Name: Lisado Plasmático Rico em Plaquetas para Tratamento de Doenças da Superfície Ocular (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Aprenda a preparar lisado plasmático rico em plaquetas para tratar doenças da superfície ocular. Este protocolo detalha coleta, caracterização e armazenamento do produto alogênico.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Os autores agradecem à "Casa del Dono di Reggio Emilia" por fornecer concentrados de plaquetas derivados de doadores.

O PRP-L utilizado para a avaliação quantitativa dos fatores de crescimento foi coletado dentro de um estudo mais amplo sobre a caracterização de produtos PRP para fins regenerativos, realizado na AUSL-IRCCS di Reggio Emilia e aprovado pelo Comitê de Ética da Área Vasta Emilia Nord em 10 de janeiro de 2019 (número de protocolo 2019/0003319). Os doadores deram o seu consentimento esclarecido de acordo com a Declaração de Helsínquia. Nenhuma aprovação ética foi necessária para coletar os dados agregados e anônimos do questionário Ocular Surface Disease Index (OSDI), que é rotineiramente usado por médicos para monitorar os sintomas da síndrome do olho seco. A Figura 1A mostra um esboço do protocolo seguido, enquanto as figuras da Figura 1B retratam as principais etapas do procedimento.
1. Coleta de plasma rico em plaquetas (PRP)
<ol><li>Aférese do PRP<ol><li>Para este protocolo, selecione doadores de plaquetas de acordo com as leis italianas: os doadores de plaquetas devem ter entre 18 e 65 anos de idade, com parâmetros normais de pressão e hemograma e uma contagem plaquetária não inferior a 180 x 109 plaquetas / L23. Os doadores elegíveis não podem tomar medicamentos antiplaquetários ou anticoagulantes dentro de 1 semana antes da doação.</li>
		<li>Realizar plasma-plaquetas-aférese utilizando um sistema automatizado de coleta de sangue, de acordo com as instruções do fabricante e as legislações nacionais23, para obter 1 unidade de plasma rico em plaquetas (PRP) de doador único. Recolher PRP em solução anticoagulante de citrato de adenina dextrose A (ACD-A). NOTA: A aférese plaquetária é realizada com um procedimento contínuo; o tempo de coleta está em um intervalo entre 40 min e 90 min. A quantidade de DAC entregue aos doadores e o tempo dos procedimentos dependem das características do doador, por exemplo, hematócrito e agulha.</li>
	</ol></li>
	<li>Características das unidades PRP NOTA: A etapa a seguir geralmente é executada automaticamente pelo sistema automatizado de coleta de sangue durante o procedimento de plasma-plaquetas-aférese. Por favor, verifique o manual de instruções do fabricante.<ol><li>Ressuspender as unidades de PRP coletadas por aférese em quantidade adequada de solução conservante com a quantidade mínima de plasma residual, necessária para manter o pH > 6,4 durante todo o tempo de armazenamento, até um volume final médio de 180 mL líquidos da solução anticoagulante (em torno de 40 mL). NOTA: De acordo com a legislação italiana, os controlos de qualidade têm de avaliar que a contagem de plaquetas (PLTs) é de pelo menos 2,0 x10 11 PLTs/unidade, enquanto os leucócitos residuais têm de ser inferiores a 1 x 106 células/unidade.</li>
		<li>Conservar o PRP leucodepletado e irradiado durante um período máximo de 5 dias a 22 °C ± 2 °C num agitador de plaquetas antes de nova manipulação23.</li>
	</ol></li>
	<li>Diluição do PRP<ol><li>Imediatamente antes de iniciar a diluição do PRP, realize uma contagem de PLT com um hemocitômetro usando a amostra coletada da bolsa principal através de um espigão perfurante. NOTA: Execute as próximas etapas na esterilidade sob um exaustor de risco biológico de classe II. Use equipamentos de proteção individual (jaleco, luvas e óculos) durante o procedimento.</li>
		<li>Diluir o PRP com uma quantidade adequada de NaCl estéril a 0,9% até uma concentração final de 0,32 x 10 9 ± 0,03 x 109 PLTs/mL, que simula a concentração média de PLT no sangue periférico.</li>
		<li>Aproveitando um pico penetrante para bolsas de sangue, divida o PRP diluído em bolsas de coleta vazias de 300 mL para atingir um volume líquido de 190 mL/bolsa.</li>
		<li>Use uma alíquota de PRP diluído residual (geralmente 1 mL) para realizar controles de qualidade avaliando possíveis contaminações microbianas. Realize um ensaio de esterilidade seguindo as instruções do fabricante em um laboratório de microbiologia (consulte Tabela de Materiais). NOTA: Utilizar frascos de cultura específicos para hemoculturas aeróbias, que são capazes de realizar a cultura qualitativa e recuperação de microrganismos aeróbios (principalmente bactérias e leveduras) a partir de amostras de sangue de pequeno volume.</li>
