Name: Isolamento de Preadipócitos de Embriões de Broiler Chick (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Aprenda a isolar preadipócitos de embriões de frango de corte com alta viabilidade e capacidade de diferenciação adipogênica. Este método permite estudar o desenvolvimento de gordura em modelos para aves e humanos.

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Os autores agradecem à UT AgResearch e ao Departamento de Zootecnia por apoiarem e otimizarem esse protocolo. Este trabalho foi financiado por subvenção do USDA.

<ol><li>Fryar, C. D., Carroll, M. D., Ogden, C. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFryar%2C+CD+%22Prevalence+of+overweight%2C+obesity%2C+and+severe+obesity+among+children+and+adolescents+aged+2-19+years%3A+United+States%2C+1963-1965+through+2015-2016%22">Prevalence of overweight, obesity, and severe obesity among children and adolescents aged 2-19 years: United States, 1963-1965 through 2015-2016</a>. , (2018).</li>
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<li>Farkas, K., Ratchford, I. A., Noble, R. C., Speake, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+size+and+docosahexaenoic+acid+content+of+adipocytes+during+chick+embryo+development%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids%22%5BJournal%5D)">Changes in the size and docosahexaenoic acid content of adipocytes during chick embryo development.</a> Lipids. 31 (3), 313-321 (1996).</li>
<li>Claver, J. A., Quaglia, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+morphology%2C+development%2C+and+function+of+blood+cells+in+nonmammalian+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Exotic+Pet+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparative morphology, development, and function of blood cells in nonmammalian vertebrates.</a> Journal of Exotic Pet Medicine. 18 (2), 87-97 (2009).</li>
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<li>Church, C. D., Berry, R., Rodeheffer, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+study+of+adipocyte+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Isolation and study of adipocyte precursors.</a> Methods in Enzymology. 537, 31-46 (2014).</li>
<li>Akbar, N., Pinnick, K. E., Paget, D., Choudhury, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+human+adipocyte-derived+extracellular+vesicles+using+filtration+and+ultracentrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of human adipocyte-derived extracellular vesicles using filtration and ultracentrifugation.</a> Journal of Visualized Experiments. (170), e61979(2021).</li>
<li>Perlman, D., Giuffre, N. A., Brindle, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Fungizone+in+control+of+fungi+and+yeasts+in+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Society+for+Experimental+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Use of Fungizone in control of fungi and yeasts in tissue culture.</a> Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 106 (4), 880-883 (1961).</li>
<li>Kuhlmann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prophylactic+use+of+antibiotics+in+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">The prophylactic use of antibiotics in cell culture.</a> Cytotechnology. 19 (2), 95-105 (1995).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Black+swimming+dots+in+cell+culture%3A+the+identity%2C+detection+method+and+judging+criteria%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Black swimming dots in cell culture: the identity, detection method and judging criteria.</a> bioRxiv. , 366906(2018).</li>
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</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Embora vários protocolos bem descritos tenham relatado o isolamento de pré-doenças 14,15,16,17, o isolamento para preadipócitos embrionários foi otimizado, o que pode ser usado para análises funcionais do crescimento e desenvolvimento de gorduras no início da vida. Este protocolo produz progenitores adipócidos embrionários de alta viabilidade com alto potencial de diferenciação. Além disso, o p...

