Name: Injeções intravítreas no olho ovino (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 37 s
Description: Aprenda a realizar injeções intravítreas em olhos de ovinos para terapia gênica na retina. Este protocolo demonstra uma abordagem menos invasiva para tratar degeneração retiniana em modelos animais.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Os autores gostariam de agradecer ao Dr. Steve Heap (BVSc, CertVOphthal) por sua assistência no estabelecimento desse protocolo e na realização das injeções descritas por Murray et al.15. Os autores também reconhecem o financiamento da CureKids New Zealand, da Canterbury Medical Research Foundation, da Neurogene Inc e da Batten Disease Support and Research Association.

Todos os protocolos experimentais foram aprovados pelo comitê de Ética Animal da Universidade Lincoln e estão de acordo com as diretrizes dos Institutos Nacionais de Saúde dos EUA para o cuidado e uso de animais em pesquisa e com a Lei de Bem-Estar Animal da Nova Zelândia (1999). As ovelhas Borderdale foram diagnosticadas ao nascer14 e mantidas em fazendas de pesquisa da Universidade Lincoln. Três ovelhas homozigotas (CLN5-/-) de 3 meses de idade receberam uma única injeção de TVI no olho esquerdo, com o olho direito não tratado atuando como um controle interno. Os dados de eletrorretinografia e patologia foram comparados com os dados históricos de controle saudável e afetado. O vetor viral utilizado neste estudo foi um sorotipo 9 de vírus adenoassociado autocomplementar, contendo o promotor de ação beta de frango (CBh) e o ovino CLN5 otimizado para códons (scAAV9/CBh-oCLN5opt). O vetor viral foi fornecido pelo University of North Carolina Vector Core, NC, EUA.
1. Pré-cirurgia
<ol><li>Autoclave o kit cirúrgico (Figura 1).</li>
	<li>Jejue as ovelhas por 24 h antes da cirurgia.</li>
	<li>Registre pesos vivos antes da cirurgia.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63823/63823fig01.jpg"> Figura 1: Kit de cirurgia intravítrea. Os instrumentos necessários para a cirurgia de TVI incluem (1) um espéculo para manter as pálpebras abertas e (2) um par de pinças de nariz curvo para agarrar a conjuntiva bulbar e girar o olho. (3) Um hemostato de nariz reto também é incluído como um instrumento alternativo para segurar a conjuntiva bulbar e manter o olho no lugar se ele tiver revertido para a órbita do olho. Este kit é autoclavado antes da cirurgia. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63823/63823fig01large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
2. Procedimento cirúrgico
<ol><li>Restrinja o animal e, usando cortadores eletrônicos, raspe a lã de um lado do pescoço sobre a veia jugular.</li>
	<li>Ocluir a veia jugular aplicando pressão na base do sulco jugular e visualizar a veia levantada.</li>
	<li>Recolher a quantidade adequada de diazepam (0,3 mg/kg) e cetamina (7,5 mg/kg) numa seringa estéril e colocar uma agulha estéril de 20 G. Insira a agulha na veia jugular e retire suavemente o êmbolo para garantir que o sangue entre no cubo e a agulha esteja dentro da veia. Uma vez confirmado, induzir através de administração intravenosa (jugular).</li>
	<li>Imediatamente após a indução, coloque o animal em decúbito dorsal, estenda o pescoço e segure a língua para cima e para frente, usando um laringoscópio para visualizar a laringe. Realizar a intubação endotraqueal inserindo suavemente um tubo endotraqueal (tamanho 6,0-9,0, dependendo do tamanho da ovelha) entre as cordas vocais quando o animal expirar. Inflar o manguito endotraqueal imediatamente e prender o tubo com uma gravata ao redor da mandíbula inferior. Confirme o fluxo de ar através do tubo.</li>
	<li>Transfira o ovino para a mesa cirúrgica e coloque-o em decúbito lateral.</li>
	<li>Conecte imediatamente o tubo endotraqueal às mangueiras da máquina anestésica para a entrega de isoflurano em oxigênio a 100%. Inicialmente comece com 3%-4% de isoflurano e, em seguida, reduza para 2%-3% para manutenção. Observe a ventilação espontânea dos ovinos.</li>
	<li>Monitore a frequência cardíaca (pulso), a frequência respiratória, a saturação de oxigênio, os níveis de CO2 no final da maré e a temperatura corporal retal durante todo o procedimento. Veja a Tabela 1 para valores fisiológicos para esses parâmetros em ovinos anestesiados (variável, mas uso como orientação).</li>
	<li>Coloque uma cortina grande, estéril e quadrada em um carrinho cirúrgico, seguido pelos instrumentos estéreis.</li>
	<li>Posicione uma cortina cirúrgica estéril e fenestrada sobre o olho a ser injetado.</li>
	<li>Desinfete assepticamente o olho usando uma seringa estéril de 20 mL para irrigar o olho com solução de iodopovidona a 1-5%.</li>
	<li>Aplicar 1-2 gotas de Alcaine 0,5% W/V solução oftálmica, como um anestésico local, para o olho.</li>
	<li>Encaixe um espéculo ocular Nopa Barraquer-Colibri (10 mm) nas pálpebras para manter o olho aberto.</li>
	<li>Segure a conjuntiva bulbar na face dorsolateral do olho com fórceps e gire o globo ocular ventromedialmente.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td>
			<td>Consciente</td>
			<td>Anestesiado</td>
			<td>Ponto crítico de intervenção recomendado</td>
		</tr><tr><td>Frequência cardíaca (batimentos/min)</td>
			<td>50-80 (repouso) a 280 (ativo)</td>
			<td>50-80</td>
			<td>&lt;50, &gt;100</td>
		</tr><tr><td>Frequência respiratória (respirações/min)</td>
			<td>15-40 (descanso) a 350 (superaquecido)</td>
			<td>10-30</td>
			<td>&lt;8, &gt;40</td>
		</tr><tr><td>Saturação de oxigênio (mm Hg)</td>
			<td>95-100</td>
			<td>98-100</td>
			<td>&lt;90</td>
		</tr><tr><td>CO2 da maré final (mm Hg)</td>
			<td>35-45</td>
			<td>35-45</td>
			<td>&gt;55</td>
		</tr><tr><td>Temperatura corporal (°C)</td>
			<td>38.5-39.5</td>
			<td>38.5-39.5</td>
			<td>36 &lt; de &gt;40</td>
		</tr></tbody></table>Tabela 1: Valores fisiológicos dos parâmetros a serem monitorados em ovinos anestesiados.
3. Preparação viral
<ol><li>Armazenar alíquotas vetoriais AAV a -80 °C até o uso.</li>
	<li>No dia da cirurgia, descongele o número necessário de frascos para entrega de IVT no gelo.</li>
	<li>Imediatamente antes da administração, o vórtice da alíquota do vetor viral e centrifugar a 400 × g por 10 s para coletar o conteúdo.</li>