		<li>Conservar os sacos de PRP diluídos a -80 °C durante um máximo de 2 meses antes do descongelamento.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Preparação de lisado plasmático rico em plaquetas (PRP-L)
<ol><li>Descongelar<ol><li>Antes de iniciar o processo de descongelamento, certifique-se de que um banho quente está regulado a 37 °C. Coloque os sacos PRP no banho quente e espere até descongelar completamente.</li>
	</ol></li>
	<li>Coleção PRP-L<ol><li>Centrifugar os sacos PRP a 3000 x g durante 30 min à temperatura ambiente. NOTA: Os próximos passos devem ser realizados em esterilidade sob um exaustor de risco biológico de classe II.</li>
		<li>Explorando o pico perfurante do saco de transferência, conecte o saco centrifugado com um saco de transferência estéril vazio de 300 mL. Com cuidado, transfira o sobrenadante PRP-L, evitando detritos, para o novo saco. Quando possível, use uma prensa de bolsas.</li>
		<li>Sele o tubo de conexão da unidade PRP-L com um selador de saco.</li>
	</ol></li>
	<li>Alíquota PRP-L NOTA: Uma unidade de partida contendo 190 ml de PRP (ver passo 1.3.3.) é suficiente para preencher dois kits de colírios (para obter detalhes sobre os dispositivos médicos específicos utilizados para a aplicação e preservação de colírios de componentes sanguíneos, consulte a Tabela de Materiais). Os kits de colírios devem ser abertos sob um exaustor de classe II com os frascos para injetáveis de corda inteiros posicionados acima da seringa pré-ligada e a seta central da torneira apontando para a esquerda para excluir o filtro antibacteriano.<ol><li>Recolher 30-60 ml de PRP-L com uma seringa estéril e ligar a seringa à ligação Luer/bloqueio na linha de enchimento.</li>
		<li>De acordo com as instruções do fabricante, gire a torneira pela metade de uma volta para abrir a linha entre a seringa contendo PRP-L e a seringa pré-conectada. Encha a seringa pré-ligada com PRP-L.</li>
		<li>Desligue a seringa PRP-L, feche a tampa do tubo da ligação luer/lock e rode a torneira para a posição original. Use a seringa do kit de colírios para encher os frascos para injetáveis com PRP-L.</li>
		<li>Repita o procedimento das etapas 2.3.1.-2.3.3. até que todos os frascos para injetáveis aplicadores estejam cheios. Certifique-se de que cada aplicador esteja devidamente preenchido e, em seguida, selá-los individualmente com um selador de sacos.</li>
		<li>Repita o procedimento com um novo kit de colírios.</li>
		<li>Utilizar uma pequena alíquota de PRP-L diluído residual para avaliar uma possível contaminação microbiana (ver passo 1.3.4.). NOTA: Se o líquido atingir acidentalmente o filtro antibacteriano no final da corda, a seringa de sucção pode opor-se à resistência, dificultando o enchimento. Para continuar o ciclo de enchimento, levante a seção final da corda por cerca de 5/6 alíquotas do filtro hidrofóbico antibacteriano no final da corda. Nesta posição, utilize uma nova seringa estéril (de 30 ml de volume) que já tenha sido preenchida com ar. Ligue a luer/trava feminina do filtro antibacteriano e pressione com força e repetidamente o êmbolo da seringa para remover todos os resíduos de componentes sanguíneos e tornar a membrana do filtro antibacteriano livre do líquido. Retire a seringa e encha os restantes frascos para injetáveis.</li>
	</ol></li>
	<li>Armazenamento PRP-L<ol><li>Rotule corretamente cada aplicador e coloque-os em um saco plástico. Rotule o saco plástico também, tomando o cuidado de destacar o grupo sanguíneo do doador.</li>
		<li>Armazenar a -80 °C por um período máximo de 24 meses antes da designação do paciente, de acordo com a lei italiana23 e as diretrizes24.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Dispensação de PRP-L
<ol><li>Realizar a designação do paciente de preferência combinando o grupo sanguíneo PRP-L. Entregue frascos para injetáveis aplicadores de PRP-L utilizando uma caixa fria e certifique-se de que cada frasco para injetáveis aplicador contém 1,45 ml de PRP-L, o que corresponde a aproximadamente 45 gotas. Instrua o paciente de que os frascos para injetáveis aplicadores podem ser armazenados nas casas dos pacientes por até 1 mês a -15 °C.</li>
</ol>

