Combinando Microscopia Confocal de Reflectância com Tomografia de Coerência Óptica para Diagnóstico Não Invasivo de Cânceres de Pele via Aquisição de Imagem

Este protocolo detalha as etapas de aquisição de imagens para dispositivos RCM e RCM-OCT à beira do leito. A aquisição de imagens de boa qualidade é essencial para o correto diagnóstico e manejo das lesões cutâneas. Esses dispositivos capturam imagens da pele em resolução histopatológica in vivo, poupando biópsias benignas desnecessárias durante a detecção precoce de cânceres de pele.

O diagnóstico é feito à beira do leito, reduzindo o tempo de espera e a ansiedade dos pacientes. A aquisição de imagens com este microscópio nos ajuda a orientar de forma não invasiva a detecção e o diagnóstico de lesões de pele e cânceres de pele em pacientes à beira do leito. Além disso, a imagem nos ajuda a triar as lesões de pele entre aquelas que podem ser superficiais versus aquelas que podem ser mais profundas, o que ajuda a orientar o tratamento.

Assim, a imagem nos ajuda a integrar ou combinar diagnóstico e tratamento em uma única visita ao paciente, o que agora está sendo chamado de paradigma de atendimento ao paciente em balcão único. Além de usar a imagem para detectar e diagnosticar lesões de pele e cânceres de pele, também estamos usando a imagem para orientar a detecção e o diagnóstico de lesões orais e cânceres orais em pacientes. Quem demonstrará o procedimento será a Sra. Ucalene Harris, histotécnica do meu laboratório.

Para começar, selecione o dispositivo WP-RCM para lesões localizadas nas superfícies planas da pele, como tronco e extremidades, e o dispositivo HH-RCM para lesões em superfícies curvas, como nariz, lóbulos da orelha, pálpebras e genitália. Para exames de imagem, posicione o paciente em uma cadeira totalmente reclinável ou em uma mesa de exame plana com apoio. Em seguida, limpe a lesão e a pele circundante com um lenço de álcool.

Adicione uma gota de óleo mineral ao centro da janela de plástico e espalhe-a cuidadosamente pela largura da janela. Retire o livro de bolso do lado adesivo da janela, estique a pele suavemente e prenda a janela. Para aquisição de imagens com o dispositivo WP-RCM, posicione a sonda perpendicularmente à lesão.

Em seguida, adquira imagens dermatoscópicas passando a sonda WP-RCM sobre a tampa plástica da janela e estime o melhor ângulo de inserção para a sonda. Alinhe a pequena seta branca localizada na lateral da sonda com a seta na lateral da câmera de dermatoscopia. Insira a câmera de dermatoscopia na tampa plástica da janela.

Certifique-se de que a imagem do dermatoscópio cubra toda a superfície da lesão e pressione o gatilho da câmera para obter uma imagem. Em seguida, remova o dermatoscópio. Em seguida, coloque uma quantidade de gel de ultrassom do tamanho de uma ervilha dentro da tampa plástica descartável.

Insira a sonda RCM na tampa plástica descartável até ouvir um clique nítido. Utilizando a imagem dermatoscópica adquirida na etapa anterior, selecione o centro da lesão e identifique a camada mais superficial ou brilhante da pele, que é a camada anuclear do estrato córneo. Defina a profundidade da imagem como zero nesse nível.

Pressione o ícone de pilha para adquirir uma pilha no centro da lesão. No menu suspenso, selecione um local anatômico, seja rosto ou corpo. Defina o tamanho do passo para 4,5 mícrons e a profundidade para 250 mícrons.

Identifique a junção dermoepidérmica, ou camada de DEJ na pilha e selecione um quadrado de 8x8 milímetros para cobrir toda a lesão. Em seguida, pressione o ícone de mosaico para adquirir o primeiro mosaico no DEJ. Para adquirir mosaicos subsequentes, clique em uma estrutura no mosaico DEJ para visualizá-la na visualização ao vivo.

Role para baixo do DEJ para adquirir mosaicos na derme e, em seguida, para cima do DEJ para tomar mosaicos na epiderme. Capturar uma pilha em cada quadrante e outra no centro da lesão com padrão homogêneo na dermatoscopia, ou adquirir pilhas adicionais para lesões heterogêneas. Após completar uma sessão de imagem, retire o cone protetor ao redor da lente do microscópio.

