoléculas que é utilizada para a descoberta de drogas comerciais, e então wafers finos e microchips com membranas nitro de silício que tendem ao risco podem ser complicados. É importante não dobrar o wafer ou aplicar forças perpendiculares à janela de nitrato de silício. Comece a padronizar a resistência fotográfica, ou RP cobrindo um wafer de silício depositado em nitreto de silício com solução de hexametiletiladisilazane e, em seguida, gire o revestimento do wafer a 3000 RPM por 30 segundos em um codificador de giro.
Asse o wafer revestido a 95 graus Celsius por 30 segundos em uma placa quente para tornar a superfície da água hidrofóbica e garantir um bom desempenho de revestimento com o RP. Em seguida, gire o wafer com um RP positivo e assá-lo 100 graus Celsius por 90 segundos. Uma RP revestida de spin tem uma espessura de 500 nanômetros. Exponha o wafer revestido de RP à luz ultravioleta por cinco segundos através de uma máscara de cromo usando um alinhador.
Desenvolva o RP por um minuto usando um desenvolvedor e enxágue duas vezes, imergindo o wafer em água desionizada. Em seguida, seque o wafer padrão pr soprando gás nitrogênio na superfície da água. Seguindo a padronização do RP. Use um íon reativo construído em laboratório, etcher com uma potência de radiofrequência de 50 watts, e com gás hexafluoreto de enxofre a três centímetros cúbicos padrão por minuto.
Para gravar o nitreto de silício exposto à taxa de seis angstroms por segundo. Elimine o RP imergindo o wafer padrão de nitreto de silício em acetona à temperatura ambiente por 30 minutos. Seguido por enxaguar o wafer duas vezes em água deionizada e secar o wafer com gás nitrogênio.
Para gravar o si exposto, mergulhe o wafer padrão de nitreto de silício em solução de hidróxido de potássio recém-preparada. Com agitação contínua até que as janelas de nitreto de silício de pé livre possam ser observadas no lado oposto do wafer padronizado. Limpe o wafer gravado mergulhando-o várias vezes em um banho de água deionizado.
Em seguida, seque o wafer no ar. Para eliminar os resíduos de gravação, pressione levemente os limites da matriz de chips com uma pinça e obtenha uma matriz de chips para ser micro padronizado. Em seguida, mergulhe a matriz de chips em solução de hidróxido de potássio recém-preparada por 30 segundos, seguida por enxaguar duas vezes, soprar os chips com gás nitrogênio e secá-los no ar por uma hora.
Para suporte sólido, prepare um wafer de silício em branco de 525 micrômetros com o revestimento de spin, como demonstrado anteriormente. Anexado ao raio de triturador no wafer de silício antes de assar o wafer e seguir o procedimento como descrito anteriormente para obter o wafer de silício de micropattern. Elimine o RP imergindo o chip padrão definido em uma solução de littanol puro de metil dois a 60 graus Celsius durante a noite.
No dia seguinte, enxágue o conjunto de chips duas vezes com água deionizada. Depois de secar o chip padrão com nitrogênio, elimine os resíduos de RP com um processo de plasma de oxigênio usando 100 centímetros cúbicos padrão por minuto de gás oxigênio a uma potência de radiofrequência de 150 watts por um minuto com o íon reativo etcher. Mais tarde, mergulhe os chips micro padronizados na solução de hidróxido de potássio por 30 segundos para eliminar totalmente os resíduos de RP.
Em seguida, enxágue e seque completamente o conjunto de chips. Diluir dois miligramas por óxido de grafeno mililitro ou solução 10 dobras com água deionizada e sonicar a solução diluída por 10 minutos para quebrar os agregados das folhas. Em seguida, centrifugar para a solução diluída a 300 vezes G por 30 segundos à temperatura ambiente.
Use um descarregador de brilho a 15 milhões de amperes para glow descarregar o lado gravado de silício do chip micro padrão por um minuto e tornar a superfície do chip com uma carga positiva. Quando terminar, solte três microliters da solução no lado de descarga de brilho do chip de micropattern. Após um minuto, borre a solução em excesso no chip com papel filtro.
Lave o chip transferido com gotículas de água deionizadas em um filme de parafina e borre o excesso com papel filtro. Repita o procedimento de fundição de queda duas vezes no lado transferido e uma vez no lado oposto. Seque o chip transferido à temperatura ambiente durante a noite.
Durante o procedimento de fotolitografia, os desenhos dos chips de micro padrão foram manipulados usando diferentes desenhos da máscara de cromo. Os números e as dimensões das membranas de nitreto de silício de pé livre foram controlados. Observou-se que os chips micro padronizados fabricados poderiam ter até 25.000 buracos suspensos.
O espectro de ramen na janela exibia os picos representativos do Além disso, os padrões de defração hexagonal multiplicados indicavam que as janelas consistiam na multicamadas A estrutura e a profundidade do micro buraco com janelas foram estudadas com microscopia eletrônica de varredura e microscopia de força atômica. Uma estrutura bem tipo do micro orifício com a janela foi observada nas imagens confirmando a possibilidade do design do chip micro padrão com janelas. Com a ajuda do chip micro padronizado, alguns espécimes biológicos e nanopartículas inorgânicas foram imagens com o microscópio eletrônico crio.
Otimizar as condições como a espessura do revestimento puro usando intensidade e tempo de desenvolvimento para micro padronização dependendo do tamanho e design dos padrões é importante. Aplicando técnicas de nano pattering, como FIB ou mesmo litho grafeno, alguns padrões de micrômetros podem ser produzidos, o que pode expandir as aplicações deste micro dispositivo onde é usado com outras técnicas analíticas.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Um chip micro-padronizado recém-desenvolvido com janelas de óxido de grafeno aprimora a imagem da microscopia eletrônica criogênica de biomoléculas e nanomateriais. Esta tecnologia permite uma análise eficiente e de alto rendimento na nanoescala.
High-throughput cryogenic electron microscopy (cryo-EM) is increasingly critical for structural biology and early-stage drug discovery, yet sample preparation bottlenecks limit its predictive value and scalability. The described micro-patterned chip with controlled ice thickness and graphene oxide windows directly addresses these challenges by enabling reproducible, nanoscale sample environments for diverse biomolecules and nanomaterials. This innovation enhances structural data quality and throughput, supporting more confident target validation and portfolio triage in biopharma R&D.
This chip fabrication method integrates into the discovery-to-preclinical continuum by providing a robust platform for structural analysis, from early target validation through lead identification and translational research.