<ol><li>Everts, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-rich+plasma+and+platelet+gel%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Extra-Corporeal+Technology%22%5BJournal%5D)">Platelet-rich plasma and platelet gel: A review.</a> The Journal of Extra-Corporeal Technology. 38 (2), 174(2006).</li>
<li>Giannaccare, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+derived+eye+drops+for+the+treatment+of+cornea+and+ocular+surface+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion+and+Apheresis+Science%22%5BJournal%5D)">Blood derived eye drops for the treatment of cornea and ocular surface diseases.</a> Transfusion and Apheresis Science. 56 (4), 595-604 (2017).</li>
<li>Bernabei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-based+treatments+for+severe+dry+eye+disease%3A+The+need+of+a+consensus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Blood-based treatments for severe dry eye disease: The need of a consensus.</a> Journal of Clinical Medicine. 8 (9), 1478(2019).</li>
<li>Findlay, Q., Reid, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye+disease%3A+When+to+treat+and+when+to+refer%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+Prescriber%22%5BJournal%5D)">Dry eye disease: When to treat and when to refer.</a> Australian Prescriber. 41 (5), 160-163 (2018).</li>
<li>Clayton, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Dry eye.</a> New England Journal of Medicine. 378 (23), 2212-2223 (2018).</li>
<li>Jones, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TFOS+DEWS+II+management+and+therapy+report%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">TFOS DEWS II management and therapy report.</a> The Ocular Surface. 15 (3), 575-628 (2017).</li>
<li>Holland, E. J., Darvish, M., Nichols, K. K., Jones, L., Karpecki, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+topical+ophthalmic+drugs+in+the+treatment+of+dry+eye+disease%3A+A+systematic+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">Efficacy of topical ophthalmic drugs in the treatment of dry eye disease: A systematic literature review.</a> The Ocular Surface. 17 (3), 412-423 (2019).</li>
<li>Shih, K. C., Lun, C. N., Jhanji, V., Thong, B. Y. H., Tong, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+review+of+randomized+controlled+trials+in+the+treatment+of+dry+eye+disease+in+Sjogren+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Inflammation%22%5BJournal%5D)">Systematic review of randomized controlled trials in the treatment of dry eye disease in Sjogren syndrome.</a> Journal of Inflammation. 14, 26(2017).</li>
<li>Rusciano, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+dry+eye+lactoferrin+and+lactobionic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Research%22%5BJournal%5D)">Age-related dry eye lactoferrin and lactobionic acid.</a> Ophthalmic Research. 60 (2), 94-99 (2018).</li>
<li>Craig, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TFOS+DEWS+II+definition+and+classification+report%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">TFOS DEWS II definition and classification report.</a> The Ocular Surface. 15 (3), 276-283 (2017).</li>
<li>Drew, V. J., Tseng, C. L., Seghatchian, J., Burnouf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reflections+on+dry+eye+syndrome+treatment%3A+Therapeutic+role+of+blood+products%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Reflections on dry eye syndrome treatment: Therapeutic role of blood products.</a> Frontiers in Medicine. 5, 33(2018).</li>
<li>Giannaccare, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+derived+eye+drops+for+the+treatment+of+cornea+and+ocular+surface+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion+and+Apheresis+Science%22%5BJournal%5D)">Blood derived eye drops for the treatment of cornea and ocular surface diseases.</a> Transfusion and Apheresis Science. 56 (4), 595-604 (2017).</li>
<li>Acebes-Huerta, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-derived+bio-products%3A+Classification+update%2C+applications%2C+concerns+and+new+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion+and+Apheresis+Science%22%5BJournal%5D)">Platelet-derived bio-products: Classification update, applications, concerns and new perspectives.</a> Transfusion and Apheresis Science. 59 (1), 102716(2020).</li>
<li>Quartieri, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolomics+comparison+of+cord+and+peripheral+blood-derived+serum+eye+drops+for+the+treatment+of+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion+and+Apheresis+Science%22%5BJournal%5D)">Metabolomics comparison of cord and peripheral blood-derived serum eye drops for the treatment of dry eye disease.</a> Transfusion and Apheresis Science. 60 (4), 103155(2021).</li>
<li>Badami, K. G., McKellar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allogeneic+serum+eye+drops%3A+Time+these+became+the+norm%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Allogeneic serum eye drops: Time these became the norm.</a> British Journal of Ophthalmology. 96 (8), 1151-1152 (2012).</li>
<li>Hwang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+clinical+efficacies+of+autologous+serum+eye+drops+in+patients+with+primary+and+secondary+Sj%C3%B6gren+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Comparison of clinical efficacies of autologous serum eye drops in patients with primary and secondary Sjögren syndrome.</a> Cornea. 33 (7), 663-667 (2014).</li>
<li>Chiang, C. C., Lin, J. M., Chen, W. L., Tsai, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allogeneic+serum+eye+drops+for+the+treatment+of+severe+dry+eye+in+patients+with+chronic+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Allogeneic serum eye drops for the treatment of severe dry eye in patients with chronic graft-versus-host disease.</a> Cornea. 26 (7), 861-863 (2007).</li>
<li>Jonsdottir-Buch, S. M., Lieder, R., Sigurjonsson, O. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+lysates+produced+from+expired+platelet+concentrates+support+growth+and+osteogenic+differentiation+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Platelet lysates produced from expired platelet concentrates support growth and osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells.</a> PLoS One. 8 (7), 68984(2013).</li>
<li>Altaie, A., Owston, H., Jones, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+platelet+lysate+for+bone+regeneration+-+Are+we+ready+for+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Use of platelet lysate for bone regeneration - Are we ready for clinical translation.</a> World Journal of Stem Cells. 8 (2), 47-55 (2016).</li>
<li>Vesaluoma, M., Teppo, A. M., Grönhagen-Riska, C., Tervo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-derived+growth+factor-BB+%28PDGF-BB%29+in+tear+fluid%3A+A+potential+modulator+of+corneal+wound+healing+following+photorefractive+keratectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) in tear fluid: A potential modulator of corneal wound healing following photorefractive keratectomy.</a> Current Eye Research. 16 (8), 825-831 (1997).</li>