A obesidade é uma ameaça à saúde global para adultos e crianças. Crianças com sobrepeso ou obesidade têm aproximadamente cinco vezes mais chances de serem obesas quando adultos, colocando-as em risco significativamente aumentado para doenças cardiovasculares, diabetes e muitas outras comorbidades. Cerca de 13,4% das crianças norte-americanas de 2 a 5 anos têm obesidade1, ilustrando que a tendência de acumular excesso de gordura corporal pode ser iniciada muito cedo na vida. Por razões muito diferentes, o acúmulo de excesso de tecido adiposo é uma preocupação para frangos de corte (tipo carne). Os frangos modernos são incrivelmente eficientes, mas ainda acumulam mais lipídios do que é fisiologicamente necessário 2,3. Essa tendência começa logo após o hatch e efetivamente desperdiça ração, o componente de produção mais caro, alocando-o longe do crescimento muscular. Portanto, tanto para crianças quanto para galinhas de corte, embora por razões muito diferentes, há a necessidade de entender fatores que influenciam o desenvolvimento de tecidos adiposos e identificar maneiras de limitar a expansão adiposa no início da vida.
Os adipócitos formam-se de pré-apócitos, células-tronco derivadas de tecido adiposo que sofrem diferenciação para desenvolver células de gordura maduras e armazenadas por lipídios. Assim, os pré-apócitos in vitro são um modelo experimental valioso para estudos de obesidade. Essas células, isoladas da fração vascular estromica dos depósitos adiposos, podem fornecer uma compreensão fundamental das vias moleculares que controlam a diferenciação de adipócitos e o metabolismo 4,5. Os embriões de pintinhos são um modelo experimental favorável em estudos de desenvolvimento porque a colheita de ovos no cronograma desejado facilita a manipulação experimental, pois permite a obtenção de embriões sem o sacrifício da mãe para observar uma série de estágios de desenvolvimento de embriões. Além disso, procedimentos cirúrgicos complicados e longos períodos de tempo não são necessários para obter embriões relativos a modelos animais maiores. Portanto, o embrião do filhote apresenta uma oportunidade de obter pré-nascidos desde os estágios iniciais do desenvolvimento do tecido adiposo. O tecido adiposo subcutâneo torna-se visível no filhote em torno do dia embrionário 12 (E12) como um depósito claramente definido localizado ao redor da coxa. Este depósito é enriquecido em pré-iadipócitos altamente proliferativos que passam ativamente por diferenciação sob pistas de desenvolvimento para formar adipócitos maduros 6,7. O processo de diferenciação adipogênica é comparável entre galinhas e humanos. Portanto, preadipócitos isolados de embriões de filhotes podem ser usados como modelo de dupla finalidade para estudos relevantes para humanos e aves. No entanto, o rendimento dos preadipócitos diminui com o envelhecimento à medida que as células crescem em adipócitos maduros5.
O presente protocolo otimiza o isolamento de pré-nascidos do tecido adiposo durante a etapa (E16-E18) em que a diferenciação adipogênica e a hipertrofia adipócite estão no seu auge em embriões de filhotesde corte 8. Este procedimento pode avaliar os efeitos de fatores aos quais o embrião em desenvolvimento está exposto no ovo, como a dieta da galinha, sobre o desenvolvimento de adipócitos e potencial adipogênico ex vivo. Também pode testar o impacto de várias manipulações (por exemplo, hipóxia, adições de nutrientes, agonistas farmacológicos e antagonistas) sobre adipogênese ou os vários 'omes (por exemplo, transcrito, metabolome, metilome) de progenitores adipócitos. Como representação do estágio inicial da formação adiposa, as células obtidas usando este protocolo são modelos valiosos para estudos relevantes para aves e seres humanos.