	<li>Diluir cada alíquota do vetor viral em solução salina tamponada com fosfato (PBS) filtrada estéril 1x para a dose desejada em um volume final de 100 μL. Prepare diluições vetoriais em um tubo de microcentrífuga estéril de 1,5 mL de baixa ligação a proteínas usando pontas de pipeta de filtro estéreis. Eliminar todos os consumíveis que tenham estado em contacto com o vector viral em solução desinfetante (ver Tabela de Materiais). NOTA: Na publicação original15 a dose do agente terapêutico (AAV9. CLN5) foi de 1,9 x 1010 genomas virais. A dosagem recomendada irá variar dependendo do agente terapêutico que está sendo administrado; portanto, uma dosagem não foi incluída no protocolo padrão aqui apresentado.</li>
	<li>Retirar todos os 100 μL da preparação do vetor AAV para uma seringa estéril de 1 ml com um 28 G x 1/2 permanentemente ligado em agulha para injeção imediata. Certifique-se de que o período de tempo entre a preparação e a injeção é inferior a 2 minutos.</li>
</ol>4. Administração viral
<ol><li>Inserir a agulha aproximadamente 7 mm posterior à esclera na face lateral do olho e inclinada posteriormente para evitar o cristalino (Figura 2 e Figura 3). Administrar a injeção única de 100 μL em bolus o mais próximo possível da retina sem perturbar a superfície da retina.</li>
	<li>Enxaguar o olho com aproximadamente 10-15 mL de solução de iodopovidona a 1-5%, seguido de 10 mL de solução salina antes da remoção do espéculo e da cortina.</li>
	<li>Vire as ovelhas e repita com o outro olho, se necessário.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63823/63823fig02.jpg"> Figura 2: Rotação ventromedial do globo ocular . (A) Segure a conjuntiva bulbar com pinça não dentada e (B) gire ventromedialmente (ou seja, para baixo e em direção ao focinho) para expor a superfície dorsolateral do olho para injeção. Abreviaturas: V = ventral, D = dorsal, M = medial, L = lateral. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63823/63823fig02large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63823/63823fig03.jpg"> Figura 3: Localização e profundidade da injeção. A agulha é injetada no aspecto dorsolateral do globo ocular e todo o comprimento do eixo da agulha (0,5 pol/12,7 mm) é inserido no olho. Observe o ângulo da agulha em direção à parte posterior do olho para evitar a lente e injete o mais próximo possível da retina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63823/63823fig03large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
5. Manejo pós-operatório
<ol><li>Após a conclusão do procedimento, pare a anestesia por inalação de gás isoflurano, lave a linha com oxigênio a 100%, desconecte a mangueira do tubo endotraqueal e transfira as ovelhas para a sala de recuperação.</li>
	<li>Coloque as ovelhas em decúbito esternal, com as pernas dobradas por baixo, e monitore até a recuperação completa. Certifique-se de que a boca do animal esteja livre de quaisquer obstruções.</li>
	<li>Quando o reflexo de deglutição for observado, esvazie parcialmente o manguito do tubo endotraqueal e remova suavemente o tubo da boca.</li>
	<li>Administrar um anti-inflamatório não esteroidal intramuscular no músculo bíceps femoral do membro posterior, antibióticos subcutâneos no lado do pescoço ou atrás do ombro e colírios de cloranfenicol a 0,5% na superfície do globo ocular.</li>
	<li>Forneça água e comida (pellets de luzerna e palha) uma vez que as ovelhas possam ficar desassistidas.</li>
	<li>Administrar 0,5% cloranfenicol colírio 2-3 por dia durante 7 dias após a cirurgia.</li>
	<li>Mantenha as ovelhas dentro de casa durante a noite antes de retornar ao piquete ao ar livre aproximadamente 24 horas após a cirurgia.</li>
	<li>Registre as temperaturas retais diariamente por 3 semanas. Monitore quaisquer alterações no pulso ou na frequência respiratória, consumo de alimentos, neurocomportamento, temperatura corporal, peso, postura, saúde ocular e sinais clínicos de problemas de saúde. Procure tratamento veterinário adequado se houver indícios de eventos adversos.</li>
</ol>6. Avaliação da eficácia in vivo
<ol><li>Se o objetivo da injeção de TVI for preservar a visão, monitore a eficácia in vivo por métodos como o teste de labirinto ou eletrorretinografia (ERG) para avaliar a função celular da retina ou a tomografia de coerência óptica (OCT) para avaliar a estrutura da retina. NOTA: Essas medidas de eficácia têm sido bem descritas após a terapia gênica comTVI 11,15,16.</li>
</ol>7. Análise de tecido post-mortem
<ol><li>Realizar a eutanásia de ovinos por um método aprovado em um desfecho apropriado após a cirurgia de injeção intravítrea. NOTA: Métodos de eutanásia sugeridos, como medicamentos veterinários intravenosos para eutanásia ou um parafuso cativo penetrante na coluna cervical seguido de exsanguinação rápida, são detalhados em outros lugares15,16.</li>
	<li>Colha globos oculares de ovelha usando tesouras curvas cirúrgicas afiadas/contundentes. Corte o canto lateral e medial para aumentar a abertura da cavidade ocular e, em seguida, corte sistematicamente as dobras conjuntivais, o tecido conjuntivo, os músculos e o nervo óptico para liberar o globo ocular da órbita.</li>
	<li>Imersão-fixação de globos oculares enucleados intactos em formalina a 10% por 2 h, seguida de pós-fixação em solução de Bouin por 4 h, fazendo um pequeno corte (0,5 cm) na esclera para permitir perfusão suficiente. Alternativamente, a imersão fixa os globos oculares na solução de Davidson por 48 h.</li>
	<li>Processe seções do tecido ocular através da incorporação e seccionamento de cera de parafina de rotina a 3-5 μm. NOTA: Procedimentos de coloração por coloração de hematoxilina e eosina (H&amp;E) e análise imuno-histoquímica já foram descritos anteriormente15,16.</li>
	<li>Avalie a eficácia no tecido post-mortem por medidas como espessura total da retina, espessura da camada da retina, contagens de fileiras celulares da camada nuclear externa e coloração imuno-histoquímica para tipos de células da retina, glia da retina ou proteínas de interesse. NOTA: Para protocolos para essas análises, ver publicações anteriores15,16.</li>
</ol>