<li>Zheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+transforming+growth+factor+%CE%B2+activity+in+normal+and+dry+eye+human+tears+by+CCL-185+cell+bioassay%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the transforming growth factor β activity in normal and dry eye human tears by CCL-185 cell bioassay.</a> Cornea. 29 (9), 1048(2010).</li>
<li>Zamani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+therapeutic+approaches+in+utilizing+platelet+lysate+in+regenerative+medicine%3A+Are+we+ready+for+clinical+use%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Novel therapeutic approaches in utilizing platelet lysate in regenerative medicine: Are we ready for clinical use.</a> Journal of Cellular Physiology. 234 (10), 17172-17186 (2019).</li>
<li>Ministro della Salute. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disposizioni+relative+ai+requisiti+di+qualit%C3%A0+e+sicurezza+del+sangue+e+degli+emocomponenti%5BTitle%5D)+AND+%22Italian+Ministry+of+Health%22%5BJournal%5D)">Disposizioni relative ai requisiti di qualità e sicurezza del sangue e degli emocomponenti.</a> Italian Ministry of Health. , DECRETO 2 Novembre 2015 (2015).</li>
<li>Aprili, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Raccomandazioni+SIMTI+sugli+emocomponenti+per+uso+non+trasfusionale%5BTitle%5D)+AND+%22Societ%C3%A0+Italiana+di+Medicina+Trasfusionale+e+Immunoematologia%22%5BJournal%5D)">Raccomandazioni SIMTI sugli emocomponenti per uso non trasfusionale.</a> Società Italiana di Medicina Trasfusionale e Immunoematologia. , (2012).</li>
<li>Schiroli, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+two+alternative+procedures+to+obtain+packed+red+blood+cells+for+%CE%B2-thalassemia+major+transfusion+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Comparison of two alternative procedures to obtain packed red blood cells for β-thalassemia major transfusion therapy.</a> Biomolecules. 11 (11), 1638(2021).</li>
<li>Pulcini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apheresis+platelet+rich-plasma+for+regenerative+medicine%3A+An+in+vitro+study+on+osteogenic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">Apheresis platelet rich-plasma for regenerative medicine: An in vitro study on osteogenic potential.</a> International Journal of Molecular Science. 22 (16), 8764(2021).</li>
<li>Ohashi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+epidermal+growth+factor+in+human+tears%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Presence of epidermal growth factor in human tears.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 30 (8), 1879-1882 (1989).</li>
<li>Vitale, S., Goodman, L. A., Reed, G. F., Smith, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+NEI-VFQ+and+OSDI+questionnaires+in+patients+with+Sj%C3%B6gren%27s+syndrome-related+dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Health+Quality+of+Life+Outcomes%22%5BJournal%5D)">Comparison of the NEI-VFQ and OSDI questionnaires in patients with Sjögren's syndrome-related dry eye.</a> Health Quality of Life Outcomes. 2, 44(2004).</li>
<li>Schiffman, R. M., Christianson, M. D., Jacobsen, G., Hirsch, J. D., Reis, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reliability+and+validity+of+the+Ocular+Surface+Disease+Index%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Reliability and validity of the Ocular Surface Disease Index.</a> Archives of Ophthalmology. 118 (5), 615-621 (2000).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+platelet+lysate+compared+to+autologous+and+allogeneic+serum+eye+drops%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Characteristics of platelet lysate compared to autologous and allogeneic serum eye drops.</a> Translational Vision Science and Technology. 9 (4), 24(2020).</li>
<li>Henschler, R., Gabriel, C., Schallmoser, K., Burnouf, T., Koh, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+platelet+lysate+current+standards+and+future+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Human platelet lysate current standards and future developments.</a> Transfusion. 59 (4), 1407-1413 (2019).</li>
<li>Samarkanova, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+evaluation+of+allogeneic+eye+drops+from+cord+blood+platelet+lysate%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Transfusion%22%5BJournal%5D)">Clinical evaluation of allogeneic eye drops from cord blood platelet lysate.</a> Blood Transfusion. 19 (4), 347-356 (2021).</li>
<li>Strunk, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+Forum+on+GMP-grade+human+platelet+lysate+for+cell+propagation%3A+Summary%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sanguinis%22%5BJournal%5D)">International Forum on GMP-grade human platelet lysate for cell propagation: Summary.</a> Vox Sanguinis. 113 (1), 80-87 (2018).</li>
<li>Schiroli, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+COVID-19+outbreak+on+the+Transfusion+Medicine+Unit+of+a+Northern+Italy+Hospital+and+Cancer+Centre%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sanguinis%22%5BJournal%5D)">The impact of COVID-19 outbreak on the Transfusion Medicine Unit of a Northern Italy Hospital and Cancer Centre.</a> Vox Sanguinis. 117 (2), 235-242 (2021).</li>
<li>Klatte-Schulz, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+different+platelet+lysates+and+platelet+rich+preparations+to+stimulate+tendon+cell+biology%3A+An+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of different platelet lysates and platelet rich preparations to stimulate tendon cell biology: An in vitro study.</a> International Journal of Molecular Science. 19 (1), 212(2018).</li>
<li>Fea, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+autologous+platelet+lysate+eye+drops%3A+An+in+vivo+confocal+microscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">The effect of autologous platelet lysate eye drops: An in vivo confocal microscopy study.</a> BioMed Research International. 2016, 8406832(2016).</li>
<li>Abu-Ameerh, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+lysate+promotes+re-epithelialization+of+persistent+epithelial+defects%3A+A+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22International+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Platelet lysate promotes re-epithelialization of persistent epithelial defects: A pilot study.</a> International Ophthalmology. 39 (7), 1483-1490 (2019).</li>
<li>Geremicca, W., Fonte, C., Vecchio, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+components+for+topical+use+in+tissue+regeneration%3A+evaluation+of+corneal+lesions+treated+with+platelet+lysate+and+considerations+on+repair+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Transfusion%22%5BJournal%5D)">Blood components for topical use in tissue regeneration: evaluation of corneal lesions treated with platelet lysate and considerations on repair mechanisms.</a> Blood Transfusion. 8 (2), 107-112 (2010).</li>
<li>De Paiva, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+TGF-%CE%B2+signaling+improves+ocular+surface+epithelial+disease+in+experimental+autoimmune+keratoconjunctivitis+sicca%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Disruption of TGF-β signaling improves ocular surface epithelial disease in experimental autoimmune keratoconjunctivitis sicca.</a> PLoS One. 6 (12), 29017(2011).</li>
</ol>