<table><tbody><tr><td>Pipeta de 1 mL</td><td>Eppendorf</td><td>Z683825</td><td>Pipeta de Canal Único, 100 - 1000 &micro; L</td></tr><tr><td>1 mL Ponta de Pipeta</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-707-402</td><td></td></tr><tr><td>100% Isopropanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A426P4</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>25 mL Frasco</td><td>Pyrex</td><td>4980-25</td><td></td></tr><tr><td>37% Formaldeído</td><td>Fisher Scientific</td><td>F75P-1GAL</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 6 Poços</td><td>Falcon</td><td>353046</td><td>Placa</td></tr><tr><td>de ensaio de 96 poços</td> tratada com cultura de tecidos <td>Costar</td><td>3632</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 96 poços, fundo preto</td><td>Costar</td><td>3603</td><td>Adipo tratado com cultura de</td></tr><tr><td>tecidosRed</td><td>Lonza</td><td>PT-7009</td><td></td></tr><tr><td>Anfotericina B</td><td>Gibco</td><td>15290026</td><td></td></tr><tr><td>Limpador de bancada (Kimtechwiper)</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Para cima e Up</td><td>NDC 1167300334</td><td>Solução de Trabalho 20%</td></tr><tr><td>Contador de Células</td><td>Corning</td><td>6749</td><td></td></tr><tr><td>Cell Strainer, 40 &micro; m</td><td>SPL</td><td>93040</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugaton</td><td>Eppendorf</td><td>5702</td><td></td></tr><tr><td>Soro de frango</td><td>Gibco</td><td>16110082</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga cônicos, 15 mL</td><td>VWR</td><td>10025-690</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga cônicos, 50 mL</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Cryovial</td><td>Nunc</td><td>343958</td><td></td></tr><tr><td>Pinça curva, 100 mm</td><td>Roboz Surgical</td><td>RS-5137</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura Cirúrgica Curva, 115 mm</td><td>Roboz Surgical</td><td>RS-6839</td><td></td></tr><tr><td>Água Destilada</td><td>Millipore</td><td>SYNSV0000</td><td>Despensed conforme necessário</td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>HyClone</td><td>SH30023.01</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Decon Labs</td><td>2701</td><td>70% Solução de Trabalho</td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino (FBS)</td><td>Microscópio</td> Fluorescente <td>Gibco 10437028</td><td></td></tr> Leitor de Placas <tr><td></td><td>Fluorescentes EVOS</td><td>M7000</td><td></td></tr><tr><td>Folha</td><td>Biotek</td><td>Synergy H1</td><td></td></tr><tr><td>Folha</td><td>Reynolds Reynolds</td><td></td><td>Wrap Folha de Alumínio Resistente, 125 PÉS QUADRADOS.</td></tr><tr><td>Recipiente de congelamento</td><td>Thermo Scientific</td><td>5100-0001</td><td></td></tr><tr><td>Gelatina</td><td>Millipore</td><td>4055</td><td>2% Solução de</td></tr><tr><td>Trabalho Hematocitômetro (Câmara de Contagem)</td> <td>Corning</td><td>480200</td><td>Incubadora de 0,1 mm de profundidade</td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>6845</td><td></td></tr><tr><td>Esterilizador de instrumentos</td><td>VWR</td><td>B1205</td><td></td></tr><tr><td>Ácido linoleico-oleico Ácido-Albumina</td><td>Sigma</td><td>L9655</td><td>1x Solução de</td></tr><tr><td>Trabalho Microscópio</td><td>Evos</td><td>AMEX1000</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta Multi-Canal</td><td>Thermo Scientific</td><td>4661070</td><td>12-Channel Pipetters, 30 - 300 &micro; L</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma</td><td>S-7907</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sigma</td><td>S-3139</td><td></td></tr><tr><td>NucBlue</td><td>Invitrogen</td><td>R37605</td><td></td></tr><tr><td>Óleo Vermelho O</td><td>Sigma</td><td>O-0625</td><td></td></tr><tr><td>Agitador Orbital</td><td>IKA</td><td>KS130BS1</td><td></td></tr><tr><td>Toalha de Papel</td><td>Tork</td><td>RK8002</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm Parafilm</td><td>M</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina/Steptomicina (P/S)</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>1x Placas de Petri de Solução de Trabalho</td></tr><tr>, Placas <td>de Petri</td><td>Falcon</td> 351029 <td></td>de<td>100 mm</td></tr><tr>, <td>Agitador</td><td>de Placas Falcon 351007</td><td></td><td>de 60 mm</td></tr><tr><td></td><td>VWR</td><td>200</td><td></td></tr><tr><td>RBC Lysis Buffer</td><td>Roche</td><td>11814389001</td><td></td></tr><tr><td>Reagent Reservior</td><td>VWR</td><td>89094-680</td><td></td></tr><tr><td>Copo Pequeno, 100 mL</td> Leitor de Placas de Espectrofotômetro <td>Pyrex</td><td>1000-100</td><td></td></tr> Gaze <tr><td>Estéril</td><td>McKesson</td><td>H1</td> da Biotek Synergy Pinça Reta McKesson 762703<td></td></tr>, <tr><td>120 mm</td><td>Roboz Surgical</td><td>RS-4960</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tesoura Reta, 140 mm</td><td>Roboz Surgical</td><td>RS-6762</td><td></td></tr><tr><td>T-25 Flask</td><td>Corning</td><td>430639</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora de Cultura de Tecidos</td> Tratada com Cultura <td>de Tecidos Thermo Scientific</td><td>50144906</td><td></td></tr><tr><td>Filtro de Tecidos, 250 &micro; m</td><td>Pierce</td><td>87791</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue Stain</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Gibco</td><td>15400054</td><td>0.1% Pinças de Solução de Trabalho</td></tr><tr><td>, 110 mm</td><td>Roboz Surgical</td><td>RS-5035</td><td></td></tr><tr><td>Tipo 1 Colagenase</td><td>Gibco</td><td>17100017</td><td></td></tr><tr><td>Banho-maria</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-462-10</td><td></td></tr><tr><td>Papel de Filtro Whatman Grau 1</td><td>Whatman</td><td>1001-110</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento de preadipócitos de embriões de broiler chick