<ol><li>Himawan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+delivery+to+retinal+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Discovery+Today%22%5BJournal%5D)">Drug delivery to retinal photoreceptors.</a> Drug Discovery Today. 24 (8), 1637-1643 (2019).</li>
<li>Murray, S. J., Mitchell, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+therapies+for+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%3A+More+than+meets+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Ocular therapies for neuronal ceroid lipofuscinoses: More than meets the eye.</a> Neural Regeneration Research. 17 (8), 1755-1756 (2022).</li>
<li>Bishop, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+macromolecules+and+supramolecular+organisation+of+the+vitreous+gel%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 19 (3), 323-344 (2000).</li>
<li>Grzybowski, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((update+on+intravitreal+injections%3A+Euretina+expert+consensus+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">update on intravitreal injections: Euretina expert consensus recommendations.</a> Ophthalmologica. 239 (4), 181-193 (2018).</li>
<li>Pavlou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+AAV+capsids+for+intravitreal+gene+therapy+of+photoreceptor+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Novel AAV capsids for intravitreal gene therapy of photoreceptor disorders.</a> EMBO Molecular Medicine. 13 (4), 13392(2021).</li>
<li>Kousi, M., Lehesjoki, A. -E., Mole, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+the+mutation+spectrum+and+clinical+correlations+of+over+360+mutations+in+eight+genes+that+underlie+the+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Mutation%22%5BJournal%5D)">Update of the mutation spectrum and clinical correlations of over 360 mutations in eight genes that underlie the neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Human Mutation. 33 (1), 42-63 (2012).</li>
<li>Wibbeler, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerliponase+alfa+for+the+treatment+of+atypical+phenotypes+of+CLN2+disease%3A+A+retrospective+case+series%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Child+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerliponase alfa for the treatment of atypical phenotypes of CLN2 disease: A retrospective case series.</a> Journal of Child Neurology. 36 (6), 468-474 (2021).</li>
<li>Schulz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+intraventricular+cerliponase+alfa+for+CLN2+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Study of intraventricular cerliponase alfa for CLN2 disease.</a> The New England Journal of Medicine. 378 (20), 1898-1907 (2018).</li>
<li>Mitchell, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+in+vivo+monitoring+of+the+CNS+demonstrates+the+efficacy+of+gene+therapy+in+a+sheep+model+of+CLN5+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Longitudinal in vivo monitoring of the CNS demonstrates the efficacy of gene therapy in a sheep model of CLN5 Batten disease.</a> Molecular Therapy. 26 (10), 2366-2378 (2018).</li>
<li>Murray, S. J., Mitchell, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+history+of+retinal+degeneration+in+ovine+models+of+CLN5+and+CLN6+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Natural history of retinal degeneration in ovine models of CLN5 and CLN6 neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Scientific Reports. 12 (1), 3670(2022).</li>
<li>Russell, K. N., Mitchell, N. L., Wellby, M. P., Barrell, G. K., Palmer, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroretinography+data+from+ovine+models+of+CLN5+and+CLN6+neuronal+ceroid+lipofuscinoses%5BTitle%5D)+AND+%22Data+in+Brief%22%5BJournal%5D)">Electroretinography data from ovine models of CLN5 and CLN6 neuronal ceroid lipofuscinoses.</a> Data in Brief. 37, 107188(2021).</li>
<li>Shafiee, A., McIntire, G. L., Sidebotham, L. C., Ward, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+determination+and+allometric+prediction+of+vitreous+volume%2C+and+retina+and+lens+weights+in+G%C3%B6ttingen+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Experimental determination and allometric prediction of vitreous volume, and retina and lens weights in Göttingen minipigs.</a> Veterinary Ophthalmology. 11 (3), 193-196 (2008).</li>
<li>Shinozaki, A., Hosaka, Y., Imagawa, T., Uehara, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topography+of+ganglion+cells+and+photoreceptors+in+the+sheep+retina%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Topography of ganglion cells and photoreceptors in the sheep retina.</a> The Journal of Comparative Neurology. 518 (12), 2305-2315 (2010).</li>
<li>Frugier, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+large+animal+model+of+CLN5+neuronal+ceroid+lipofuscinosis+in+Borderdale+sheep+is+caused+by+a+nucleotide+substitution+at+a+consensus+splice+site+%28c.571%2B1G%3EA%29+leading+to+excision+of+exon+3%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">A new large animal model of CLN5 neuronal ceroid lipofuscinosis in Borderdale sheep is caused by a nucleotide substitution at a consensus splice site (c.571+1G>A) leading to excision of exon 3.</a> Neurobiology of Disease. 29 (2), 306-315 (2008).</li>
<li>Murray, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravitreal+gene+therapy+protects+against+retinal+dysfunction+and+degeneration+in+sheep+with+CLN5+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Intravitreal gene therapy protects against retinal dysfunction and degeneration in sheep with CLN5 Batten disease.</a> Experimental Eye Research. 207, 108600(2021).</li>
<li>Ross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outer+retinal+transduction+by+AAV2-7m8+following+intravitreal+injection+in+a+sheep+model+of+CNGA3+achromatopsia%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Outer retinal transduction by AAV2-7m8 following intravitreal injection in a sheep model of CNGA3 achromatopsia.</a> Gene Therapy. , (2021).</li>
<li>Boyd, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor-targeted+gene+delivery+using+intravitreally+administered+AAV+vectors+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor-targeted gene delivery using intravitreally administered AAV vectors in dogs.</a> Gene Therapy. 23 (2), 223-230 (2016).</li>