Os autores declaram não haver conflitos de interesse.

Nos últimos anos, o uso clínico de produtos à base de plaquetas para patologias da superfície ocular tem aumentado, mas sua difusão é dificultada pela falta de robustez científica. Isso é causado principalmente pela ampla heterogeneidade nas fontes de doadores e nos protocolos de preparação, que muitas vezes não são totalmente divulgados ou não são projetados especificamente para o propósito para o qual são dispensados. Particularmente, ainda faltam informações sobre produtos à base de plaquetas coletados por aférese. Po...

Os produtos derivados do sangue são amplamente utilizados no cuidado de feridas1, cirurgia maxilofacial e ortopédica e para o tratamento de diferentes doenças da superfície ocular2, como a doença do olho seco (DED)3. Na DED, a homeostase do filme lacrimal é prejudicada como consequência do funcionamento anormal de diferentes fatores envolvidos na produção de lágrimas e na integridade da superfície ocular 4,5.
A DED é caracterizada por heterogeneidade de causas e gravidade 6,7,8 e pode ser consequência de diferentes fatores como envelhecimento, sexo9, lentes de contato, medicamentos tópicos ou sistêmicos 10 ou condições pré-existentes como a síndrome de Sjögren 10. Apesar de apresentar sintomas leves, a DED acomete milhões de pessoas em todo o mundo, impactando sua qualidade de vida e também o sistema de saúde6.
Muitos tratamentos têm sido relatados para essa patologia, mas ainda não há consenso sobre a solução mais eficaz12. Até o momento, as lágrimas artificiais são a primeira linha de terapia voltada para restaurar a composição aquosa do filme lacrimal, embora esses substitutos não contenham os principais solutos biologicamente ativos das lágrimas naturais 6,11. Os produtos à base de plaquetas são considerados uma alternativa válida12,13 às lágrimas artificiais, embora sua eficácia clínica, recomendações de uso e métodos de preparação ainda sejam motivo de debate3.
Os produtos à base de sangue compartilham com as lágrimas uma composição semelhante em termos de metabólitos14, proteínas, lipídios, vitaminas, íons, fatores de crescimento (GFs), compostos antioxidantes 11 e osmolaridade (300 mOsm/L)11. Por meio da atividade sinérgica de seus componentes, promovem a regeneração do epitélio corneano, inibem a liberação de citocinas inflamatórias e aumentam o número de células caliciformes e a expressão de mucinas na conjuntiva 2,3.
Até o momento, a heterogeneidade em produtos oftálmicos à base de sangue tem sido documentada na literatura; esses produtos podem ser classificados de acordo com a origem do doador de sangue, ou seja, autólogo ou alogênico, bem como a fonte sanguínea, ou seja, sangue periférico, sangue do cordão umbilical, soro ou plaquetas.
Embora os produtos autólogos tenham sido os mais difundidos3, os alogênicos estão se tornando a escolha preferida, uma vez que garantem maiores padrões de eficácia e segurança 15, juntamente com uma redução significativa nos custos16,17. Estudos prévios, de fato, comprovaram que produtos à base de sangue obtidos de pacientes com doenças autoimunes e/ou sistêmicas podem apresentar qualidade e funcionalidade alteradas 6,16,17. Apesar de os colírios à base de soro serem os mais difundidos, os produtos à base de plaquetas estão se firmando recentemente como uma alternativa válida, pois podem ser facilmente preparados mantendo níveis significativos de eficácia 3,11. Os produtos à base de plaquetas atualmente disponíveis podem ser divididos em plasma rico em plaquetas (PRP), lisado plasmático rico em plaquetas (PRP-L) e plasma rico em fatores de crescimento (PRGF)3.
Entre eles, o PRP-L tem a vantagem de ser um produto congelado de longa duração. O PRP-L pode ser preparado a partir de aférese, buffy-coats, ou mesmo de plaquetas expirantes (PLTs)18,19, reduzindo preciosamente seu desperdício. As alíquotas podem ser armazenadas por meses nos centros de transfusões de sangue a -80 °C ou mesmo nas casas dos pacientes a -15 °C por períodos mais curtos.
Os PRP-L são altamente enriquecidos em FGs, que comprovadamente estimulam a regeneração da superfície ocular 12,20,21. No entanto, são poucos os estudos clínicos relatados nessa área, e todos utilizaram fontes autólogas 3,22. O PRP-L ainda necessita de validação e caracterização adicionais antes de poder ser utilizado rotineiramente para o tratamento de doenças da superfície ocular, uma vez que não existem diretrizes padronizadas para sua preparação, dispensação e armazenamento3.
Neste documento, um protocolo detalhado é compartilhado para a produção de PRP-L usado na Unidade de Medicina Transfusional em AUSL-IRCCS di Reggio Emilia, Itália, e dispensação a pacientes com DED. Nosso objetivo é ajudar a comunidade científica a desenvolver métodos padrão de preparação, que possam aumentar a homogeneidade e a consistência em estudos e abordagens clínicas em todo o mundo.