Isolation of Preadipocytes from Broiler Chick Embryos

Pré-iadipócitos primários são um valioso sistema experimental para entender as vias moleculares que controlam a diferenciação e o metabolismo adipócitos. Embriões de frango oferecem a oportunidade de isolar os pré-idócitos do estágio inicial do desenvolvimento adiposo. Esta célula primária pode ser usada para identificar fatores que influenciam a proliferação de pré-doenças e a diferenciação adipogênica, tornando-as um modelo valioso para estudos relacionados à obesidade infantil e controle do excesso de deposição de gordura em aves de capoeira. O rápido crescimento do tecido adiposo pós-natal efetivamente desperdiça ração, alocando-o longe do crescimento muscular em frangos de corte. Portanto, métodos para entender os estágios iniciais do desenvolvimento de tecidos adiposos podem fornecer pistas para regular essa tendência e identificar maneiras de limitar a expansão adiposa no início da vida. O presente estudo foi concebido para desenvolver um método eficiente de isolamento, cultura primária e diferenciação adipogênica de pré-iadipócitos isolados do desenvolvimento de tecido adiposo de embriões de filhotes de frango comercial (tipo carne). O procedimento foi otimizado para produzir células com alta viabilidade (~98%) e capacidade aumentada de diferenciação em adipócitos maduros. Este método simples de isolamento, cultura e diferenciação pré-apócis embrionárias suporta análises funcionais de crescimento e desenvolvimento de gordura no início da vida.

Os pré-apócis primários são morfologicamente semelhantes aos fibroblastos, com formas irregulares, semelhantes a estrelas e um núcleo central (Figura 2A-C). As células prontamente aderem à cultura tecidual e começam a proliferar logo após o apego. Eles rapidamente se diferenciam e acumulam gotículas lipídicas (Figura 3D) quando fornecidos com ácidos graxos na mídia. A viabilidade (98%, baseada na exclusão de corantes) relatada n...

O presente protocolo descreve um método simples para isolar pré-apócitos do tecido adiposo em embriões de frango. Este método permite o isolamento com alto rendimento, cultura primária e diferenciação adipogênica de pré-apócitos. Manchas de óleo Vermelho O e mancha lipídica/DNA mediram a capacidade adipogênica de células isoladas induzidas com meios de diferenciação.

Isolamento de Preadipócitos de Embriões de Broiler Chick

Primary preadipocytes are a valuable experimental system for understanding the molecular pathways that control adipocyte differentiation and metabolism. ...