<li>Dalkara, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo-directed+evolution+of+a+new+adeno-associated+virus+for+therapeutic+outer+retinal+gene+delivery+from+the+vitreous%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo-directed evolution of a new adeno-associated virus for therapeutic outer retinal gene delivery from the vitreous.</a> Science Translational Medicine. 5 (189), (2013).</li>
<li>Gearhart, P. M., Gearhart, C., Thompson, D. A., Petersen-Jones, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+visual+performance+with+intravitreal+administration+of+9-cis-retinal+in+Rpe65-mutant+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Improvement of visual performance with intravitreal administration of 9-cis-retinal in Rpe65-mutant dogs.</a> Archives of Ophthalmology. 128 (11), 1442-1448 (2010).</li>
<li>Ross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+photoreceptor+transduction+efficacy+of+capsid-modified+adeno-associated+viral+vectors+following+intravitreal+and+subretinal+delivery+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Evaluation of photoreceptor transduction efficacy of capsid-modified adeno-associated viral vectors following intravitreal and subretinal delivery in sheep.</a> Human Gene Therapy. 31 (13-14), 719-729 (2020).</li>
<li>Kotterman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+neutralization+poses+a+barrier+to+intravitreal+adeno-associated+viral+vector+gene+delivery+to+non-human+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Antibody neutralization poses a barrier to intravitreal adeno-associated viral vector gene delivery to non-human primates.</a> Gene Therapy. 22 (2), 116-126 (2015).</li>
<li>Whitehead, M., Osborne, A., Yu-Wai-Man, P., Martin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humoral+immune+responses+to+AAV+gene+therapy+in+the+ocular+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Humoral immune responses to AAV gene therapy in the ocular compartment.</a> Biological Reviews. 96 (4), 1616-1644 (2021).</li>
<li>Yun, C., Oh, J., Hwang, S. -Y., Kim, S. -W., Huh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subconjunctival+hemorrhage+after+intravitreal+injection+of+anti-vascular+endothelial+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Graefe%27s+Archive+for+Clinical+and+Experimental+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Subconjunctival hemorrhage after intravitreal injection of anti-vascular endothelial growth factor.</a> Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 253 (9), 1465-1470 (2015).</li>
<li>Christensen, L., Cerda, A., Olson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+measurement+of+needle+forces+and+acute+pressure+changes+during+intravitreal+injections%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Real-time measurement of needle forces and acute pressure changes during intravitreal injections.</a> Clinical & Experimental Ophthalmology. 45 (8), 820-827 (2017).</li>
<li>Allmendinger, A., Butt, Y. L., Mueller, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraocular+pressure+and+injection+forces+during+intravitreal+injection+into+enucleated+porcine+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Intraocular pressure and injection forces during intravitreal injection into enucleated porcine eyes.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 166, 87-93 (2021).</li>
<li>Ross, M., Ofri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+retinal+gene+therapy%3A+Evolving+from+subretinal+to+intravitreal+vector+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">The future of retinal gene therapy: Evolving from subretinal to intravitreal vector delivery.</a> Neural Regeneration Research. 16 (9), 1751-1759 (2021).</li>
<li>Henein, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrodynamics+of+intravitreal+injections+into+liquid+vitreous+substitutes%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Hydrodynamics of intravitreal injections into liquid vitreous substitutes.</a> Pharmaceutics. 11 (8), 371(2019).</li>
<li>Park, I., Park, H. S., Kim, H. K., Chung, W. K., Kim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+measurement+of+intraocular+pressure+variation+during+automatic+intravitreal+injections%3A+An+ex-vivo+experimental+study+using+porcine+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Real-time measurement of intraocular pressure variation during automatic intravitreal injections: An ex-vivo experimental study using porcine eyes.</a> PloS One. 16 (8), 0256344(2021).</li>
<li>Willekens, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravitreally+injected+fluid+dispersion%3A+Importance+of+injection+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Intravitreally injected fluid dispersion: Importance of injection technique.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (3), 1434-1441 (2017).</li>
<li>Peynshaert, K., Devoldere, J., De Smedt, S. C., Remaut, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+ex+vivo+models+to+study+drug+delivery+barriers+in+the+posterior+segment+of+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">In vitro and ex vivo models to study drug delivery barriers in the posterior segment of the eye.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 126, 44-57 (2018).</li>
<li>Kiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vector+Considerations+for+Ocular+Gene+Therapy.+Adeno-associated+virus+vectors+offer+a+safe+and+effective+tool+for+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Retinal+Physician%22%5BJournal%5D)">Vector Considerations for Ocular Gene Therapy. Adeno-associated virus vectors offer a safe and effective tool for gene delivery.</a> Retinal Physician. 17, 40-45 (2020).</li>
<li>Kleine Holthaus, S. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+targeting+the+inner+retina+rescues+the+retinal+phenotype+in+a+mouse+model+of+CLN3+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Gene therapy targeting the inner retina rescues the retinal phenotype in a mouse model of CLN3 Batten disease.</a> Human Gene Therapy. 31 (13-14), 709-718 (2020).</li>
<li>Kleine Holthaus, S. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+brain-directed+gene+therapy+rescues+a+mouse+model+of+neurodegenerative+CLN6+Batten+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Neonatal brain-directed gene therapy rescues a mouse model of neurodegenerative CLN6 Batten disease.</a> Human Molecular Genetics. 28 (23), 3867-3879 (2019).</li>
</ol>