<table><tbody><tr><td>Equipamentos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CompoSeal Mobilea II</td><td>Fresenius Kabi, Alemanha</td><td></td><td>seladora de sacos</td></tr><tr><td>HeraSafe hood Heraeus</td><td>Instruments, Alemanha</td><td></td><td>Classe II capa de risco biológico</td></tr><tr><td>MCS+ 9000 Sistema Móvel de Coleta de Plaquetas</td><td>Haemonetics, Itália</td><td></td><td>Equipamento automatizado de coleta de plasma e multicomponentes para doação de plaquetas, glóbulos vermelhos, plasma ou componentes sanguíneos combinados</td></tr><tr><td>Agitador de plaquetas, PF396i</td><td>Helmer, EUA</td><td></td><td>Agitador de plaquetas</td></tr><tr><td>Irradiador de sangue de raios X Raycell</td><td>MDS Nordion, Canadá</td><td></td><td>Irradiador de sangue de raios X</td></tr><tr><td>ROTIXA 50RS</td><td>Hettich Zentrifugen, Alemanha</td><td></td><td>Entrada de alta velocidade</td></tr><tr><td>Sysmex XS-1000i</td><td>Sysmex Europe GMBH, Alemanha</td><td></td><td>hemocitômetro para contagem de plaquetas</td></tr><tr><td>Banho quente, WB-M15</td><td>Falc Instruments, Itália</td><td></td><td>Banho quente</td></tr><tr><td><forte>Materiais</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ACD-A Solução anticoagulante A</td><td>Fenwal Inc., EUA</td> Solução anticoagulante <td>DIN 00788139</td><td>para aférese plaquetária (1000 ml)</td></tr><tr><td>BD BACTEC Peds Plus/F Frascos de cultura</td><td>BD Biosciences, EUA</td><td>BD 442020</td><td>Ensaio de esterilidade</td></tr><tr><td>BD BACTEC Peds Plus/F Frascos de cultura</td><td>BD Biosciences, EUA</td><td>442020</td><td>Pelo menos 2 frascos para ensaio de esterilidade</td></tr><tr><td>Seringa BD Luer Lok</td><td>BD Plastipack, EUA</td><td>300865</td><td>Pelo menos 4 seringas estéreis (50 ml)</td></tr><tr><td>Bio-Plex Human Cancer Panel 1</td><td>BioRad Laboratories, EUA</td><td>171AC500M</td><td>Painel padrão para avaliação</td></tr> <tr><td>de isoformas PDGFPainel de Câncer Humano Bio-Plex 2</td><td>BioRad Laboratories, EUA</td><td>171AC600M</td><td>Painel padrão para avaliação de EGF</td></tr><tr><td>Leitor Multiplex Bio-Plex MAGPIX</td><td>BioRad Laboratories, EUA</td><td>Magpix</td><td>Este instrumento permite vários imunoensaios usando esferas magnéticas funcionalizadas.</td></tr><tr><td>Ensaio Bio-Plex Pro TGF-b BioRad</td><td>Laboratories, EUA</td><td>10024984</td><td>Conjunto e padrões para avaliação de isoformas de TGFb</td></tr><tr><td>BioRet</td><td>ARIES s.r.l., Itália</td><td>A2DH0020</td><td>Pelo menos 4 pontas perfurantes para bolsas de sangue</td></tr><tr><td>Tubo de coleta de sangue</td><td>BD Vacutainer, EUA</td><td>367835</td><td>1 tubo, necessário para realizar a contagem de</td></tr> <tr><td>plaquetasKit de colírios. COL Dispositivo médico para aplicação e preservação de colírios de hemocomponentes</td><td>Biomed Device s.r.l., Itália</td> Kit de colírios <td>COLC50</td><td>. Pelo menos 2 kits para cada unidade de PRP coletada</td></tr><tr><td>Câncer Humano Conjunto PDGF-AB/BB 1x96 poços</td><td>BioRad Laboratories, EUA</td><td>171BC511</td><td>Conjunto para avaliação de isoformas PDGF</td></tr><tr><td>Câncer Humano2 Conjunto EGF 1x96 poços</td><td>BioRad Laboratories, EUA</td><td>171BC603M</td><td>Conjunto para avaliação EGF</td></tr><tr><td>Solução estéril NaCl 0,9%</td><td>Baxter S.p.A., Itália</td><td>B05BB01</td><td>1000 ml</td></tr><tr><td>Questionário OSDI</td><td>Allergan Inc., EUA</td><td>OSDI</td><td>Ocular Surface Disease Index Questionnaire</td></tr><tr><td>Piercing spike</td><td>BioRet ARIES s.r.l., Itália</td><td>BS051004</td><td>Spike</td></tr><tr><td>Plaqueta Additive Solution A+ T-PAS+</td><td>TERUMO BCT Inc., Itália</td><td>40842</td><td>solução conservante para concentrados de plaquetas (1000 ml)</td></tr><tr><td>Software Excel</td><td>Microsoft, USA</td><td>Excel</td><td>Software de análise de dados</td></tr><tr><td>Teruflex Bolsa de transferência 1000 ml</td><td>TERUMO BCT Inc., Itália</td><td>BB*T100BM</td><td>1 para diluição de PRP</td></tr><tr><td>Teruflex Saco de transferência 300 ml</td><td>TERUMO BCT Inc., Itália</td><td>BB*030CM</td><td>Pelo menos 6 para cada unidade de PRP coletada</td></tr></tbody></table>