Pré-iadipócitos primários são um valioso sistema experimental para entender as vias moleculares que controlam o metabolismo de adipócitos. Os embriões de frango oferecem a oportunidade de isolar os preadipócitos do estágio inicial do desenvolvimento de adipócitos. Este método tem sido otimizado para produzir células com alta viabilidade e capacidade aumentada de diferenciação em adipócito maduro, que pode ser usado para análise funcional do crescimento precoce da gordura e desenvolvimento de embriões em filhotes.O processo de diferenciação adipogênica é altamente comparável entre galinhas e humanos. Portanto, preadipócitos isolados podem ser usados como modelo duplo proposto para estudos relevantes para humanos e aves. Para começar, limpe o corpo do embrião com 70% de etanol.Em seguida, para evitar interferência durante a filtragem em etapas posteriores após a digestão esfregou suavemente a superfície da pele com gaze estéril para remover penas. Em seguida, corte a pele entre as pernas e a região abdominal para revelar o par de depósitos de adiposos femorais. Use fórceps curvos com uma mão para segurar a pele ao redor da perna e remova suavemente a gordura subcutânea femoral.com a outra mão. Mais tarde, use fórceps curvos para puxar suavemente o depósito para longe da perna. Transfira os tecidos para um tubo de 15 mililitros contendo cinco mililitros de mídia de coleta e repita a dissecção para o outro lado da almofada de gordura.Agora, transfira as almofadas de gordura coletadas para uma placa de Petri de 60 milímetros contendo solução de esterilização e enxágue brevemente girando o prato algumas vezes. Em seguida, enxágue a solução de esterilização transferindo as almofadas de gordura para uma placa de Petri de 60 milímetros contendo PBS. Gire suavemente a placa e, mais uma vez, lave com PBS.Para a digestão dos tecidos adiposos, transfira-os para um tubo de 15 milímetros contendo solução enzimática pré-quente. Em seguida, mergulhe um par de tesouras longas retas no tubo e, finalmente, pique os tecidos adiposos na solução em pedaços o menor possível. Transfira o tecido picado e a solução enzimática para um frasco autoclavado de 25 mililitros.Enrole o frasco com filme de parafina e coloque o frasco em uma incubadora de shaker orbital a 37 graus Celsius para digestão. Após a digestão, bato suave para cima e para baixo para misturar bem. Em seguida, remova qualquer pedaço de tecido e detritos não digeridos filtrando através de um coador de tecido de 250 micrômetros em um tubo de 15 mililitros por pipetação.Agora, remova as células aderidas ao frasco enxaguando o frasco com quatro mililitros de mídia de crescimento e filtrar a suspensão celular no mesmo tubo de 15 mililitros. Em seguida, enxágue o coador, canalizar novamente a mídia de crescimento para remover quaisquer células presas no filtro. Centrifugar a 300 vezes G por cinco minutos à temperatura ambiente para pelotar a fração celular e aspirar o supernatante sem perturbar a pelota celular.Levemente resuspenque a pelota em um mililitro de tampão de lise de glóbulos vermelhos, misture bem por pipetar e incubar por cinco minutos em temperatura ambiente. Em seguida, diluir as células adicionando cinco mililitros de mídia de crescimento ao tubo contendo as células e misturá-las suavemente por pipetação. Agora, pipeta as células em um coador de células de 40 micrômetros e filtra-as em um novo tubo de 50 mililitros.Em seguida, enxágüe o coador com mais cinco mililitros de mídia de crescimento e pelota as células por centrifugação a 300 vezes G por sete minutos em temperatura ambiente. Aspire cuidadosamente o supernatante. Resuspende a pelota celular restante em um mililitro de mídia de crescimento por pipetação Para determinar a densidade e viabilidade celular, misture 10 microliters de cada amostra em azul trypan por pipetação.Coloque 10 microliters da mistura no hemótmetro e conte as células. A análise dos pré-apócitos após 24, 48 e 72 horas mostrou morfologia celular normal e número. A indução adipogênica de preadipócitos mostrou rápida diferenciação e acúmulo de gotículas lipídicas.O manuseio agressivo de preadipócitos durante o isolamento resultou em danos celulares e baixo número de células. A contaminação microbiana pode ser observada apesar de tomar medidas preventivas. A coloração lipídica com óleo vermelho O indicou que os preadipócitos rapidamente começam a desenvolver gotículas lipídicas sob incentivo adipogênico e o acúmulo progride ao longo do tempo, como observado em 24, 48 e 72 horas.O acúmulo de lipídios em relação ao número celular foi quantificado por manchas lipídicas e de DNA. Tanto o acúmulo de lipídios quanto a proliferação celular aumentaram com o tempo. O baixo número celular ou células danificadas podem ser observados quando as frações teciduais são digeridas por muito tempo.Portanto, recomenda-se que uma hora e meia de digestão não seja excedida. Preadipócitos isolados podem ser usados para estudos de expressão genética. RNA suficiente pode ser obtido para uso na síntese cDNA e follow-on qPCR ou RNAseq.