Os autores não têm conflitos de interesse a divulgar.

As injeções intravítreas são um dos procedimentos cirúrgicos mais comuns na oftalmologia humana e provaram ser eficazes na administração de terapias genéticas mediadas por AAV para a retina de ovinos. Já havíamos demonstrado anteriormente a eficácia do AAV9. A terapia gênica com CLN5 foi administrada intravitrealmente na atenuação da disfunção e degeneração da retina em ovinos com CLN5 NCL15. Espera-se que a tradução desta via de administração para pacientes humanos com NCL também se mostre benéfi...

Vários métodos podem ser usados para fornecer agentes terapêuticos à retina, incluindo administração intravítrea (IVT), sub-retiniana, supracoroidal, periocular ou tópica. Cada via de administração envolve a superação de barreiras como a barreira sangue-retina ou as membranas limitantes internas e externas e tem taxas variadas de eficácia dependendo do fármaco a ser administrado e do alvo específico da retina 1,2.
A administração da droga IVT envolve uma injeção no humor vítreo do olho, uma substância gelatinosa que ocupa a câmara posterior do olho. A principal função do humor vítreo é manter a forma do globo ocular e manter os tecidos oculares, como a lente e a retina, no lugar. O humor vítreo é composto em grande parte de água, com pequenas quantidades de colágeno, ácido hialurônico e outras proteínas não colágenas3. A injeção de TVI é um procedimento simples e comum usado rotineiramente para tratar uma ampla gama de condições oculares, incluindo degeneração macular relacionada à idade, edema macular diabético, retinopatia diabética, oclusão da veia retiniana e várias distrofias hereditárias da retina 4,5.
Lipofuscinoses ceroides neuronais (NCL; Doença de Batten) é um grupo de doenças fatais de armazenamento lisossômico que causam degeneração grave do cérebro e da retina. Atualmente, existem 13 variantes conhecidas de NCL resultantes de mutações em diferentes genes (CLN1-8, CLN10-14) que afetam predominantemente crianças, mas têm idades variadas de início e gravidade da doença6. As NCLs compartilham sintomas progressivos comuns, incluindo declínio cognitivo e motor, convulsões e perda de visão. Não há cura para a NCL; no entanto, a terapia de reposição enzimática dirigida pelo cérebro está atualmente em ensaios clínicos para a doença CLN27,8, e a terapia gênica mediada por AAV tem se mostrado grande promessa em estudos pré-clínicos, com um ensaio clínico para a terapia gênica CLN5 esperado para começar em 2022 9,10.
Muitas outras espécies desenvolvem formas naturais de NCL, incluindo gatos, cães, ovelhas e vacas. Dois modelos ovinos de NCL estão atualmente em estudo ativo na Nova Zelândia: um modelo de doença CLN5 em ovinos de Borderdale e um modelo de doença CLN6 em ovinos de South Hampshire. Os ovinos afetados apresentam muitas das características clínicas e patológicas da doença humana, incluindo atrofia retiniana e perda de visão10,11. Embora a terapia gênica CLN5 dirigida pelo cérebro em ovinos com doença CLN5 possa prevenir ou deter a atrofia cerebral e o declínio clínico, as ovelhas tratadas ainda perdem a visão9. Isso evidenciou a necessidade de tratar a retina para preservar a visão e manter uma melhor qualidade de vida, levando ao estabelecimento de um protocolo de terapia gênica ocular em ovinos.
O olho de ovelha representa um bom modelo do olho humano devido à sua semelhança nas dimensões do globo ocular, volume vítreo e estrutura da retina10,12,13. Este trabalho detalha o protocolo cirúrgico para a administração de TVI de um pequeno volume (≤100 μL) de vetor viral terapêutico ao olho ovino.