Limpe a ponta da lente objetiva com um cotonete com álcool e seque a lente. Reconecte o cone de plástico à sonda do microscópio. Para gerar um relatório de avaliação diagnóstica confocal, clique em Nova Avaliação.

Insira o diagnóstico nas opções pré-selecionadas no menu suspenso. Selecione os recursos vistos durante a geração de imagens na lista de verificação do relatório e selecione o gerenciamento aplicável. Clique em Concluir e assinar.

Gere o relatório como PDF e imprima-o. para aquisição de imagens com o aparelho HH-RCM, primeiro posicionar o paciente e limpar o local da lesão e circundar a lesão com um anel de papel. Aplique uma quantidade de gel de ultrassom do tamanho de uma ervilha na lente objetiva do HH-RCM e cubra com a tampa plástica.

Adicione uma gota generosa de óleo mineral ao lado da tampa plástica que estará tocando a pele. Pressione a sonda para o lado da lesão na pele com pressão firme. Use os controles de profundidade Z no dispositivo HH-RCM para se mover para cima e para baixo em várias profundidades dentro da lesão.

Adquira várias imagens de quadro único e pilhas nas regiões de interesse. Para lesões grandes, faça vídeos contínuos em várias camadas movendo a sonda HH-RCM sobre toda a superfície da lesão e clicando no símbolo de captura de vídeo. Registre o movimento das células sanguíneas dentro dos vasos.

Depois que a sessão de geração de imagens for concluída, pressione Done Imaging. Limpe a lesão com um cotonete de álcool, retire o gel de ultrassom da lente objetiva da sonda e recoloque a tampa plástica. Posicione o paciente para exames de imagem e certifique-se de que o limite da lesão esteja livre de pelos excessivos e impurezas tópicas.

Depois de preparar a sonda conforme descrito na seção anterior, clique em Configurações de imagem. Selecione o modo Imagem de linha para adquirir uma imagem RCM. Defina o tamanho da etapa como cinco mícrons e o número de etapas como 40.

Adquira pilhas como mostrado na seção anterior clicando em Agarrar. Em seguida, clique no botão Congelar após a conclusão. Clique em Configurações de imagem e selecione Modo raster para adquirir um vídeo OCT correlacionado para a arquitetura da lesão.

Alterne para a guia técnico. Depois de concluído, clique no botão Agarrar e pressione imediatamente o botão Salvar. Usando este protocolo, imagens RCM de alta qualidade foram adquiridas em profundidades relevantes na pele.

Artefatos como bolhas de ar, detritos superficiais e artefatos de movimento que dificultam a avaliação diagnóstica devem ser evitados. Na MCR, várias camadas da pele foram observadas, como o estrato córneo, composto por queratinócitos anucleados, e o estrato espinhoso, composto por células nucleadas firmemente embaladas com citoplasma brilhante, criando um padrão típico de favo de mel. Seguiu-se o estrato basal, identificado pelo padrão de paralelepípedos formado pela capa de melanina dos queratinócitos basais.

E o DEJ caracterizado pelo padrão de anéis brilhantes. A derme papilar era composta por fibras colágenas brilhantes e vasos sanguíneos. Imagens de RCM para cânceres de pele comuns, como o carcinoma basocelular, mostraram nódulos tumorais com fissura e paliçada.

O carcinoma de células escamosas mostrou um padrão atípico de favo de mel e vasos de botoeira. E o melanoma mostrou aglomerados de células pagoides brilhantes e grandes e redondas na epiderme. Para o carcinoma basocelular, a imagem da RCM não foi capaz de mostrar um nódulo tumoral definitivo.

Já as imagens de RCM-OCT interpretadas por ambos os stacks e rasters mostraram um nódulo tumoral cinza distinto conectado à epiderme, juntamente com fendas e feixes de colágeno espessados. O diagnóstico foi confirmado por H&E Stained Biopsy. É importante adquirir mosaicos de qualidade diagnóstica de cinco camadas da pele com o WP-RCM Imaging.

Faça um vídeo suave e pilhas usando HH-RCM, e uma pilha e um raster na mesma área usando o dispositivo RCM-OCT.