lisado plasmático rico em plaquetas para tratamento de doenças da superfície ocular

Platelet-Rich Plasma Lysate for Treatment of Eye Surface Diseases

Várias doenças da superfície ocular são tratadas com colírios derivados do sangue. Seu uso foi introduzido na prática clínica por causa de seu conteúdo de metabólito e fator de crescimento, o que promove a regeneração da superfície ocular. Os colírios à base de sangue podem ser preparados a partir de diferentes fontes (ou seja, doação de sangue total ou aférese plaquetária), bem como com diferentes protocolos (por exemplo, diferentes diluições e ciclos de congelamento/descongelamento). Essa variabilidade dificulta a padronização dos protocolos clínicos e, consequentemente, a avaliação de sua eficácia clínica. O pormenor e a partilha dos procedimentos metodológicos podem contribuir para a definição de orientações comuns. Nos últimos anos, os produtos alogênicos vêm se difundindo como alternativa aos tratamentos autólogos, uma vez que garantem maiores padrões de eficácia; entre eles, os colírios de lisado plasmático rico em plaquetas (PRP-L) são preparados com procedimentos de fabricação simples. Na unidade de medicina transfusional da AUSL-IRCCS di Reggio Emilia, Itália, o PRP-L é obtido a partir da doação de aférese plaquetária. Este produto é inicialmente diluído a 0,3 x 10 9 plaquetas/mL (a partir de uma concentração média de 1 x 10 9 plaquetas/mL) em NaCl a0,9%. As plaquetas diluídas são congeladas/descongeladas e, posteriormente, centrifugadas para eliminar detritos. O volume final é dividido em alíquotas de 1,45 mL e armazenado a -80 °C. Antes de serem dispensados aos pacientes, os colírios são testados quanto à esterilidade. Os pacientes podem armazenar lisados plaquetários a -15 °C por até 1 mês. A composição do fator de crescimento também é avaliada a partir de alíquotas selecionadas aleatoriamente, e os valores médios são relatados aqui.

A justificativa para o uso de colírios derivados do soro (que é o produto à base de sangue mais frequentemente usado para o tratamento de doenças da superfície ocular) reside em seu conteúdo de GFs, que são quase completamente derivados de plaquetas circulantes. O PRP contém um número significativamente maior de plaquetas (e, consequentemente, de GFs derivados de plaquetas) em comparação com o soro do sangue periférico, variando entre 0,15 x 10 9-0,45 x 109 PLTs/mL. De acordo com as leis italianas, ...

Os lisados plaquetários representam uma ferramenta emergente para o tratamento de doenças da superfície ocular. Aqui, propomos um método para o preparo, dispensação, armazenamento e caracterização do lisado plaquetário coletado de doadores de plaquetas.

Lisado Plasmático Rico em Plaquetas para Tratamento de Doenças da Superfície Ocular

Various ocular surface diseases are treated with blood-derived eye drops. Their use has been introduced in clinical practice because of their metabolite ...

PRP Lysate é um produto emergente à base de plaquetas para o tratamento de doenças da superfície ocular. Aqui queremos compartilhar e detalhar nosso protocolo de produção para cobrir o desenvolvimento de diretrizes metodológicas comuns. Os produtos halogênicos têm se difundido como uma alternativa aos tratamentos autólogos.Uma vez que garantem padrões de eficácia mais elevados. PRP Lisado contém uma alta concentração de fatores de crescimento. Sua produção é barata e simples e pode ser armazenada por um longo período de tempo.O uso de hemoderivados para o tratamento de doenças oculares ou faciais está amplamente documentado na literatura. No entanto, as suas candidaturas ainda não encontraram um consenso. Uma das razões é a variabilidade dos métodos utilizados para a sua produção.Nosso objetivo é compartilhar nosso protocolo para desenvolver metodologias comuns. Para começar, realize uma contagem de plaquetas com um hemocistômetro usando a amostra coletada da bolsa principal através de um espigão perfurante. Diluir o plasma rico em plaquetas com uma quantidade adequada de cloreto de sódio estéril a 0,9%.Divida o plasma diluído rico em plaquetas em sacos coletores vazios de 300 mili