<table><tbody><tr><td>Seringa de segurança de baixo espaço morto de 1 mL com agulha permanentemente anexada de 0,5 polegada</td><td>Fisher Scientific, Auckland, Nova Zelândia</td><td>05-561-28</td><td>Seringa de segurança Covidien Monoject Tuberculin ou tubo de</td></tr><tr><td>microcentrífuga similar de 1,5 mL Tubos de autoclave</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HS4323</td><td>para esterilizar antes do uso Máquina de</td></tr><tr><td>anestesia com banco de gás e monitor&nbsp;</td><td>Hyvet Anestesia, Christchurch, Nova Zelândia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Colírio antibiótico</td><td>Teva Pharma Ltd, Auckland, Nova Zelândia</td><td></td><td>Nome comercial: Chlorafast (0,5% cloranfenicol)</td></tr> <tr><td>BrightMount plus meio de montagem anti-desbotamento</td><td>Abcam, Cambridge, Reino Unido</td><td>ab103748</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4&prime; ,6-diamidino-2-fenilindol dicloridrato)</td> <td>Sigma Aldrich, St. Louis, Missouri, Estados Unidos</td><td>10236276001</td><td></td></tr><tr><td>Sedativo</td> <td>DiazepamIlium, Troy Laboratories Pty Ltd, Tauranga, Nova Zelândia</td><td></td><td>5 mg / mL</td></tr><tr><td>Tubos endotraqueais</td><td>Flexicare Medical Ltd, Mountain Ash, Reino Unido</td><td></td><td>Padrão, algemados. Tamanhos 7, 7.5, ou 8 dependendo do tamanho da ovelha</td></tr><tr><td>Espéculo ocular</td><td>Capes Medical Ltd, Tauranga, Nova Zelândia</td><td>KP151/14</td><td>Nopa Barraquer-Colibri (10 mm)</td></tr><tr><td>Campo cirúrgico fenestrado</td><td>Amtech Medical Ltd, Whanganui, Nova Zelândia</td><td>DI583</td><td>Ou similar&nbsp;</td></tr><tr><td>Dicas de Filtro</td><td>Interlab, Auckland, Nova Zelândia</td><td></td><td>10, 200 e 1.000 &micro; L&nbsp;</td></tr><tr><td>Solução de formaldeído (37%)</td><td>Fisher Scientific, Auckland, Nova Zelândia</td><td>AJA809-2.5PL</td><td>Faça até 10% em água destilada com 0.9% de NaCl</td></tr><tr><td>Anti-coelho de cabra Alexa Fluor 594</td><td>Invitrogen Carlsbad, CA, EUA&</td><td>nbsp; A-11012</td><td>Uso na diluição de 1:500</td></tr><tr><td>Anestésico Isoflurano</td><td>Attane, Bayer Animal Health, Auckland, Nova Zelândia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anestésico/analgésico Cetamina HCl</td><td>PhoenixPharm Distributors Ltd, Auckland, Nova Zelândia</td><td></td><td>Laringoscópio 100 mg/mL</td></tr><tr><td>(veterinário)</td><td>KaWe Medical, Dinamarca</td><td></td><td>Lâmina Miller C, tamanho 2</td></tr><tr><td>Agulhas&nbsp;</td><td>Capes Medical Ltd, Tauranga, Nova Zelândia</td><td>302025</td><td>BD Agulhas hipodérmicas, ou similar</td></tr><tr><td>Anti-inflamatório não esteróide</td><td>Boehringer Ingelheim (NZ) Ltd, Auckland, Nova Zelândia</td><td>49402/008</td><td>Nome comercial: Metacam 20 (20 mg/mL meloxicam)</td></tr><tr><td>Pinça não dentada</td><td>Capes Medical Ltd, Tauranga, Nova Zelândia</td><td>AB864/16</td><td>Ou similar&nbsp;</td></tr><tr><td>Hemostático não dentado</td><td>Capes Medical Ltd, Tauranga, Nova Zelândia</td><td>AA150/12</td><td>Ou similar&nbsp;</td></tr><tr><td>Soro de cabra normal</td><td>Thermo Fisher Scientific, Christchurch, Nova Zelândia</td><td>16210072</td><td></td></tr><tr><td>Oxigênio (médico)</td> <td>BOC Gas, Christchurch, Nova Zelândia</td><td></td><td>Cilindro D2, código de gás 180</td></tr><tr><td>Fosfato tampolado salino&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific, Christchurch, Nova Zelândia</td><td>10010023</td> Solução <td>estéril e filtrada</td></tr> de <tr><td>iodopovidona</td><td>Capes Medical Ltd, Tauranga, Nova Zelândia</td><td>005835</td><td>Nome comercial: Betadine (10% de iodopovidona)</td></tr> <tr><td>Proteína ácida fibrilar glial anti-vaca de coelho (GFAP)</td> <td>Dako, Glostrup, Dinamarca</td><td>Z0334</td><td>Use na diluição de 1: 2.500</td></tr><tr><td>Sorotipo 9 de vírus adeno-associado auto-complementar, contendo o promotor de ação beta de frango (CBh) e CLN5 ovino otimizado para códon</td><td>University of North Carolina Vector Core, NC, EUA.</td><td>scAAV9/CBh-oCLN5opt</td><td></td></tr><tr><td>Solução IV de Cloreto de Sódio 0,9%</td><td>Capes Medical Ltd, Tauranga, Nova Zelândia</td><td>AHB1322</td><td>Nome comercial: Solução salina</td></tr><tr><td>Antibióticos subcutâneos</td><td>Intervet Schering Plough Animal Health Ltd, Wellington, Nova Zelândia</td><td></td><td>Nome comercial: Duplocilina LA (150.000 UI/mL de penicilina procaína e 115.000 UI/mL de penicilina benzatina)</td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica afiada e curvada sem corte&nbsp;</td><td>Capes Medical Ltd, Tauranga, Nova Zelândia</td><td>SSSHBLC130</td><td></td></tr><tr><td>Seringa Terumo Luer Lock</td><td>Amtech Medical Ltd, Whanganui, Nova Zelândia</td><td>SH159/SH160</td><td>Seringas estéreis; 10 mL para a preparação de medicamentos de indução, 20 mL para a preparação de solução salina</td></tr><tr><td>Virkon Disinfectant Powder</td><td>EBOS Group Ltd, Christchurch, Nova Zelândia</td><td>28461115</td><td></td></tr></tbody></table>