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Este artigo irá fornecer um método para isolar e cultura de codorna ou frango...

Isolamento e Cultura da Avian embrionárias Células Progenitoras Valvular

Este vídeo demonstra o isolamento da membrana corioalantóide portadora de tumor do embrião de galinha. O CAM colhido pode ser usado para outras aplicações a jusante.

Colheita de membrana corioalantóide de pintinho: um método para isolar a membrana corioalantóide com enxerto tumoral de ovo de galinha

Modelos de cultura celular proporcionar um controle detalhado sobre as condições ambientais e, assim, proporcionar uma plataforma poderosa para elucidar vários aspectos da biologia celular neuronal. Nós descrevemos um método rápido, barato e confiável para isolar, dissociar e cultura neurônios sensoriais a partir de embriões de galinha. Os detalhes da preparação substratos e imunocitoquímica também são fornecidos.

Isolamento e Cultura de Dissociated neurônios sensoriais de Chick Embriões

Aqui, descrevemos uma imunoprecipitação da cromatina (ChIP) e protocolo de preparação ChIP-seq biblioteca para gerar perfis de epigenomic global de amostras embrionárias de galinha baixa abundância.

Cromatina (ChIP) imunoprecipitação para baixo-abundância embrionárias amostras

Este artigo fornece um método para isolar tecidos embrionários puros de codorna e galinha de embriões que podem ser combinados para formar ex vivo de órgãos quimérico.

Isolamento de tecidos embrionários e formação de órgãos quiméricoes codorna-frango, usando o exemplo do Timo

Este relatório descreve um protocolo para o isolamento simultâneo de preadipócitos primários marrons e brancos de camundongos recém-nascidos. Células isoladas podem ser cultivadas na cultura e induzidas a se diferenciar em adipócitos brancos e marrons totalmente maduros. O método permite a caracterização genética, molecular e funcional das células de gordura primárias na cultura.

Isolamento e diferenciação de preadipócitos brancos e marrons primários de camundongos recém-nascidos

Este é um método eficaz para testar supressores ou condutores de metástase de câncer. As células, transduzidas com uma biblioteca de expressão, são injetadas na vasculatura da membrana corioallantóica do frango para formar colônias metastáticas. Colônias que têm diminuído ou aumentado a invasividade são extirpadas, expandidas, reinjetadas para confirmar seu fenótipo e, finalmente, analisadas usando alto sequenciamento de rendimento.

Descoberta de reguladores metastáticos usando um modelo de membrana corioallantóica intravital rápida e quantitativa

Este protocolo descreve o isolamento semi-automatizado da fração vascular estromal (FVS) do tecido adiposo murino para obtenção de pré-adipócitos e diferenciação de adipócitos in vitro. O uso de um dissociador tecidual para digestão da colagenase reduz a variação experimental e aumenta a reprodutibilidade.

Isolamento Semi-Automatizado da Fração Vascular Estromal do Tecido Adiposo Branco Murino Usando um Dissociador de Tecido

Aqui, descrevemos um protocolo para separar células vitelinos, células da granulosa e teca em folículos pré-ovulatórios aviários. Esse manuseio preciso permite investigações críticas sobre o papel dessas camadas na função reprodutiva, auxiliando na compreensão do desenvolvimento folicular, regulação hormonal e pesquisa de doenças para melhorar o rendimento agrícola e insights biomédicos.

Separação de camadas de células do folículo pré-ovulatório da granulosa e da teca aviária para aplicações a jusante

Visualizar e acessar o embrião de galinha durante o desenvolvimento pode ser um desafio. Desenvolvemos um método ex ovo que é simples, econômico e pode ser facilmente usado em sala de aula ou ambiente de pesquisa. Este método fornece acesso ao embrião em estágios finais do desenvolvimento embrionário (HH 40).

Otimizado Ex-ovo A cultura de Chick embriões para estágio avançado de desenvolvimento

Aprenda a isolar preadipócitos de embriões de frango de corte com alta viabilidade e capacidade de diferenciação adipogênica. Este método permite estudar o desenvolvimento de gordura em modelos para aves e humanos.

Isolamento de Preadipócitos de Embriões de Broiler Chick

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