platelet-rich-plasma-lysate-for-treatment-of-eye-surface-diseases

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Lisado de plaquetas humanas é uma fonte rica em fatores de crescimento e um suplemento potente em cultura de células. Este protocolo apresenta o processo de preparação de um grande pool de lisado de plaquetas humanas por a partir de plasma rico em plaquetas, realizando diversos ciclos de congelamento e descongelamento e esgotando os fragmentos de plaquetas.

Preparação de pool de plaquetas Lysate Humanos (pHPL) como um suplemento eficiente para animais de soro livre de culturas de células estaminais humanas

Este vídeo demonstra a preparação de plasma rico em plaquetas (PRP) de alta qualidade por meio da triagem da contagem de plaquetas, coleta e centrifugação de sangue e isolamento de plaquetas. Este PRP é usado em aplicações terapêuticas para regeneração e cicatrização de tecidos.

Preparação de plasma rico em plaquetas a partir de sangue periférico humano

Implante infecção associada é uma complicação clínica significativa. Este estudo descreve uma abordagem utilizando plasma rico em plaquetas (PRP) para evitar as infecções associadas implante, apresenta o protocolo para a preparação de PRP com a concentração de plaquetas constante, e relata as propriedades antimicrobianas recentemente identificados de PRP e protocolos relacionados para examinar tais propriedades...

PRP como uma nova abordagem para prevenir a infecção: Preparação e<em&gt; In vitro</em&gt; Propriedades antimicrobianas do PRP

A Fibrina Rica em Plaquetas Leucocitárias (L-PRF) representa uma preparação aprovada pela FDA de concentrados de plaquetas autólogos que possui arquitetura única de fibrina, plaquetas enriquecidas e fatores de crescimento abundantes. Aqui, apresentamos um protocolo para geração de L-PRF em consultório, bem como avaliamos suas propriedades mecânicas, incluindo testes uniaxiais e testes de resistência à retenção de sutura.

Caracterização de leucócito-rico em plaquetas de fibrina, A Novel Biomaterial

Osteoartrose do joelho é frequentemente visto no departamento de Ortopedia. Apresentamos em detalhe o processo de tratamento de osteoartrite do joelho inteiro com injeção de plasma rico em plaquetas, incluindo preparação, procedimentos e avaliação.

Preparação, procedimentos e avaliação da injeção de Plasma rico em plaquetas no tratamento da osteoartrose do joelho

Este protocolo apresenta um dispositivo que produz PRP para impulsionar a expansão in vitro de células em um sistema de cultura de fibroblastos 100% autólogo.

Produção de Plasma Autólogo Rico em Plaquetas para Impulsionar a Expansão In Vitro de Fibroblastos Humanos

O primata não humano (NHP) é um modelo ideal para estudar a terapêutica celular da retina humana devido às semelhanças anatômicas e genéticas. Este manuscrito descreve um método de transplante submacular de células epiteliais de pigmento retiniano no olho nHP e estratégias para prevenir complicações intraoperatórias associadas à manipulação macular.

Transplante de Epitélio de Pigmento De Retina em um modelo de primata não humano para doenças degenerativas da retina

Este artigo descreve um protocolo para simplificar o processo e tornar a preparação de soro condicionado autólogo (SCA) menos dispendiosa. Não são necessárias seringas especiais ou contas de vidro revestidas de superfície. Além disso, a SCA modificada (mACS) apresenta vantagens competitivas sobre o soro autólogo convencional na cicatrização de feridas corneanas de olhos murinos ex vivo.

Produção de Soro Autólogo Condicionado Modificado e Avaliação Ex Vivo de seu Potencial de Cicatrização em Epitélio Corneano Murino

A formação de plaquetas pró-coagulantes tem sido correlacionada com um risco aumentado de trombose. Apresenta-se aqui um protocolo preciso para isolar plaquetas lavadas do sangue humano, destinado a quantificar a exposição à fosfatidilserina e a liberação de microvesículas, que são características distintivas das plaquetas pró-coagulantes.

Caracterização de plaquetas pró-coagulantes medindo a exposição à fosfatidilserina e a liberação de microvesículas de plaquetas purificadas humanas

O plasma rico em plaquetas (PRP) é usado no tratamento de distúrbios musculoesqueléticos equinos. Diferentes técnicas produzem PRP com concentrações variadas de plaquetas e leucócitos. Este artigo descreve um método para obter PRP a partir de sangue de cavalo.

Um método simples de tubo de centrifugação dupla para obter plasma rico em plaquetas do sangue equino

Aprenda a preparar lisado plasmático rico em plaquetas para tratar doenças da superfície ocular. Este protocolo detalha coleta, caracterização e armazenamento do produto alogênico.

Lisado Plasmático Rico em Plaquetas para Tratamento de Doenças da Superfície Ocular

Explorar mais vídeos