injeções intravítreas no olho ovino

Intravitreal Injections in the Ovine Eye

Existem vários métodos para a entrega de agentes terapêuticos à retina, incluindo administração intravítrea (IVT), sub-retiniana, supracoroidal, periocular ou tópica. A administração da droga IVT envolve uma injeção no humor vítreo do olho, uma substância gelatinosa que preenche a câmara posterior do olho e mantém a forma do globo ocular. Embora a via IVT seja menos especificamente direcionada do que o parto sub-retiniano, é muito menos invasiva e é amplamente utilizada em ambientes clínicos para uma série de doenças oculares. 
Demonstramos anteriormente a eficácia da entrega intravítrea de um produto de terapia gênica mediado por vírus adenoassociado (AAV) (AAV9. CLN5) em ovinos com uma forma natural de CLN5 de lipofuscinose ceróide neuronal (NCL). As ovelhas afetadas receberam terapia genética IVT em um olho, com o outro olho não tratado servindo como um controle interno. A estrutura e a função da retina foram mantidas no olho tratado até 15 meses após o tratamento, enquanto o olho não tratado apresentou função progressivamente declinante e atrofia grave durante o exame post-mortem. Com base nos estudos com ovelhas, o produto de terapia genética CLN5 foi liberado como um candidato a novo medicamento experimental (IND) pela Food and Drug Administration dos Estados Unidos em setembro de 2021. Este trabalho detalha o protocolo cirúrgico para a entrega de TVI de um vetor viral terapêutico ao olho ovino.

A eficácia da administração de IVT de um vetor de terapia gênica CLN5 na atenuação da disfunção e degeneração da retina em ovinos com CLN5 NCL já foi demonstrada anteriormente por este grupo de pesquisa15. Os ovinos afetados receberam uma única injeção de 100 μL de TVI de CLN5 embalado em um vetor AAV sorotipo 9 (AAV9) (AAV9). CLN5) em um olho, com o olho contralateral servindo como um controle interno não tratado. A visão foi avaliada mensalmente desde a idade na injeção (3 meses) até a doença em...

Injeções intravítreas foram realizadas no olho de ovelha com o objetivo de fornecer terapia gênica mediada por vírus para a retina.

Injeções intravítreas no olho ovino

There are several methods for the delivery of therapeutic agents to the retina, including intravitreal (IVT), subretinal, suprachoroidal, periocular, or ...

Injeções intravítreas podem ser usadas para fornecer agentes terapêuticos à retina. Um protocolo para injeções intravítreas no olho de ovelha, como um modelo do olho humano, é apresentado aqui. As injeções intravítreas são muito menos invasivas do que outras injeções oculares.As injeções intravítreas podem ser usadas com sucesso para fornecer um produto de terapia genética e tratar a degeneração da retina em ovinos com lipofuscinoses ceroides neuronais que ocorrem naturalmente. Uma vez que a ovelha esteja anestesiada, comece a desinfetar assepticamente o olho a ser injetado, irrigando-o com 1 a 5% de solução de iodopovidona usando uma seringa de 20 mililitros. Em seguida, posicione uma cortina cirúrgica estéril e fenestrada sobre o olho.Encaixe um espéculo ocular nas pálpebras para manter o olho aberto. Segure a conjuntiva bulbar na face lateral dorsal do olho com fórceps e gire o globo ocular ventromedialmente. Insira a agulha aproximadamente sete milímetros posterior à esclera na face lateral do olho e inclinada posteriormente para evitar a lente.Administrar a injeção única de 100 microlitros como um bolus, o mais próximo possível da retina, sem perturbar a superfície da retina. Enxaguar o olho com aproximadamente 10 a 15 mililitros de 1 a 5% de solução de iodopovidona seguida de 10 mililitros de solução salina, antes de remover o espéculo e o drape. A análise eletrorretinográfica demonstrou a função retiniana preservada no olho tratado, enquanto o olho não tratado diminuiu de maneira semelhante aos animais afetados pela CLN5.A histologia da retina foi quase normalizada no olho tratado com uma espessura total da retina comparável a animais controle saudáveis na retina central. Em contraste, a espessura da retina não tratada foi comparável aos animais afetados pelo CLN5. A expressão da proteína glial fibrilar ácida, ou GFAP, um marcador de estresse retiniano e astroglia, foi menor nos olhos tratados do que nos olhos não tratados, indicando que a inflamação associada à doença foi atenuada após o tratamento.Com o estabelecimento de um protocolo para injeções intravítreas no olho de ovelha, as ovelhas agora podem ser usadas para testar a segurança e a eficácia de muitos agentes terapêuticos intravitríferos.

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Injeção intravítrea é uma técnica amplamente utilizada na pesquisa em ciências visuais para doenças oculares ou como a aplicação direta do tratamento local. Este vídeo demonstra um protocolo para a injeção intravítrea usando uma seringa de 1ml com vidro pipeta. Dicas úteis sobre como evitar sangramento maciço e danos lentes são dadas.

Injeção intravítrea para o Estabelecimento de Modelo de Doenças Ocular

Fonte: Park, S. W., et al. Abordagem límbica-injeção sub-retiniana de vetores virais para terapia gênica no epitélio pigmentar da retina de camundongos. J. Vis. Exp. (2015)O vídeo descreve o método de injeção sub-retiniana de vetores virais no epitélio pigmentar da retina (EPR) em um modelo de camundongo. Ele detalha o procedimento desde a anestesia e preparação ocular até a entrega precisa do vetor lentiviral, garantindo a integração e expressão do gene no EPR.

Injeção sub-retiniana de vetores virais no epitélio pigmentar da retina em um modelo de camundongo

Os coelhos são amplamente utilizados para estudar a farmacocinética de drogas intraoculares. Descrevemos um método para a realização de estudos farmacocinéticos de drogas intraoculares usando olhos de coelho.

Uso de olhos de coelhos em farmacocinéticas Estudos de intraoculares Drogas

Aqui vamos demonstrar uma nova abordagem para usando a tomografia de coerência óptica espectral-domínio de alta resolução (HR-SD-OCT) para auxiliar entrega de agentes de terapia do gene para o espaço subretinal, avaliar sua cobertura areal e caracterizar vitalidade fotoreceptor.

Tomografia de coerência óptica Mouse ultra alta resolução para auxiliar a injeção intra-ocular em pesquisa de terapia de genes da retina

Células epiteliais de pigmento retinal podem servir como uma terapia de reposição celular para a forma avançada de degeneration macular age-related seco. Este protocolo descreve a geração de um modelo de grandes olhos de atrofia geográfica e o subretinal transplante de células epiteliais de pigmento retinal embrionárias humanas células-tronco derivadas para este modelo de doença.

Subretinal transplante de células epiteliais de pigmento retinal derivado de células-tronco embrionárias humanas em um modelo de grandes olhos de atrofia geográfica

Descrevemos aqui um método de injeção intravitaliana e subsequente quantitação bacteriana no modelo de camundongos de endophthalmite bacteriana. Este protocolo pode ser estendido para medir as respostas imunes do hospedeiro e a expressão genética bacteriana e hospedeira.

Injeção intravitreal e quantitação de parâmetros de infecção em um modelo de rato de endophtalmite bacteriana

Neste manuscrito, a injeção subconjuntival é demonstrada como um método de entrega vetorial válido para tecidos oculares em camundongos usando um sistema de injeção que consiste em uma bomba de seringa de infusão/retirada e uma seringa removível à prova de gás acoplada a agulhas de microinjeção. Este sistema de injeção também é adaptável para outras vias de administração intraocular.

Administração Subconjuntival de Vetores de Vírus Adenoassociados em Modelos de Pequenos Animais

Este protocolo descreve uma técnica para injeção intracameral em ratos usando uma incisão central na córnea e um longo túnel na câmara anterior. Este método de injeção minimiza o risco de induzir danos inadvertidos ao tecido e, assim, melhora a precisão e a reprodutibilidade.

Injeção intracameral em ratos com baixo risco de efeitos adversos

Este protocolo descreve uma técnica única usando uma abordagem transconjuntival para acessar o nervo óptico de rato para injeções.

Abordagem transconjuntival para injeção no nervo óptico de rato

Este estudo apresenta uma metodologia para a administração de terapêutica na retina e nos nervos ópticos do rato adulto. Além disso, um método exclusivo de recuperação de tecido é introduzido para uma coleção em bloco de cima para baixo do nervo óptico e da retina em um rato adulto.

Entrega terapêutica ocular e recuperação avançada de tecidos em ratos adultos

Aprenda a realizar injeções intravítreas em olhos de ovinos para terapia gênica na retina. Este protocolo demonstra uma abordagem menos invasiva para tratar degeneração retiniana em modelos animais.

Injeções intravítreas no olho ovino

Explorar mais vídeos